MiR-92a-3p靶向KLF4促进肝细胞癌恶性进程

目的:探究微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)对肝细胞癌(HCC)的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR检测人肝细胞癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、Hep3B和人正常肝细胞系HL-7702中miR-92a-3p和Krüppel样因子4(KLF4)的表达。将SMMC-7721、Bel-7402细胞分组为Inhibitor NC组、miR-92a-3p Inhibitor组、mimic NC组、miR-92a-3p mimic组、mimic NC+oe-NC组、mimic NC+oe-KLF4组、miR-92a-3p mimic+oe-NC组、miR-92a-3p mimic+oe-KLF4组。qRT-PCR检测细胞中miR-92a-3p和KLF4的mRNA表达水平。Western blot检测KLF4蛋白表达水平。MTT增殖实验检测细胞活力。划痕愈合、Transwell侵袭实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力。通过TargetScan分析miR-92a-3p与KLF4的靶向关系,并通过双荧光素酶实验验证。结果:相比于正常细胞,miR-92a-3p在HCC细胞中高表达,KLF4在HCC细胞中低表达(P<0.05)。与正常表达组相比,下调miR-92a-3p显著抑制了SMMC-7721和Bel-7402细胞的增殖、迁移、侵袭能力(P<0.05)。双荧光素酶实验验证了miR-92a-3p与KLF4存在靶向结合位点。过表达KLF4能够阻碍HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制过表达miR-92a-3p对HCC细胞生长的促进作用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-92a-3p能够通过靶向下调KLF4来促进HCC细胞的增殖、迁移、侵袭。

miR-92a通过调控NF-κB信号通路及EMT过程对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响

目的探究miR-92a通过调控核因子-κB(NF-κB)信号通路及上皮间质转化(EMT)过程对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响。方法收集2021年6月—2022年6月于本院行手术切除的50例宫颈癌组织标本及其癌旁正常组织标本,体外培养的细胞株包括正常人宫颈上皮HCvEpC细胞及宫颈癌细胞系Me 180、Caski、C-33A、Hela。qRT-PCR检测宫颈癌组织和细胞中miR-92a、NF-κB mRNA的表达;分析miR-92a表达与患者临床病理参数的关系;靶基因预测、双荧光素酶验证miR-92a对NF-κB的靶向调控作用;Pearson检验分析宫颈癌组织中miR-92a与NF-κB mRNA的相关性;将Hela细胞分为对照组、miR-NC组、miR-92a组、miR-92a inhibitor组、miR-92a inhibitor+pcDNA-NC组和miR-92a inhibitor+NF-κB组,采用脂质体瞬时转染法分别转染相应的质粒;MTT法、CCK-8、Transwell小室实验、划痕实验、流式细胞术分别检测各组细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡及细胞周期分布情况;Western blot分析各组细胞中NF-κB及EMT相关蛋白的表达。结果宫颈癌组织和细胞中miR-92a和NF-κB mRNA的表达均显著上调(P<0.05);miR-92a表达与患者的肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移有明显的相关性(P<0.05);miR-92a靶向促进NF-κB表达;宫颈癌组织中miR-92a与NF-κB mRNA呈明显正相关(P<0.05);与对照组和miR-NC组相比,miR-92a组细胞OD值、单克隆形成数目、细胞侵袭数目、划痕愈合率、停留在S期的比例明显增加,NF-κB、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显升高,细胞凋亡率、停留在G0/G1期的比例、E-cadherin、α-catenin蛋白表达水平明显下降,miR-92a inhibitor组获得与上述相反的结果(P<0.05);与miR-92a inhibitor+pcDNA-NC组相比,miR-92a inhibitor+NF-κB组细胞OD值、单克隆形成数目、细胞侵袭数目、划痕愈合率、停留在S期的比例明显增加,NF-κB、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显升高,细胞凋亡率、停留在G0/G1期的比例、E-cadherin、α-catenin蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论miR-92a可靶向促进NF-κB表达,增强宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力和EMT,促进细胞周期进程,抑制细胞凋亡,从而降低宫颈癌细胞的放疗敏感性。

