miRNA-1260b、miRNA-182-5p及CEA、CA199表达水平对结直肠癌诊断的价值研究

目的探讨结直肠癌患者miRNA-1260b、miRNA-182-5p及癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)表达水平及其对结直肠癌的临床诊断价值分析。方法回顾性选取2020年1月至2020年12月于本院诊断为结直肠癌的60例患者作为结直肠癌组,选择本院同期进行健康体检正常人群40例为对照组。采集正常和结直肠癌组术前空腹外周静脉血,术中收集患者切除病灶和癌旁组织标本;检测两组血清及组织中miRNA-1260b、miRNA-182-5p表达水平,同时检测两组血清CEA、CA199水平;通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线,根据曲线下面积(AUC)值分析miRNA-1260b、miRNA-182-5p、CEA、CA199对结直肠癌的诊断价值。结果结直肠癌组织及血清中miRNA-1260b、miRNA-182-5p表达水平明显升高癌旁正常组织和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结直肠癌患者血清CEA、CA199水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线结果显示,miRNA-1260b、miRNA-182-5p及CEA、CA199单独诊断结直肠癌的AUC分别为0.719、0.736、0.854、0.817;四者联合诊断的AUC为0.939,明显高于任意单个指标诊断。结论结直肠癌患者血清和癌组织中miRNA-1260b、miRNA-182-5p表达水平明显升高,用于诊断结直肠癌的AUC值均大于0.7,其两者联合CEA、CA199诊断价值更高,有望成为诊断直肠癌的潜在特异性标志物。

自拟健脾养肾补血汤辅助治疗再生障碍性贫血的疗效及对免疫功能、血清miR-155-5p、miR-1260b的的影响

目的:探究自拟健脾养肾补血汤辅助治疗再生障碍性贫血(AA)的疗效及对免疫功能、血清miR-155-5p、miR-1260b的影响。方法:选取我院2017年6月至2022年1月收治的104例无移植指征的AA患者。按照随机数字表法分为对照组[n=52,免疫抑制(IST)治疗]和观察组[n=52,自拟健脾养肾补血汤辅助IST治疗]。对比两组患者临床疗效,治疗前后中医证候积分、外周血象、免疫功能、血清miR-155-5p、miR-1260b水平及治疗期间不良反应情况。结果:观察组治疗总体有效率96.15%高于对照组84.62%(P<0.05);两组患者治疗后中医证候积分均明显下降,且观察组低于对照组(P<0.05);两组治疗后血红蛋白(Hb)、白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)、铁蛋白(SF)及网织红细胞计数(ReT)水平均升高,且观察组高于对照组(P<0.05);两组治疗后NK细胞、CD4+百分比及CD4+/CD8+值均升高,CD8+百分比均下降,且观察组NK细胞、CD4+百分比及CD4+/CD8+值高于对照组,CD8+百分比低于对照组(P<0.05);两组治疗后清miR-155-5p及miR-1260b mRNA均下降,且观察组低于对照组(P<0.05);两组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾养肾补血汤辅助IST治疗AA可明显提升患者免疫功能,促进骨髓造血功能恢复,下调血清miR-155-5p和miR-1260b水平,且药物毒性较小,具有一定安全性。

