血清miRNA-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1水平与脑胶质瘤患者术后复发的关系

目的检测脑胶质瘤患者的血清微小RNA(miRNA)-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1(A1BG-AS1)水平,并分析其与患者术后复发的关系。方法选取94例接受手术治疗的脑胶质瘤患者和84例健康体检者,分别作为研究组和对照组。术后所有脑胶质瘤患者均随访2年,依据是否复发分为复发组(n=71)和非复发组(n=23)。采用聚合酶链反应(PCR)检测血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平,比较研究组和对照组、复发组和非复发组的血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平。采用Spearman相关分析法分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1单独及联合检测对脑胶质瘤患者术后复发的评估价值。结果研究组患者血清miRNA-199a-5p水平明显低于对照组,血清A1BG-AS1水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。复发组患者血清miRNA-199a-5p水平低于非复发组,血清A1BG-AS1水平高于非复发组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。血清miRNA-199a-5p水平与脑胶质瘤患者术后复发呈负相关(r=-0.382,P﹤0.05),血清A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发呈正相关(r=0.423,P﹤0.05)。ROC曲线显示,血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1联合检测评估脑胶质瘤患者术后复发的AUC和灵敏度均高于二者单独检测。结论脑胶质瘤患者血清miRNA-199a-5p水平降低,血清A1BG-AS1水平升高,且其表达水平与脑胶质瘤患者术后复发有关,联合检测对术后复发具有较好的评估价值。

miRNA-199a-5p对骨肉瘤细胞增殖及自噬的影响

目的探讨mi RNA-199a-5p对人骨肉瘤细胞株U2OS增殖及自噬的影响及其可能的作用机制。方法实时定量PCR法检测32例骨肉瘤患者的病理组织标本及配对癌旁正常组织中mi RNA-199a-5p的表达水平。将mi RNA-199a-5p mimics转染入U2OS细胞,使其过表达mi RNA-199a-5p,采用CCK-8法和流式细胞仪检测细胞增殖及周期的变化;Western blot检测周期相关蛋白(cyclin D1、P27、p Rb)及自噬相关蛋白(Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ)表达水平。结果 mi RNA-199a-5p在骨肉瘤组织及癌细胞U2OS中低表达,且表达水平与肿块大小、远距转移、Enneking临床分期及病理分级密切相关。过表达mi RNA-199a-5p后,U2OS细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),同时cyclin D1、p Rb表达水平显著下降,而P27、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1的表达水平显著增加(P<0.05)。结论 mi RNA-199a-5p能够抑制人骨肉瘤细胞株U2OS的增殖并激活细胞自噬;其作用机制可能与下调cyclin D1、上调P27、抑制p Rb蛋白的磷酸化、造成细胞周期G1/S阻滞有关。提示mi RNA-199a-5p可以作为骨肉瘤临床治疗的潜在作用位点。

miRNA-199a-5p在热损伤人皮肤成纤维细胞中的表达及其功能研究

目的:观察热损伤人皮肤成纤维细胞中miRNA-199a-5p表达量的变化,以及对皮肤成纤维细胞增殖、迁移、侵袭功能的影响。方法:分别用人皮肤成纤维细胞株(HSF)隔水52℃水浴30 s、60 s制造细胞热损伤模型,对比观察细胞热损伤状态;用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测热损伤24 h、48 h后细胞的增殖率;用qRT-PCR检测热损伤24 h、48 h后细胞miRNA-199a-5p表达量的变化情况;用划痕和Transwell测试细胞的迁移、侵袭功能;用模拟物提高热损伤细胞中miRNA-199a-5p的表达量,检测热损伤细胞的增殖和侵袭情况。结果:52℃30 s可以很好地制造人皮肤成纤维热损伤模型;与对照组比较,热损伤后miRNA-199a-5p表达量下调[24 h,(2.67±0.35)%,P<0.001;48 h,(18.42±0.44)%,P<0.001],细胞增殖显著受到抑制[24 h,(17.10±3.21)%,P<0.002;48 h,(25.93±1.74)%,P<0.001],细胞的迁移功能显著下降[(35.35±7.07)%,P<0.001],侵袭功能亦被显著抑制[(57.14±9.52)%,P<0.007]。通过模拟物提高热损伤细胞中miRNA-199a-5p的表达量后,细胞的增殖显著上调[(136.55±6.14)%,P<0.003],细胞的侵袭能力增强[(196.88±15.63)%,P<0.003]。结论:热损伤人皮肤成纤维细胞中miRNA-199a-5p的表达量与细胞增殖、迁移和侵袭正相关,提高热损伤细胞中miRNA-199a-5p的表达量可以帮助热损伤细胞快速转归。

