双氢青蒿素对BXSB小鼠狼疮肾炎的作用及机制研究

目的 观察双氢青蒿素 (Dihydroqinghaosu ,DQHS)对BXSB小鼠狼疮肾炎 (LN)病理改变的影响及对其肾组织核蛋白提取物中核转录因子 κB(NF κB)活化和NF κBp6 5蛋白表达的影响 ,探讨DQHS治疗系统性红斑狼疮 (systemiclupuserythematosus,SLE)的分子机制。 方法 对低温冰冻肾组织进行免疫荧光检测 ;用Westernblot的方法检测肾组织核蛋白提取物中NF κBp6 5蛋白的表达 ;以凝胶电泳迁移率改变试验 (Electrophreticmobilityshiftassay ,EMSA)对NF κB的活化进行检测。结果 免疫荧光检测显示 :模型对照组及DQHS(5mg·kg-1)剂量组小鼠肾脏组织中多种免疫球蛋白 (IgG ,IgA ,IgM)和补体 (C3 ,C1q)的荧光检测呈强阳性 ,DQHS高剂量 (12 5mg·kg-1)和中剂量 (2 5mg·kg-1)组除IgG和补体C3 呈微弱阳性外 ,IgA ,IgM和补体C1q均为阴性 ;与正常组相比较 ,BXSB小鼠肾组织核蛋白提取物中NF κB的活化及其p6 5蛋白的表达均增加 ,其中 p6 5蛋白表达的增加差异具有显著性 (P <0 0 1) ;与模型组相比较 ,DQHS3个剂量 (12 5、2 5、5mg·kg-1)组BXSB小鼠肾组织核蛋白提取物中NF κB的活化及其p6 5蛋白的表达均有不同程度的降低 ,其中 p6 5蛋白表达的降低差异具有显著性 (P <0 0 1)。结论 DQHS能抑制肾组织中NF

双氢青蒿素对BXSB狼疮小鼠自身抗体产生、TNFα分泌及狼疮性肾炎病理改变的影响

目的 :观察双氢青蒿素 (DQHS)对BXSB狼疮模型小鼠几项免疫指标及狼疮性肾炎 (lupusnephri tis,LN)病理改变的影响 ,探讨DQHS治疗系统性红斑狼疮 (systemiclupuserythematosus,SLE)的可能机制。方法 :采用ELISA方法检测血清中的抗双链DNA(ds DNA)抗体 ,以ELISA试剂盒检测血清中肿瘤坏死因子α(TNFα)的水平 ,对肾脏组织进行HE常规染色及Masson特殊染色。结果 :血清中TNFα、抗ds DNA抗体水平 ,DQHS 12 5mg/kg给药组及DQHS 2 5mg/kg给药组与模型组比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5或P <0 0 1) ;各组肾脏组织HE、Masson染色病理改变差异有显著性。结论 :DQHS能抑制BXSB小鼠血清抗ds DNA抗体的生成 ,对BXSB小鼠血清中TNFα的分泌有抑制作用 ,能明显改善BXSB小鼠LN的病理状态。

亚砷酸对BXSB狼疮鼠狼疮性肾炎的治疗作用

目的 :观察亚砷酸对BXSB自发狼疮鼠狼疮性肾炎的治疗作用。方法 :2个月龄雄性BXSB小鼠12只 ,随机分为对照组 (生理盐水 )和治疗组 (亚砷酸 0 .8mg/kg) ,隔日腹腔注射 ,共 5 5d。观察尿蛋白、尿红细胞、血清肌酐 ,血清IgG、dsDNA、ANA及肾脏病理变化。结果 :治疗组的尿蛋白排出量比对照组明显减少 ,血清IgG和dsDNA值也比对照组低 ,肾脏病理改变比对照组明显减轻。结论 :亚砷酸能抑制BXSB狼疮鼠的自身免疫反应 。

IL-10基因给药对BXSB狼疮小鼠发病的影响

目的：为了观察白细胞介素10（IL－10）在系统性红斑狼疮（SLE）发病中的作用。方法：通过基因工程方法构建了真核表达载体pcDNA3－IL－10，采用基因给药方式先后两次将质粒DNA直接肌注于3．5月龄雄性BXSB狼疮小鼠．同时给对照组小鼠注射等量空载体质粒pcDNA3。结果：发现IL－10在该鼠体内过表达可导致其血清ANA滴度、IL－6水平及肾脏IgG沉积明显增加，而尿蛋白和血清GPT水平及肾脏C3沉积无明显差异。结论：提示IL－10在SLE发病中可能具有病理性作用，阻止或减少IL－10的分泌及作用，也许有助于SLE的治疗。