血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平对早期肝细胞癌的诊断价值

目的探讨微小RNA(micro RNA,miRNA)-574-5p、miRNA-106b、高敏甲胎蛋白异质体(highly sensutive-alpha fetoprotein heterogeneity L3,hs-AFP-L3)水平检测对早期肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的诊断价值。方法选择吉林省肿瘤医院2020年3月至2022年3月收治的HCC患者186例(HCC组)、肝硬化患者120例(肝硬化组)、接受体检的健康人员120例(对照组)为研究对象。比较各组血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平,并比较HCC组不同病理特征患者血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平,绘制受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3对早期HCC的诊断价值。结果HCC组、肝硬化组和对照组患者血清miRNA-574-5p(1.09±0.33比0.84±0.27比0.61±0.18)、miRNA-106b(1.22±0.39比0.71±0.22比0.56±0.19)、hs-AFP-L3[(23.08±4.36)μg/L比(2.61±0.79)μg/L比(0.47±0.14)μg/L]水平差异有统计学意义,HCC组患者各项指标均显著高于肝硬化组和对照组,肝硬化组患者各项指标均显著高于对照组(P均<0.05)。HCC肿瘤个数为多发、肿瘤最大径≥5 cm、中晚期、有远处转移、有静脉瘤栓患者血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平分别高于单发[miRNA-574-5p:1.24±0.43比0.83±0.27;miRNA-106b:1.46±0.45比0.97±0.31;hs-AFP-L3:(25.73±5.21)μg/L比(19.15±4.25)μg/L]、肿瘤最大径<5 cm[miRNA-574-5p:1.29±0.46比0.82±0.24;miRNA-106b:1.51±0.44比0.95±0.29;hs-AFP-L3:(26.82±5.03)μg/L比(19.12±3.99)μg/L]、早期[miRNA-574-5p:1.31±0.44比0.90±0.28;miRNA-106b:1.49±0.51比0.99±0.32;(26.60±4.98)μg/L比(18.94±4.02)μg/L]、无远处转移[miRNA-574-5p:1.36±0.46比0.88±0.25;1.45±0.41比0.96±0.32;hs-AFP-L3:(26.79±5.44)μg/L比(19.04±3.83)μg/L]、无静脉瘤栓患者[miRNA-574-5p:1.39±0.43比0.92±0.31;miRNA-106b:1.43±0.39比1.0±0.34;hs-AFP-L3:(26.41±4.54)μg/L比(20.11±4.01)μg/L](P<0.05);肝功能Child-Pugh分级A级、B级、C级患者血清miRNA-574-5p(0.85±0.26比1.08±0.37比1.27±0.40)、miRNA-106b(0.92±0.29比1.15±0.35比1.41±0.38)、hs-AFP-L3[(18.69±3.72)μg/L比(23.17±4.88)μg/L比(26.45±5.32)μg/L]含量逐渐增加(P均<0.05)。miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3联合检测诊断早期HCC的曲线下面积为0.919(95%CI为0.873~0.980),敏感度和特异度分别为0.882、0.901。结论miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3联合检测对早期HCC的诊断具有较高的临床价值。

miRNA-200b在糖尿病小鼠海马体中的异常表达及靶基因预测

目的分析糖尿病小鼠海马体miRNA-200b表达情况,并预测miRNA-200b靶基因。方法采用链脲佐菌素或联合高糖高脂饮食分别诱导1型和2型糖尿病小鼠模型,建模后处死小鼠,分离海马体组织,利用荧光定量PCR测定miRNA-200b表达量。通过miRWalk、miRDB和miRPathDB三个基因数据库预测miRNA-200b靶基因,进行GO分析和KEGG分析。结果成功建立糖尿病小鼠模型。糖尿病小鼠海马体中miRNA-200b表达量比正常小鼠下降(P<0.05)。生物信息学预测显示,miRNA-200b筛选到3个靶基因,分别是GAB1、SLC5A3和GICCL1,靶基因功能富集于糖代谢、脑部神经营养等信号通路。结论miRNA-200b在糖尿病小鼠海马体中显著下降,有望成为糖尿病治疗的新靶点。

再生障碍性贫血患者外周血miR-155-5p、miR-1260b水平及临床意义

目的探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血微小核糖核酸miR-155-5p、miR-1260b水平及临床意义。方法将该院2014年1月至2019年8月收治的初诊AA患者108例纳入研究作为观察组。另外,选取同期于该院体检的健康志愿者102例作为健康组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测外周血miR-155-5p、miR-1260b水平。比较2组外周血miR-155-5p、miR-1260b水平,观察组中的重型AA与非重型AA患者二者的表达水平。采用Cox回归分析AA患者死亡的影响因素。结果观察组外周血miR-155-5p、miR-1260b水平均高于健康组(P<0.05),重型AA患者二者水平均高于非重型AA患者(P<0.05)。临床分型为重型AA,并发感染、出血,正细胞正色素性贫血、白细胞计数、网织红细胞均值、淋巴细胞与非造血细胞比值、基线血小板计数,外周血miR-155-5p、miR-1260b水平,治疗无效均是AA患者死亡的危险因素(P<0.05)。结论AA患者外周血miR-155-5p、miR-1260b水平升高,与疾病严重程度、预后均相关。