大鼠烧伤和热压伤自身修复过程中miRNA-199a-5p的表达变化

目的:探讨大鼠烧伤和热压伤中变性真皮miRNA-199a-5p表达量随时间的变化情况。方法:用控温烫伤仪制作皮肤烧伤模型和热压伤模型,设置阴性对照组,用qRT-PCR检测不同的时间烫伤和热压伤部位变性真皮中的miRNA-199a-5p相对表达量。结果:各模型组变性真皮中miRNA-199a-5p相对表达量较正常组织中的相对表达量呈先下调后上调趋势,14 d时miRNA-199a-5p相对表达量上调具有显著差异(P<0.05)。结论:miRNA-199a-5p表达和变性真皮的增殖和迁移调控相关,损伤早期表达量的下调,促进变性真皮恢复正常功能,表达量的上调则促进细胞增殖和迁移,为热压伤创面修复机制的探讨提供新思路。

宫颈癌组织中Has-miRNA-199a-5p的表达变化

目的观察宫颈癌组织中has-miRNA-199a-5p的表达变化。方法采用茎环RT-PCR法检测50例宫颈癌组织(观察组)和50例非癌疾病切除的正常宫颈组织(对照组)中has-miRNA-199a-5p。结果观察组has-miR-NA-199a-5p表达量为38.62±16.57,对照组为5.46±4.89,P<0.01。高分化宫颈癌组织has-miRNA-199a-5p表达量为5.67±4.35,中低分化宫颈癌组织为40.28±17.13,P<0.01。结论宫颈癌组织has-miRNA-199a-5p异常高表达,且表达量与宫颈癌分化程度有关。

miRNA-199a-5p通过SP1调节ERK5抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的机制

目的探讨miR-199a-5p对乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭影响及其作用机制。方法转染miR-199a-5p mimic至MDA-MB-231细胞,Transwell侵袭实验检测miR-199a-5p对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响。采用细胞免疫荧光、Western blot法检测上皮细胞-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)分子标志物E-cadherin、vimentin的表达。应用Western blot法检测miR-199a-5p mimic及其LNA-siRNA对ERK5、p ERK5、EGF、SP1表达的影响。染色体免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,CHIP)技术检测SP1是否与ERK5启动子区结合。结果 miR-199a-5p能抑制MDA-MB-231细胞的侵袭,降低vimentin的表达,增强E-cadherin的表达。同时,miR-199a-5p降低ERK5表达并抑制其磷酸化;EGF、SP1的表达也相应减少。相反,应用LNA-siRNA抑制miR-199a-5p后,ERK5、p ERK5、EGF、SP1的表达上调。CHIP结果显示SP1能与ERK5启动子区结合。结论 miR-199a-5p通过调节EGF、SP1下调ERK5的表达并抑制其磷酸化,进而发挥对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的抑制作用。