血清miR-92a-3p、miR-147水平与脓毒症患者病情严重程度、炎症反应的关系及对预后的评估价值

目的探讨血清微小核糖核酸(miR)-92a-3p、miR-147与脓毒症患者病情严重程度、炎症反应以及预后的关系,分析miR-92a-3p、miR-147预测脓毒症患者预后的价值。方法将2018年3月至2022年6月邯郸市中心医院急诊科收治的157例脓毒症患者(患者组)和107例体检健康者(对照组)纳入研究。患者组又根据脓毒症病情分为脓毒症组(66例)和脓毒症休克组(91例)。检测纳入研究者血清miR-92a-3p、miR-147以及炎症因子水平,追踪临床结局。采用Pearson相关分析miR-92a-3p、miR-147水平与序贯器官衰竭(SOFA)评分、急性生理和慢性健康状态Ⅱ(APACHEⅡ)评分和炎症因子水平的相关性。采用多因素Logistic回归分析影响脓毒症患者预后的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-92a-3p、miR-147在脓毒症患者预后判断中的价值。结果患者组血清miR-92a-3p水平高于对照组(P<0.05),miR-147水平低于对照组(P<0.05)。脓毒症休克组血清miR-92a-3p水平高于脓毒症组(P<0.05),miR-147水平低于脓毒症组(P<0.05)。脓毒症患者血清miR-92a-3p水平与白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)水平,APACHEⅡ评分、SOFA评分均呈正相关(P<0.05),miR-147水平与上述指标均呈负相关(P<0.05)。脓毒症休克、miR-92a-3p水平升高是脓毒症患者预后不良的危险因素(P<0.05),miR-147水平升高是保护因素(P<0.05)。miR-92a-3p、miR-147联合用于预测脓毒症患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.855,高于两者单独使用(AUC分别为0.711、0.723)。结论脓毒症患者血清miR-92a-3p水平增高,miR-147水平降低,而且与病情加重、炎症反应加剧以及预后不良有关。

miR-92a通过调控TGF-β1/Smads通路对心房颤动心肌纤维化的影响

目的探究miR-92a通过调控转化生长因子(TGF)-β1/Smad家族成员通路对心房颤动(AF)心肌纤维化(MF)的影响。方法将50只大鼠随机分为对照组、AF组、AAV-NC组、AAV-miR-92a组、AAV-inhibitor组,除对照组外,其他组大鼠构建AF模型。AAV-NC组、AAV-miR-92a组、AAV-inhibitor组分别在第1天尾静脉注射对应腺病毒载体,14 d后处死大鼠。采用超声心动图评估大鼠左心室重构及功能;生物信息学预测及双荧光素酶实验验证miR-92a对Smad7的调控作用;HE、Masson染色、免疫组化染色观察心肌组织病理学改变及心肌组织Ⅰ型胶原蛋白(Collagen-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Collagen-Ⅲ)的表达;免疫荧光检测大鼠心肌组织α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、成纤维细胞特异蛋白(FSP)-1表达;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测心肌组织miR-92a、Smad7 mRNA表达;Western印迹检测心肌组织TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7蛋白表达。结果生物信息学预测和双荧光素酶实验验证了miR-92a对Smad7的靶向调控作用;与对照组相比,AF组、AAV-NC组、AAV-miR-92a组左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)水平、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA、FSP-1水平、miR-92a、TGF-β1、Smad2、Smad3水平显著升高,Smad7 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05);与AF组相比,AAV-miR-92a组LVEF、LVFS水平、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA、FSP-1水平、miR-92a、TGF-β1、Smad2、Smad3水平显著升高,Smad7 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05),AAV-inhibitor组LVEF、LVFS水平、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA、FSP-1水平、miR-92a、TGF-β1、Smad2、Smad3水平显著降低,Smad7 mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论AF大鼠心肌组织中miR-92a表达量升高,其靶基因Smad7表达量降低;抑制miR-92a表达能提高大鼠LVEF和LVFS水平,改善大鼠心功能;同时减少Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA、FSP-1水平,降低心肌纤维化程度;其机制可能与调控TGF-β1/Smads通路有关。