血清人附睾蛋白4联合外泌体miRNA-200a/200b/200c用于糖链抗原125阴性卵巢上皮癌早期诊断的价值

目的研究血清人附睾蛋白4(human epididymal protein,HE4)联合外泌体中的微小RNA(miRNA)-200a/200b/200c用于糖链抗原125(sugar chain antigen,CA125)阴性卵巢上皮癌(epithelial ovarian carcinoma,EOC)早期诊断的价值。方法选取CA125阴性EOC患者120例作为研究对象,设为研究组;另选取同期收治的115例卵巢上皮良性肿瘤患者作为良性组,107例于武汉市第一医院体检的健康女性作为对照组。比较3组HE4、CA125、miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线分析各项血清指标鉴别CA125阴性EOC及卵巢上皮良性肿瘤的价值。结果研究组HE4及miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c水平显著高于良性组、对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。经ROC分析证实,血清HE4及miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c能够用于CA125阴性EOC的诊断,且HE4+miRNA-200a/b/c联合诊断相对于单独及两两诊断可获得更高的曲线下面积,均有P<0.05。经logistic逐步回归分析证实,HE4≥163.110 pmol/L、miRNA-200a≥2.7002^(-△△CT)、miRNA-200b≥1.6652^(-△△CT)、miRNA-200c≥1.3952^(-△△CT)为CA125阴性EOC发生的危险因素(P<0.05)。结论血清HE4及miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c可用于CA125阴性EOC的早期诊断中,且四项指标联合诊断具有更高的敏感度与特异性,值得临床医师关注。

右美托咪定对老年宫颈癌Ⅰa期手术患者心肌保护及血清miRNA-30a、miRNA-30b的影响

目的观察右美托咪定(Dex)对老年宫颈癌Ⅰa期手术患者心肌保护及血清miRNA-30a、miRNA-30b的影响。方法选取2021年1月至2022年3月广西壮族自治区贵港市人民医院行宫颈癌Ⅰa期手术老年患者60例为观察对象,采用随机数字表法将其分为对照组和试验组,各30例。对照组予丙泊酚联合瑞芬太尼靶控输注全凭静脉麻醉,试验组于麻醉诱导前15 min予Dex 0.8μg/kg静脉泵入至诱导完成后10 min,维持量0.4μg/(kg·h)至手术结束前30 min,其他麻醉方法同对照组。比较两组插管后即刻(T0)、切皮后10 min(T1)、手术结束时(T2)的心率(HR)、平均动脉压(MAP);比较两组术前15 min及术后6、12、24 h血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、miR-30a、miR-30b。结果T1、T2时,两组HR、MAP低于T0时,差异有统计学意义(P<0.05);试验组HR、MAP低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后6、12、24 h,两组CK、CK-MB、miR-30a高于术前15 min,miR-30b低于术前15 min,差异有统计学意义(P<0.05);试验组CK、CK-MB、miR-30a、miR-30b低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论右美托咪定对老年宫颈癌Ⅰa期手术患者心肌具有良好的保护作用,可降低血清miR-30a及miR-30b表达。