下调miRNA-199a-5p靶向HIF1α激活JAK/STAT3通路促进乳腺癌细胞增殖与恶性转移

目的:探讨miRNA-199a-5p在乳腺癌MCF-7细胞中的表达及其对细胞增殖与恶性转移的影响。方法:利用RT-qPCR检测miR-199a-5p在乳腺癌细胞(MCF-7细胞)和人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A细胞)中的差异表达。过表达或下调miR-199a-5p表达,通过MTT试剂盒检测MCF-7细胞增殖能力,Transwell检测MCF-7细胞的侵袭能力,Western blot检测过表达及下调miR-199a-5p对MCF-7细胞EMT的影响。TargetScan分析miR-199a-5p的作用靶点,双荧光素酶报告基因实验检测miR-199a-5p和HIF1α之间的关系。RT-qPCR检测HIF1α在MCF-7细胞和MCF-10A细胞中的差异表达。HIF1α siRNA质粒转染细胞后,检测下调HIF1α对MCF-7细胞增殖、侵袭和EMT的影响。过表达HIF1α后,Western blot检测细胞内JAK、p-JAK、STAT3和p-STAT3蛋白的表达量。将AG490作用MCF-7细胞后再转染pcDNA-HIF1α质粒,检测MCF-7细胞增殖、侵袭和EMT能力。结果:与MCF-10A细胞相比,MCF-7细胞中miR-199a-5p表达明显降低(P<0.01),HIF1α表达明显上升(P<0.01)。过表达miR-199a-5p抑制了MCF-7细胞增殖、侵袭与EMT,下调miR-199a-5p促进了MCF-7细胞的增殖、侵袭与EMT;miR-199a-5p靶向HIF1α,且负调控HIF1α表达;siRNA下调HIF1α表达后明显抑制了MCF-7细胞增殖、侵袭和EMT;上调HIF1α表达后,激活MCF-7细胞内JAK/STAT3通路,AG490作用MCF-7细胞能明显抑制HIF1α对MCF-7细胞增殖、侵袭和EMT的促进作用。结论:下调miRNA-199a-5p靶向HIF1α激活JAK/STAT3通路促进乳腺癌细胞增殖与恶性转移。

长链非编码RNA TMPO-AS1靶向调控miRNA-199a-5p基因对胃癌SGC-7901细胞生物学特性的影响

目的 探讨lncRNATMPO和miR-199a-5p调控胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的作用及其机制。方法采用qRT-PCR检测胃癌组织和细胞中lncRNATMPO-AS1的表达。采用CCK-8、Transwell检测胃癌细胞的增殖和迁移;采用生物信息分析、荧光素酶实验、qRT-PCR验证lncRNATMPO-AS1和miR-199a-5p的靶向关系。结果 与癌旁正常组织和正常胃黏膜上皮细胞相比,lncRNATMPO-AS1在胃癌组织和细胞中表达上调(P<0.05)。下调lncRNATMPO-AS1增加胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。lncRNATMPO-AS1靶向作用miR-199a-5p并下调其表达水平。结论lncRNATMPO-AS1在胃癌中发挥促癌效应,其可以通过抑制miR-199a-5p的功能而促进胃癌细胞的增殖和迁移。

miR-223、miR-200b、miR-199a-5p在缺血性脑卒中患者中的表达及相关性研究

目的 探讨微小RNA(miR)-223、miR-200b、miR-199a-5p在缺血性脑卒中(IS)患者中的表达及相关性。方法 选取2019年3月—2021年3月上海市第六人民医院金山分院IS患者132例为研究对象,根据90 d后改良Rankin量表(mRS)评分分为预后不良组(n=51,mRS评分>2分)和预后良好组(n=81,mRS评分≤2分)。比较两组基线资料,美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)、mRS评分,血清miR-223、miR-200b、miR-199a-5p,分析上述血清指标与NIHSS、mRS评分的相关性,探讨IS预后不良的影响因素,评价上述血清指标对IS预后的预测价值及不同表达与IS预后的关系。结果 预后不良组血清miR-223、miR-199a-5p表达高于预后良好组,血清miR-200b表达低于预后良好组(P<0.05);miR-223、miR-199a-5p与NIHSS、mRS评分呈正相关,miR-200b与NIHSS、mRS评分呈负相关(P<0.05);将卒中分型、NIHSS评分、血小板计数、发病至治疗时间等其他因素控制后,血清miR-223、miR-200b、miR-199a-5p与IS预后不良(mRS评分)显著相关(P<0.05);血清miR-223、miR-200b、miR-199a-5p联合预测IS预后不良的曲线下面积(AUC)最大,为0.928;miR-223、miR-199a-5p高表达者预后不良发生率高于低表达者,miR-200b低表达者预后不良发生率高于高表达者(P<0.05)。结论 血清miR-223、miR-199a-5p过表达和miR-200b表达缺失均与IS患者神经功能缺损程度及神经功能恶化有关,可为患者预后预测提供参考依据。

