miR-9-3p对细胞脂代谢调节功能及可能机制

目的 检测microRNA-9-3p (miR-9-3p)对HepG2细胞增殖及脂质代谢的影响,探讨其对细胞沉默信息调节因子(Sirt-1)蛋白表达的影响。方法 以HepG2细胞为体外细胞模型,应用体外细胞培养技术、噻唑蓝(MTT)比色法、转染技术和Western印迹,以miR-9-3p mimic、miR-9-3p inhibitor转染为干预手段,应用MTT比色法、Western印迹检测正常对照组、miR-9-3p mimic组、anti-miR-9-3p组3组HepG2细胞增殖水平、总胆固醇(TC)及三酰甘油(TG)表达水平及Sirt-1蛋白的表达。结果 miR-9-3p mimic组miR-9-3p表达水平显著高于正常对照组(P<0.05);anti-miR-9-3p组miR-9-3p表达水平显著低于正常对照组(P<0.05);与正常对照组相比,miR-9-3p mimic组HepG2细胞增殖显著增加(P<0.05);anti-miR-9-3p组HepG2细胞增殖显著抑制(P<0.05);miR-9-3p mimic组HepG2细胞TC及TG表达水平显著增加(P<0.05);anti-miR-9-3p组HepG2细胞TC及TG表达水平显著降低(P<0.05);miR-9-3p mimic组HepG2细胞Sirt-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05);anti-miR-9-3p组HepG2细胞Sirt-1蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。结论 miR-9-3p转染能够促进HepG2细胞增殖;miR-9-3p转染显著增加HepG2细胞TG及TC表达;miR-9-3p转染能够显著降低HepG2细胞Sirt-1蛋白表达。miR-9-3p能够影响HepG2细胞增殖及TC及TG代谢,其可能是通过调节Sirt-1蛋白表达发挥作用。

脑胶质瘤病人血浆miR-9-3p的变化及其与病人临床预后的关系

目的探讨脑胶质瘤病人血浆miR-9-3p的变化及临床意义。方法选取2016年3月1日至2019年3月1日收治的脑胶质瘤42例,另选20例同期健康查体者为对照,用RT-PCR法检测血浆miR-9-3p水平。42例脑胶质瘤术后随访24~60个月,记录生存情况;以血浆miR-9-3p平均值为准,分为低表达和高表达。结果脑胶质瘤病人血浆miR-9-3p水平明显降低(P<0.05),多因素Cox分析显示,血浆miR-9-3P低表达是脑胶质瘤病人不良生存预后的独立危险因素(P<0.05)。生存曲线分析显示,miR-9-3p低表达脑胶质瘤病人中位总生存期较高表达病人明显缩短(P<0.05)。结论人脑胶质瘤血浆miR-9-3p表达下调,与病人不良生存预后密切相关。

miR-9-3p通过IRF2BP2调控食管鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移和免疫逃逸

目的:探讨miR-9-3p/IRF2BP2分子轴对食管鳞状细胞癌(ESCC)恶性生物学行为的影响。方法:采用ACLBI和Starbase数据库分析miR-9-3p在ESCC中的表达差异及其与患者生存的相关性。双荧光素酶报告基因验证miR-9-3p和IRF2BP2的靶向关系。CCK-8、Annexin V-FITC/PI试剂盒和Transwell分别检测KYSE-30细胞增殖、凋亡和迁移。Western blot检测miR-9-3p/IRF2BP2轴对KYSE-30细胞PD-L1表达的影响。CD8~+T细胞与KYSE-30细胞共培养后,ELISA检测CD8~+T细胞上清中IFN-γ,IL-4和IL-10水平。结果:miR-9-3p在ESCC组织和细胞系中异常高表达,且预示较差的生存率。miR-9-3p靶向负调控IRF2BP2表达。过表达IRF2BP2抑制KYSE-30细胞增殖、迁移和免疫逃逸并促进其凋亡,而miR-9-3p可拮抗IRF2BP2的作用。结论:miR-9-3p通过抑制IRF2BP2表达促进ESCC细胞增殖、迁移和免疫逃逸并抑制其凋亡。

