基于网络药理学及分子对接与实验验证苗药抑癌汤经WNT/β-catenin信号通路抑制小细胞肺癌增殖的作用机制

目的运用网络药理学及分子对接技术挖掘并预测苗药抑癌汤(Miao-Yi-Ai-Tang,MYAT)治疗小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)的作用靶点及相关信号通路,并通过细胞及动物实验验证其作用机制,为基础实验及临床应用提供理论依据。方法从TCMSP数据库获取MYAT有效成分,并结合PubMed、Swiss Target Prediction及Uniprot数据库获取潜在靶点;通过DrugBank、Genecards、OMIM、TTD数据库收集SCLC相关基因,通过Venny 2.1平台获取MYAT和SCLC的交集基因后导入STRING数据库,构建蛋白质相互作用网络(Protein-protein interaction,PPI),运用Cytoscape 3.9.1软件进行可视化分析,利用Metascape数据库进行GO富集分析及KEGG通路分析,预测MYAT治疗SCLC的直接作用靶点及信号通路;使用AutoDock Tools 1.5.7软件进行分子对接验证两者之间的紧密联系。通过细胞学实验验证,培养细胞加入MYAT处理并使用qPCR检测β-catenin、AXIN、c-myc的表达,Western blot检测细胞中β-catenin的表达;动物实验建立肺癌NCI-H446皮下移植瘤模型,观察MYAT对肿瘤生长的影响。结果共获得MYAT有效成分65个,SCLC基因1368个,MYAT与SCLC交集基因260个,富集分析显示与癌症通路、PD-L1/PD-1通路、NF-κB通路、Wnt等信号通路有关。分子对接验证结果显示,其有效活性成分与核心靶点蛋白的结合能均<0 kJ·mol-1,说明蛋白可与活性成分自发结合且稳定性较好。细胞实验显示MYAT组β-catenin、c-myc及AXIN mRNA表达量均显著下调(P<0.05)。动物实验显示:MYAT能明显抑制肿瘤在体内的生长。结论苗药抑癌汤可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制小细胞肺癌增殖。

苗药抑癌汤对人肺癌NCI-H446细胞的影响

目的:探讨苗药抑癌汤浓缩液对人肺癌NCI-H446细胞的影响。方法:培养细胞加不同剂量苗药抑癌汤药处理,用CCK-8及流式检测细胞凋亡筛选苗药抑癌汤最佳浓度。按照最佳浓度处理细胞将细胞分为抑癌汤组(2.5 g/mL)顺铂组(0.6μg/mL)、顺铂(0.6μg/mL)+二十分之一(0.125 g/mL)抑癌汤组、空白对照组,流式细胞术检测细胞周期、凋亡,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:与对照组比较其余三组细胞活力显著下降(P<0.05),细胞凋亡率提高,细胞周期停滞于G2期。结论:抑癌汤能显著抑制NCI-H446细胞增殖、迁移与侵袭,并诱导NCI-H446细胞凋亡,且抑癌汤结合顺铂效果更佳。