LINC00662通过调控miR-199a-5p/MAP3K1通路对胃癌侵袭、转移的影响

目的探讨LINC00662通过调控miR-199a-5p/丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶1(MAP3K1)通路对胃癌侵袭、转移的影响。方法收集2018年6月至2020年6月期间我院胃癌患者癌组织及癌旁组织,实时定量PCR检测胃癌组织及癌旁组织中LINC00662、miR-199a-5p、MAP3K1 mRNA表达。取对数生长期的SGC-7901细胞,利用LipofectamineTM2000转染试剂盒进行转染,并分为si-NC组、si-LINC00662组、si-LINC00662+anti-miR-NC组、si-LINC00662+anti-miR-199a-5p组、si-LINC00662+miR-NC组、si-LINC00662+miR-199a-5p组、miR-NC组、miR-199a-5p组、空载体组、LINC00662过表达组、anti-miR-NC组、anti-miR-199a-5p组,另取未转染的SGC-7901细胞作为空白组。Transwell实验检测各组细胞的侵袭与迁移;划痕实验检测各组细胞迁移能力;Western blotting检测各组细胞中MAP3K1、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)表达;双荧光素酶报告基因实验验证LINC00662与miR-199a-5p、miR-199a-5p与MAP3K1的靶向关系。结果与癌旁组织比较,胃癌组织中LINC00662、MAP3K1 mRNA表达水平显著升高,miR-199a-5p表达水平显著降低(均P<0.05)。与空白组和si-NC组比较,si-LINC00662组SGC-7901细胞中LINC00662表达水平显著降低,侵袭、迁移细胞数目显著减少,划痕愈合率显著降低,MAP3K1、MMP-2、MMP-9、N-cadherin相对表达量显著降低,miR-199a-5p表达水平显著升高(均P<0.05)。与si-LINC00662组和si-LINC00662+anti-miR-NC组比较,si-LINC00662+anti-miR-199a-5p组SGC-7901细胞中miR-199a-5p表达水平显著降低,侵袭、迁移细胞数目显著升高,划痕愈合率显著升高,MAP3K1、MMP-2、MMP-9、N-cadherin相对表达量显著升高(均P<0.05)。与si-LINC00662组和si-LINC00662+miR-NC组比较,si-LINC00662+miR-199a-5p组SGC-7901细胞中miR-199a-5p表达水平显著升高,侵袭、迁移细胞数目显著降低,划痕愈合率显著降低,MAP3K1、MMP-2、MMP-9、N-cadherin相对表达量显著降低(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实LINC00662靶向负调控miR-199a-5p表达,miR-199a-5p靶向负调控MAP3K1表达。结论胃癌组织中LINC00662高表达,si-LINC00662通过调控miR-199a-5p/MAP3K1通路抑制胃癌细胞侵袭、转移。

微小RNA-199a-5p对非小细胞肺癌紫杉醇耐药性的影响及其机制

目的 探讨微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞紫杉醇(PTX)耐药性的影响及其机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分析人NSCLC细胞株A549和耐药NSCLC细胞株A549/PTX中miR-199a-5p相对表达水平;采用细胞增殖试剂盒(CCK-8)分析A549和A549/PTX细胞对PTX的耐药性;双荧光素酶实验验证miR-199a-5p与热休克因子-1(HSF-1)的靶向关系。采用CCK-8和TUNEL分别检测细胞增殖、凋亡情况;采用Western blotting检测细胞中HSF-1、热休克蛋白(HSP)90、HSP60、P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达水平。结果 A549/PTX细胞对PTX的耐药性显著高于A549细胞(P<0.05),且A549/PTX细胞对PTX的半数抑制浓度(IC_(50))高于A549细胞。耐药细胞株A549/PTX中miR-199a-5p表达显著下调,HSF-1 mRNA显著上调(P<0.05)。在耐药细胞株A549/PTX中miR-199a-5p负靶向调控HSF-1表达(P<0.05)。在A549/PTX细胞中过表达miR-199a-5p或抑制HSF-1可降低PTX的IC_(50)值,促进细胞凋亡,下调HSF-1、HSP90、HSP60和P-gp蛋白水平(P<0.05);而过表达HSF-1则可在一定程度上逆转上调miR-199a-5p对A549/PTX细胞的影响(P<0.05)。结论 miR-199a-5p通过抑制HSF-1减弱NSCLC细胞PTX耐药性。

