miRNA-381表达及其与鼻咽癌放疗敏感性的关系

目的:观察人鼻咽癌细胞及组织中miRNA-381的表达变化,探讨其与放射敏感性的关系。方法:采用RT-PCR法测定正常鼻咽部上皮细胞株NP460,人鼻咽癌细胞株CNE-2,放疗抵抗细胞株CNE-2R及20例符合纳入标准的鼻咽癌组织中miRNA-381的表达。完成放疗后3个月接受影像学复查,分析患者的近期放疗疗效。所有病例都有2年或2年以上随访记录,根据随访记录制定放疗敏感性评估标准。采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性。结果:入组患者根据放疗敏感性评估标准,分为放疗抵抗组(7例)和放疗敏感组(13例),放疗抵抗组的miRNA-381表达显著低于放疗敏感组(P<0.01)。克隆形成实验结果显示细胞的放疗敏感性为NP460>CNE-2>CNE-2R,且有显著统计学差异(P<0.01)。RT-PCR结果显示正常鼻咽部上皮细胞株NP460中miRNA-381表达量高于鼻咽癌细胞株,放疗抵抗细胞株CNE-2R中miRNA-381表达量远低于其亲代细胞株CNE-2。近期疗效和鼻咽癌组织中miRNA-381相对表达量的相关性分析显示miRNA-381相对表达量与近期疗效呈正相关(r=0.77,P<0.000 1)。结论:miRNA-381在放疗抵抗的鼻咽癌细胞及临床标本中的表达量显著低于放疗敏感的细胞及组织。miRNA-381相对表达量越高的鼻咽癌患者接受根治性放疗后的近期疗效越好。

MiRNA-381表达及其与食管鳞癌放疗敏感性的关系

目的:观察人食管鳞癌细胞及组织中miRNA-381的表达变化,探讨其与放射敏感性的关系。方法:采用RT-PCR法测定人食管鳞癌细胞TE-1、TE-10、TE-11及20例符合纳入标准的食管鳞癌组织中miRNA-381的表达。完成放疗后1个月接受影像学复查,分析患者的近期放疗疗效。采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性。结果:入组患者根据近期疗效分为放疗抵抗组(6例)和放疗敏感组(14例),放疗抵抗组的miRNA-381表达显著低于放疗敏感组(P<0.05)。克隆形成实验结果显示细胞的放疗敏感性为TE-11>TE-10>TE-1,且有显著统计学差异(P<0.05)。RT-PCR结果显示放疗最敏感的TE-11细胞中miRNA-381表达量最高,而放疗抵抗的TE-1细胞中miRNA-381表达量最低。近期疗效和食管鳞癌组织中miRNA-381相对表达量的相关性分析显示miRNA-381相对表达量与近期疗效呈正相关(r=0.72,P<0.05)。结论:MiRNA-381在放疗敏感的食管鳞癌细胞及临床标本中的表达量显著高于放疗抵抗的细胞及组织。MiRNA-381相对表达量越高的食管鳞癌患者接受根治性放疗后的近期疗效越好。

MiRNA-381抑制肾癌侵袭能力及其分子机制

目的:研究mi RNA-381对肾癌侵袭的抑制作用,并探索其机制。方法:上调mi RNA-381表达后,观察mi RNA-381对肾癌细胞侵袭的抑制作用。通过mi R数据库star Base研究mi RNA-381靶基因,再通过双荧光素酶实验验证。分析mi RNA-381及相应靶基因在细胞和组织水平的表达丰度。结果:转染mi RNA-381后,其表达增加,跨膜细胞数目显著下降,细胞侵袭力受抑制。生物信息学分析显示mi RNA-381靶基因为CREB绑定蛋白(CREB binding protein,CBP)、β-catenin和淋巴增强因子-1(lymphoid enhancer binding factor-1,LEF-1);包含野生型靶基因3'-非编码区载体组的荧光素酶活性明显降低。实时定量PCR显示肾癌细胞中mi RNA-381低表达,在高转移潜能肾癌细胞株786-OHM中表达更低;相反,在细胞、组织水平mi RNA-381靶基因CBP,β-catenin与LEF-1表达均增高。结论:Mi RNA-381可抑制肾癌细胞的侵袭能力,其机制可能是通过CBP,β-catenin和LEF-1实现的。