孤立低高密度脂蛋白胆固醇表型与血浆miR-9-3p、miR-28-5p的表达分析

目的探讨孤立低高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)表型血浆miR-9-3p和miR-28-5p的变化模式及其相关性。方法选取唐山市工人医院体检中心2014年1月至2015年12月174例健康体检者资料,收集其外周血血浆样本。根据血清HDL-C水平分为血脂正常表型组(86例)和孤立低HDL-C表型组(88例)。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法测定血浆miR-9-3p和miR-28-5p的表达水平。结果脂代谢表型正常组和孤立低HDL-C表型组血浆中miR-9-3p的检出率分别为86.05%(74/86)和64.78%(57/88),差异有统计学意义(χ2=10.58,P=0.001);女性miR-9-3p水平在脂代谢正常组和孤立低HDL-C异常表型组血浆中的表达水平均高于男性[正常组:0.041(0.024,0.111)vs.0.018(0.009,0.039),Z=3.05,P=0.002;孤立低HDL-C表型组:0.029(0.024,0.059)vs.0.013(0.007,0.027),Z=3.35,P=0.001]。线性回归显示,表观健康者血浆miR-9-3p的相对表达水平与性别(β=-1.337,P<0.001)、血清HDL-C(β=1.638,P=0.041)、空腹血糖(β=0.475,P=0.044)相关。血浆miR-28-5p女性组高于男性组,差异有统计学意义[0.003(0.002,0.008)vs.0.004(0.003,0.011),P=0.028],而不同表型组中男、女比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论血浆miR-9-3p是孤立低HDL-C表型的分子病理特征,性别、血清HDL-C、空腹血糖是其循环水平变化的主要影响因素。

miR-9-3p对ConA诱导的小鼠慢性实验性肝损伤的影响

目的探讨miR-9-3p对刀豆蛋白A(ConA)诱导所致小鼠慢性实验性肝损伤的影响。方法ConA构建小鼠慢性实验性肝损伤模型,高通量测序筛查模型动物肝组织miRNA的差异表达。BALB/c小鼠40只,随机分成对照组、ConA损伤组、过表达组(ConA+慢病毒包装miR-9-3p组)、过表达对照组(ConA+慢病毒空载体组)每组10只;各模型组小鼠经尾静脉按8 mg/kg体重注射ConA每周1次(对照组注射等体积生理盐水),连续8周;过表达组于第7周经尾静脉注射,将慢病毒包装的miR-9-3p过表达质粒(2×107 TU/mL)注射到小鼠体内,每周1次,连续2周;过表达对照组注射等量慢病毒空载体;于ConA末次给药7 d后处死小鼠收集样本,电子天平检测肝脏指数变化,血清酶学检测AST,ALT水平,HE染色检测模型小鼠肝脏组织病理改变;蛋白印迹(Western Blot)检测模型小鼠肝脏组织中COL1A1及α-SMA蛋白的表达变化。结果高通量测序显示慢性肝损伤模型中miR-9-3p表达明显下调。在肝损伤鼠体内过表达miR-9-3p后,血清AST和ALT水平明显下降;HE染色检测观察到过表达的miR-9-3p明显减轻肝ConA诱导的肝脏组织病理损伤,与ConA损伤组比较,细胞肿胀坏死减弱,小叶结构恢复;Western Blot检测过表达miR-9-3p后COL1A1及α-SMA蛋白的表达明显减低。结论miR-9-3p可减弱ConA诱导所致小鼠慢性实验性肝损伤。

外泌体miR-9-3p在非小细胞肺癌血清中表达及检测的临床意义

目的分析外泌体miR-9-3p在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)血清中的表达水平,探讨血清外泌体miR-9-3p检测在NSCLC诊断中的临床意义。方法收集2016年1月至2017年12月在山东省青岛疗养院诊疗的80例NSCLC患者(NSCLC组)、50例肺部良性病变患者(良性对照组)为研究对象,美国Invitrogen;总外泌体分离试剂盒提取两组患者血清外泌体,使用miRcute miRNA提取分离试剂盒从外泌体中提取miRNA,实时荧光定量PCR检测两组miR-9-3p水平,Spearman相关分析NSCLC血清miR-9-3p与常规标志物癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFR A21-1)水平相关性,评价血清外泌体miR-9-3p联合CEA、CYFR A21-1检测诊断NSCLC的价值。结果NSCLC患者血清miR-9-3p水平明显高于良性对照组;NSCLC患者血清外泌体miR-9-3p水平与CEA、CYFRA21-1水平具有明显相关性(P<0.01);血清miR-9-3p联合CEA、CYFR A21-1检测诊断NSCLC的敏感性、准确性、阴性预测值与各单项检测比较明显提高(P<0.01),分别为95.00%、91.54%、91.49%。结论血清外泌体miR-9-3p可作为诊断NSCLC的新型标志物,联合常规标志物检测明显提高诊断NSCLC效能。

