腺病毒介导miRNA-29a过表达抑制人胃癌细胞的增殖

目的:利用重组人5型复制缺陷型腺病毒载体介导miRNA-29a(miR-29a)过表达,观察miR-29a对人胃癌细胞系SGC-7901及AGS的增殖抑制作用。方法:构建含pre-miR-29a的重组腺病毒Ad-miR29a及含LacZ基因的对照腺病毒Ad-LacZ,分别感染人胃癌SGC-7901及AGS细胞,采用real-time PCR法检测SGC-7901及AGS细胞中miR-29a的表达,CCK-8法检测miR-29a对SGC-7901及AGS细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测SGC-7901及AGS细胞的细胞周期,Transwell法检测miR-29a对SGC-7901及AGS细胞迁移能力的影响。结果:与Ad-LacZ对照组相比,Ad-miR29a组感染后胃癌SGC-7901及AGS细胞中miR-29a的表达均显著增加[(17.35±0.71)vs(1.12±0.09),(26.50±1.09)vs(0.95±0.04);均P<0.01];且胃癌SGC-7901及AGS细胞增殖明显受到抑制,感染6 d后D值均显著降低[(0.54±0.03)vs(0.77±0.04),(0.70±0.03)vs(0.88±0.04);均P<0.01)],而Ad-LacZ感染组与未感染组相比则无明显变化(P>0.05);与Ad-LacZ对照组相比,Ad-miR29a组SGC-7901及AGS细胞中G0/G1期细胞比例均显著增加[(63.10±4.91)%vs(47.60±5.31)%,(69.80±3.15)%vs(54.60±4.22)%;均P<0.05],但胃癌SGC-7901及AGS细胞的迁移能力并没有明显差异。结论:miR-29a过表达可有效抑制胃癌SGC-7901及AGS细胞的增殖,miR-29a有望成为治疗胃癌的新靶标。

不同类型肠易激综合征患者血清miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a水平的临床意义

目的探讨不同类型肠易激综合征(IBS)患者血清微小RNA(miRNA)-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达水平的相关性及临床意义,为IBS的病因学研究提供理论依据。方法采用病例抽样的方法选取2015年10月至2018年6月该院IBS患者110例,选取同期110例体检健康者为健康对照组。受试者采样前12 h低蛋白饮食,每位受试者取10 mL静脉血样本,静脉血3000 r/min离心后取上清。采用实时荧光定量反转录PCR测定受试者miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达水平。结果混合型IBS的miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达水平均显著高于其他3种亚型(P<0.05),不确定型IBS的miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达水平均显著高于便秘型IBS及腹泻型IBS(P<0.05)。混合型、不确定型IBS患者的miRNA-144、miRNA-29a、miRNA-200a的表达水平两两之间均存在相关性且有统计学意义(P<0.05),但对于单纯腹泻或者便秘型IBS患者来说,仅miRNA-29a与miRNA-200a的表达水平存在统计学相关性(P<0.05)。结论混合型、不确定型IBS患者血清miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达水平较其他2种亚型高,且血清miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达两两之间具有显著相关性。

miRNA-29a调控H3K4甲基化在前列腺癌病理机理中的作用

目的探讨在前列腺癌中miR-29a与H3K4特异性去甲基化酶—KDM5B之间的关系,验证miR-29a通过调控KDM5B的表达来抑制前列腺癌细胞的增殖并诱导其凋亡。方法将miR-29a模拟物(miR-29a mimic)片段和含野生型KDM5B基因3'-非翻译区的荧光素酶报告载体(KDM5B-wt)共转染至前列腺癌PC3和Lncap细胞后,进行荧光素酶活性检测。采用脂质体转染法将miR-29a mimics转染入人前列腺癌PC3和Lncap细胞中,MTT实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;Real-Time PCR和Western印迹法检测KDM5B表达水平。结果转染miR-29a mimics后,KDM5B的表达被明显抑制(P<0.01),蛋白表达水平也明显低于NC组。与NC组相比,转染miR-29a mimics组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在S/G2期,细胞凋亡率较NC组增加(P<0.01)。结论 miR-29a可以通过调控H3K4特异性去甲基化酶-KDM5B的表达而抑制前列腺癌PC3和Lncap细胞的增殖。miR-29a有希望成为诊断和治疗前列腺癌新的分子标记和靶点。