双氢青蒿素对狼疮性BXSB小鼠的作用

目的探讨双氢青蒿素治疗红斑狼疮的机理。方法选择雄性BXSB小鼠50只,分成空白组(生理盐水)、对照组(强的松)和实验组(双氢青蒿素),采用Macart和直接免疫荧光方法检测BXSB小鼠尿蛋白、脾脏T细胞亚群和B细胞。结果BXSB小鼠尿蛋白量依次减低为空白组>实验组>对照组,P<0.01。对照组的CD4T细胞和CD8T细胞低于空白组,P<0.05。实验组的CD4T细胞和CD8T细胞高于空白组,P<0.01。B细胞降低顺序为空白组>实验组>对照组,P<0.01。结论双氢青蒿素通过抑制B淋巴细胞增殖,促进CD4T细胞和CD8T细胞的增殖,尤其是CD8T细胞增殖明显,减少B细胞分泌自身抗体,从而达到治疗红斑狼疮的作用。

中药狼疮静颗粒对狼疮性BXSB小鼠脾脏CD_4^+T、CD_(19)^+B细胞凋亡的影响

目的 :研究中药狼疮静颗粒对BXSB狼疮性小鼠脾脏CD4 + T、CD19+ B细胞凋亡的影响 ,并探讨其作用机理。方法 :运用流式细胞术、免疫双荧光染色法检测脾脏CD4 + T、CD19+ B细胞凋亡。结果 :雄性BXSB小鼠脾脏CD4 + T、CD19+ B细胞凋亡加速 ,中药狼疮静颗粒可明显抑制BXSB小鼠脾脏CD4 + T、CD19+B细胞凋亡率。结论 :中药狼疮静颗粒通过抑制T、B淋巴细胞过度凋亡 ,可能阻抑了过量核酸抗原释放 ,从而抑制了B细胞的异常增生活化 ,使自身抗体产生减少而达到治疗系统性红斑狼疮目的。

叉状头/翅膀状螺旋转录因子在BXSB狼疮小鼠肾脏中的表达

目的观察叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)在BXSB狼疮小鼠肾脏中的表达,探讨Foxp3在狼疮性肾炎中可能的免疫耐受诱导作用及机制。方法选取8周龄及16周龄雄性BXSB小鼠各6只,以8周龄C57BL/6雄性小鼠6只为正常对照,用免疫组织化学及实时荧光定量PCR方法,检测Foxp3在小鼠肾脏中的表达。结果正常对照组C57BL/6小鼠肾组织Foxp3阳性表达,细胞呈深棕色着色,广泛分布于肾小管;8周龄及16周龄BXSB小鼠肾脏组织Foxp3弱阳性表达,细胞呈浅棕色着色,分布于肾小管。8、16周龄BXSB组小鼠肾组织内Foxp3mRNA表达水平[(0.55±0.06),(0.51±0.07)]均较正常对照组(1.02±0.08)降低,差异有统计学意义(均P<0.01);16周龄BXSB组小鼠的Foxp3mRNA表达水平较8周龄BXSB组降低,但差异没有统计学意义(P>0.05)。结论 BXSB小鼠狼疮肾炎的发病机制可能与调节性T细胞的Foxp3表达下调相关。

T细胞免疫防治BXSB小鼠系统性红斑狼疮的实验研究

目的 :探索用自身反应性 T细胞免疫防治 BXSB雄性小鼠发生类似人系统性红斑狼疮 (SL E)的可行性。方法 :用活化的 BXSB小鼠自身反应性 T细胞克隆 (ATL 1)从小鼠尾静脉注射进行免疫 (1× 10 6 /只 ,共 3次 ) ,然后从不同角度监测病情发展情况。 结果 :在免疫后的第 1、2、4周 ,T细胞免疫组小鼠血清中抗 ds DNA抗体水平明显低于对照组 (P<0 .0 1) ,在免疫后第 4、8、12、16周 ,T细胞免疫组小鼠的死亡率明显低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,但是两组尿蛋白的浓度在各时间段均未见显著差异。结论 :T细胞免疫能在一定程度上延缓 BXSB小鼠 SL E的进程 ,延长小鼠的生存时间。其机制可能与 T细胞免疫诱导了针对自身反应性 T细胞的调节性免疫应答有关。

C_3基因在BXSB小鼠主要脏器中的表达

用同位素标记ｃＤＮＡ探针的分子杂交方法检测了ＢＸＳＢ小鼠肝、肾、脾、胸腺各脏器中补体Ｃ_３ｍＲＮＡ的表达情况，结果表明３～４月龄雄性ＢＸＳＢ小鼠肝、肾、脾各脏器Ｃ_３ｍＲＮＡ的表达量较正常对照鼠显著增加。Ｃ_３基因的过度表达可能参与ＢＸＳＢ小鼠ＳＬＥ多脏器非感染性炎症的发生，同时提示该鼠存在Ｍ系统的大量扩增及活化。