血清外泌体miR-9-3p水平与2型糖尿病轻度认知功能障碍的相关性研究

目的探讨血清外泌体miR-9-3p水平与2型糖尿病(T2DM)轻度认知功能障碍(MCI)的相关性。方法为横断面研究。选取2016年2月至2021年3月就诊于南京大学医学院附属鼓楼医院内分泌科的T2DM患者,以及同期年龄、性别和教育年限匹配且认知功能正常的健康对照者作为研究对象。收集研究对象性别、年龄和教育年限,检测其血清外泌体miR-9-3p水平、空腹C肽(FCP)、空腹胰岛素、空腹血糖(FPG),并计算稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),完善简易智力状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)和3.0 T高分辨率头颅磁共振检查(检测灰质体积)。根据临床诊断标准将T2DM患者分为认知功能正常组和合并MCI组。采用单因素方差分析比较组间血清外泌体miR-9-3p等的差异,采用偏相关分析评估T2DM患者血清外泌体miR-9-3p与认知功能及灰质体积的相关性,采用多因素logistic回归分析法分析T2DM患者血清外泌体miR-9-3p与其发生MCI风险的关系,并通过受试者工作曲线评估血清外泌体miR-9-3p对患者MCI的预测价值。结果最终纳入70例研究对象。其中,健康对照者23名,认知功能正常的T2DM患者35例,合并MCI的T2DM患者12例。3组研究对象间性别、年龄和教育年限差异均无统计学意义(P>0.05)。合并MCI的T2DM患者血清外泌体miR-9-3p水平高于认知功能正常的T2DM患者和健康对照者[分别为(2111.9±722.7)、(1264.6±699.3)和(586.3±275.3)fM,P<0.001]。在T2DM患者中,校正性别、年龄和教育年限后,血清外泌体miR-9-3p水平与MMSE得分、MoCA得分以及灰质体积均呈负相关(r值分别为-0.390、-0.322和-0.549,均P<0.05)。logistic回归分析结果显示,在调整性别、年龄、教育年限、FCP和HOMA-IR后,血清外泌体miR-9-3p是T2DM患者发生MCI的独立影响因素(OR=1.241,95%CI 1.033~1.490,P=0.021)。血清外泌体miR-9-3p预测T2DM患者MCI的受试者工作曲线下面积为0.824,敏感度为91.7%,特异度为68.6%。结论血清外泌体miR-9-3p水平升高与T2DM患者的MCI风险增加相关。

长链非编码RNAMIR22HG和微RNA-9-3p在骨关节炎病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)MIR22HG和微RNA-9-3p(miR-9-3p)在骨关节炎(OA)病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性。方法 选取2020年10月至2021年10月在南充市中医医院确诊为OA的病人120例,作为OA组,60例体检健康人群作为对照组;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平;Pearson法分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的相关性以及二者与视觉模拟(VAS)评分、美国特种外科医院膝关节评分(HSS)以及西安大略和麦马斯特大学骨关节炎指数可视化量表(WOMAC)评分的相关性;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p对OA的诊断价值。结果 OA组的血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著高于对照组(1.48±0.25比1.01±0.22),miR-9-3p的表达水平显著低于对照组(0.72±0.13比1.05±0.12)(P<0.05);相关性分析显示,lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平呈负相关关系(P<0.05);KLⅣ级血清lncRNA MIR22HG的表达水平、VAS评分、WOMAC评分显著高于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著高于KLⅡ级(P<0.05),KLⅣ级血清miR-9-3p的表达水平、HSS评分显著低于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著低于KLⅡ级(P<0.05);OA病人lncRNA MIR22HG的表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈正相关,与HSS评分呈负相关(P<0.05);miR-9-3p表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈负相关,与HSS评分呈正相关(P<0.05);二者联合诊断的AUC高于lncRNA MIR22HG、miR-9-3p单独诊断的AUC值(Z=2.22,P=0.012;Z=1.43,P=0.025)。结论OA病人血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著升高,miR-9-3p表达水平显著降低,二者与OA病情严重程度密切相关,且对OA具有一定的诊断价值。