非小细胞肺癌的miRNA-29a表达及临床意义

目的探讨miRNA-29a在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义。方法采用实时荧光定量PCR技术检测55例NSCLC组织及癌旁组织中miRNA-29a的表达水平,并分析其与临床病理特征及预后的关系。结果 NSCLC组织中miRNA-29a的表达下调43例,表达上调12例,其表达仅与性别有关(P<0.05),而与年龄、吸烟史、病理类型、肿瘤大小及TNM分期均无关。miRNA-29a表达诊断癌组织与癌旁组织的受试者工作特征(ROC)曲线的面积(Az)为0.669(95%CI:0.568～0.770),灵敏度和特异度分别为49.1%和85.5%。生存分析显示,不同miRNA-29a表达的NSCLC患者的生存率有明显差异(P=0.032);多因素回归分析显示,miRNA-29a表达是总生存期的独立预后因素。结论 miRNA-29a在NSCLC组织中表达下调,其可作为NSCLC的诊断、预后判断指标及治疗靶标。

miRNA-29a对平滑肌细胞增殖凋亡的影响

目的检测miRNA-29a在腹主动脉瘤患者与正常人血清中的表达差异,探讨miRNA-29a过表达对人腹主动脉平滑肌细胞(HVSMCs)增殖凋亡的影响。方法收集该院2011年3月至2014年3月间确诊腹主动脉瘤患者血清标本25例,平均年龄(62.9±13.6)岁;同期收集与其年龄相匹配的正常老年人血清标本25例,平均年龄(61.5±11.8)岁。用RT-PCR分别检测其miRNA-29a表达。构建人重组慢病毒载体MCS-CMV-miRNA;将构建载体MCS-CMV-miRNA-29a转染HVSMCs细胞,荧光显微镜下观察其转染效率,RT-PCR及Western blot法检测转染后各组细胞中miRNA-29a和miRNA-29a靶基因COL1A1的表达,最后应用Annexin V/7-AAD双染法检测转染后72h对HVSMCs细胞凋亡的影响。结果在腹主动脉瘤患者中miRNA-29a表达较正常人低。构建的重组慢病毒载体MCS-CMV-miRNA-29a转染效率为(74.25±10.10)%,转染后miRNA-29a及蛋白表达在靶细胞较对照组增多,MTS及Annexin V显示miRNA-29a过表达后细胞增殖增多,凋亡减少。结论成功构建携带miRNA-29a慢病毒载体,转染后miRNA-29a稳定表达,miRNA-29a过表达可促进细胞增殖,抑制其凋亡。

食管鳞状细胞癌组织中miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c、VEGF-A表达变化及其相关性

目的观察食管鳞状细胞癌(ESCC)癌组织及癌旁组织中miRNA-29家族(miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c)及血管内皮生长因子A(VEGF-A)的相对表达量变化,并探讨他们之间的关系。方法收集手术切除并经病理检查确诊的ESCC癌组织及癌旁组织,应用qRT-PCR及免疫组织化学染色技术分别检测miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c、VEGF-A的相对表达量,并分析其相关关系;进一步应用生物信息学方法和双荧光素酶报告基因系统推测和验证miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同调控同一靶基因VEGF-A的分子调节机制。结果与癌旁组织比较,ESCC癌组织中miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c呈低表达(P均<0.05);VEGF-A呈高表达(P<0.05),且其之间呈负相关关系(miRNA-29a:r=-0.955;miRNA-29b:r=-0.950;miRNA-29c:r=-0.893,P均<0.01)。生物信息学分析结果发现,VEGF-A能够与miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c进行特异性结合,可能为miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同的靶基因。双荧光素酶报告基因系统验证了VEGF-A是miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同的靶基因。结论 ESCC癌组织中miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c低表达,VEGFA高表达;且他们之间具有负相关关系。VEGF-A为miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同的靶向调节基因。