circRNA_MYLK靶向miR-92a-3p调控急性B淋巴细胞白血病细胞增殖及凋亡

目的:探讨环状RNA_MYLK(circRNA_MYLK)对急性淋巴细胞白血病细胞增殖及凋亡的影响及其可能作用机制。方法:选取四川大学华西医院收治的56例急性淋巴细胞白血病患者为研究组,同时选取45例健康志愿者为对照组。取两组骨髓样本后分离单个核细胞,并通过流式细胞仪分选B淋巴细胞;qRT-PCR法检测单个核细胞中circRNA_MYLK、微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)表达量;Pearson法分析急性淋巴细胞白血病患者单个核细胞中circRNA_MYLK与miR-92a-3p相关性。体外培养人急性淋巴细胞白血病细胞系(SUP-B15、NALM-6、BALL-1)和正常B淋巴细胞,并将si-NC、si-circRNA_MYLK、anti-miR-NC、anti-miR-92a-3p、miR-NC、miR-92a-3pmimic、si-circRNA_MYLK和anti-miR-NC、si-circRNA_MYLK和anti-miR-92a-3p转染至SUP-B15细胞;qRT-PCR法检测circRNA_MYLK、miR-92a-3p表达量;CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;双荧光素酶报告实验验证circRNA_MYLK与miR-92a-3p靶向作用。结果:与对照组和正常B淋巴细胞比较,研究组患者单个核细胞和人急性淋巴细胞白血病细胞系(SUP-B15、NALM-6、BALL-1)中circRNA_MYLK表达量升高(P<0.05),miR-92a-3p表达量降低(P<0.05)。急性淋巴细胞白血病患者单个核细胞中circRNA_MYLK与miR-92a-3p呈负相关(r=-0.9682)。干扰circRNA_MYLK或过表达miR-92a-3p降低SUP-B15细胞存活率和S期细胞比例(P<0.05),增加G 0/G 1期细胞比例、细胞凋亡率(P<0.05);circRNA_MYLK可靶向调节miR-92a-3p的表达;抑制miR-92a-3p表达可逆转干扰circRNA_MYLK表达对SUP-B15细胞增殖、细胞周期、凋亡的作用(P<0.05)。结论:干扰circRNA_MYLK表达可诱导急性淋巴细胞白血病细胞凋亡并抑制细胞增殖,其机制与靶向调控miR-92a-3p表达有关。

miR-92a-3p在小鼠胚胎神经管闭合中的作用及机制

目的探讨miR-92a-3p与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4)之间的相互作用,以及两者在神经管畸形(neural tube defect,NTD)中对细胞迁移的影响。方法实验动物采用C57BL/6J小鼠,孕鼠随机分为NTD组与对照组,每组30只,NTD组采用全反式维A酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导NTD模型,于E9.5采集胚胎样本。实验所用细胞系为小鼠神经干细胞C17.2,转染NOX4过表达质粒、miR-92a-3p模拟物/抑制剂、模拟物对照/抑制剂对照。采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测胚胎和C17.2细胞中miR-92a-3p表达,采用蛋白质印迹法检测NOX4的表达。通过双荧光素酶报告基因实验明确miR-92a-3p对NOX4的结合及靶向调控关系。采用细胞划痕实验与Transwell实验观察miR-92a-3p和NOX4对细胞迁移活动的影响。统计学方法采用单因素方差分析、独立样本t检验。结果NTD组胚胎miR-92a-3p表达低于对照组(0.753±0.052与1.006±0.126,t=3.212,P=0.033),NOX4蛋白表达高于对照组(0.870±0.039与0.688±0.056,t=4.621,P=0.010)。在转染NOX43’端非翻译区(3’untranslated regions,3’UTR)荧光素酶报告基因的C17.2细胞中,共转染miR-92a-3p模拟物组的荧光素酶活性低于模拟物对照组(0.368±0.102与1.000±0.149,t=5.530,P=0.005);共转染miR-92a-3p抑制剂组的荧光素酶活性高于抑制剂对照组(1.254±0.080与1.000±0.129,t=2.899,P=0.044)。C17.2细胞转染miR-92a-3p模拟物组,NOX4的蛋白表达低于模拟物对照组(1.077±0.142与1.432±0.300,t=2.396,P=0.044);转染miR-92a-3p抑制剂组,NOX4的蛋白表达高于抑制剂对照组(1.443±0.054与1.249±0.090,t=3.709,P=0.010)。细胞划痕的实验结果表明,转染NOX4质粒后,细胞伤口愈合的速度低于对照组[(8.8±6.5)%与(44.1±6.8)%,t=6.513,P=0.003],然而当过表达NOX4的同时转染miR-92a-3p,与转染NOX4组比较,细胞伤口愈合速度加快[(37.2±11.7)%与(8.8±6.5)%,t=3.680,P=0.021]。Transwell实验发现,转染NOX4质粒后,迁移的细胞数量低于对照组[(102.7±4.5)与(133.0±11.8)个,t=4.162,P=0.014],而共转染NOX4与miR-92a-3p后,与转染NOX4组比较,发生迁移的细胞明显增多[(176.0±11.0)与(102.7±4.5)个,t=10.680,P<0.001]。结论小鼠NTD模型中,异常低表达的miR-92a-3p能够通过上调NOX4的表达,阻碍小鼠胚胎神经管闭合过程中细胞的迁移活动,最终导致NTD的发生。

