miRNA-41调控c-myc在宫颈癌上皮间质转化中的作用

目的探讨miRNA-41调控c-myc在宫颈癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用。方法HeLa宫颈癌细胞系随机分为3组,空白组、对照组与miRNA-41组,对照组与miRNA-41组分别转染miRNA-41 NC与miRNA-41 mimic,空白组不进行转染。qRT-PCR检测miRNA-41表达,MTT法检测细胞增殖指数,Transwell小室检测细胞侵袭指数,流式细胞术检测细胞周期,Western Blot检测c-myc与Vimentin表达。结果转染后24 h与36 h,miRNA-41组的miRNA-41表达水平显著高于空白组和对照组(P<0.05);细胞增殖指数与侵袭指数显著高于空白组和对照组(P<0.05);转染后36 h,miRNA-41组的G1期比例较对照组和空白组显著降低(P<0.05),S期+G2期比例显著增加(P<0.05)。转染后36 h,miRNA-41组的c-myc与Vimentin蛋白相对表达量显著高于对照组和空白组,空白组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论miRNA-41在宫颈癌细胞中的高表达能够促进c-myc与Vimentin蛋白表达,从而促使EMT的发生,调节细胞周期,提高细胞增殖性与侵袭性。

家蚕let-7 microRNA靶基因Bmlin-41的克隆表达与调控

异时性基因调控细胞增殖和个体发育阶段的转换。家蚕异时性基因在家蚕变态发育过程中也很可能具有重要的调控作用,但它们的表达模式、生物学功能以及与micro RNA之间的关系却鲜有报道。本研究首先利用果蝇同源基因lin-41搜索家蚕基因组数据库中相似序列,设计引物扩增Bmlin-41的编码序列,克隆了家蚕Bmlin-41基因CDS,其长度为2 166 bp,编码721个氨基酸,含有B-box和NHL结构域;随后,利用RT-PCR、q PCR技术并结合已有的家蚕全基因组芯片数据研究了Bmlin-41在家蚕中的时空表达模式,发现Bmlin-41在从家蚕胚胎到成虫的发育过程中呈逐渐递增的表达趋势,在五龄3 d不同组织中,于卵巢里表达量最高,精巢和中肠次之,而其余组织中低量表达或不表达;最后,利用3′RACE克隆了Bmlin-41基因的3′UTR,全长1 434 bp,用在线软件RNAhybrid预测发现Bmlin-41的3′UTR上存在bmo-let-7靶位点,构建了含Bmlin-41 3′UTR的双荧光素酶报告基因载体,在S2细胞上共转染Bmlin-41 3′UTR和bmo-let-7的模拟物(Mimics)和拮抗剂(Antagomir),bmo-let-7 mimics显著下调Bmlin-41,bmo-let-7 antagomir显著上调Bmlin-41,证实了Bmlin-41是bmo-let-7的靶基因。以上研究结果为深入研究let-7 mi RNA和Bmlin-41的功能,揭示Bmlin-41和bmo-let-7在家蚕变态发育过程中的调控关系提供了新的线索。