ciRS-7通过抑制miR-7表达增强子宫内膜癌细胞对内质网应激抗性

目的:探究环状RNA ciRS-7与子宫内膜癌(EC)细胞内质网(ER)应激之间的关系。方法:通过慢病毒转染细胞的方法构建稳定过表达ciRS-7的EC细胞系Ishikawa,集落形成试验检测过表达ciRS-7的Ishikawa细胞增殖活性变化,划痕试验检测Ishikawa细胞迁移能力变化,Transwell试验检测Ishikawa细胞侵袭能力变化,qRT-PCR检测Ishikawa细胞内miR-7表达水平变化。对Ishikawa细胞进行血清饥饿24h处理,通过Western blot检测Ishikawa细胞ER应激相关蛋白和凋亡相关蛋白表达水平,qRT-PCR检测Ishikawa细胞内miR-7表达水平。通过细胞免疫荧光试验比较饥饿处理的ciRS-7过表达细胞和和未经饥饿处理的空白组细胞内Ki-67和抗凋亡蛋白表达水平。构建稳定过表达ciRS-7和miR-7的Ishikawa细胞株,在饥饿处理细胞诱导ER应激后,Western blot检测ER应激相关蛋白和促凋亡蛋白表达水平。构建稳定敲低ciRS-7的Ishikawa细胞株,在饥饿处理细胞诱导ER应激后,通过qRT-PCR检测细胞miR-7水平,Western blot检测ER应激相关蛋白和促凋亡蛋白表达水平。结果:过表达ciRS-7的Ishikawa细胞增殖活性显著提升,迁移和侵袭能力显著增强;ciRS-7的过表达导致miR-7水平显著降低。血清饥饿24h成功诱导Ishikawa细胞ER应激水平升高。过表达ciRS-7的Ishikawa细胞内miR-7水平显著低于阴性对照组细胞,对ER应激抗性更强,促凋亡蛋白表达水平显著低于阴性对照组细胞。CiRS-7和miR-7双重过表达细胞对饥饿诱导的ER应激抗性降低,凋亡蛋白表达水平显著升高。敲低ciRS-7导致细胞miR-7水平升高,细胞对饥饿诱导的ER应激抗性减弱,细胞凋亡增加。结论:ciRS-7的表达能够促进EC细胞增殖、迁移和侵袭,并且通过抑制miR-7的表达增强EC细胞对饥饿诱导的ER应激抗性。

酸枣仁提取物调控miR-7b-3p/5-羟色胺1A受体表达促进骨生长

背景:前期研究发现,酸枣仁提取物通过提高脑组织5-羟色胺1A受体(serotonin 1A receptor,5-HT1AR)表达,使之与5-羟色胺结合,延长小鼠慢波睡眠,促进生长激素的分泌,从而使骨生长。5-HT1AR作为一种蛋白质,其表达丰度受到miRNA的调控。作者推测酸枣仁提取物可能通过miRNA调控5-HT1AR的表达从而发挥药物作用。目的:观察酸枣仁提取物通过干预小鼠脑组织中miR-7b-3p/5-HT1AR通路对骨骼生长的影响。方法:①将昆明种小鼠分为正常对照组、用药组(灌胃酸枣仁提取物0.320 mg/g),阳性对照组(灌胃酸枣仁皂甙0.013 mg/g)和酸枣仁提取物+5-HT1AR抑制剂组(灌胃酸枣仁提取物最后3 d同时每天侧脑室注射5-HT1AR选择性抑制剂P-MPPF 8μg),25 d后观察酸枣仁提取物对小鼠骨生长、血清生长激素水平及脑组织5-HT1AR表达的影响;②基因芯片法筛选由酸枣仁提取物引起的骨生长小鼠与普通小鼠脑组织差异表达的miRNAs,并通过PCR验证和双荧光素酶报告基因实验证实筛选的miR-7b-3p与5-HT1AR的调控关系;③体外培养小鼠脑皮质细胞并鉴定,利用Western blot法观察酸枣仁提取物对脑皮质细胞中5-HT1AR表达的影响;④将昆明种小鼠分为正常对照组、用药组、miR-7b-3p inhibitor组、用药+miR-7b-3p mimics组、阳性对照组,观察各组小鼠脑组织5-HT1AR表达及5-羟色胺与5-HT1AR结合活性;⑤将SD大鼠分为正常对照组、用药组、miR-7b-3p inhibitor组、用药+miR-7b-3p mimics组、阳性对照组,观察各组大鼠慢波睡眠的变化。结果与结论:①酸枣仁提取物可以促进小鼠体长、胫骨增长,促进生长激素分泌,提高脑组织5-HT1AR含量;②基因芯片筛选出差异表达的miRNAs个数为16个,其中上调有13个,下调有3个;生物信息学预测下调miR-7b-3p可以调控5-HT1AR表达,且双荧光素酶报告基因实验证实二者有直接调控关系;③酸枣仁提取物和沉默脑皮质细胞中miR-7b-3p表达可以引起5-HT1AR高表达;沉默miR-7b-3p后小鼠脑组织5-HT1AR表达、5-羟色胺与5-HT1AR结合活性及生长激素分泌均升高;过表达miR-7b-3p后小鼠脑组织5-HT1AR表达、5-羟色胺与5-HT1AR结合活性及生长激素分泌均降低;大鼠慢波睡眠期也相应延长或缩短。结果表明,酸枣仁提取物能够降低脑组织的miR-7b-3p水平,同时增加5-HT1AR的表达量。这种机制有助于延长慢波睡眠周期,并且促进生长激素的生成,对骨骼生长有积极影响,为使用酸枣仁提取物作为促进骨骼生长的潜在手段提供了科学依据。