miR-22-3p在腹主动脉瘤中对金属基质蛋白酶-9作用的实验研究

目的:探讨miR-22-3p在小鼠腹主动脉瘤模型中对金属基质蛋白酶-9(MMP-9)的作用。方法:20只apoE基因敲除(apoE-/-)雄性小鼠均等为血管紧张素II(Ang-II)组与对照组,对照组无处理,Ang-II组给予Ang-II(1 500ng·min^(-1)·kg^(-1),6w)微量泵持续灌注,超声观测6周后腹主动脉成瘤率。6周后取成瘤小鼠血管组织RNA,实时PCR测量miR-22-3p的表达;提取野生小鼠血管组织中平滑肌细胞、成纤维细胞与巨噬细胞进行原代培养,同时进行上述三种细胞系及内皮细胞系的培养,实时PCR检测各种细胞miR-22-3p的表达以发现其细胞来源。取10只apoE-/-雄性小鼠随机分为实验组与对照组,均给予Ang-II微量泵灌注,agomiR-22组内眦静脉注射agomiR-22,对照组内眦静脉注射agomiR空载体(agomiR-NC),每5天1次。6周后超声观测腹主动脉成瘤率,免疫组化染色观察血管组织中MMP-9的表达。结果:与对照组相比,6周后Ang-II组主动脉组织中miR-22-3p表达显著下降[(0.00079±0.00029)vs.(0.00042±0.00023),P<0.05]。在各种原代与细胞系培养中,miR-22-3p仅于平滑肌细胞上表达,在灌泵6周apoE-/-小鼠中补miR-22-3p后,腹主动脉瘤成瘤率明显下降(75%vs.0,P<0.05);MMP-9含量显著下降。结论:在腹主动脉瘤形成过程中,miR-22-3p仅在平滑肌细胞表达且降低,MMP-9升高,但补充后miR-22后降低,提示miR-22-3p可能通过下调MMP-9的表达抑制腹主动脉瘤的发生。

miR-125a-3p对动脉粥样硬化斑块及M1/M2巨噬细胞、MMP-9和VEGF的影响

目的探讨miR-125a-3p对大耳兔动脉粥样硬化斑块形成、M1/M2巨噬细胞、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法15只成年雄性健康日本大耳兔,随机分为3组,每组5只,对照组给予普通饲料喂养,动脉粥样硬化模型组给予牛血清白蛋白注射和高胆固醇饲料喂养,miR-125a-3p抑制剂干预组给予动脉粥样硬化兔注射miR-125a-3p干扰慢病毒载体。油红O染色后图像分析法测定斑块面积,免疫组化法测定MMP-9和VEGF,免疫荧光法检测斑块组织中M1标记物CD11c和M2标记物CD206。结果与动脉粥样硬化组相比,miR-125a-3p抑制剂组斑块面积百分比显著降低(P<0.0001)。与对照组相比,动脉粥样硬化组MMP-9(P<0.001)、VEGF(P<0.01)和CD11c(P<0.001)水平显著升高,CD206水平显著降低(P<0.001);与动脉粥样硬化组相比,miR-125a-3p抑制剂干预组MMP-9(P<0.01)、VEGF(P<0.01)和CD11c(P<0.001)水平有所降低,CD206水平有所升高(P<0.001)。结论抑制miR-125a-3p可减轻动脉粥样硬化斑块的形成,平衡M1/M2巨噬细胞,降低斑块组织中MMP-9和VEGF的表达,miR-125a-3p可能是治疗不稳定动脉粥样硬化斑块的新靶点。