miRNA-29a-3p通过靶向PROM1在喉癌细胞增殖中的作用研究

目的探讨miRNA-29a-3p在喉癌细胞增殖中的作用和分子机制.方法选择4种人喉癌细胞系(TU212、M4E、M2E、HEP-2)以及正常鼻咽上皮细胞系NP69,将转染mimic-NC质粒和miRNA-29a-3p mimic质粒的细胞分别设为mimic-NC组和miRNA-29a-3p mimic组,并根据是否转染mimic-NC质粒、oe-NC质粒、miRNA-29a-3p mimic质粒、oe-prominin 1(PROM1)质粒分别设立mimic-NC+oe-NC组、miRNA-29a-3p mimic+oe-NC组、miRNA-29a-3p mimic+oe-PROM1组.使用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测各细胞系中miRNA-29a-3p表达,利用荧光素酶报告实验验证miRNA-29a-3p与PROM1的靶向关系,采用克隆形成实验及噻唑蓝(MTT)实验检测喉癌细胞的增殖能力,利用Western blot法检测喉癌细胞中PROM1的表达情况.结果 TU212细胞、M4E细胞、M2E细胞和HEP-2细胞的miRNA-29a-3p相对表达量均明显低于正常NP69细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.01).选择相对表达量最低的TU212细胞作为受试细胞进行后续实验.miRNA-29a-3p mimic组TU212细胞PROM1蛋白相对表达量明显低于mimic-NC组,差异有统计学意义(P﹤0.01).转染miRNA-29a-3p后,野生型PROM1的荧光素酶活性明显低于mimic-NC组,差异有统计学意义(P﹤0.01);而转染miRNA-29a-3p后,突变型PROM1的荧光素酶活性与mimic-NC组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05).miRNA-29a-3p mimic+oe-NC组细胞克隆形成率及各时间点吸光度(OD)值均低于mimic-NC+oe-NC组和miRNA-29a-3p mimic+oe-PROM1组,差异均有统计学意义(P﹤0.05);mimic-NC+oe-NC组与miRNA-29a-3p mimic+oe-PROM1组细胞克隆形成率及各时间点OD值比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05).结论 miRNA-29a-3p可明显抑制喉癌细胞的增殖,其可能的机制是通过靶向调控PROM1发挥作用.