外周血miR-92a、miR-375及miR-760对结直肠癌不同TNM分级的诊断预测价值

目的 探讨外周血miR-92a、miR-375及miR-760对结直肠癌不同TNM分级的诊断价值。方法 选取2018年1月至2021年1月运城市中心医院收治的70例结直肠癌患者,提取其血清总RNA行反转录,并采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time fluorescence polymerase chain reaction, RT-qPCR)分析不同TNM分期外周血miR-92a、miR-375及miR-760的表达水平。采用Pearson相关性分析miR-92a、miR-375及miR-760表达水平与TNM分期的相关性,采用ROC曲线分析3种miRNAs在不同TNM分期的诊断价值。结果 miR-92a在结直肠癌TNM各分期中的表达呈上升趋势,在不同期的分布差异有统计学意义(P <0.05)。miR-760在结直肠癌TNM各分期中的表达呈下降趋势,在不同期的分布差异有统计学意义(P <0.05)。miR-375在TNM各分期中表达水平呈下降趋势,在不同期的分布差异有统计学意义(P<0.05)。miR-92a、miR-375及miR-760表达水平与性别和年龄均无相关性(P> 0.05),miR-92a表达水平与结直肠癌TNM分期呈正相关(r=0.683,P <0.01),miR-375、miR-760表达水平与结直肠癌TNM分期呈负相关(r=-0.472,-0.684,P <0.01)。miR-92a、miR-375及miR-760鉴别结直肠癌TNM IV期和TNMⅠ~Ⅲ期的AUC分别为0.926(95%CI:0.856~0.997),0.804(95%CI:0.622~0.985)和0.836(95%CI:0.733~0.938),灵敏度分别为100.00%,63.64%和72.73%,特异性分别为73.58%,86.79%和76.56%。结论 miR-92a、miR-375及miR-760可以鉴别结直肠癌不同TNM分期,有望应用于其预后判断。

COX-2、G-17、miR-92a表达及幽门螺杆菌感染与结直肠息肉、结直肠癌发生的相关性

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)、胃泌素17(G-17)、miR-92a表达及幽门螺杆菌(Hp)感染与结直肠息肉、结直肠癌发生的相关性。方法选取2021年1月至2022年12月在四川绵阳四○四医院就诊的结直肠息肉患者62例(息肉组),结直肠癌患者48例(肿瘤组),检查两组组织COX-2、外周血G-17、粪便miR-92a表达以及幽门螺旋杆菌感染情况,分析其与结直肠息肉、结直肠癌发生的相关性。结果肿瘤组COX-2阳性表达率和Hp感染率分别为68.75%和75.00%,明显高于息肉组(P<0.05);肿瘤组G-17和miR-92a相对表达量分别为(25.56±7.76)pmol/L和(1.94±0.43),明显高于息肉组(P<0.05);息肉最大直径≥10mm患者COX-2阳性表达率、G-17、miR-92a相对表达量和Hp感染率分别为41.94%、(22.42±5.28)pmol/L、(1.29±0.25)和38.71%,明显高于息肉最大直径<10mm患者(P<0.05);息肉多发患者COX-2阳性表达率、G-17、miR-92a相对表达量和Hp感染率分别为45.83%、(23.12±5.14)pmol/L、(1.33±0.23)和54.17%,明显高于息肉单发患者(P<0.05);多发肿瘤患者G-17和miR-92a相对表达量分别为(30.72±6.00)pmol/L和(2.12±0.33),明显高于单发肿瘤患者(P<0.05);TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者COX-2阳性表达率、G-17、miR-92a相对表达量和Hp感染率分别为100.00%、(29.60±6.80)pmol/L、(2.15±0.44)和100.00%,明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05);息肉组Hp感染患者COX-2阳性表达率、G-17和miR-92a相对变量分别为56.25%、(23.42±5.65)pmol/L和(1.34±0.21),明显高于无Hp感染患者(P<0.05);肿瘤组Hp感染患者COX-2阳性表达率、G-17和miR-92a相对变量分别为83.33%、(27.12±5.109)pmol/L和(2.12±0.26),明显高于无Hp感染患者(P<0.05)。结论COX-2、G-17、miR-92a表达及Hp感染与结直肠息肉、结直肠癌临床特征有关,同时Hp感染可提高COX-2、G-17、miR-92a表达。

miR-92a/Dickkopf相关蛋白1介导丁酸钠调控Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞增殖