结直肠癌患者根治术前血清miR-193a-3p和CA19-9表达水平与临床病理特征及预后的关系

目的:探讨结直肠癌患者根治术前血清miR-193a-3p和糖类抗原19-9(CA19-9)表达水平与临床病理特征及预后的关系。方法:选取2010年1月至2012年6月在武汉大学人民医院行根治性切除术的216例结直肠癌患者作为研究组。另选取50例正常人作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测患者术前血清中miR-193a-3p的相对表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测CA19-9表达水平。分析miR-193a-3p、CA19-9表达水平与结直肠癌病理特征及预后的关系。结果:研究组患者miR-193a-3p相对表达量明显低于对照组,CA19-9表达水平明显高于对照组(均P<0.05)。术前miR-193a-3p呈低表达、CA19-9阳性的结直肠癌患者肿瘤分化程度较低、TNM分期较晚,且更易发生淋巴结转移和脉管浸润(P<0.05)。miR-193a-3p低表达组患者复发转移率明显高于miR-193a-3p高表达组,5年生存率明显低于miR-193a-3p高表达组;CA19-9阳性组患者复发转移率明显高于CA19-9阴性组,5年生存率明显低于CA19-9阴性组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:结直肠癌患者根治术前血清miR-193a-3p呈低表达,CA19-9呈高表达;miR-193a-3p和CA19-9表达与肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移等病理特征密切相关,且对患者生存预后有一定的预测作用。

miR-1-3p通过靶向调控CDK9对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-1-3p与细胞周期蛋白依赖性激酶9(CDK9)的靶向调控关系及其对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和凋亡的影响。方法:培养人肺上皮细胞株BEAS-2B及人NSCLC细胞株A549、H1299、HCC827和H460,并将miR-1-3p mimic及其阴性对照(miR-NC)转染至A549细胞,qPCR法检测细胞miR-1-3p表达水平,Western blot法检测细胞CDK9蛋白表达水平,生物信息学方法预测miR-1-3p可能的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-1-3p与CDK9的靶向调控关系。将miR-1-3p mimic和pCEP4-CDK9质粒分别或同时转染至A549细胞,CCK-8法检测细胞增殖率,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果:与BEAS-2B细胞相比,A549、H1299、HCC827和H460细胞中miR-1-3p表达降低(P<0.05),CDK9蛋白表达升高(P<0.05),A549细胞水平变化最为显著。CDK9是miR-1-3p的靶基因,可被miR-1-3p靶向负调控抑制其蛋白表达。miR-1-3p过表达可显著抑制A549细胞增殖及细胞克隆形成能力,提高A549细胞凋亡率,促进cleaved-Caspase-3和Bax蛋白表达,抑制Bcl-2蛋白表达。过表达CDK9可明显逆转miR-1-3p对A549细胞增殖的抑制作用及凋亡的促进作用。结论:miR-1-3p可抑制NSCLC细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与靶向抑制CDK9蛋白表达有关。

急性脑梗死患者血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP的变化特点及临床意义

目的探讨急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI)患者的血清微小RNA(MicroRNA,miR)-151a-3p、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、超敏C反应蛋白(high sensitivity C reactive protein,hs-CRP)变化特点及其与病情间的相关性。方法选取我院收治的ACI患者140例(ACI组)和健康体检者70例(对照组),检测两组的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平,并分析这些指标与ACI患者美国国立卫生研究院卒中量表(National Institute of Health stroke scale,NIHSS)评分间的关系。结果ACI组的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);重型ACI组患者的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平均显著的高于轻型组及中型ACI组,差异有统计学意义(P<0.05);中型ACI组患者的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平均显著高于轻型ACI组,差异具有统计学意义(P<0.05)。ACI组患者的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平与其NIHSS评分间均呈显著正相关性(P<0.05)。多元线性回归模型显示,miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP、TG、血糖水平升高是ACI患者NIHSS评分增高的独立危险因素(P<0.05)。结论ACI患者的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平显著高于健康人群,且与ACI患者神经功能受损程度有一定的相关性。