miRNA-138-5p、miRNA-34b在肺癌中的表达及与患者临床特征和预后的关系

目的 探讨miRNA-138-5p、miRNA-34b在肺癌中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法 选取151例肺癌患者,均进行手术切除治疗,取术后肺癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miRNA-138-5p、miRNA-34b水平。比较不同临床特征、不同预后肺癌患者肺癌组织中miRNA-138-5p、miRNA-34b水平,肺癌患者预后的影响因素采用多因素Logistic回归分析。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估miRNA-138-5p、miRNA-34b单独及联合检测对肺癌患者预后的预测价值。结果 肺癌组织中miRNA-138-5p、miRNA-34b水平均明显低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。肿瘤直径≥2 cm、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移、分化程度为低分化的肺癌患者肺癌组织中miRNA-138-5p、miRNA-34b水平分别明显低于肿瘤直径﹤2 cm、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、分化程度为中高分化的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。至随访结束,151例肺癌患者中,预后良好119例,预后不良32例。预后不良肺癌患者肺癌组织中miRNA-138-5p、miRNA-34b水平均明显低于预后良好患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,肿瘤直径≥2 cm、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移、分化程度为低分化、miRNA-138-5p水平降低、miRNA-34b水平降低均是肺癌患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线显示,miRNA-138-5p、miRNA-34b联合检测预测肺癌患者预后的AUC为0.951(95%CI:0.918~0.984),高于二者单独检测的0.603、0.572。结论 miRNA-138-5p、miRNA-34b在肺癌组织中异常低表达,且与患者临床特征、预后密切相关,有望成为评估肺癌恶性程度及预后的重要分子标志物。

结直肠癌患者血清miRNA-1260b和miRNA-182-5p等标志物的表达水平及意义

目的 探讨结直肠癌患者血清miRNA-1260b、miRNA-182-5p及癌胚抗原(CEA)和糖类抗原(CA199)的表达水平及临床诊断意义。方法 选取2020年1月至2020年12月间长安医院诊断为结直肠癌的60例患者作为结直肠癌组,另选择同期进行健康体检的60例正常人群作为对照组。术前采集所有研究对象的空腹外周静脉血,收集结直肠癌患者术中切除的癌组织和癌旁正常组织标本。检测两组血清及组织中miRNA-1260b和miRNA-182-5p表达水平和血清CEA、CA199水平。通过绘制受试者工作特征曲线(ROC),根据曲线下面积(AUC)值分析miRNA-1260b、miRNA-182-5p、CEA及CA199对结直肠癌的诊断价值。结果 结直肠癌组织及血清中miRNA-1260b和miRNA-182-5p表达水平明显高于癌旁正常组织和对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结直肠癌患者血清CEA、CA199水平高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。ROC曲线结果显示,miRNA-1260b、miRNA-182-5p、CEA及CA199单独诊断结直肠癌的AUC分别为0.709、0.736、0.847和0.799;四者联合诊断的AUC为0.936,明显高于任意单个指标诊断。结论 结直肠癌患者血清和癌组织中miRNA-1260b和miRNA-182-5p表达水平明显升高,用于诊断结直肠癌的AUC值均大于0.7,两者联合CEA和CA199诊断价值更高,有望成为诊断直肠癌的潜在特异性标志物。

联合测定血浆miRNA-19b及红细胞分布宽度在COPD相关肺动脉高压中的临床价值

目的探讨联合测定血浆miRNA-19b及红细胞分布宽度(RDW)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关肺动脉高压(PH)中的临床价值。方法COPD急性加重(AECOPD)患者共156例,根据肺动脉收缩压(PASP)结果,分为AECOPD组(A组)45例、AECOPD合并PH组(B组)111例。测定两组入院时血浆miRNA-19b、PASP、经细胞分布宽度(RDW),并绘制血浆miRNA-19b和RDW诊断COPD相关PH的受试者工作特征(ROC)曲线;应用Logistic回归分析预测血浆miRNA-19b和RDW诊断COPD相关PH概率;绘制血浆miRNA-19b和RDW联合诊断COPD相关PH ROC曲线,计算诊断价值。结果与A组比较,B组血浆miRNA-19b明显降低、RDW、PASP明显升高(P<0.05)。血浆miRNA-19b和RDW联合诊断COPD相关PH的曲线下面积(AUC)高于单独诊断。结论血浆miRNA-19b和RDW对于辅助诊断COPD相关PH具有一定的临床价值,联合测定可以提高COPD相关PH诊断的敏感度和特异度。