近年来已有研究表明,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACs)丁酸钠可以抑制结肠癌细胞增殖,促进结肠癌细胞凋亡,但其分子调控机制仍有待于深入研究。在本研究中,CCK-8检测、5-乙炔基-2-脱氧尿嘧啶核苷(Edu)增殖实验和流式细胞术分析证实,丁酸钠处理结肠癌细胞24 h后结肠癌细胞增殖能力明显减弱,凋亡率明显增加(P<0.01)。进一步转录物组测序结果表明,丁酸钠处理结肠癌细胞后,Wnt/β-catenin信号通路的拮抗剂Dickkopf相关蛋白1(DKK1)水平的表达显著高于未处理组(P<0.01);荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹分析进一步验证,丁酸钠可以显著诱导DKK 1的表达水平,同时抑制Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因c-Myc的表达水平(P<0.01)。沉默结肠癌细胞的DKK 1后进一步使用丁酸钠进行处理,Edu增殖实验和流式细胞术结果显示,抑制结肠癌细胞中DKK 1后可以逆转丁酸钠对结肠癌细胞的作用(P<0.01)。生物信息学预测数据库分析显示,DKK 1可能与miR-92靶向结合;qRT-PCR结果显示,丁酸钠可以明显降低结肠癌细胞中miR-92a的表达(P<0.01);Western印迹技术和双萤光素酶报告基因检测证实,miR-92a与DKK 1 mRNA的3′-UTR存在靶向结合关系(P<0.01)。过表达结肠癌细胞中的miR-92a后进一步使用丁酸钠进行处理也能逆转丁酸钠对结肠癌细胞的作用(P<0.01)。总之本研究明确了,丁酸钠可以通过miR-92a/DKK1调控Wnt/β-catenin信号通路进而抑制结肠癌细胞增殖,促进结肠癌细胞凋亡。

miR-92a-1联合血清CEA、CA-199检测对结直肠癌的诊断价值分析

目的:分析miR-92a-1联合血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原-199(CA-199)检测对结直肠癌(CRC)的诊断价值。方法:选择2020年4月—2022年3月于我院治疗的82例CRC患者作为CRC组,选取同期于我院治疗的80例结直肠息肉患者作为良性组。测定并比较两组miR-92a-1、CEA及CA-199水平,绘制ROC曲线并计算曲线下面积(AUC)值,分析miR-92a-1联合CEA、CA-199检测诊断CRC的价值。结果:CRC组的miR-92a-1、CEA、CA-199水平高于良性组,有统计学差异(P<0.05);ROC曲线分析显示,miR-92a-1、CEA、CA-199单项及联合诊断CRC的AUC分别为0.767、0.965、0.952、0.986;miR-92a-1+CEA+CA-199联合诊断CRC的敏感度与准确度最高,分别为96.30%、93.47%。结论:CRC患者的miR-92a-1、CEA及CA-199水平呈高表达,miR-92a-1、CEA及CA-199联合检测可提高CRC诊断效能,为临床诊治CRC提供参考信息。