sPE患者血清miR-199a-5p、miR-142-3p表达变化及与产妇血管内皮损伤、围产儿结局的关系

目的观察重度子痫前期(sPE)患者血清微小核糖核酸-199a-5p(miR-199a-5p)、微小核糖核酸-142-3p(miR-142-3p)表达变化,并分析其与产妇血管内皮损伤、围产儿结局的关系,为围产儿结局的改善提供参考。方法选取sPE患者200例(观察组)和产检健康孕妇200例(对照组),采用RT-PCR法测算两组血清miR-199a-5p、miR-142-3p,酶联免疫吸附试验检测两组血清可溶性细胞内皮因子(sEng)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)、内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF),Pearson相关分析法分析观察组血清miR-199a-5p、miR-142-3p与血管内皮功能相关指标的相关性。根据围产儿结局将观察组分为结局不良组(29例)和结局良好组(171例),采用单因素分析法及多因素Logistic回归分析法分析患者血清miR-199a-5p、miR-142-3p表达与围产儿结局的关系。结果与对照组比较,观察组血清miR-199a-5p表达及VEGF水平降低,血清miR-142-3p表达及sEng、sFlt-1、ET-1水平升高(P均<0.05)。观察组血清miR-199a-5p表达与sEng、sFlt-1、ET-1水平呈负相关,与VEGF水平呈正相关(P均<0.05);血清miR-142-3p表达与sEng、sFlt-1、ET-1水平呈正相关,与VEGF水平呈负相关(P均<0.05)。结局不良组和结局良好组年龄、早发型sPE比例、并发水肿比例、并发子痫比例、并发胎盘早剥比例、并发产后出血比例、血清miR-142-3p表达变化、血清miR-199a-5p表达变化比较,P均<0.05;多因素Logistic回归分析显示,早发型sPE、胎盘早剥、miR-142-3p高表达是sPE围产儿结局不良的危险因素(P均<0.05),miR-199a-5p高表达是sPE围产儿结局不良的保护因素(P<0.05)。结论sPE患者血清miR-199a-5p表达降低、miR-142-3p表达升高,与血管内皮损伤有关,miR-142-3p高表达是sPE围产儿结局不良的危险因素,miR-199a-5p高表达是sPE围产儿结局不良的保护因素。

健脾合剂调控miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p干预IBS-D大鼠的作用机制研究

目的基于miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p探讨健脾合剂干预腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠的作用机制。方法采用急-慢应激法联合番泻叶灌胃法制备IBS-D大鼠模型,分组后给予健脾合剂干预。实验过程中及治疗完成后,记录大鼠一般情况、体质量及粪便性状;采用直肠扩张下腹壁回缩反射(Abdominal withdrawal reflex,AWR)评分检测大鼠的疼痛阈值,评估IBS-D大鼠的内脏敏感性;采用显色基质鲎试剂检测大鼠血液中的细菌内毒素含量,观察其肠道通透性变化;观察大鼠结肠黏膜组织病理,对其肠黏膜状态进行评估;并使用RT-PCR法检测大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p的含量。结果粪便性状评分、内脏敏感性测定、组织病理结果表明IBS-D大鼠模型制备成功。与空白组比较,模型组大鼠大便稀溏甚则水样,体质量下降;健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠大便成形,粪便Bristol评分显著降低,体质量有所增加。内脏敏感性结果显示,IBS-D大鼠内脏疼痛阈值下降;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内脏疼痛阈值有所升高,内脏敏感性降低。显色基质鲎试剂检测结果显示,IBS-D大鼠血清内毒素含量升高;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内毒素含量较前下降,肠道通透性降低。大鼠结肠粘膜病理结果表明,IBS-D大鼠结肠组织黏膜上皮轻度破损,局部可见水肿。健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠结肠黏膜上述情况得到有效改善。Realtime PCR法检测大鼠结肠粘膜结果显示,IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平显著降低,健脾合剂治疗后,高剂量组大鼠miR-219a-5p、miR-338-3p含量有所升高。结论健脾合剂对改善IBS-D症状具有一定的作用,健脾合剂能够增加IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平,提示其可能通过对miR-219a-5p、miR-338-3p的调控降低IBS-D大鼠的肠道通透性及内脏敏感性,从而发挥疗效。