M2巨噬细胞来源的外泌体转运miR-1260b促进胶质母细胞瘤迁移的机制研究

肿瘤相关巨噬细胞浸润肿瘤组织并促进胶质母细胞瘤进展,但作用机制还有待进一步研究。本文以探究M2巨噬细胞通过分泌外泌体影响胶质母细胞瘤迁移能力的机制为目的。采用超高速离心法提取外泌体;采用RNA测序筛选差异表达的miRNA;采用数据库靶点预测miRNA可能的靶蛋白;采用双萤光素酶报告基因实验验证miRNA与靶基因的相互作用;采用裸鼠皮下移植瘤模型检测肿瘤细胞增殖能力。实验结果表明,肿瘤相关巨噬细胞主要是M2巨噬细胞,M2巨噬细胞分泌的外泌体能够促进脑胶质瘤细胞的迁移,其机制与转运miR-1260b且靶向调控AJAP1影响脑胶质瘤细胞的迁移有关,提示巨噬细胞分泌的外泌体通过转运miR-1260b,从而影响胶质母细胞瘤的迁移能力。

结直肠癌患者血清lncRNA SNHG11及miRNA-27b水平分析及与预后的关系

目的探讨结直肠癌患者血清长链非编码RNA(lncRNA)小核RNA宿主基因11(SNHG11)及微小RNA(miRNA)miR-27b的表达及与预后的关系。方法将2016年1月至2018年1月广州市增城区中医医院收治的94例结直肠癌患者纳入研究作为结直肠癌组,将同期于该院就诊的94例结直肠良性疾病患者纳入研究作为结直肠癌良性疾病组,另选取94例体检健康者作为对照组。比较3组血清lncRNA SNHG11、miR-27b水平。结直肠癌组患者根据临床特征分为不同的亚组,比较亚组间lncRNA SNHG11、miR-27b水平。随访3年,根据患者存活情况分为存活组和死亡组,比较两组lncRNA SNHG11、miR-27b水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析lncRNA SNHG11、miR-27b水平用于评估患者预后的价值。以结直肠癌患者lncRNA SNHG11、miR-27b水平平均值为界将患者分为高、低表达组,采用K-M生存曲线分析两组患者累积存活率。结果相较于对照组及结直肠良性疾病组,结直肠癌组患者血清lncRNA SNHG11水平更低,而miR-27b水平更高(P<0.05);亚组分析结果显示:患者lncRNA SNHG11、miR-27b水平与淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05)。相较于存活组,死亡组lncRNA SNHG11水平更低,而miR-27b水平更高(P<0.05)。ROC曲线分析显示:lncRNA SNHG11用于评估患者生存预后的最佳截断值为3.883,曲线下面积为0.868;miR-27b用于评估患者生存预后的最佳截断值为3.971,AUC为0.851。随访3年,lncRNA SNHG11高表达组(54例)中36例存活,累积存活率为66.67%,lncRNA SNHG11低表达组(40例)中16例存活,累积存活率为40.00%,两组累积存活率比较差异有统计学意义(P<0.05);miR-27b高表达组(43例)中18例存活,累积存活率41.86%,miR-27b低表达组(51例)中34例存活,累积存活率为66.67%,两组累积存活率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论结直肠癌患者血清lncRNA SNHG11水平下降,而miR-27b水平升高,二者水平与患者淋巴结转移、TNM分期有关,可作为患者生存预后评估的辅助指标。