miR-7抑制剂治疗MRL/lpr小鼠的实验性研究

目的:探讨miR-7抑制剂治疗MRL/lpr小鼠的疗效。方法:选取30只MRL/lpr小鼠,随机分为miR-7抑制剂(miR-7 antagomir)组、环磷酰胺(CTX)组和生理盐水(Saline)对照组,10只/组。MRL/lpr小鼠13周时开始治疗,以上药物分别连续给药5周。每周观察各组小鼠一般状况并称重,留取血清和尿液标本。ELISA检测13~17周三组小鼠血清ANA、抗ds-DNA抗体、C3水平,并检测上述各周三组小鼠尿蛋白水平。流式细胞术检测三组小鼠Tfh细胞比例变化。RT-PCR检测三组小鼠脾脏和淋巴结miR-7和PTEN mRNA表达水平。HE、PAS、PASM染色观察光镜下三组小鼠的肾脏病理情况。结果:治疗5周后,形态学方面:与Saline组相比,miR-7 antagomir组和CTX组小鼠一般状况良好,体质量随周龄增加而增加。血清学方面:miR-7 antagomir组和CTX组血清ANA和抗ds-DNA抗体较Saline组明显下降,补体C3水平明显上升,但两治疗组间上述指标差异均无统计学意义。细胞学方面:miR-7 antagomir组小鼠脾脏Tfh细胞比例明显低于Saline组。与Saline组比较,miR-7 antagomir组小鼠脾B细胞miR-7表达水平降低,PTEN mRNA表达水平升高。此外,miR-7 antagomir组和CTX组小鼠光镜下肾脏病理改变均较Saline组有所好转,但该两组间肾脏病理改变无明显差异。结论:miR-7可作为系统性红斑狼疮的潜在治疗靶点,miR-7 antagomir能够显示出与经典免疫抑制剂CTX相近的治疗效果,有效地改善了MRL/lpr小鼠的狼疮样疾病表现,延缓了病情进展。

lncRNA SOX21-AS1通过调控miR-7-5p表达对H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)SOX21反义RNA1(SOX21-AS1)是否靶向miR-7-5p调控H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤。方法2022年7月—2023年2月于青海省人民医院进行实验。以H_(2)O_(2)诱导H9C2细胞构建氧化应激损伤模型。将H9C2分为Con组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+si-NC组、H_(2)O_(2)+si-SOX21-AS1组、H_(2)O_(2)+miR-NC组、H_(2)O_(2)+miR-7-5p组、H_(2)O_(2)+si-SOX21-AS1+anti-miR-NC组、H_(2)O_(2)+si-SOX21-AS1+anti-miR-7-5p组。采用RT-qPCR检测细胞中SOX21-AS1和miR-7-5p表达。CCK-8法和流式细胞术检测H9C2活力和凋亡。应用相应试剂盒检测细胞中超氧化物岐化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。双荧光素酶报告实验验证SOX21-AS1与miR-7-5p的靶向关系。结果H_(2)O_(2)处理后H9C2活力、miR-7-5p表达、SOD活力下降(P<0.05),而凋亡率、SOX21-AS1表达、MDA含量增加(P<0.05)。干扰SOX21-AS1或过表达miR-7-5p均可促进H9C2细胞存活(P<0.05),增加SOD活力(P<0.05),降低MDA含量(P<0.05),抑制细胞凋亡(P<0.05)。miR-7-5p是SOX21-AS1的靶基因。抑制miR-7-5p表达可逆转干扰SOX21-AS1对H_(2)O_(2)处理H9C2细胞的保护作用(P<0.01)。结论干扰SOX21-AS1可上调miR-7-5p表达,从而抑制H_(2)O_(2)引起的心肌损伤。

