miRNA-211通过BIN1介导肝癌细胞PD-L1依赖的免疫逃逸研究

目的探讨miR-211对程序性死亡-配体1(PD-L1)介导的肝癌细胞免疫逃逸作用及其相关机制。方法收集我院19例肝癌患者肿瘤组织,通过qRT-PCR检测肝癌组织中miR-211和PDL1表达水平并分析两者的相关性。检测人肝癌HepG2、HCCLM3细胞和人正常肝上皮细胞HL-02中miR-211和PD-L1表达水平。将HepG2细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-211组(转染miR-211),检测2组细胞中miR-211和PD-L1表达水平以及NK-92细胞对肝癌细胞的杀伤率。采用荧光素酶报告基因实验检测miR-211和BIN1的靶向关系。再将HepG2细胞分为miR-NC+oe-NC组(转染miR-NC和oe-NC)、miR-211+oe-NC组(转染miR-211和oe-NC)及miR-211+oe-BIN1组(转染miR-211和oe-BIN1),检测各组细胞中miR-211、BIN1和PD-L1表达及NK-92细胞对肝癌细胞的杀伤率。结果肝癌患者肿瘤组织中miR-211和PD-L1表达呈正相关(r=0.6007,P=0.001)。与HL-02细胞比较,HepG2和HCCLM3细胞中miR-211、PD-L1表达水平升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-211组miR-211、PD-L1表达水平升高(P<0.05),NK-92细胞对肝癌细胞的杀伤率降低(P<0.05)。miR-211靶向结合并抑制BIN1。与miR-NC+oe-NC组比较,miR-211+oe-NC组miR-211、PD-L1表达水平升高(P<0.05),BIN1表达水平降低(P<0.05),NK-92细胞对肝癌细胞的杀伤率降低(P<0.05)。与miR-211+oe-NC组比较,miR-211+oe-BIN1组BIN1表达水平升高(P<0.05),PD-L1表达水平降低(P<0.05),NK-92细胞对肝癌细胞的杀伤率升高(P<0.05)。结论在肝癌细胞中,miR-211靶向抑制BIN1表达,从而促进PD-L1依赖的免疫逃逸。

糖尿病视网膜病变血浆miRNA-211表达及其临床意义

目的分析糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy,DR)不同时期血浆微小核糖核酸-211(miRNA-211)的相对表达量;分析miRNA-211对DR的诊断价值及其影响因素。方法运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术测定20例非增殖期糖尿病视网膜病变(NPDR)患者,20例增殖期糖尿病视网膜病变(PDR)患者,20例未合并DR的单纯2型糖尿病(NDR)患者,及20例体检健康者(HC组)的血浆中miRNA-211的相对表达量。收集所有受试者年龄(Age)、性别(Sex)、身体质量指数(BMI)、糖尿病病程、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血尿素氮(BUN)等临床信息,并进行统计学分析。结果NDR组、NPDR组及PDR组患者的FBG水平、HbA1c水平、血浆miRNA-211相对表达量显著高于HC组患者;且随着病情进展miRNA-211相对表达量逐渐增高,两两组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05);HC组及NDR组患者的血尿素氮表达水平均低于NPDR组及PDR组患者。采用spearman秩相关分析结果显示:DR分期、FBG、抗胰岛素抗体是DR患者血浆miRNA-211相对表达含量的影响因素。进一步多元线性回归分析影响DR患者血浆miRNA-211表达的因素为DR分期、FBG,且呈正相关。ROC曲线评估miRNA-211对DR的诊断效能,曲线下面积(AUCROC)为0.941;95%CI为0.893~0.988;P<0.001差异有统计学意义。结论随着DR的严重程度增加、BUN表达水平的增加,血浆miRNA-211的相对表达量相应增加;血浆miRNA-211可以作为DR早期诊断、发生风险、严重程度及预后评估的指标;miRNA-211可以作为DR靶向治疗新的生物学指标。