miR-199a-5p、IFN-γ、IL-12在老年慢性HBV感染患者不同免疫状态下的评估价值

目的分析老年慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者不同免疫状态下血清miR-199a-5p、干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-12表达及其对不同免疫状态下老年慢性HBV感染的评估价值。方法106例老年慢性HBV感染患者依据免疫状态的不同分为再活动期49例,免疫控制期57例。另选取同期接受检查的健康志愿者55例为对照组。以实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)测定所有研究对象血清中miR-199a-5p水平,采用酶联免疫吸附试验测定血清IFN-γ、IL-12水平。以Spearman相关性分析血清miR-199a-5p、IFN-γ、IL-12水平与老年慢性HBV感染患者免疫状态的相关性,以受试者工作特征(ROC)曲线分析患者血清miR-199a-5p、IFN-γ、IL-12水平对老年慢性HBV感染患者不同免疫状态的评估价值。结果研究组血清miR-199a-5p、IFN-γ、IL-12水平显著高于对照组(P<0.05);再活动期患者血清miR-199a-5p、IFN-γ、IL-12水平显著高于免疫控制期患者(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,血清miR-199a-5p、IFN-γ、IL-12水平与老年慢性HBV感染患者免疫状态呈正相关(r=0.468、0.496、0.435,均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-199a-5p、IFN-γ、IL-12水平单独及联合评估老年慢性HBV感染患者免疫状态的曲线下面积(AUC)分别为0.669、0.802、0.646、0.841,检测灵敏度分别为50.00%、90.48%、38.10%、69.05%,特异性分别为77.55%、59.18%、91.84%、87.76%,联合评估效能显著优于各指标单独评估。结论老年慢性HBV感染患者不同免疫状态下血清中miR-199a-5p、IFN-γ、IL-12水平表达不同,检测其水平可评估患者免疫状态,且三者联合评估的效能更佳,可为临床治疗提供一定的参考依据。

舒芬太尼通过miR-199a-5p减轻缺氧复氧H9C2细胞凋亡自噬的机制研究

目的:观察舒芬太尼对缺氧复氧(H/R)心肌细胞H9C2凋亡、自噬的影响,并探究其作用机制。方法:建立H/R H9C2细胞损伤模型,用10μmol/L舒芬太尼处理H9C2细胞再行H/R。采用脂质体法将H/R+SUF+antagomiRNA组(转染antagomiRNA,用10μmol/L舒芬太尼处理)、H/R+SUF+antagomiR-199a-5p组(转染antagomiR-199a-5p,用10μmol/L舒芬太尼处理)转染H9C2细胞并行H/R处理。采用细胞计数试剂盒(CCK8)检测培养12、24和48 h的细胞活力。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙锭双染法、蛋白质印迹法检测细胞凋亡率、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、波形蛋白(survivin)、线粒体自噬相关蛋白(PINK1)、自噬标记物(LC3-Ⅱ/Ⅰ)和细胞色素C(Cyt C)的蛋白表达。结果:与H9C2组相比,H/R组细胞在48、72 h的活力均显著降低;与H/R+ddH_(2)O组相比,H/R+SUF组细胞在48、72 h的细胞活力显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05),因此选用培养48 h的细胞用于后续研究。与H9C2组相比,H/R组H9C2细胞凋亡率显著升高,Caspase-3、PINK1、LC3-Ⅱ/Ⅰ和细胞质Cyt C蛋白表达水平显著升高,survivin、线粒体Cyt C蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与H/R+ddH_(2)O组相比,H/R+SUF组H9C2细胞凋亡率显著降低,Caspase-3、PINK1、LC3-Ⅱ/Ⅰ和细胞质Cyt C蛋白表达水平显著降低,survivin、线粒体Cyt C蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。H/R组miR-199a-5p的表达水平显著高于H9C2组,H/R+SUF组miR-199a-5p的表达水平则显著低于H/R+ddH_(2)O组,差异均有统计学意义(P<0.05);特异性抑制miR-199a-5p的表达明显增强了舒芬太尼对H/R H9C2细胞的凋亡自噬抑制作用。结论:舒芬太尼可抑制H/R心肌细胞的凋亡和自噬,其作用机制与调控miR-199a-5p的表达水平有关。