基于miRNA-29c/白血病抑制因子轴探讨针刺调节脾虚大鼠肠道炎症机制研究

目的观察针刺调节miRNA-29c/白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)轴改善脾虚大鼠结肠炎症机制,探讨“健脾益气”针刺疗法改善脾虚便溏症状现代作用机理。方法将60只SD雄性大鼠以随机数字表法分为正常组、模型组、非经非穴组、针刺组,每组15只。除正常组外,其余3组采用劳倦过度和不规律饮食复合方法建立脾虚证大鼠模型。造模成功后,针刺组电针“足三里”穴及“脾俞”穴干预治疗,非经非穴组给予电针尾尖作为对照干预,每日1次/20 min,共治疗14 d。治疗结束后,取大鼠结肠组织及全血。qPCR检测大鼠结肠组织miRNA-29/LIF轴相关基因的表达;Western blot检测大鼠白介素-6(interleukin6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)的表达;ELISA检测结肠组织中白介素-1β(interleukin1β,IL-1β)、白介素-18(interleukin18,IL-18)的含量;HE染色法观察大鼠结肠组织病理形态变化;TUNEL染色观察各组结肠组织凋亡情况;流式细胞术观察外周血单个核细胞(PBMC)凋亡状况。结果与正常组相比,模型组大鼠结肠组织LIF的表达水平明显下降(P<0.05),miRNA-29、IL-1β、IL-6、白介素-8(interleukin18,IL-8)、TNF-αmRNA表达以及IL-6、TNF-α蛋白表达水平有所升高(P<0.05);与模型组相比,针刺组大鼠结肠组织LIF表达水平明显升高(P<0.05),miRNA-29c、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达以及IL-6、TNF-α蛋白表达水平有所降低(P<0.05),非经非穴组差异无统计学意义(P>0.05);与正常组相比,模型组大鼠结肠组织中促炎因子IL-1β、IL-18表达水平明显升高(P<0.05),与模型组相比,针刺组大鼠结肠组织中促炎因子IL-1β、IL-18的表达水平有所降低(P<0.05)。另外HE染色结果显示,针刺治疗可有效减轻结肠黏膜组织中炎症细胞浸润和杯状细胞的损失;TUNEL染色结果显示,针刺可以抑制miRNA-29c/LIF轴,改善脾虚大鼠结肠炎症,抑制结肠黏膜细胞凋亡;流式细胞术结果显示与正常组相比,模型组、非经非穴组大鼠PBMC凋亡率明显升高(P<0.05),与模型组相比,针刺组大鼠PBMC细胞凋亡率有所降低(P<0.05)。结论电针“足三里”“脾俞”穴可以调节miRNA-29c/LIF轴,抑制肠道炎症和促炎症介质的表达,进而抑制血液、结肠黏膜细胞凋亡,提高机体免疫力,从而改善脾虚便溏症状。

麦冬提取物对胰岛素抵抗大鼠肝组织miRNA-29a及FOXO3表达的影响

目的：探讨麦冬提取物对胰岛素抵抗大鼠肝组织中miRNA-29a及FOXO3表达的影响。方法：选取60只SD级雄性大鼠,随机选取10只为正常组,其余50只建立胰岛素抵抗大鼠模型,造模成功后分为模型组、麦冬提取物高、中、低剂量组、二甲双胍组5组,每组10只,麦冬提取物高、中、低剂量组分别给予150,300,500 mg·kg^-1麦冬提取物灌胃给药干预,二甲双胍组给予200 mg·kg^-1二甲双胍混悬液灌胃给药干预,正常组及模型组给予等体积的生理盐水,分别于给药4,8周后,检测各组大鼠体重（BW）,肝重（LW）,空腹血糖（FBG）,血清总胆固醇（TC）,甘油三酯（TG）,空腹胰岛素（FINs）,胰岛素敏感指数（ISI）,肝脏指数（LI）,C肽;苏木素-伊红（HE）染色观察肝脏病理变化;采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测肝组织miRNA-29a,FOXO3表达水平。结果：正常组大鼠饮食正常,皮毛整洁,精神状态良好,模型组大鼠精神萎靡、皮毛凌乱欠光泽,懒惰,麦冬提取物组及二甲双胍组大鼠皮毛欠光泽,有不同程度活动及饮食减少,精神状态优于模型组;麦冬提取物可明显降低胰岛素抵抗大鼠BW,LW,LI,C肽水平（P〈0.05）,明显降低TC,TG,FINs水平（P〈0.05）,显著升高ISI水平（P〈0.05）,改善大鼠胰岛素抵抗;麦冬提取物明显改善胰岛素抵抗模型大鼠脂肪变性,改善肝脏病理状态;麦冬提取物可明显下调miRNA-29a表达,上调FOXO3表达,且呈现一定剂量依赖性（P〈0.05）。结论：麦冬提取物可明显改善胰岛素抵抗,推测其机制为下调miRNA-29a表达,上调FOXO3表达。