阿尔茨海默症患者血清miR-211和miR-202表达水平及其与认知功能、焦虑抑郁情绪的相关性研究

目的分析阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease)患者血清微小核糖核酸(microRNA,miR)-211和miR-202表达水平及与认知功能、焦虑抑郁情绪的相关性研究。方法选取2019年3月~2022年3月河北燕达医院收治的阿尔茨海默症患者90例作为研究组,根据临床痴呆评定量表(clinical dementia rating,CDR)评分将患者分为轻度组(n=24)、中度组(n=48)和重度组(n=18)。另选取同期健康体检者90例作为对照组,比较血清miR-211和miR-202表达水平。Pearson法和Spearman法分析血清miR-211,miR-202以及二者与认知功能、焦虑抑郁情绪的相关性,采用Logistic回归分析阿尔茨海默症的影响因素。结果与对照组比较,研究组血清miR-211(0.59±0.16 vs 1.01±0.31)、miR-202(0.35±0.10 vs 1.00±0.32)表达水平降低,差异具有统计学意义(t=11.422,18.393,均P<0.05)。轻度、中度和重度组血清miR-211(0.73±0.21,0.62±0.17,0.32±0.08)表达水平、miR-202(0.51±0.15,0.33±0.10,0.19±0.04)表达水平、简易精神状态检查量表(mini-mental state examination,MMSE)评分(22.54±1.41分,19.35±1.01分,16.23±1.00分)和蒙特利尔认知评估量表(montreal cognitive assessment,MoCA)评分(25.35±2.60分,18.59±1.32分,16.59±1.24分)逐渐降低,差异具有统计学意义(F=32.006,46.917,163.048,163.703,均P<0.05)。与轻度组比较,重度组、中度组血清miR-211,miR-202,MMSE和MoCA评分降低,差异具有统计学意义(t=3.685~25.375,均P<0.05)。轻度、中度和重度组Hamilton焦虑量表(hamilton anxiety scale,HAMA)评分(12.34±1.27分,20.59±2.09分,31.29±2.19分)和Hamilton抑郁量表(hamilton depression scale,HAMD)评分(14.35±2.13分,23.89±2.20分,35.35±1.21分)逐渐升高,差异具有统计学意义(F=496.059,553.939,均P<0.05)。根据Pearson相关性分析得知,miR-211与miR-202呈正相关(r=0.615,P<0.05)。根据Spearman相关性分析得知,miR-211和miR-202与MMSE和MoCA呈显著正相关(r=0.539~0.585,均P<0.05);与HAMA和HAMD呈显著负相关(r=-0.651~-0.539,均P<0.05)。根据Logistic回归分析得知miR-211[OR(95%CI):5.321(1.648~17.180)]和miR-202[OR(95%CI):3.158(1.989~5.012)]低表达是影响阿尔茨海默症的危险因素(均P<0.05)。结论阿尔茨海默症患者血清miR-211和miR-202表达水平降低,且miR-211和miR-202与认知功能、焦虑抑郁情绪密切相关。