MiRNA-27b对血管紧张素Ⅱ诱导肥大心肌细胞凋亡相关因子表达的影响

目的:观察微小RNA-27b(miR-27b)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肥大心肌细胞凋亡率及凋亡相关蛋白表达的影响。方法:将H9c2小鼠心肌细胞分为4组,分别为正常对照组、AngⅡ诱导组、miR-27b mimics组和阴性核苷酸组。各组细胞建模培养后分别检测心肌细胞凋亡率,Bax、Bcl-2蛋白和mi R-27b的表达,监测心肌细胞内活性氧(ROS)水平的变化以及总超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:免疫荧光染色可见AngⅡ诱导组心肌细胞均较正常对照组明显肥大,细胞表面积增大,而miR-27b mimics组细胞肥大明显改善(P<0.05)。与正常对照组比较,AngⅡ诱导组Bax蛋白表达上调,而Bcl-2蛋白和miR-27b表达明显下调(P<0.05)。与AngⅡ诱导组比较,miR-27b mimics组Bax蛋白表达则减少,而Bcl-2蛋白和miR-27b表达增加(P<0.05)。与正常对照组相比,AngⅡ诱导组凋亡率显著增加(P<0.01),而与AngⅡ诱导组比较,mi R-27b mimics组凋亡率明显改善(P<0.05)。AngⅡ诱导组心肌细胞ROS水平较正常对照组上升,而总SOD活性下降,2组间比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与AngⅡ诱导组比较,miR-27b mimics组ROS水平下降,而总SOD活性增加(P<0.05)。结论:miR-27b可能通过调控细胞凋亡的基因转录,参与心肌细胞肥大的发生发展。

结直肠癌及缺氧的结直肠癌细胞中HIF-1α与miRNA-200b表达的相关性

目的探讨缺氧诱导因子HIF-1α与miRNA-200b在结直肠癌及缺氧的结直肠癌细胞中的表达以及两者的相关性。方法采用实时定量PCR检测50例结直肠癌患者的结直肠癌组织及其癌旁组织中HIF-1α与miRNA-200b的表达。利用Co Cl_2构建结肠癌细胞系的缺氧诱导模型,通过实时定量PCR和Western blot分别测定缺氧的Caco-2细胞中HIF-1α和miRNA-200b基因表达并确立两者相关性。结果 HIF-1α在癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P〈0.01）,miRNA-200b在癌组织中的表达显著低于癌旁组织（P〈0.01）,且HIF-1α和miRNA-200b在癌组织中的表达呈负相关（r=-0.324,P〈0.05）。缺氧处理2 h后,HIF-1α表达升高,miRNA-200b表达降低;随着缺氧时间延长（4~12 h）HIF-1α表达逐渐降低,miRNA-200b的表达缓慢上升;缺氧16 h,HIF-1α的表达回升且达到另一个高峰,miRNA-200b的表达降至最低。Real-time PCR和Western blot联合检测发现,HIF-1α和miRNA-200b表达呈相反的趋势。结论 HIF-1α可能通过抑制miRNA-200b的表达从而参与结直肠癌上皮细胞EMT的过程。

