温阳消癥方对单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化的影响

目的:研究温阳消癥方对单侧输尿管结扎小鼠肾功能及肾组织病理的影响。方法:32只C57小鼠随机抽取8只作为假手术组,其余24只采用单侧输尿管结扎法制作肾间质纤维化模型。造模成功后随机分为模型组、缬沙坦组、温阳消癥方组,每组8只,分组给药,治疗2周后眼眶采血并测定血清肌酐、尿素氮,同时取肾组织进行HE、Masson染色,观察肾脏病理改变。结果:与假手术组相比,模型组的血清肌酐、尿素氮水平明显升高(P <0. 001),肾间质纤维化改变明显,胶原染色阳性率百分比升高(P <0. 001);与模型组比较,缬沙坦组和温阳消癥方组的血清肌酐、尿素氮水平均有明显下降(P <0. 001),肾组织纤维化程度较轻,胶原染色阳性率百分比下降(P <0. 001);温阳消癥方组疗效优于缬沙坦组。结论:温阳消癥方能改善UUO小鼠的肾功能,减轻肾间质纤维化,其效果好于缬沙坦胶囊。

柴黄益肾颗粒抑制巨噬细胞Mincle改善小鼠慢性肾病模型肾纤维化

目的研究柴黄益肾颗粒对小鼠慢性肾病模型肾脏纤维化的影响及潜在作用机制。方法将36只C57BL/6雄性小鼠随机均分为假手术组、模型组、柴黄益肾颗粒低剂量(3.835 g·kg^(-1))组、柴黄益肾颗粒高剂量(7.67 g·kg^(-1))组、阳性对照厄贝沙坦组和柴黄益肾颗粒高剂量+Mincle激动剂海藻糖-6,6-二苯甲酸酯(trehalose-6,6-dibehenate,TDB)组(术后1 h,一次性腹腔注射TDB 10 mg·kg^(-1))。采用单侧输尿管结扎法(UUO)建立小鼠肾脏纤维化模型。术后1 h,各药物组给小鼠灌胃相应药物,假手术组和模型组灌胃生理盐水,每日1次,连续7 d。通过苏木精-伊红染色和天狼星红染色观察各组小鼠肾脏病理变化和纤维化改变,采用Real-time PCR和ELISA法检测各组肾脏中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达和分泌,免疫组化和Western Blot法检测纤维化指标α-SMA和Fn的蛋白水平,免疫荧光和Western Blot法检测Mincle及其下游信号Syk/NF-κB的蛋白水平,流式细胞术分析Mincle阳性的巨噬细胞比例。结果与模型组比,柴黄益肾颗粒低、高剂量组均能有效改善UUO诱导的肾脏损伤和纤维化,抑制肾脏α-SMA和Fn的蛋白水平(P<0.01)。同时,柴黄益肾颗粒高剂量组可有效降低UUO模型肾脏炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达和分泌(P<0.01),抑制NF-κB的磷酸化(P<0.01)。机制研究表明,柴黄益肾颗粒高剂量组可明显下调UUO小鼠肾脏中巨噬细胞Mincle的蛋白水平以及下游信号Syk的活性(P<0.01)。采用Mincle激动剂TDB激活Mincle后,柴黄益肾颗粒高剂量组改善的肾脏损伤、炎症因子分泌和纤维化效果明显减弱(P<0.05,P<0.01)。结论柴黄益肾颗粒可改善UUO诱导的小鼠肾损伤、炎症和纤维化,其作用机制可能与下调巨噬细胞Mincle/Syk/NF-κB信号有关。

益肾活血方对肾纤维化小鼠血管内皮结构及功能的影响

目的:从内皮细胞及细胞能量代谢角度,探讨益肾活血方对肾间质纤维化(RIF)的作用机制。方法:采用单侧输尿管梗阻(UUO)方法造模成功后将75只SPF级C57BL/6小鼠随机分为模型组、白藜芦醇组(50 mg·kg^(-1)·d^(-1))、益肾活血方低、中、高剂量组(7.1、14.2、28.4 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组15只。另设15只作为假手术组。假手术组及模型组予等体积生理盐水灌胃。所有小鼠于造模术后第7、14、21天(d7、d14、d21)处死并取材,采用免疫组织化学S-P法检测血小板内皮细胞黏附分子31(CD31)蛋白表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)、促血管生成素-1(Ang-1)/酪氨酸激酶受体-2(Tie-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、闭合蛋白(Occludin)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾组织Ang-1/Tie-2、VEGF、VE-cadherin、Occludin mRNA表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠活性氧(ROS)水平。结果:与假手术组比较,模型组肾组织中CD31表达明显减少且随造模时间延长而加重(P<0.05),α-SAM、Col-Ⅳ蛋白表达水平显著升高(P<0.01);但d14~d21间CD31表达趋于平稳;ROS水平显著升高(P<0.01);Ang-1/Tie-2、VEGF、VE-cadherin、Occludin蛋白表达及mRNA表达显著下调(P<0.01)。与模型组比较,白藜芦醇组、益肾活血方中、高剂量组治疗后CD31表达量明显增加(P<0.05),α-SAM、Col-Ⅳ显著下降(P<0.01),ROS含量显著减少(P<0.01),Ang-1/Tie-2、VEGF、VE-cadherin、Occludin的蛋白表达及mRNA表达量均显著上调(P<0.01)。与白藜芦醇组比较,益肾活血方低剂量组与益肾活血方中剂量组Ang-1/Tie-2、VEGF、VE-cadherin、Occludin蛋白表达具有显著差异(P<0.01),益肾活血方高剂量组CD31、Ang-1/Tie-2 mRNA表达量差异无统计学意义,益肾活血方中剂量组ROS水平差异无统计学意义。结论:益肾活血方抗RIF作用可能与促进血管内皮修复、调控线粒体ROS减轻氧化应激,保护肾脏内皮结构完整性,延缓细胞凋亡,维持细胞能量代谢有关。