黄芩素调控miR-7对人胃癌BGC-823细胞自噬的影响及其作用机制研究

目的研究黄芩素(BAI)通过上调microRNA-7-5p(miR-7)对胃癌细胞系BGC-823细胞自噬的影响及可能的机制。方法MTT法筛选BAI处理BGC-823细胞的最佳药物浓度。实时定量PCR法检测慢病毒稳定转染miR-7的BGC-823细胞系的转染效率。实验分对照组(mimic-NC)、miR-7组(miR-7 mimic)及BAI组(即miR-7过表达联合BAI处理组);MTT实验、平板克隆实验和EdU实验检测细胞增殖能力;细胞免疫荧光染色和Western blot法检测了自噬相关16样蛋白1(ATG16L1)、p62蛋白(p62)、Bcl2同源结构域蛋白(Beclin 1)、自噬相关蛋白5(ATG5)、微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达水平;网络药理学分析,预测可能的信号通路;Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路相关蛋白的表达水平。结果50μmol/L的BAI可显著抑制BGC-823细胞的增殖能力;与对照组比较BAI处理后miR-7表达水平显著升高;miR-7组的细胞增殖显著被抑制,且自噬相关分子的蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著上调,促进了BGC-823细胞的自噬体形成,抑制了自噬流的形成;与miR-7组比较,BAI组可进一步抑制BGC-823细胞增殖、诱导细胞自噬体形成但抑制自噬流产生;网络药理学分析BAI、胃癌、自噬共同靶基因可能与PI3K/AKT信号通路相关;与对照组相比,miR-7组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的磷酸化水平显著被抑制,BAI组则可进一步抑制这些蛋白的磷酸化水平。结论BAI介导miR-7抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导BGC-823细胞自噬体的形成并抑制自噬流的产生。

miR-21、miR-222、miR-146b和miR-7检测在甲状腺乳头状癌诊断中的价值

目的探讨miR-21、miR-222、miR-146b和miR-7在甲状腺乳头状癌(PTC)诊断中的价值。方法选取2020年12月—2021年12月云南省第三人民医院PTC患者150例(PTC组)、甲状腺良性结节患者50例(良性结节组)和健康体检者50名(正常对照组)。收集所有研究对象的临床资料,并检测miR-21、miR-222、miR-146b和miR-7。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估各项指标鉴别诊断良性结节与PTC的效能。结果PTC组、良性结节组和正常对照组血浆miR-21、miR-146b、miR-222相对表达量依次降低(P<0.001),血浆miR-7相对表达量依次升高(P<0.001)。不同肿瘤分期的PTC患者之间血浆miR-222相对表达量差异有统计学意义(P<0.05)。有无淋巴转移的PTC患者之间血浆miR-146b相对表达量差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别、年龄、肿块大小、肿瘤分期和有无淋巴转移的PTC患者之间血浆miR-21和miR-7相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-21、miR-146b、miR-222和miR-7单项检测鉴别诊断PTC与良性结节的曲线下面积(AUC)分别为0.743、0.828、0.708、0.777。4项指标联合检测的AUC(0.933)除与miR-222+miR-146b+miR-7组合(0.917)差异无统计学意义(P>0.05)外,均高于其他任意3项组合、2项组合和单项检测的AUC(P<0.05)。miR-222+miR-146b+miR-7和4种miRNA联合检测鉴别诊断早期(Ⅰ~Ⅱ期)PTC和良性结节的AUC分别为0.914、0.925,差异无统计学意义(P>0.05);鉴别诊断中晚期(Ⅲ~Ⅳ期)PTC和良性结节的AUC分别为0.938、0.992,差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-146b和miR-222与PTC的病情相关。miR-222、miR-146b、miR-7联合检测鉴别诊断良性、恶性甲状腺结节和不同分期PTC的效能均较高,具有临床推广价值。