miR-101-3p靶向调控SOX9影响肝癌细胞增殖凋亡的研究

目的探讨miR-101-3p对肝癌细胞增殖凋亡的影响及其对靶基因性别决定区Y框蛋白9(sex determining region Y-box 9,SOX9)的调控作用。方法肝癌细胞转染miR-101-3p模拟物(miR-101-3p mimics组)、模拟物阴性对照(mimics control组)、SOX9小干扰RNA(SOX9 siRNA组)、siRNA对照(siRNA control组),同时以只加入转染试剂的细胞为对照组,RT-PCR检测细胞中miR-101-3p水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、SOX9表达,靶基因预测库预测miR-101-3p靶基因,荧光素酶报告基因鉴定靶基因。结果miR-101-3p mimics能够促进肝癌细胞中miR-101-3p表达,SOX9 siRNA能够抑制肝癌细胞中SOX9的表达。miR-101-3p mimics组细胞凋亡率高达(35.69±5.27)%,细胞存活率只有(76.34±4.63)%,细胞中Cleaved Caspase-3表达增多。靶基因预测库和双荧光素酶报告基因预测并鉴定miR-101-3p的靶基因是SOX9。miR-101-3p mimics能够抑制SOX9 mRNA和蛋白表达。SOX9 siRNA组细胞中SOX9蛋白表达下降,Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,细胞凋亡率高达(29.58±2.58)%,而细胞存活率只有(69.47±5.26)%。结论miR-101-3p能够负调控靶基因SOX9,从而促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖。

长链非编码RNA MIR22HG通过微小RNA-9-3p调节CTLA4抑制前列腺癌

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIR22HG通过微小RNA-9-3p(miR-9-3p)调节细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)抑制前列腺癌的机制。方法收集26例前列腺癌组织样本和26例前列腺增生组织样本,培养VCAP、PC3、LNCap和DU145细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测前列腺癌组织、前列腺增生组织及4种前列腺癌细胞的MIR22HG和miR-9-3p mRNA水平。筛选MIR22HG和miR-9-3p mRNA表达较高的细胞。将筛选出的细胞按不同干预方法分为OE-CTLA4(CTLA4过表达组)、OE-MIR22HG(MIR22HG过表达组)、miR-9-3p mimic(miR-9-3p过表达组)、OE-MIR22HG+miR-9-3p mimic(MIR22HG及miR-9-3p联合过表达组)、OE-NC+NC mimic(转染对照组)、NC mimic(miR-9-3p过表达对照组)。采用TargetScan数据库及荧光素酶报告基因实验验证MIR22HG与miR-9-3p及miR-9-3p与CTLA4是否存在靶向抑制关系。采用qRT-PCR及Western blot检测各组细胞MIR22HG和miR-9-3p mRNA及CTLA4蛋白表达。取裸鼠96只,按干预方法不同分为OE-NC+NC mimic组(转染对照)、OE-MIR22HG组(MIR22HG过表达)及OE-MIR22HG+miR-9-3p mimic组(MIR22HG及miR-9-3p联合过表达),每组32只。接种后4周期间,每周检测小鼠原位移植瘤并统计瘤体的质量和体积变化。结果前列腺癌细胞VCAP、PC3、LNCap和DU145细胞中,PC3细胞MIR22HG mRNA相对较低,miR-9-3p mRNA相对较高,因此选择PC3细胞进行研究。在PC3细胞中成功过表达MIR22HG,荧光素酶报告基因实验验证了MIR22HG和miR-9-3p的靶向抑制关系,过表达MIR22HG,miR-9-3p表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。TargetScan数据库预测免疫基因CTLA4和miR-9-3p的靶向关系,荧光素酶报告基因实验验证miR-9-3p和CTLA4的靶向抑制关系,过表达miR-9-3p,CTLA4表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达MIR22HG的裸鼠皮下肿瘤的质量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。OE-MIR22HG+miR-9-3p mimic组裸鼠皮下肿瘤的质量、体积与OE-NC+NC mimic组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论MIR22HG与miR-9-3p存在靶向负调节关系,miR-9-3p与CTLA-4存在靶向调节关系,MIR22HG/miR-9-3p可能通过抑制CTLA4达到免疫治疗前列腺癌的目的。