中药狼疮方对狼疮样BXSB小鼠脾脏免疫系统和淋巴细胞亚群的影响

目的:研究中药狼疮方对狼疮样BXSB小鼠免疫系统和淋巴细胞亚群的影响,探讨狼疮方治疗SLE的免疫学机制。方法:采用BXSB小鼠模型,随机分为3组:狼疮方治疗组(每天0.5mL狼疮方药液灌胃)、强的松治疗组(每天prednisone0.173mg/20gBW溶于0.5mL生理盐水灌胃),未治疗组(每天0.5mL生理盐水灌胃),每组6只,疗程10周。另设与BXSB小鼠同基因的正常C57BL/6小鼠6只为正常对照组。分别采集上述各组小鼠外周血和脾组织进行检测。结果:(1)未治疗组BXSB小鼠血清IgG和抗ds-DNA抗体水平及脾组织CD3、CD4、CD8、CD19、CD23阳性细胞百分比都显著高于正常对照组、狼疮方治疗组、强的松治疗组(P<0.05或P<0.01)。(2)经狼疮方或强的松治疗后,BXSB小鼠血清IgG、抗ds-DNA抗体水平及脾组织CD4、CD8、CD19、CD23阳性细胞百分比显著低于未治疗组(与未治疗组相比,P<0.05或P<0.01),且接近正常水平(与正常对照组比较,P>0.05)。结论:狼疮样BXSB小鼠T、B细胞免疫功能上调。中药狼疮方可抑制狼疮样小鼠T、B淋巴细胞活化,减轻其高丙种球蛋白血症,减少体内自身抗体产生。

狼疮样BXSB小鼠脾细胞CD134/CD134L的表达及治疗影响

为了探讨CD134/CD134L共刺激信号在SLE发病机制中的可能作用及治疗的影响。采用狼疮样BXSB小鼠模型,随机分为三组:狼疮方治疗组、强的松治疗组、未治疗组,每组6只,疗程10周。另设与BXSB小鼠同基因的正常C57BL/6小鼠6只为正常对照组。分别采集上述各组小鼠外周血和脾组织进行检测。结果:(1)与正常对照组比较,未治疗组BXSB小鼠的血清IgG和抗dsDNA抗体水平和脾组织CD4+CD134+、CD8+CD134+、CD19+CD134L+、CD23+CD134L+的百分比及CD134、CD134L的mRNA拷贝数都显著增高(P<0.05或P<0.01)。且血IgG和抗dsDNA抗体水平与脾细胞CD19+CD134L、CD23+CD134L的水平增加呈正相关;(2)狼疮方治疗组或强的松治疗组的血清IgG、抗dsDNA抗体水平和脾组织CD4+CD134+、CD8+CD134+、CD19+CD134L+、CD23+CD134L+的百分比及CD134、CD134L的mRNA拷贝数都显著低于未治疗组(P<0.05或P<0.01),而与正常对照组无显著差异(P均>0.05)。狼疮样BXSB小鼠存在CD134/CD134L的异常表达。狼疮方可减轻狼疮样小鼠高丙种球蛋白血症,减少体内自身抗体产生,对CD134/CD134L的下调作用与强的松相当。

ICOSL单克隆抗体对BXSB狼疮鼠病变的影响

目的观察大鼠抗小鼠ICOSL多克隆抗体抑制ICOS(可诱导共刺激分子)信号通路对BXSB狼疮鼠病变的影响。方法大鼠抗小鼠ICOSL(可诱导共刺激分子配体)抗体尾静脉注射BXSB狼疮鼠,100μg/次,3次/周,共4周,对照组以相同量PBS注射,在治疗后观察血IgG型dsDNA抗体、尿蛋白、肾小球IgG沉积以及肾组织病理变化。结果实验组狼疮鼠的蛋白尿和IgG型dsDNA抗体较对照组明显减少(P<0.01),IgG在肾组织沉积以及肾组织病理损伤也较对照组减轻(P<0.01)。结论抑制ICOS信号通路可减轻BXSB狼疮鼠病变。

BXSB小鼠肝、肾、脾脏器中C－myc和N－ras原癌基因的表达

用同位素标记ｃＤＮＡ探针的斑点杂交方法观察了ＢＸＳＢ小鼠肝、肾、脾脏器中Ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ原癌基因的表达情况。结果表明ＳＬＥ发病较重的４～６月龄ＢＸＳＢ雄鼠脾脏和肾脏均表达Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ，肝脏未见表达。ＳＬＥ发病较轻的４～６周龄ＢＸＳＢ雄鼠仅发现脾脏表达Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ。ＢＸＳＢ小鼠肝、肾、脾各脏器均无Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ表达。本研究结果提示Ｃ－ｍｙｃ基因可能参与ＢＸＳＢ小鼠淋巴细胞异常活化和狼疮性肾炎的发生。