癫痫患者脑电图异常和血清BDNF GFAP miR-7-5p表达特征及与认知功能的关系

目的:探究癫痫患者脑电图异常和BDNF、GFAP、miR-7-5p表达特征,并探究各指标与患者认知功能的关系。方法:本研究以我院2017年4月至2021年4月期间治疗的294例癫痫患者为对象,采用MoCA评分对患者的认知功能进行评价,并据此对患者进行分组:将得分≥26分的198例患者纳入认知正常组,得分<26分的96例患者纳入认知障碍组,患者均接受脑电图检查、血清BDNF、GFAP、miR-7-5p检测,比较组间脑电图检查异常情况及血清BDNF、GFAP、miR-7-5p表达差异,并探究上述指标与认知障碍的关联。结果:对两组患者的MoCA评分进行分析可知认知障碍组患者的Mo-CA各项评分均低于认知正常组(P<0.05)。与认知正常组患者相比,认知障碍组患者脑电图无异常占比降低,认知障碍组患者脑电图痫样放电、脑电图慢波发放的发生率高于认知正常组(P<0.05)。与认知正常组患者相比较,认知障碍组BDNF、miR-7-5p降低,GFAP升高(P<0.05)。通过Pearson相关性分析发现,患者的MoCA评分与血清中的BDNF和miR-7-5p表达呈正相关,与其GFAP表达呈负相关(P<0.05)。经ROC曲线分析,血清BDNF、miR-7-5p及GFAP表达对癫痫患者认知障碍的发生具有一定诊断价值,其AUC值分别为0.836、0.845、0.957。结论:伴有认知障碍的癫痫患者脑电图异常特征以脑电图痫样放电、脑电图慢波发放为主,血清BDNF、miR-7-5p表达低于认知正常的癫痫患者,GFAP表达高于认知正常的癫痫患者,且血清BDNF、miR-7-5p及GFAP表达对癫痫患者认知障碍的发生具有一定诊断价值。

miR-124-3p、miR-452、miR-7-5p在肝癌组织中的表达情况及其与临床特征、预后的关系

目的探讨miR-124-3p、miR-452、miR-7-5p在肝癌组织中的表达情况及其与临床特征、预后的关系。方法选取2017年1月至2020年1月河南大学第一附属医院收治的115例肝癌患者作为研究对象。比较肝癌组织与癌旁组织中miR-124-3p、miR-452、miR-7-5p表达情况,分析其与患者临床特征、预后的关系,通过单因素、多因素logistic回归分析肝癌患者的预后危险因素。结果肝癌患者肝癌组织中miR-124-3p、miR-7-5p表达低于癌旁组织,miR-452表达高于癌旁组织(P<0.05)。低分化组肝癌组织中miR-124-3p、miR-7-5p表达低于高、中分化组,中分化组低于高分化组;低分化组肝癌组织中miR-452表达高于高、中分化组,中分化组高于高分化组;Ⅳ期组肝癌组织中miR-124-3p、miR-7-5p表达低于Ⅰ、Ⅱ期、Ⅲ期组,Ⅲ期组低于Ⅰ、Ⅱ期组;Ⅳ期组肝癌组织中miR-452表达高于Ⅰ、Ⅱ期、Ⅲ期组,Ⅲ期组高于Ⅰ、Ⅱ期组(P<0.05)。miR-124-3p、miR-7-5p高表达的患者3 a生存率均高于低表达的患者,miR-452高表达的患者3 a生存率低于低表达患者(P<0.05)。有血管侵犯的3 a生存率为26.83%,低于无血管侵犯的51.35%(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,miR-124-3p低表达、miR-452高表达、miR-7-5p低表达、有血管侵犯是肝癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论miR-124-3p、miR-452、miR-7-5p的表达与肝癌的发生、发展密切相关,且miR-124-3p、miR-7-5p低表达、miR-452高表达、有血管侵犯是肝癌患者预后的独立危险因素。

LncRNA AFAP1-AS1 exhibits oncogenic characteristics and promotes gemcitabine-resistance of cervical cancer cells through miR-7-5p/EGFR axis