老年2型糖尿病患者外周血miR-29a的表达及预测肾损害的价值

目的:探讨老年2型糖尿病患者外周血miRNA-29a(miR-29a)表达变化情况及其预测肾损害的价值。方法:选取2020年1月至2022年3月本院收治的95例老年2型糖尿病患者(糖尿病组),另选取76例同期体检健康者(对照组),均采用实时荧光定量PCR法检测外周血miR-29a表达,另检测肾功能相关指标[血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、血尿酸(UA)、胱抑素C(CysC)、尿微量白蛋白(UmAlb)、尿微量白蛋白与血肌酐比值(UACR)]。对比对照组、糖尿病组外周血miR-29a表达及肾功能相关指标,采用Pearson相关分析糖尿病组外周血miR-29a表达与肾功能相关指标的关系。糖尿病组患者随访6~24个月,统计肾损害发生率,绘制ROC曲线,分析外周血miR-29a对肾损害的预测价值,采用Cox回归分析老年2型糖尿病患者并发肾损害的危险因素。结果:糖尿病组外周血miR-29a表达水平、Scr、BUN、UA、CysC、UmAlb及UACR均高于对照组(P<0.05)。糖尿病患者外周血miR-29a表达与Scr、BUN、UA、CysC、UmAlb、UACR均呈正相关性(r为0.721~0.821,P<0.05)。根据ROC曲线,外周血miR-29a预测老年2型糖尿病患者并发肾损害的最佳截断值为1.66,敏感度、特异度分别为76.19%、72.97%,曲线下面积为0.741(95%CI 0.641~0.825)。空腹血糖、糖化血红蛋白、外周血miR-29a相对表达量>1.66均是老年2型糖尿病患者并发肾损害的危险因素(HR=2.375、2.779、4.302,95%CI 1.431~4.096、1.754~4.585、3.145~6.952,P<0.05)。结论:老年2型糖尿病患者外周血miR-29a表达升高,与肾损害的发生存在一定的关系,可作为预测肾损害的辅助指标。

miRNA-29a在卡介苗处理的U937巨噬细胞中的表达及基因调控研究

目的 分析结核分枝杆菌感染情况下,U937巨噬细胞中miRNA-29a的表达变化及基因的表达调控,揭示miRNA-29a在结核发生发展中的作用机制.方法 利用miRnada、RNAhybrid和targetscan软件对miRNA-29a的靶基因进行预测.采用卡介苗菌株感染佛波酯（PMA）诱导分化的U937巨噬细胞,提取RNA,逆转录为cDNA.采用实时荧光定量PCR检测miRNA-29a及其靶基因表达水平,并通过构建miRNA-29a过表达和低表达的U937巨噬细胞系,检测miRNA-29a水平及其靶基因的表达水平.采用SPSS 18.0统计软件对数据进行分析.结果 miRNA-29a调控VEGFA、NFATC3和TSC22D3基因等表达.卡介苗菌株感染U937巨噬细胞后,miRNA-29a表达增加,为正常培养U937巨噬细胞的1.33倍（P〈0.05）,VEGFA、NFATC3及TSC22D3基因表达水平也显著升高,分别为正常培养U937巨噬细胞的5.34、99.25及2.12倍（P〈0.01）.U937巨噬细胞经miRNA-29a模拟物转染后,VEGFA、NFATC3和TSC22D3基因表达水平分别上调至1.35、1.29和3.38倍（P 〈0.05或 〈0.01）,而U937巨噬细胞经miRNA-29a抑制剂转染后,VEGFA、NFATC3和TSC22D3基因表达水平分别下调至0.07、0.08和0.55倍（P〈0.01）.结论 结核分枝杆菌感染可导致U937巨噬细胞miRNA-29a表达水平升高,进一步靶向调控VEGFA、NFATC3和TSC22D3基因表达增加,从而可能参与结核的发生发展.