冠心病合并2型糖尿病患者血清中miR-92a、HbA1c及内皮抑素水平评估预后的临床意义

目的分析微小RNA-92a(miR-92a)、糖化血红蛋白(HbA1c)、内皮抑素(ES)在冠心病(coronary heart disease,CHD)合并2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者中的表达水平及与患者预后的相关性。方法将2020年5月—2021年5月徐州市第一人民医院收治的84例CHD合并T2DM患者纳入观察组,本院同期收治的65例单纯CHD患者纳入单纯CHD组,同期于本院行体检的70名健康体检者设为对照组。检测3组miR-92a、HbA1c、ES表达水平,并对比分析;同时随访1年,依据心血管不良事件发生情况将84例CHD合并T2DM患者分为两个亚组,即预后良好组与预后不良组,对比两组miR-92a、HbA1c、ES表达水平;此外,绘制受试者工作曲线(ROC),分析miR-92a、HbA1c、ES 3项指标单独与联合诊断预测CHD合并T2DM患者预后的效能。结果观察组miR-92a、HbA1c、ES分别为(1.89±0.45)、(11.78±2.12)%、(44.59±4.35)ng/mL高于单纯CHD组(1.23±0.26)、(5.35±1.01)%、(30.36±3.37)ng/mL与对照组(0.84±0.13)、(4.29±0.78)%、(25.48±2.25)ng/mL,差异有统计学意义(P<0.05);预后不良组的miR-92a、HbA1c、ES高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);ROC结果显示:miR-92a、HbA1c、ES联合预测患者预后的曲线下面积(AUC)0.909(95%CI:0.848~0.971)高于3项指标的单独检测[0.776(95%CI:0.659~0.892)、0.860(95%CI:0.740~0.980)、0.795(95%CI:0.697~0.893)]。结论miR-92a、HbA1c、ES在CHD合并T2DM患者中呈高表达,3项指标联合检测可有效预测患者预后,临床应用价值较高。

miR-92a在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管生成的作用

目的:探讨miR-92a在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管新生功能的影响和作用机制。方法:采用qRT-PCR方法检测广东医学院附属深圳南山医院2014年6月至2015年12月经手术切除的25例结直肠癌组织和对应癌旁组织及4种结直肠癌细胞(HCT116、SW620、SW480、HT29)中miR-92a的表达;免疫组织化学法检测结直肠癌和癌旁组织中CD31阳性表达的微血管密度(microvessel density,MVD),Pearson相关性分析探讨miR-92a表达与肿瘤血管新生MVD的相关性。通过转染miR-92a-mimic、inhibitor上调或抑制结直肠癌细胞HCT116、SW620中miR-92a的表达水平,采用小管形成实验检测miR-92a不同表达对HUVEC小管形成的影响,免疫印迹法检测对其下游潜在靶点PTEN的蛋白表达的影响。结果:结直肠癌组织miR-92a的表达水平显著高于对应癌旁组织(P<0.01);4种人结肠癌细胞系miR-92a的表达水平均显著高于正常肠上皮组织(P<0.05);结直肠癌组织CD31阳性微血管密度显著高于癌旁组织(P<0.01),miR-92a表达水平与结直肠癌血管新生MVD呈显著正相关(r=0.580,P=0.01);上调miR-92a表达的HCT116细胞培养上清液可以显著促进HUVEC小管形成(P<0.05);上调miR-92a表达可以显著抑制HCT116细胞中PTEN蛋白表达水平(P<0.01)。结论:miR-92a在结直肠癌细胞和组织中高表达,与肿瘤血管新生增加密切相关;miR-92a可能通过抑制PTEN的表达发挥促进结直肠癌血管新生的生物学功能。

结直肠癌患者血清、粪便和癌组织中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1的检测及其临床意义

目的:探讨结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)患者血清、粪便和癌组织中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1的表达水平及其临床意义。方法:收集2016年7月至2017年5月在海南省中医院就诊的63例CRC患者,根据CRC有无远处转移将患者分为无转移组(n=35)和转移组(n=28);另选取同期体检的30例健康志愿者纳入对照组。采集所有受试者的血清、粪便及CRC组织,用RT-PCR检测标本中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1的表达水平,并进行比较分析。结果:CRC患者血清中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1表达水平显著高于对照组(均P<0.05),以转移组中表达水平最高(P<0.05)。CRC患者粪便中miR-21、miR-217和miR-92a-1表达水平显著高于对照组(均P<0.05),无转移组miR-217表达水平显著低于转移组(P<0.05),而miR-21、miR-29b和miR-92a-1在无转移组和转移组的差异无统计学意义(P>0.05)。无转移组CRC组织中miR-21、miR-29b和miR-92a-1均明显低于转移组(均P<0.05),而miR-217表达水平显著高于转移组(P<0.05)。结论:miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1在CRC患者的血清、粪便和癌组织中异常表达,多种miRNAs的联合检测有利于对CRC的发生、诊治和预后的评估。