Background:Drug resistance is the main factor contributing to cancer recurrence and poor prognosis.Exploration of drug resistance-related mechanisms and effective therapeutic targets are the aim of molecular targeted therapy.In our study,the role of long non-coding RNA(lncRNA)AFAP1-AS1 in gemcitabine resistance and related mechanisms were explored in cervical cancer cells.Methods:Gemcitabine-resistant cervical cancer cell lines HT-3-Gem and SW756-Gem were constructed using the gemcitabine concentration gradient method.The overall survival rates and recurrence-free survival rates were evaluated by Kaplan-Meier analysis.The interaction was verified through a Dual-luciferase reporter gene assay and a Biotinylated RNA pull-down assay.Cell proliferation ability was assessed through methyl-thiazolyl-tetrazolium(MTT),soft agar,and colony formation experiments.Cell cycle and apoptosis were detected byflow cytometry.Results:Up-regulation of AFAP1-AS1 in cervical cancer predicted a poor prognosis.Besides,patients in the gemcitabine-resistance group had higher levels of AFAP1-AS1 than the gemcitabine-sensitive group.AFAP1-AS1 promoted tumor growth and induced gemcitabine tolerance of cervical cancer cells.In addition,AFAP1-AS1 mediated epidermal growth factor receptor(EGFR)expression by serving as a molecular sponge for microRNA-7a-5p(miR-7-5p).This present study also proved that the knockdown of EGFR or overexpression of miR-7a-5p abolished the accelerative role of AFAP1-AS1 overexpression in cancer progression and gemcitabine tolerance.Conclusions:In general,the AFAP1-AS1/miR-7-5p/EGFR axis was tightly related to the progression and gemcitabine tolerance of cervical cancer,providing potential targets for the management of cervical cancer.

癫痫患者脑电图异常与血液miR-130b-3p和miR-7及FGL2表达特征的关系

目的探讨癫痫患者脑电图异常与血液miR-130b-3p、miR-7及纤维蛋白原样蛋白2(FGL2)表达特征的关系。方法选取接受治疗的癫痫患者124例作为观察组(癫痫发作轻度患者36例、中度患者51例及重度患者37例,脑电图轻度异常患者65例、中度异常35例及重度异常24例),同时选取体检健康者120例作为对照组;比较观察组和对照组、不同程度癫痫发作患者、不同程度脑电图异常的癫痫患者血液miR-130b-3p、miR-7及FGL2表达差异,分析癫痫患者血液miR-130b-3p、miR-7及FGL2与疾病程度和脑电图异常的相关性。结果观察组miR-130b-3p、FGL2高于对照组(P<0.05),miR-7低于对照组(P<0.05);癫痫发作重度患者miR-130b-3p、FGL2高于轻度和中度患者(P<0.05),miR-7低于轻度和中度患者(P<0.05);全面性癫痫发作患者miR-130b-3p、FGL2高于部分性发作患者(P<0.05);脑电图重度异常癫痫患者miR-130b-3p、FGL2高于脑电图轻度和中度异常患者(P<0.05),miR-7低于轻度和中度异常患者(P<0.05);脑电图中度异常癫痫患者miR-130b-3p、FGL2高于脑电图轻度异常患者(P<0.05),miR-7低于轻度异常患者(P<0.05);癫痫患者miR-130b-3p及FGL2与疾病严重程度、脑电图异常程度呈正相关(P<0.05),miR-7与疾病严重程度、脑电图异常程度呈负相关(P<0.05)。结论癫痫患者血液miR-130b-3p及FGL2表达上调,而miR-7下调,3项指标均与与癫痫患者疾病严重程度、脑电图异常程度存在相关关系。

miR-7-5p和miR-152-3p联合调控Wnt/β-catenin通路对乳腺癌细胞上皮-间质转化及化疗耐药的影响

目的探讨miR-7-5p和miR-152-3p协同抑制乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)进程及紫杉醇耐药的分子机制。方法采用生物信息学软件预测miR-7-5p和miR-152-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测两者与TCF4的靶向关系;Western blot法检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键调控因子β-catenin及TCF4蛋白的表达;在转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics基础上给予Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl处理后,Western blot法检测MCF-7/TAX细胞中β-catenin、TCF4和EMT相关蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达,Transwell小室实验检测MCF-7/TAX细胞侵袭和迁移能力;MTT实验检测激活Wnt/β-catenin信号通路对MCF-7/TAX细胞紫杉醇耐药性的影响。结果TCF43′UTR区域存在能够与miR-7-5p及miR-152-3p互补的结合位点;转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics后可使TCF4野生型(TCF4-WT)报告基因载体的荧光素酶活性较NC组明显降低(P<0.05)。Western blot结果显示,与NC组相比,转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics后各组紫杉醇耐药MCF-7/TAX细胞中β-catenin和TCF4蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),且两者共同转染后MCF-7/TAX细胞中β-catenin和TCF4蛋白的表达水平较miR-7-5p组或miR-152-3p组进一步降低(P<0.05)。Western blot结果显示,LiCl处理后MCF-7/TAX细胞中β-catenin、TCF4和vimentin蛋白表达水平明显升高,而E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。Transwell小室结果显示,LiCl处理后MCF-7/TAX细胞侵袭和迁移能力明显增强(P<0.05)。MTT结果显示,不同浓度紫杉醇作用下,miR-7-5p+LiCl组细胞增殖活力较miR-7-5p组明显升高;同时miR-152-3p+LiCl组和miR-7-5p/152-3p+LiCl组细胞的增殖活力较NC组均明显升高(P<0.05)。结论TCF4是miR-7-5p和miR-152-3p的共同靶标。miR-7-5p和miR-152-3p可共同抑制MCF-7/TAX细胞中Wnt/β-catenin信号通路的活化。