血浆miRNA-21和miRNA-29c水平对非小细胞肺癌的诊断意义

目的:探讨血浆miRNA-21、miRNA-29c水平对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断意义。方法:采用实时荧光定量PCR法检测56例NSCLC患者和47例良性肺病患者血浆miRNA-21和miRNA-29c的相对表达水平。建立受试者工作特征(ROC)曲线,根据ROC曲线下面积判断它们诊断NSCLC的效能。依据ROC曲线分析设定的临界值计算血浆miRNA-21和miRNA-29c诊断NSCLC的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性。并将这些结果与NSCLC患者血清癌胚抗原检测结果进行比较。结果:NSCLC患者血浆miRNA-21水平显著高于良性肺病患者(P<0.001),而血浆miRNA-29c水平明显低于良性肺病患者(P<0.001)。NSCLC患者血浆miRNA-21和miRNA-29c水平与肿瘤的临床(TNM)分期显著相关(P=0.008和P=0.011),血浆miRNA-21水平与肿瘤的分化程度也明显相关(P=0.001)。根据ROC曲线分析取miRNA-21和miRNA-29c诊断NSCLC的临界值分别为4.026和0.985,血浆miRNA-21诊断NSCLC的敏感性和特异性分别为76.8%和76.6%,血浆miRNA-29c诊断NSCLC的敏感性和特异性分别为78.6%和72.3%。血清癌胚抗原诊断NSCLC的敏感性明显低于miRNA-21和miRNA-29c,特异性相似。结论:血浆miRNA-21和miRNA-29c诊断肺癌的效能优于血清癌胚抗原,有可能成为诊断NSCLC的血液标志物。

利用CRISPR/Cas9技术构建miRNA-29b1基因敲除小鼠

目的应用CRISPR/Cas9技术构建miRNA-29b1基因敲除小鼠。方法针对miRNA-29b1基因设计一段sgRNA,sgRNA和Cas9体外转录后显微注射至C57BL/6小鼠受精卵细胞。小鼠出生后取其基因组DNA进行测序以鉴定基因型,同时取小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器研磨后提取总RNA,通过real-time PCR分析miRNA-29b1在这些脏器中的表达。结果设计了20 bp的miRNA-29b1sgRNA并与Cas9一起进行了体外转录,显微注射小鼠受精卵细胞后获得miRNA-29b1基因突变小鼠。测序结果表明突变小鼠有两种基因型,一种为10 bp的缺失突变;另一种为22 bp的缺失突变,同时伴有3 bp的插入突变。与野生型小鼠相比,基因突变小鼠心、肝、脾、肺、肾等组织中miRNA-29b1表达量下降明显。结论应用CRISPR/Cas9技术成功构建miRNA-29b1基因敲除小鼠。

小檗碱对大鼠高血压左室肥厚心肌表达miRNA-29b的影响及抑制心肌纤维化的作用机制

目的探讨小檗碱(BBR)对大鼠高血压左室肥厚心肌表达miRNA-29b的影响及抑制心肌纤维化的作用机制。方法将25只雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham组,n=7),模型组(Model组,n=9)和模型给药组(Model+BBR组,n=9)。腹主动脉缩窄法制备大鼠高血压心肌肥厚模型,术后8周测定各组超声心动图、心脏肥大指数,Masson染色检测心肌组织纤维化,RT-PCR检测心肌组织miRNA-29b及其靶基因col1α1和col3α1 mRNA表达。结果Model组的舒张末期室间隔厚度(IVSd)、舒张末期左室后壁厚度(LVPWd)均厚于Sham组,左室长轴缩短分数(FS)、射血分数(EF)均低于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05);Model+BBR组的IVSd、LVPWd均薄于Model组,FS、EF均高于Model组,差异有统计学意义(P<0.05)。Model组的心脏重量显著重于Sham组,心脏/体重比显著高于Sham组(P<0.01);Model+BBR组的心脏重量轻于Model组,心脏/体重比低于Model组(P<0.05)。Model组的心肌胶原蛋白体积分数显著高于Sham组(P<0.01);Model+BBR组的心肌胶原蛋白体积分数低于Model组(P<0.05)。Model组的Col1α1 mRNA和Col3α1 mRNA水平均高于Sham组,miRNA-29b水平低于Sham组(P<0.05或P<0.01);Model+BBR组的Col1α1 mRNA和Col3α1 mRNA水平均低于Model组,miRNA-29b水平高于Model组(P<0.05)。结论BBR可能通过下调miRNA-29b水平及上调其靶基因表达水平,抑制高血压心肌肥厚模型心肌肥厚和心肌纤维化。