下调miR-92a对非小细胞肺癌细胞增殖及血管生成因子表达的影响

目的探讨miR-92a下调对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖及血管生成的影响。方法将NSCLC中A549细胞分为三组培养:A549组(未转染A549细胞)、sc-siRNA组(转染sc-siRNA的A549细胞)、miR-92a-siRNA组(转染miR-92a-siRNA的A549细胞)。分别采用RT-PCR和Western blot检测A549细胞和正常人支气管上皮(human bronchial epithelial,HBE)细胞中miR-92a相对表达量、PTEN、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白相对表达水平。采用活细胞计数法和结晶紫染色实验检测各组A549细胞的增殖能力。结果 miR-92a在A549组细胞中的相对表达量高于HBE细胞(P <0. 05); A549组细胞中PTEN蛋白表达水平低于HBE细胞(P <0. 05),VEGF蛋白表达水平高于HBE细胞(P <0. 05); miR-92a-siRNA组细胞中miR-92a相对表达量降低(P <0. 05),PTEN蛋白表达水平升高(P <0. 05),VEGF蛋白表达水平降低(P <0. 05); miR-92a-siRNA组细胞中PI3K和Akt蛋白表达水平均下降(P <0. 05); miR-92a-siRNA组细胞数目减少,细胞增殖能力减弱。结论 NSCLC中A549细胞的miR-92a表达明显上调,miR-92a基因沉默能明显抑制细胞增殖、血管生成,PTEN和VEGF相关PI3K/Akt信号通路可能在此过程中发挥重要作用。

心肌梗死急诊经皮冠状动脉介入治疗前后全血中miR-92a的表达

目的观察急性心肌梗死患者行急诊经皮冠状动脉介入治疗(PCI)前后静脉血中miR-92a的表达及其变化,探讨miR-92a在急性心肌梗死中的临床意义。方法采用实时定量荧光PCR(qRT-PCR)技术检测11例健康者静脉血及21例急性心肌梗死患者行PCI前后静脉血中miR-92a的表达。结果急性心肌梗死患者全血中的miR-92a水平高于健康人,PCI术后的miR-92a表达明显比术前下降。结论 miR-92a可能参与了急性心肌梗死的发生发展及转归的过程,抑制miR-92a的表达可能是未来治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的靶点。

内皮细胞缺氧后miR-210、miR-92a、miR-126表达及意义

目的进一步探讨缺氧后血管新生的调控机制。方法常规方法培养人微血管内皮细胞,低氧培养箱制备内皮细胞缺氧模型(观察组),正常细胞作为对照组。采用real time PCR法检测两组内皮特异性microRNA(miR-210、miR-92a、miR-126)表达变化。结果与对照组比较,miR-210、miR-92a、miR-126分别上调了(5.19±0.99)、(3.02±0.88)、(3.87±0.83)倍,P均<0.05。结论缺氧可促使内皮细胞特异性microRNA表达改变,此可能为缺氧后血管新生的主要调控机制。

miR-92a对奶山羊乳腺上皮细胞增殖及凋亡的调控分析

miRNAs是对哺乳动物乳腺组织发育及泌乳机能进行调控的重要因子。本研究依据已有的关中奶山羊乳腺组织miRNA表达谱,选择不同泌乳时期差异表达的miR-92a为研究对象,探究miR-92a对山羊乳腺上皮细胞(GMEC)增殖及凋亡的调控作用,并挖掘其潜在的调控基因。采用荧光定量PCR、MTT检测、EdU检测及流式细胞术,检测miR-92a在不同泌乳时期乳腺组织的表达情况,并在细胞水平检测miR-92a对乳腺上皮细胞增殖、凋亡及细胞周期的调控作用。利用RNA-seq技术,分析过表达miR-92a乳腺上皮细胞中的差异表达基因。qRT-PCR结果显示,miR-92a在奶山羊泌乳初期乳腺组织中表达量极显著高于泌乳中期(P<0.01),表明miR-92a可能对奶山羊泌乳性状有重要的调控作用。GMEC过表达miR-92a后,试验结果显示:与NC对照组比较,miR-92a过表达组的EdU阳性细胞数极显著减少(P<0.01),S期的细胞数显著下降、G1期的细胞数显著增加,同时miR-92a组的凋亡细胞数目显著增加(P<0.05)。采用RNA-seq,构建了miR-92a过表达mRNA文库,发现下调基因54个,上调基因160个。GO terms及KEGG通路分析显示差异表达基因调控乳腺上皮细胞多种生物学功能。以上结果表明miR-92a促进GMEC凋亡、抑制其增殖,测序结果进一步证明miR-92a对奶山羊乳腺发育及泌乳性能具有潜在的调控作用。