miR-363-3p对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响

目的观察miR-363-3p对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移与侵袭能力的影响。方法收集发生和未发生淋巴结转移的NSCLC组织样本各26、21例份,常规培养人NSCLC细胞株A549及高转移性NSCLC细胞株H441,采用实时荧光定量PCR法检测不同组织及细胞中miR-363-3p相对表达量。将对数生长期的H441细胞分为对照组、miR-363-3p mimics组、miR-363-3p inhibitor组,分别使用Lipofectamine 2000转染试剂盒转染对照miRNA、miR-363-3p mimics、miR-363-3p inhibitor。转染30 h,采用Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力(以迁移和侵袭细胞数表示),采用Western blotting法检测迁移标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及侵袭标志物基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)蛋白表达。结果发生和未发生淋巴结转移的NSCLC组织miR-363-3p相对表达量分别为1.091±0.153、0.128±0.336,二者比较P<0.01。A549、H441细胞miR-363-3p相对表达量分别为1.02±0.039、31.45±1.158,二者比较P<0.01。miR-363-3p inhibitor组、对照组、miR-363-3p mimics组迁移细胞数、侵袭细胞数及Vimentin、MMP-9、MMP-3蛋白相对表达量均依次升高,E-cadherin蛋白相对表达量依次降低,两组间比较P均<0.05。结论 miR-363-3p可能通过升高Vimentin、MMP-9、MMP-3蛋白表达及降低E-cadherin蛋白表达而促进NSCLC细胞的迁移和侵袭。

miR-369-3p靶向FGF9信号通路调控肝癌细胞增殖与侵袭

目的:阐明脂代谢相关mi R-369-3p在肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)病理组织中的表达特征及其与临床预后的相关性,解析mi R-369-3p在HCC细胞中的作用性质及相应分子机理。方法:实时定量PCR法检测mi R-369-3p在HCC病理组织和细胞中的表达变化,并通过Spearman’s法分析mi R-369-3p表达水平与临床病理资料相关性;CCK-8检测、Transwell穿透小室实验和裸鼠荷瘤实验检测敲低内源性mi R-369-3p表达后对HCC细胞增殖和侵袭性的影响作用;利用生物信息学分析、瞬时转染、定点突变和荧光素酶报告基因活性检测分析mi R-369-3p对纤维母细胞生长因子9(fibroblast growth factor 9,FGF9)的转录后调控作用。结果:mi R-369-3p在HCC病理组织(n=68)和细胞中异常低表达,且此低表达趋势与HCC患者预后呈显著负相关关系(x^2=6.907,P=0.0086);敲低内源性mi R-369-3p可显著促进HCC细胞的增殖、侵袭性;参与调控这一抑瘤效应的关键分子机制可能是miR-369-3p与FGF9的3’-UTR区直接结合,在转录后水平抑制FGF9 m RNA的稳定性,进而抑制后者表达水平。结论:miR-369-3p可通过靶向FGF9信号在转录后调控水平负性调控肝癌细胞增殖和侵袭过程,在肝癌发生和进展过程中发挥关键抑癌作用。

lncRNA SNHG7对胶质瘤细胞侵袭、迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因7(SNHG7)与胶质瘤生存预后的关系,及其对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法 选取2015年6月至2016年3月手术切除的胶质瘤组织80例(术后随访截止2020年4月)和50例颅脑损伤颅内减压术中切取的非肿瘤脑组织为对照,用RT-PCR法检测lncRNA SNHG7的表达水平。体外培养胶质瘤U87细胞,转染不同质粒敲低lncRNA SNHG7表达,用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力;双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA SNHG7对miR-4516的调控作用。结果 胶质瘤组织lncRNA SNHG7表达量明显高于对照组(P<0.05);多因素Cox回归分析显示,lncRNA SNHG7高表达是胶质瘤病人不良生存预后的独立影响因素(P<0.05);生存曲线分析显示,高表达组胶质瘤病人中位总生存期较低表达组明显缩短(P<0.05)。敲低lncRNA SNHG7表达,明显抑制U87细胞侵袭和迁移力(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实lncRNA SNHG7靶向上调miR-4516表达,上调miR-4516可逆转敲低lncRNA SNHG7表达对胶质瘤U87细胞侵袭和迁移能力的作用(P<0.05)。结论 胶质瘤组织lncRNA SNHG7呈高表达,与病人不良生存预后有关。lncRNA SNHG7通过靶向调控上调miR-4516表达促进胶质瘤细胞的侵袭和迁移。