氧化苦参碱通过胰腺星状细胞中miRNA-211-5p调节TLR4／NF-κB通路调控炎性反应

目的探讨氧化苦参碱(OM)是否通过胰腺星状细胞株(LTC-14)中mi R-211-5p调节TLR4/NF-κB通路调控炎性反应。方法用生物预测、文献分析筛选出目的 mi R;脂多糖(LPS)刺激LTC-14细胞制备炎症模型,通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测mi R的变化以及OM对其的调节作用;通过转染mimics和inhibitor来过表达和低表达目的 mi R后,以Western Blotting法、实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测LTC-14细胞中TLR4/NF-κB信号通路相关分子(TLR4、My D88、NF-κB)的表达情况,ELISA法检测细胞上清中炎性因子TNF-α的表达情况。结果经生物信息学预测筛选出的目的 mi R为mi R-211-5p;与对照组比较,LPS刺激LTC-14细胞后mi R-211-5p表达明显下降(P<0.001);与模型组比较,经OM干预后mi R-211-5p表达显著上升(P<0.001)。过表达mi R-211-5p后,TLR4、My D88、NF-κB的m RNA和蛋白水平,以及炎性因子TNF-α表达显著下降(P<0.05、0.01、0.001);低表达mi R-211-5p后,TLR4、My D88、NF-κB的m RNA和蛋白水平,以及炎性因子TNF-α表达上升(P<0.05、0.01、0.001)。结论 PSCs中的mi R-211-5p通过调节TLR4/NF-κB信号通路调节炎症反应,OM可以调节炎症模型中mi R-211-5p的表达,OM调节炎症反应的作用机制可能是通过mi R-211-5p调节TLR4/NF-κB信号通路实现的。

miR-211通过靶向下调SATB2表达促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移与侵袭

目的:探讨miR-211及SATB2基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞中的表达情况,探究miR-211在NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用及其相关机制。方法:双荧光素酶报告系统验证miR-211和SATB2的相互作用机制;qRT-PCR检测miR-211和SATB2在NSCLC组织及癌旁组织中的表达情况;向A549细胞中转染miR-211 mimics、miR-211 inhibitor和pcDNA3.1-SATB2,检验转染效率及转染后A549细胞中SATB2 mRNA和蛋白表达水平;采用CCK-8实验和Transwell小室分别检测miR-211和SATB2表达变化对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:双荧光素酶报告系统结果提示SATB23'UTR是miR-211直接结合的靶位点。NSCLC组织中miR-211表达上调,SATB2表达下调,两者表达呈线性负相关(P<0.05)。转染miR-211 mimics显著下调A549细胞中SATB2 mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05);转染miR-211 inhibitor和pcDNA3.1-SATB2使A549细胞中SATB2 mRNA和蛋白的表达水平增高(P<0.05)。CCK-8实验显示,相较于对照组,miR-211过表达组的A549细胞增殖率显著增加(P<0.05),miR-211抑制组和SATB2过表达组的A549细胞增殖能力下降(P<0.05)。Transwell小室实验结果显示,与对照组相比,miR-211抑制组和SATB2过表达组的A549细胞迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。在miR-211过表达组共转染SATB2过表达,使miR-211介导的对A549细胞增殖、迁移及侵袭的促进作用受到抑制。结论:下调miR-211的表达可以增加NSCLC细胞中SATB2转录及转录后表达水平,从而抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

微小核糖核酸-211和微小核糖核酸-196a在宫颈癌中的表达及意义

目的探讨微小核糖核酸-211(miR-211)和微小核糖核酸-196a(miR-196a)在宫颈癌中的表达及意义。方法选取2017年1月—2020年6月在台州市第一人民医院妇科住院的宫颈癌患者79例为宫颈癌组,另选取同期来院30例健康体检者为对照组。采用实时荧光定量PCR检测外周血浆中的miR-211和miR-196a表达水平,并用SPSS 22.0软件进行统计学分析。结果宫颈癌组miR-211和miR-196a表达水平分别为(0.720±0.278)和(3.194±0.759),对照组miR-211和miR-196a达水平分别为(1.529±0.648)和(1.857±0.638),miR-211表达水平在宫颈癌组显著低于对照组,miR-196a表达水平在宫颈癌组显著高于对照组,差异均有统计学意义(t=9.148和-8.555,均P<0.05)。宫颈癌患者miR-211和miR-196a表达水平在临床分期、分化程度、淋巴结转移及HR-HPV感染方面差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-211对宫颈癌诊断的曲线下面积(AUC)为0.891,miR-196a对宫颈癌诊断的AUC为0.906,均有较高的诊断效能。结论miR-211可能为抑癌基因、miR-196a可能为癌基因,对宫颈癌具有较高的诊断效能。