miRNA-381靶向PTEN对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制研究

目的探讨与研究miRNA-381靶向10号染色体上磷酸酶与张力蛋白同源缺失基因(PTEN)对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制。方法将处于对数生长期的BGC-823细胞平均分为三组:对照组、实验1组与实验2组,分别转染miRNA NC 20 nmol/L与miRNA-381 mimic 20 nmol/L、40 nmol/L。采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell小室实验检测细胞迁移情况,实时定量PCR检测miRNA-381表达情况,Western blotting检测PTEN蛋白表达情况。结果转染后24 h、48 h,实验1组与实验2组的细胞增殖指数、细胞迁移指数、miRNA-381表达量高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);实验2组高于实验1组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。实验2组与实验1组的细胞凋亡指数、PTEN蛋白相对表达量均显著低于对照组,实验2组也较实验1组显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与转染后24 h相比,转染后48 h三组细胞增殖指数、凋亡指数、迁移指数以及miRNA-381相对表达量均显著增加,而PTEN蛋白相对表达量仅对照组显著增加,两个实验组均显著降低(P<0.05)。结论在胃癌细胞中,miRNA-381可通过靶向抑制PTEN表达,从而促进胃癌细胞增殖与迁移,抑制胃癌细胞的凋亡。

miRNA-381对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及机制

目的观察mi RNA-381对胃癌细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T及BSG823和正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1中mi RNA-381的表达;将AGS细胞系分成两组,阴性对照组和mi RNA-381模拟物组,采用Lipofectamine TM 2000分别转染mi RNA-381 scramble及mimics,采用CCK-8、Transwell实验测定两组细胞增殖和侵袭的影响,Western blot检测两组细胞肝受体类似物1(LRH-1)和扭曲相关蛋白1(Twist1)表达水平。结果胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T及BSG823中mi RNA-381相对表达量较正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1为低。mi RNA-381模拟物组在转染后72和96 h OD 450 nm值低于阴性对照组(P<0.05);阴性对照组侵袭细胞数为(79.6±7.2)个,mi RNA-381模拟物组侵袭细胞数为(31.70±4.2)个,mi RNA-381模拟物组侵袭细胞数少于阴性对照组(P<0.01);mi RNA-381模拟物组LRH-1蛋白相对表达量为(0.39±0.04),阴性对照组为1.0,mi RNA-381模拟物组LRH-1蛋白相对表达量低于阴性对照组(P<0.01);mi RNA-381模拟物组Twist1蛋白相对表达量为(0.51±0.05),阴性对照组为1.0,mi RNA-381模拟物组Twist 1蛋白相对表达量低于阴性对照组(P<0.01)。结论 mi RNA-381低表达于胃癌细胞系,mi RNA-381过表达可抑制胃癌细胞增殖和侵袭能力,其机制可能与下调LRH-1和Twist1的表达有关。

miRNA-381在恶性肿瘤中的研究进展

miRNA是一类非编码RNA,在细胞增殖、凋亡以及分化过程中扮演着十分重要的角色。其中miRNA-381(hsa-miR-381)是近年来新鉴定的出的一种miRNA,miR-381的编码基因位于14号染色体的长臂上,属于miR-154基因家,最早发现于胃癌。有研究表明,miR-381在肺癌、肝癌、结肠癌和骨肉瘤等恶性肿瘤中异常表达,提示其在肿瘤的发生和进展中起重要作用。本文就miR-381与恶性肿瘤的相关研究进展作一综述。

宫颈癌患者血清微小核糖核酸-381、微小核糖核酸-145水平变化及与临床病理参数相关性分析

目的:探讨宫颈癌(CC)患者血清微小核糖核酸-381(miRNA-381)、微小核糖核酸-145(miRNA-145)水平的变化及与临床病理参数的关系。方法:选取CC患者80例作为观察组,并于同期健康女性体检者选取68例作为对照组。采用定量聚合酶链反应法(QRT-PCR)检测两组血清miRNA-381、miRNA-145表达水平,同时收集其临床病理资料,探究血清表达水平与临床病理参数的关系。结果:观察组血清miRNA-381、miRNA-145水平低于对照组(均P<0.05);CC患者血清miRNA-381、miRNA-145表达水平与患者年龄、乳头瘤病毒感染、肿瘤直径、病理分期等因素无关(均P>0.05);与病理类型、组织分化程度、浸润深度、脉管浸润、淋巴结转移有关(均P<0.05)。结论:CC患者中血清miRNA-381、miRNA-145呈低表达,其表达水平与病理类型、组织分化程度、浸润深度、脉管浸润、淋巴结转移有关。