低氧训练对肥胖大鼠脂肪组织miRNA-27b/PPARγ脂代谢通路的影响

目的:通过建立高脂饮食单纯营养性肥胖大鼠模型,结合脂肪组织中脂肪酸结合蛋白AFABP1、脂肪酸转运蛋白FATP4和胆固醇反转物ABCA1的表达水平变化,从脂类物质结合和转运的角度探讨低氧训练对miRNA-27b/PPARγ调节通路及其下游相关靶基因表达的影响。方法:SD大鼠肥胖模型验证成功后,随机分为常氧安静组(NC)、常氧训练组(NT)、低氧安静组(HC)和低氧训练组(HT)。NT和HT组分别以20 m/min、25 m/min进行水平跑台训练,持续训练4周,1 h/天,6天/周;NC和HC组不运动;低氧氧浓度为13.6%(相当于海拔3 500 m)。4周后取血清进行血脂测试,肾周脂肪采用q RT-PCR进行miRNA-27b、PPARγ、AFABP1、FATP4、ABCA1基因表达检测。结果:1)HT、HC和NT组大鼠体重低于NC组(P<0.01),NT组脂肪重量低于NC组(P<0.05),HT组脂肪重低于NC、HC组(P<0.01);2)HT、HC组的TC值低于NC组(P<0.05),HC、HT组的TG值高于NT组(P<0.01),HT、HC组的HDLC值低于NC、NT组(P<0.05);3)HT组的miRNA-27b表达较NC、NT和HC组下调(P<0.01);4)HT组的PPARγm RNA表达较NC、HC组上调(P<0.01);5)NT组的FABP1 m RNA表达较NC组上调(P<0.01),HC组较NC组下调(P<0.01),HT组较NC、HC组上调(P<0.01),HT组较NT组下调(P<0.01),HT组的FATP4 m RNA较NC组上调(P<0.01),HT、HC组的ABCA1 m RNA表达较NC、NT组下调(P<0.01)。结论:1)低氧训练较常氧训练和单纯低氧暴露降低肥胖大鼠体重和脂肪重量更有效;2)低氧训练通过抑制脂肪组织miRNA-27表达,上调PPARγ表达,影响下游靶基因AFABP1和FATP4的表达,促进脂肪酸的结合与转运,但却抑制ABCA1表达,引起HDL-C水平下降。

miRNA-130b在骨肉瘤组织中的表达及其对骨肉瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨骨肉瘤组织中miRNA-130b的表达及其对骨肉瘤细胞增殖、细胞周期以及凋亡的影响。方法用Real-time PCR法检测48例骨肉瘤患者肿瘤组织与癌旁组织中miRNA-130b的表达水平。用脂质体法将miRNA-130b inhibitor瞬时转染入U2人骨肉瘤细胞,实时定量RT-PCR检测U2细胞miRNA-130b的表达,CCK8增殖实验检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞周期及细胞凋亡率,荧光素酶基因报告实验检测miRNA-130b与RUNX3之间的调控机制、荧光素酶的相对活性和转染后RUNX3及miRNA-130b的表达水平。结果骨肉瘤组织中miRNA-130b的表达明显高于癌旁组织,转染miRNA-130b inhibitor后U2细胞miRNA-130b的表达水平明显受抑制,人骨肉瘤细胞U2转染miRNA-130b inhibitor的细胞增殖速度明显下降,细胞周期阻滞在G0/G1期,凋亡率增高,细胞中RUNX3蛋白及m RNA表达水平明显升高;miRNA-130b显著抑制野生型RUNX3-3’UTR表达载体的荧光素酶活性;抑制miRNA-130b表达后,RUNX3表达明显升高;抑制RUNX3表达后,miRNA-130的表达无明显变化。结论 miRNA-130b在骨肉瘤中呈高表达水平,抑制miRNA-130b可能通过调控RUNX3抑制骨肉瘤细胞的增殖,并促进细胞凋亡。

肝癌组织中miRNA-200b表达及其与患者生存时间的关系

目的探讨miRNA-200b（miR-200b）在肝癌组织中的表达及其与患者生存时间的关系。方法选择行手术治疗的原发性肝癌患者76例,术中留取肝癌组织以及癌旁正常组织,采用RT-PCR技术检测miR-200b表达,分析其表达与患者临床病理特征的关系。以miR-200b相对表达量的中位数为界值,将患者分为miR-200b高表达和低表达,采用Kaplan-Meier生存分析法比较其生存情况。结果肝癌组织中miR-200b相对表达量为0.61±0.12,癌旁正常组织为1.37±0.19,二者比较P〈0.05。miR-200b表达与肝癌患者淋巴结转移有关（P〈0.05）,与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、TNM分期、肝炎史和AFP均无关（P均〉0.05）。miR-200b相对表达量中位数为0.597,76例患者中miR-200b高表达32例、低表达39例。随访2~60个月,miR-200b高表达者生存22例（68.7%）、中位生存期47.5个月,低表达者生存16例（41.0%）、中位生存期31.0个月;miR-200b高表达者生存率及生存期均高于低表达者（P均〈0.05）。结论 miR-200b在肝癌组织中低表达,其低表达与肿瘤浸润、转移有关,可影响患者生存时间。