miRNA-29b在特发性肺间质纤维化中的抗纤维化作用

目的:探讨miRNA-29b(简称miR-29b)在特发性肺间质纤维化(IPF)上皮间充质转分化(EMT)过程中的抗纤维化作用。方法:将体外培养的IMR-90细胞随机分为空白对照组、TGF-β1诱导组(诱导48 h)、miR-29b转染组(TGF-β1+miR-29b)和miR-29b阴性对照组(TGF-β1+无意义序列);应用倒置相差显微镜观察细胞形态改变;运用实时荧光定量PCR技术和Western bolt技术分别检测TGF-β/Smad信号通路Smad3和p-Smad3、上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cad)、间质标志物平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和下游靶基因Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)的表达。结果:与空白对照组比较,TGF-β1诱导组IMR-90细胞中E-cad表达显著下降,p-Smad3、α-SMA和COL1A1的表达显著升高(P均<0.05);与TGF-β1诱导组比较,miR-29b转染组E-cad表达升高,p-Smad3、α-SMA和COL1A1的表达降低(P均<0.01)。结论:上调miR-29b表达可抑制TGF-β/Smad信号通路介导的肺泡上皮细胞EMT。

miRNA-29c在鼻咽癌患者中的表达水平及其临床意义

目的:探讨miRNA-29c在鼻咽癌患者血清中的表达及其临床意义。方法:选取50例鼻咽癌患者及50例健康对照组,检测血清中miRNA-29c的表达量并分析其与临床病理资料及复发转移的相关性。结果:与健康人对比,鼻咽癌患者血清中miRNA-29c的表达量更低(P<0.05)。淋巴结转移的病例表达量明显降低,Ⅳ期病例较Ⅱ-Ⅲ期病例表达量降低,EB病毒阳性患者较阴性表达量降低(P<0.05)。与高分化鳞癌相比,低分化和中分化鳞癌组织中miRNA-29c的表达水平均明显下降(P<0.05)。2年内复发转移患者的miRNA-29c表达量更低(P<0.05)。结论:miRNA-29c低表达可能与鼻咽癌的发生、发展、侵袭转移相关。

转化生长因子-β_2(TGF-β_2)诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义

目的探究转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达变化及意义。方法使用不同浓度TGF-β2刺激RPE细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Western blot、RT-PCR检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白(fibronection,FN)、神经钙粘连蛋白(nerve calcium adhesion protein,N-Cadherin)的表达。采用RT-PCR检测不同浓度TGF-β2及不同时间TGF-β2(5μg·L^(-1))刺激RPE细胞后miRNA-29b的表达。结果 TGF-β2刺激后的RPE细胞形态呈纤维化改变。在一定浓度范围内(1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)),随着TGF-β2浓度的增加FN、N-Cadherin及相应mRNA随之增加,1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)组与对照组(0μg·L^(-1))相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。TGF-β2在一定浓度范围内(0μg·L^(-1)、1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1))以剂量依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)组与对照组(0μg·L^(-1))相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01),在TGF-β2浓度为5μg·L^(-1)时miRNA-29b表达量最低。TGF-β2在一定时间范围内(0 h、3 h、6 h、12 h)以时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,3 h、6 h、12 h、24 h、48 h组与0 h相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论一定范围内TGF-β2以剂量和时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b的表达,为进一步研究miRNA-29b与TGF-β2在RPE细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础。