miR-7与肝细胞性肝癌EMT及临床病理特征之间的相关性研究

目的探讨微小RNA-7(miR-7)与肝细胞性肝癌(HCC)临床病理特征及上皮间质化转变(EMT)之间的相关性。方法收集30组HCC(包括癌组织及对应癌旁组织)临床标本及临床相关病理资料,分别检测miR-7及EMT标志物N-钙粘蛋白(N-cadherin)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达,分析miR-7与HCC临床病理特征之间的相关性及miR-7与EMT之间的相关性。结果 miR-7、E-cadherin在癌组织的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.01),而N-cadherin的表达则相反。相关性分析表明,miR-7与E-cadherin呈正相关性,与N-cadherin呈负相关性。miR-7在HCC的表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、是否伴随肝炎病毒感染无相关性,而与TNM分级、分化程度和血管侵犯密切相关。结论 miR-7的表达水平与EMT程度呈负相关性,检测miR-7的表达对HCC的临床诊断、治疗及预后判断具有潜在的重要意义。

环状RNA CDR1as与miR-7在癫痫患者血浆中的表达及与脑电图异常的关系分析

目的探讨环状RNA小脑变性相关蛋白1反义转录物(CDR1as)与微小RNA-7(miR-7)在癫痫患者血浆中的表达及与脑电图异常的关系。方法选取2016年12月—2019年12月在新乡医学院第二附属医院门诊及住院的癫痫患者87例为观察组,并根据脑电图结果分为正常组(6例)、轻度异常组(18例)、中度异常组(37例)及重度异常组(26例);选取同期健康体检者90例为对照组。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测血浆CDR1as、miR-7水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血浆白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-1β水平;Pearson法分析癫痫患者血浆CDR1as、miR-7水平与IL-2、TNF-α和IL-1β水平的相关性。结果对照组、正常组、轻度异常组、中度异常组、重度异常组血浆CDR1as、IL-2、TNF-α和IL-1β水平总体呈升高变化,miR-7水平总体呈降低变化,差异均有统计学意义(P<0.05)。癫痫患者血浆CDR1as水平与IL-2、TNF-α和IL-1β水平呈正相关(P<0.05),miR-7水平与IL-2、TNF-α和IL-1β水平呈负相关(P<0.05)。结论CDR1as、miR-7在癫痫患者血浆中分别呈高表达、低表达,与炎症因子水平、脑电图异常程度密切相关,可能通过影响炎症反应引起脑部异常放电。

miR-7对胃癌细胞SGC7901增殖、迁移及侵袭能力的影响及其与黏着斑激酶相关性研究

目的探讨miR-7对胃癌细胞SGC7901增殖、迁移及侵袭能力的影响及其与黏着斑激酶(FAK)相关性。方法培养人胃癌SGC7901细胞,将细胞分为miR-7mimics组、miR-阴性对照组和空白对照组,分别转染miR-7模拟物(miR-7mimics)、miR-阴性序列和不做任何处理。Real-time PCR检测miR-7表达,MTT法检测细胞增殖情况,Transwell小室检测细胞迁移能力和细胞侵袭能力,Western blot检测FAK和FAK Tyr397蛋白表达,利用Pearson相关分析对变量间相关关系进行分析。结果 miR-7mimics组细胞中miR-7相对表达量(2.86±0.47),显著高于miR-阴性对照组(1.03±0.15)和空白对照组(1.06±0.17),差异有统计学意义(F=635.985,P<0.01);miR-7mimics组24、48、72和96h细胞生长抑制率均高于miR-阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);迁移实验中,miR-7mimics组平均迁移细胞数[(159.52±5.94)/视野],显著低于miR-阴性对照组[(315.42±7.59/视野]和空白对照组[(307.53±8.16)/视野],差异有统计学意义(均P<0.05);侵袭实验中,miR-7 mimics组平均侵袭细胞数[(29.85±4.52)/视野],显著低于miR-阴性对照组[(85.42±5.59)/视野]和空白对照组[(88.53±6.16)/视野],差异有统计学意义(均P<0.05);miR-7mimics组细胞中FAK、FAK Tyr397蛋白表达量均低于miR-阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);Pearson相关分析显示,细胞中miR-7表达量与FAK和FAK Tyr397蛋白表达量均呈负相关(r=-0.724和-0.874,均P<0.01)。结论过表达miR-7可显著抑制胃癌SGC7901细胞增殖、迁移及侵袭过程,可能与负性调控FAK蛋白表达有关。