环状RNA FAT1(hsa_circ_0001461)通过调控miR-181d-5p/miR-199a-5p促进口腔鳞状细胞癌进展

目的:探讨环状RNA FAT1(hsa_circ_0001461)-miR-181d-5p/miR-199a-5p轴在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞生物学功能中的作用及机制。方法:收集30例OSCC患者的临床组织,采用实时定量PCR检测circFAT1、miR-181d-5p及miR-199a-5p在OSCC组织和细胞中的表达。通过StarBase和双荧光素酶报告基因实验验证miR-181d-5p/miR-199a-5p与circFAT1的靶向关系。利用CCK-8、Transwell、流式细胞术检测circFAT1-miR-181d-5p/miR-199a-5p轴对于OSCC细胞活力、迁移、侵袭、凋亡和周期的影响。采用免疫印迹法结合LY294002处理检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:在OSCC中circFAT1表达升高,miR-181d-5p、miR-199a-5p表达下降(P<0.001)。circFAT1可以同时靶向miR-181d-5p和miR-199a-5p(P<0.01)。沉默circFAT1、过表达miR-181d及miR-199a-5p抑制了OSCC细胞活力、迁移、侵袭和周期进展、诱导凋亡,同时抑制PI3K/Akt/mTOR通路的激活;过表达circFAT1、抑制miR-181d-5p及miR-199a-5p则发挥相反作用(P<0.05)。miR-181d-5p、miR-199a-5p可部分逆转circFAT1对OSCC细胞生物学功能的影响(P<0.05)。LY294002预处理逆转了过表达circFAT1对PI3K/Akt/mTOR通路和细胞活力的影响(P<0.05)。结论:circFAT1通过调控miR-181d-5p和miR-199a-5p促进OSCC细胞恶性进展。

马齿苋提取物调控miR-199a-5p对人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长和胶原合成的影响

目的探讨马齿苋提取物调控miR-199a-5p对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)生长和胶原合成的影响。方法将HKF细胞分为对照组、马齿苋提取物(50、100、200μg/mL)组、miR-NC组、miR-199a-5p组、anti-miR-NC+200μg/mL马齿苋提取物组、anti-miR-199a-5p+200μg/mL马齿苋提取物组。CCK-8法检测HKF细胞活力,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-qPCR法检测细胞miR-199a-5p表达,Western blot法检测细胞Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白表达。结果与对照组比较,马齿苋提取物组细胞活力、S期细胞比例、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ蛋白表达降低(P<0.05),miR-199a-5p表达、G_(0)/G_(1)期细胞比例升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-199a-5p组细胞活力、S期细胞比例、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ蛋白表达降低(P<0.05),G_(0)/G_(1)期细胞比例升高(P<0.05)。与anti-miR-NC+200μg/mL马齿苋提取物组比较,anti-miR-199a-5p+200μg/mL马齿苋提取物组细胞活力、S期细胞比例、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ蛋白表达升高(P<0.05),G_(0)/G_(1)期细胞比例降低(P<0.05)。结论马齿苋提取物可能通过上调miR-199a-5p表达抑制HKF细胞生长和胶原合成。

miRNA-34a-5p靶向Fut8抑制巨噬源性泡沫细胞的运动能力

目的探讨miRNA-34a-5p/岩藻糖基转移酶8(fucosyltransferase,Fut8)轴对巨噬源性泡沫细胞运动能力的影响。方法首先利用生物信息学和RT-PCR寻找并检测Fut8基因上游的调控miRNA变化情况;其次利用Pearson相关性分析观察斑块组患者血清中Fut8和miRNA的相关性;最后构建泡沫细胞模型观察miRNA对泡沫细胞运动能力的影响并明确Fut8在其中的重要作用。结果miRNA-34a-5p和miRNA-449b-5p在斑块组患者血清中均显著上升,但miRNA-34a-5p与Fut8有更大的相关性。miRNA-34a-5p在泡沫细胞形成时含量显著升高,抑制miRNA-34a-5p表达会促进Fut8的表达。高表达的miRNA-34a-5p会导致穿透到下室的细胞数量减少。过表达Fut8预处理细胞,会增加穿透到下室的细胞数量。结论miRNA-34a-5p为Fut8的上游miRNA之一,通过下调Fut8表达而抑制巨噬源性泡沫细胞运动能力。