实时定量PCR检测miRNA-29a在肝癌中的变化

目的:探讨微小RNA(miRNA)-29a在正常人和原发性肝癌患者血清,以及原发性肝癌患者的正常肝脏组织和肝癌组织中的表达。方法:应用荧光实时定量PCR方法检测miRNA-29a,在正常人和原发性肝癌患者血清水平。同时收集并检测原发性肝癌患者术中取得的正常肝脏组织和癌症组织中miRNA-29a的含量。结果:1)与正常人血清相比,miRNA-29a在原发性肝癌患者血清中水平没有明显改变(P>0.05)。2)与正常肝脏组织相比,原发性肝癌患者肝癌组织中miRNA-125含量明显降低,有统计学差异(P<0.01)。结论:MiRNA-29a在原发性肝癌患者的肝癌组织中表达显著降低,但患者的血清水平并没有明显改变。

miRNA-29b、MMP-2在大鼠颅内动脉瘤中的相关性及药物干预

目的观察miRNA-29b与MMP-2在颅内动脉瘤壁组织中的变化,探讨其在动脉瘤中的相关性及不同药物干预的影响。方法将40只雄性SD大鼠(6周龄)采用随机数字表法分为模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组,每组各10只。模型组、多西环素组、丙戊酸钠组大鼠均采用颈外动脉结扎制造颅内动脉瘤模型,对照组大鼠不做造模处理。前三组于造模成功后分别注射生理盐水0.1 mL/(kg·d)、多西环素15 mg/(kg·d)、丙戊酸钠15 mg/(kg·d),对照组大鼠注射生理盐水0.1 mL/(kg·d)。2个月后取各组动脉组织,采用实时荧光定量PCR检测miRNA-29b的表达,采用免疫组化检测MMP-2的表达。结果模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组中miRNA-29b的相对表达量分别为(0.27±0.04),(0.68±0.03),(0.47±0.15),(0.95±0.12),差异均有显著统计学意义(F=10.235,P<0.01);miRNA-29b表达量经两两比较,模型组明显低于对照组,丙戊酸钠组明显高于模型组,而多西环素组明显高于丙戊酸钠组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、多西环素组、丙戊酸钠组和对照组中MMP-2阳性细胞数分别为(21.10±3.36),(10.27±1.20),(15.24±2.13),(4.50±0.44),差异均有显著统计学意义(F=6.013,P<0.01);MMP-2阳性细胞数经两两比较,模型组明显高于对照组,丙戊酸钠组明显低于模型组,而多西环素组则明显低于丙戊酸钠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 miRNA-29b、MMP-2的表达水平与颅内动脉瘤的发生相关,多西环素对MMP-2的抑制作用明显强于丙戊酸钠。

黄连素与miRNA-29b-3p对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄连素对结直肠癌HCT-116细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法采用0、25、50、100、150和200μmol/L的黄连素处理HCT-116细胞24、48 h后,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRTPCR)检测人正常结肠上皮细胞株NCM460和人结直肠癌细胞株HCT-116、Caco-2细胞中miRNA-29b-3p相对表达量及黄连素干预后HCT-116细胞中miRNA-29b-3p表达水平变化。噻唑蓝(MTT)法检测HCT-116细胞存活情况;流式细胞仪检测150μmol/L黄连素处理48 h后的HCT-116细胞凋亡情况;流式细胞仪检测miRNA-29b-3p过表达和低表达对HCT-116细胞存活和凋亡的影响。结果 qRT-PCR法检测发现,HCT-116细胞中miRNA-29b-3p的相对表达量,低于Caco-2细胞和NCM460细胞,黄连素干预后HCT-116细胞中miRNA-29b-3p的相对表达量明显上调(P﹤0.01)。150μmol/L黄连素处理48 h后,HCT-116细胞存活率明显降低(P﹤0.01),凋亡率明显升高(P﹤0.01)。miRNA-29b-3p过表达可抑制HCT-116细胞的增殖并诱导其凋亡;miRNA-29b-3p低表达可逆转黄连素对HCT-116细胞的抑增殖和促凋亡作用。结论黄连素可能通过促进miRNA-29b-3p表达来抑制结直肠癌HCT-116细胞增殖并诱导其凋亡。