肝纤维化指标与miRNA-200b、TAP联合检测与原发性肝癌预后的相关性研究

目的 探讨肝纤维化指标与miRNA-200b、肿瘤异常蛋白(TAP)表达水平与原发性肝癌预后的相关性。方法 选择2017年2月至2018年1月在该院接受治疗的73例原发性肝癌患者病例资料作为研究对象,根据预后状况分为预后良好组和预后不良组。对两组患者miRNA-200b、TAP表达水平及肝纤维化指标进行分析。结果 预后不良组患者肝组织miRNA-200bmRNA表达量均低于预后良好组,预后良好组患者血清TAP水平显著高于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良患者血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层粘连蛋白(LN)以及透明质酸(HA)水平均低于预后良好患者,差异有统计学意义(P<0.05)。血清血清TAP、癌组织miRNA-200bmRNA表达水平与肝纤维化指标联合检测对原发性肝癌预后评估的灵敏度、准确度和特异度分别为0.985、0.972和0.832。结论 血清TAP、癌组织miRNA-200bmRNA表达水平与肝纤维化指标联合检测可用于对原发性肝癌的预后进行评估的灵敏度、特异度及准确度均较高,具有较好的临床应用前景。

miRNA-196b过表达对K562细胞增殖、凋亡及survivin、Cox-2表达的影响

背景与目的:BCR-ABL融合基因是慢性粒细胞白血病发病的分子病理基础,也是诊断慢性粒细胞白血病、观察疗效、评估预后等的有效指标。miRNA-196b在急性粒细胞白血病中低表达并对疾病的发展起主要作用。在慢性粒细胞白血病中miRNA-196b的靶基因为BCR-ABL,miRNA-196b过表达抑制BCR-ABL融合基因的表达。生存素(survivin)是BCR-ABL的一个下游基因,已在多种肿瘤中发现survivin与环氧化酶-2(Cox-2)协同调节细胞的增殖凋亡。本研究旨在探讨miRNA-196b过表达对K562细胞增殖、凋亡及survivin、Cox-2 mRNA表达的影响。方法:实验分为K562-196b组、空载K562-pLV组与K562组,采用CCK-8法检测细胞增殖;采用AnnexinⅤ-PE检测细胞凋亡;采用实时荧光定量PCR法检测Cox-2、survivin mRNA的表达情况。结果:miRNA-196b过表达可以明显抑制K562细胞增殖;K562-196b组细胞凋亡率显著高于K562组(P<0.05);miRNA-196b组中survivin基因显著低表达(P<0.05),Cox-2基因中无明显变化(P>0.05)。结论:miRNA-196b对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡有显著作用;miRNA-196b过表达可下调survivin基因的表达,为miRNA-196b作为慢性粒细胞性白血病的治疗靶点提供了依据。

利用CRISPR/Cas9技术构建miRNA-29b1基因敲除小鼠

目的应用CRISPR/Cas9技术构建miRNA-29b1基因敲除小鼠。方法针对miRNA-29b1基因设计一段sgRNA,sgRNA和Cas9体外转录后显微注射至C57BL/6小鼠受精卵细胞。小鼠出生后取其基因组DNA进行测序以鉴定基因型,同时取小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器研磨后提取总RNA,通过real-time PCR分析miRNA-29b1在这些脏器中的表达。结果设计了20 bp的miRNA-29b1sgRNA并与Cas9一起进行了体外转录,显微注射小鼠受精卵细胞后获得miRNA-29b1基因突变小鼠。测序结果表明突变小鼠有两种基因型,一种为10 bp的缺失突变;另一种为22 bp的缺失突变,同时伴有3 bp的插入突变。与野生型小鼠相比,基因突变小鼠心、肝、脾、肺、肾等组织中miRNA-29b1表达量下降明显。结论应用CRISPR/Cas9技术成功构建miRNA-29b1基因敲除小鼠。