首发精神分裂症患者血清miR-124、miR-381水平及其诊断价值

目的 探讨首发精神分裂症患者血清miR-124、miR-381水平及其诊断价值。方法 选取2019年5月至2021年5月于重庆市精神卫生中心入院治疗的91例首发精神分裂症患者为首发精神分裂症组,选取同期于我院健康体检的70名志愿者作为对照组。采用RT-qPCR检测两组受试者的血清miR-124、miR-381水平。采用阳性与阴性症状量表(PANSS)评估首发精神分裂症组患者的病情,并根据得分将患者分为轻度组(n=38)、中度组(n=29)、重度组(n=24)。采用Spearman相关分析首发精神分裂症患者血清miR-124、miR-381水平与PANSS得分的相关性。采用二项Logistic回归分析首发精神分裂症患者发病的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-124、miR-381水平对重度首发精神分裂症的诊断价值。结果 首发精神分裂症组患者的血清miR-124水平低于对照组,miR-381高于对照组,差异均有统计学意义(t=7.022、11.192;P均<0.01)。中度组、重度组的血清miR-124水平低于轻度组,miR-381水平高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05);重度组血清miR-124水平低于中度组,miR-381水平高于中度组,差异有统计学意义(P<0.05)。患者的阳性症状得分、阴性症状得分、抑郁情绪得分、兴奋状态得分、认知功能得分、PANSS得分总分与血清miR-124水平呈负相关(P<0.05),与血清miR-381水平呈正相关(P<0.05)。miR-381是首发精神分裂症的危险因素(OR=0.682,95%CI=0.511~0.910,P<0.05),miR-124是保护因素(OR=2.248,95%CI=1.125~4.490,P<0.05)。血清miR-124、miR-381以及两者联合诊断重度首发精神分裂症的ROC曲线下面积分别为0.877、0.781、0.935,联合诊断的敏感度为95.83%,特异性为82.09%,两者联合优于血清miR-124、miR-381各自单独诊断(Z_(两者联合-miR-124)=2.197,P_(两者联合-miR-124)=0.028;Z_(两者联合-miR-381)=2.927,P_(两者联合-miR-381)=0.003)。结论 首发精神分裂症患者的血清miR-124水平较低,与病情严重程度呈负相关;血清miR-381水平较高,与病情严重程度呈正相关。血清miR-124、miR-381水平可作为诊断重度首发精神分裂症、判断病情严重程度的标志物。

MiR-381下调Hes1表达调控神经干细胞增殖和向神经元的分化

目的:探讨miRNA-381在神经干细胞(neural stem cell,NSCs)的体外增殖、分化中的作用及相关机制。方法:采用光镜观察法、免疫组化法对原代获取及诱导分化后的NSCs予以鉴定;QPCR及Western blot法检测miRNA-381、nestin、β-tubulin-Ⅲ和Hes1的mRNA及蛋白表达;CCK-8法检测不同时间点NSCs的增殖情况;荧光素酶报告基因法验证miR-381对Hes1野生型及突变型3'非编码结合区的靶向作用。结果:原代培养细胞呈明显的神经球形态,且高表达nestin蛋白,经b FGF诱导后则高表达β-tubulin-Ⅲ;miR-381转染后,NSCs中miR-381、nestin、β-tubulin-Ⅲ的mRNA和蛋白水平均明显升高(p<0.001),免疫荧光法也进一步验证miR-381转染后的NSCs其β-tubulin-Ⅲ的荧光强度显著增强;此外,miR-381转染24 h、48 h及72 h后,NSCs的增殖能力均高于阴性对照组(p24h<0.01,p48h<0.001,p72h<0.001);荧光素酶法结果显示miR-381能显著降低野生型Hes1载体的3'非编码区的荧光素酶活性,而Hes1基因载体的突变型3'UTR的荧光素酶活性不受到miR-381的影响(p<0.001);另外,miR-381过表达能明显降低Hes1蛋白的表达;而二者共转染的NSCs增殖能力在转染后24 h、48 h及72 h,均明显低于单纯miR-381转染组(p<0.01或p<0.001);同时,共转染后β-tubulin Ⅲ的mRNA及蛋白水平均明显低于单纯miR-381转染组(p<0.001)。结论:miR-381通过下调Hes1表达促进NSCs的增殖和向神经元的分化。