miR-7抑制喉鳞癌Hep-2细胞增殖及迁移的研究

目的探讨上调microRNA-7(miR-7)表达对喉鳞癌Hep-2细胞增殖与迁移的作用及可能机制。方法通过脂质体转染miR-7模拟物(miR-7 mimics)及随机序列(miR-Scramble),将喉鳞癌Hep-2细胞分成miR-7组、Scramble组和空白对照(Mock)组,实时定量PCR(qPCR)检测转染48 h后各组细胞中miR-7表达,CCK-8法检测转染48 h后的各组细胞的增殖抑制情况,Transwell试验观察转染24 h后细胞迁移能力,qPCR及Western blotting检测PI3K(p110)、AKT及pAKT的mRNA和蛋白表达情况。结果 miR-7组Hep-2细胞转染miR-7 mimics后miR-7表达水平明显上调,与其余两组比较差异有统计学意义(P<0.01);与Scramble组和Mock组相比,miR-7组Hep-2细胞的增殖抑制率升高,迁移能力降低,且PI3K、AKT及p AKT的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05)。结论上调喉鳞癌Hep-2细胞中miR-7表达能够抑制肿瘤细胞的增殖与迁移,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。

敲除OIP5-AS1基因通过miR-7-5p/PARP1轴增强非小细胞肺癌细胞的化学敏感性

目的探讨OIP5-AS1基因对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞化学敏感性的作用及分子机制。方法采用CCK-8法检测正常肺细胞系BEAS-2B、肺癌细胞系A549和顺铂耐药肺癌细胞A549/DDP的半抑制浓度(IC50)值。应用RT-qPCR检测OIP5-AS1、miR-7-5p和PARP1的表达水平。生物信息学检测OIP5-AS1、miR-7-5p和PARP1的靶向关系,用荧光素实验进一步验证。Western blot法检测相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡情况;克隆形成检测细胞生长情况。结果A549/DDP细胞中IC50值最高,且OIP5-AS1高表达,miR-7-5p低表达。miR-7-5p是OIP5-AS1的靶向调节基因之一,且为负调控关系。敲除OIP5-AS1抑制A549/DDP细胞的生长并增强化学敏感性,促进A549/DDP细胞凋亡。敲除OIP5-AS1下调PARP1可以增强A549/DDP细胞的化学敏感性,抑制NSCLC的生长和凋亡。结论OIP5-AS1通过上调miR-7-5p或下调PARP1,增强A549/DDP细胞的化学敏感性,抑制NSCLC的生长和凋亡。

TTF-1启动子调控miR-7表达对人肺癌95D细胞体外凋亡的影响

目的观察甲状腺转录因子-1(TTF-1)启动子调控miR-7表达对人肺癌细胞体外凋亡的影响,并探讨其意义。方法将前期构建的TTF-1启动子调控miR-7真核表达载体(命名为p-T-miR-7)与对照载体p-cont分别体外瞬时转染人肺癌95D细胞,采用FCM法检测95D细胞凋亡比例;TUNEL法检测95D细胞凋亡情况;Western blot检测各组中磷酸化Caspase3和磷酸化Caspase9的蛋白的表达;共聚焦显微技术检测miR-7靶分子CGGBP1和EGFR蛋白的表达;最后,采用Western blot检测各组中磷酸化Akt和Erk蛋白的表达。结果体外转染48h后,与p-cont转染组相比,转染p-T-miR-7组细胞凋亡比例明显增加(P<0.05);磷酸化Caspase3和磷酸化Caspase9蛋白水平均显著增加(P<0.05),同时EGFR和CGGBP1蛋白表达均明显降低,且细胞中磷酸化Akt和Erk蛋白水平亦显著降低(P<0.05)。结论 TTF-1启动子调控miR-7表达可导致人肺癌细胞的凋亡。这为后续基于miR-7的人肺癌基因靶向治疗策略的开发提供了前期实验依据。

miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞干样特性的影响

背景:miR-7在胃癌等多种肿瘤组织中表达下调,主要发挥抑癌作用。现已证实,miR-7能够影响胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭等多种细胞生物学功能。然而,目前有关miR-7与胃癌细胞干样特性关系的研究较少,机制尚不明确。目的:探讨miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞干样特性的影响。方法:以胃癌细胞株SGC-7901为模型,用NC、miR-7-5p mimics、inhibitor NC及miR-7-5p inhibitor转染细胞,转染48 h后采用倒置荧光显微镜观察转染效率,RT-qPCR方法检测miR-7-5p、Nanog和Sox2 mRNA表达水平,采用成球实验和软琼脂集落实验检测细胞成球能力和软琼脂集落形成能力,流式细胞术检测CD24^(+)CD44^(+)细胞亚群比例。结果与结论:(1)与inhibitor NC或NC组比较,转染miR-7-5p inhibitor或mimics后,胃癌SGC7901细胞中miR-7-5p的表达量显著降低或升高(P<0.01);(2)与NC组比较,miR-7-5p mimics组成球数量和软琼脂集落形成数量明显减少(P<0.05,P<0.01),而miR-7-5p inhibitor组成球数量和集落形成数量则明显高于miR-7-5p inhibitor NC组(P<0.05,P<0.01);(3)miR-7-5p mimics组CD24^(+)CD44^(+)细胞比例明显低于NC组(P<0.01),而miR-7-5p inhibitor组CD24^(+)CD44^(+)细胞的比例显著高于inhibitor NC组(P<0.01);(4)miR-7-5p mimics组Nanog和Sox2 mRNA表达明显低于NC组,miR-7-5p inhibitor组Nanog和Sox2 mRNA表达显著高于inhibitor NC组(P<0.05,P<0.01);(5)结果表明,miR-7-5p可以通过减弱胃癌细胞的成球能力、软琼脂集落形成能力以及降低胃癌细胞中CD24^(+)CD44^(+)细胞亚群比例等方式抑制胃癌细胞的干样特性,其机制可能与调控干性相关基因Nanog和Sox2的表达有关。

miR-7在口腔鳞状细胞癌中的表达及潜在临床意义

目的研究miR-7在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及潜在临床意义。方法获取原发性OSCC患者肿瘤组织53例及正常健康组织27例,利用qRT-PCR检测各组织中miR-7的表达,并分析其与上皮间质转化的相关性。利用质粒转染技术将含miR-7序列片段的质粒导入OSCC细胞株SCC9中,通过建立过表达miR-7的SCC9细胞进一步验证miR-7与OSCC上皮间质转化的关系。结果与健康组织比较,miR-7在OSCC肿瘤组织中的表达显著降低(P<0.01);miR-7的表达与上皮间质转化过程呈显著相关性(P<0.001)。与对照组细胞比较,过表达miR-7促进SCC9细胞E-cadherin的表达,抑制Fibronectin的表达(P<0.01)。结论miR-7在OSCC中低表达,与上皮间质转化过程高度相关。

急性缺血性脑卒中病人血清miR-7和miR-200b表达水平及与脑侧支循环分级的关系探讨

目的检测急性缺血性脑卒中(CIS)病人血清miR-7和miR-200b表达水平,探讨二者对CIS病人脑侧支循环途径的预测价值。方法选择2016年5月—2018年5月在我院神经内科住院治疗的126例CIS病人为研究对象,根据脑侧支循环的建立情况分为一级侧支循环组(44例)、二级侧支循环组(63例)和三级侧支循环组(19例),同期选取健康体检者50名作为对照组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测受试者血清miR-7、miR-200b水平,并进行分析。结果与对照组比较,CIS病人血清miR-7、miR-200b水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。检测血清miR-7、miR-200b水平诊断CIS疾病的ROC曲线下面积(AUC)分别为:0.734、0.667,灵敏度分别为63.41%、57.89%,特异度分别为75.70%、74.61%。miR-7、miR-200b表达水平与CIS病人脑侧支循环分级和美国介入和治疗神经放射学会/介入放射学会(ASITN/SIR)血流分级有关(P<0.05)。miR-7、miR-200b水平预测CIS病人建立三级侧支循环途径的AUC分别为0.894、0.876,灵敏度分别为79.82%、71.90%,特异度分别为86.91%、84.73%。结论CIS病人血清miR-7、miR-200b低表达,且在脑侧支循环分级不同的病人存在明显差异,检测血清miR-7、miR-200b水平对CIS病人脑侧支循环途径的预测具有一定价值。