miR-199a-5p通过靶向JunB介导心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的作用机制

目的:观察miR-199a-5p对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:将120只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、Antagomir对照组、Antagomir组、Agomir对照组及Agomir组。除假手术组(18只)外,其余组大鼠采用持续14 d结扎左冠状动脉前降支诱导构建心肌梗死后心力衰竭大鼠模型,成功诱导94只心力衰竭大鼠,剔除4只,随机分组,每组大鼠18只。分别给予Antagomir对照组、Antagomir组、Agomir对照组及Agomir组大鼠心肌内注射2×1010PFU/mL miR-199a-5p Antagomir对照液、Antagomir液、Agomir对照液及Agomir稀释液各100μL,假手术组与模型组大鼠均等量注射生理盐水。2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法检测心肌梗死面积;苏木精-伊红(HE)染色法检测心肌组织病理损伤情况;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)染色法检测心脏缺血部位细胞凋亡水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组大鼠心肌组织中miR-199a-5p、转录因子活化蛋白激酶B(JunB)基因相对表达水平;双荧光素酶试验验证miR-199a-5p与JunB的靶向关系;免疫印迹法(Western Blot)检测各组大鼠心肌组织内活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved-Caspase 3)、JunB、淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积增加,组织结构不完整,心肌细胞排列错乱不规则,炎性细胞浸润,细胞间有明显凋亡,miR-199a-5p基因及Cleaved-Caspase 3、Bax蛋白表达水平升高,JunB mRNA及JunB、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,Antagomir对照组及Agomir对照组大鼠心肌病理组织学变化、相关基因和蛋白相对表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Antagomir组大鼠心肌组织病理情况显著改善,miR-199a-5p基因及Cleaved-Caspase 3、Bax蛋白表达水平降低,JunB mRNA及JunB、Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05);Agomir组大鼠心肌组织病理损伤加重,miR-199a-5p基因及Cleaved-Caspase 3、Bax蛋白表达水平升高,JunB mRNA及JunB、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。JunB为miR-199a-5p的靶基因。结论:miR-199a-5p可诱导心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡,可能与靶向抑制JunB表达有关。

miRNA-1260b、miRNA-182-5p及CEA、CA199表达水平对结直肠癌诊断的价值研究

目的探讨结直肠癌患者miRNA-1260b、miRNA-182-5p及癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)表达水平及其对结直肠癌的临床诊断价值分析。方法回顾性选取2020年1月至2020年12月于本院诊断为结直肠癌的60例患者作为结直肠癌组,选择本院同期进行健康体检正常人群40例为对照组。采集正常和结直肠癌组术前空腹外周静脉血,术中收集患者切除病灶和癌旁组织标本;检测两组血清及组织中miRNA-1260b、miRNA-182-5p表达水平,同时检测两组血清CEA、CA199水平;通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线,根据曲线下面积(AUC)值分析miRNA-1260b、miRNA-182-5p、CEA、CA199对结直肠癌的诊断价值。结果结直肠癌组织及血清中miRNA-1260b、miRNA-182-5p表达水平明显升高癌旁正常组织和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结直肠癌患者血清CEA、CA199水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线结果显示,miRNA-1260b、miRNA-182-5p及CEA、CA199单独诊断结直肠癌的AUC分别为0.719、0.736、0.854、0.817;四者联合诊断的AUC为0.939,明显高于任意单个指标诊断。结论结直肠癌患者血清和癌组织中miRNA-1260b、miRNA-182-5p表达水平明显升高,用于诊断结直肠癌的AUC值均大于0.7,其两者联合CEA、CA199诊断价值更高,有望成为诊断直肠癌的潜在特异性标志物。