miR-92a对H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响

目的探讨miR-92a对过氧化氢(H2O2)诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响。方法通过Lipofectamine^(TM)2000将miR-92a抑制物(inhibitor)及阴性对照组转染大鼠心肌细胞H9C2,RT-PCR检测转染后细胞中miR-92a的表达;将后续实验分为空白对照组、H2O2组和miR-92a inhibitor+H2O2组,利用CCK8法、流式细胞仪及Western印迹分别检测3组细胞的增殖、凋亡、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Wnt信号通路β-连环蛋白(β-catenin)和c-Myc的蛋白表达。结果 miR-92a inhibitor组miR-92a mRNA表达显著低于空白对照组(P<0.05),阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组比较,H2O2组细胞增殖显著降低,凋亡率显著增加,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著上调表达,Bcl-2蛋白显著下调表达(均P<0.05),与H_2O_2组比较,miR-92a inhibitor+H_2O_2组细胞增殖显著升高,凋亡率显著降低,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著下调表达,Bcl-2蛋白显著上调表达(均P<0.05)。结论抑制miR-92a的表达可促进H2O2诱导的H9C2心肌细胞增殖,抑制细胞的凋亡,其机制与调节Bax、Bcl-2蛋白及Wnt信号通路表达有关。

西妥昔单抗联合SOX方案治疗大肠癌患者的效果及对血清miR-29b和miR-92a-1水平的影响

目的探讨西妥昔单抗联合SOX方案治疗大肠癌的效果及其对血清miR-29b与miR-92a-1水平的影响。方法选择大连大学附属新华医院肛肠科2016年3月至2018年3月收治的84例大肠癌患者,随机分为SOX组和联合组,每组42例。SOX组采取SOX方案化疗,21 d为1个周期,共8个周期。联合组在SOX方案基础上联合西妥昔单抗,每2周1次。比较两组有效率、疾病控制率、化疗前后的血清miR-29b与miR-92a-1表达水平、不良反应、无进展生存期与总生存期。结果两组有效率接近,差异无统计学意义(P>0.05),联合组疾病控制率为85.71%,高于SOX组的66.67%(P<0.05)。化疗后,两组血清miR-29b和miR-92a-1表达水平均较化疗前降低(P<0.05)。联合组化疗后的血清miR-29b和miR-92a-1表达水平均低于SOX组(P<0.05)。两组不良反应发生率的差异无统计学意义(P>0.05)。截至2019年4月,两组随访时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组无进展生存期与总生存期长于SOX组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论西妥昔单抗联合SOX方案治疗大肠癌可提高疾病控制率,延长生存时间,并下调患者血清miR-29b和miR-92a-1表达,且不会增加不良反应,患者耐受性较好。

miR-92a和miR-362-3p调节TOB2参与亚低温对重型创伤性脑损伤保护作用

目的探讨miR-92a和miR-362-3p调节TOB2参与亚低温对重型创伤性脑损伤保护作用。方法前瞻性选择2015年3月至2017年4月就诊的重型颅脑损伤患者84例,采用随机数字发将其分为常规治疗组(42例)和亚低温+常规治疗组(42例)。常规治疗组患者给予脱水、止血、抗炎及神经营养药物等常规治疗;亚低温+常规治疗组患者常规治疗基础上外加亚低温治疗。于治疗前,治疗后第1天、第7天和第14天采集肘静脉血5 ml,用qRT-PCR法检测患者血清miR-92a和miR-362-3p表达水平,用western blotting法检测患者血清TOB2蛋白表达,用荧光素酶活性实验验证TOB2是否是miR-92a和miR-362-3p的靶基因,记录患者伤后6个月时的格拉斯哥预后分级(GOS)。结果在治疗前,两组患者血清miR-92a和miR-362-3p表达无统计学差异(P>0.05)。在治疗后第1天、第7天和第14天,相比于常规治疗组,亚低温+常规治疗组患者血清miR-92a和miR-362-3p表达水平均降低(P<0.01),此外,治疗期间TOB2表达水平逐渐增加。荧光素酶活性实验验证证实ARNTL是miR-92a和miR-362-3p靶基因。在伤后第6个月,相比于常规治疗组,亚低温+规治疗组患者预后良好率和中等残疾率均增加,而重度残疾率、植物生存率和死亡率均降低(P<0.05)。结论创伤性脑损伤后miR-92a和miR-362-3p调节TOB2参与亚低温对其保护作用。