来氟米特对BXSB狼疮鼠免疫状况的影响

目的:观察来氟米特对BXSB小鼠免疫状况的影响。方法:48只3月龄的雄性BXSB小鼠分为4组,治疗前后测定24h尿蛋白;治疗后检测血清抗dsDNA抗体以及肾脏免疫复合物。结果:治疗后,来氟米特组的尿蛋白、抗dsDNA抗体明显低于地塞米松和生理盐水组(P<0.01),也低于环磷酰胺组,但其组间差异无统计学意义(P>0.05);来氟米特组的肾脏免疫复合物低于其他治疗组(P<0.05或P<0.01)。与生理盐水组相比,来氟米特组小鼠的生存期明显延长(χ2=4.56,P<0.05)。结论:来氟米特可显著改善BXSB小鼠的免疫状况,能延缓BXSB狼疮鼠的疾病进程。

BXSB狼疮鼠骨髓细胞凋亡的实验研究

目的通过在体外对BXSB狼疮鼠骨髓细胞进行培养,检测BXSB狼疮鼠骨髓细胞的凋亡情况,从而在干细胞水平上探讨系统性红斑狼疮(SLE)的发病机制。方法取4月龄雄性BXSB狼疮鼠和雄性BALB/c小鼠各6只。从小鼠股骨提取骨髓细胞后,用台盼蓝染色法检测骨髓细胞的活性,计数。然后将骨髓细胞悬液加入6孔培养板,每孔加入等量的骨髓细胞。置于37℃、5%CO2中培养24h后收集骨髓细胞,用TUNEL法检测细胞的凋亡。结果①BXSB狼疮鼠骨髓细胞数量明显高于同龄BALB/c小鼠,而且BXSB狼疮鼠与同龄BALB/c小鼠相比,骨髓细胞数/小鼠体重之比也明显升高。②BXSB狼疮鼠骨髓细胞中凋亡水平明显下降。结论BXSB狼疮鼠的发病可能与其骨髓细胞的凋亡异常有关。

EsA对BXSB狼疮性肾炎小鼠作用观察

目的观察商陆皂苷甲(EsA)对BXSB小鼠狼疮性肾炎(LN)的治疗作用及IL-6及TNF-α分泌的影响,探讨EsA对LN的可能作用机制。方法 12周龄雄性BXSB小鼠24只,随机分成模型对照组、EsA低剂量治疗组和EsA高剂量治疗组。腹腔注射每日1次,4周后达治疗终点。结果 EsA能显著降低BXSB小鼠尿蛋白/尿肌酐比值,改善BXSB肾脏病变。结论 EsA对BXSB狼疮性肾炎小鼠具有显著治疗作用,抑制IL-6及TNF-α分泌产生可能参与EsA抗炎机制。

白介素-1受体拮抗剂对BXSB狼疮小鼠的治疗作用观察

利用基因工程技术获得高纯度人白介素-1受体拮抗剂（IL－1ra），连续性尾静脉注射4．5月龄雄性BXSB狼疮小鼠，发现其尿蛋白水平和ANA滴度的增加幅度减少，肾脏IgG、C3沉积减轻，血清白细胞介素-6（IL－6）活性和肾脏IL－6蛋白表达减弱。提示IL－1在BXSB狼疮小鼠发病中的病理性作用及IL－1ra对该鼠可能的治疗作用。

花生四烯酸产物对BXSB小鼠狼疮肾炎的影响

目的探讨狼疮肾炎发病与花生四烯酸产物的关系。方法44只BXSB小鼠分4组,经中药治疗1.5月后,分别测定各组小鼠的尿蛋白定量、血清抗核抗体、肾脏内IgG和C3沉积量及肾组织内前列腺素(PGE1)、前列环素(6-酮-PGF1α)、血栓素(TXB2)和白三烯(LTC4)的含量。结果发现空白对照组雄性小鼠尿蛋白定量、血清抗核抗体水平、肾组织内IgG、C3含量均高于治疗组。与此同时,肾组织内LTC4、TXB2含量高于治疗组,肾组织内6-酮-PGF1α及PGE1含量低于治疗组。结论皮质类固醇和中药治疗后可以使6-酮-PGF1α及PGE1升高,使LTC4、TXB2含量降低,说明花生四烯酸的不同衍生物含量和狼疮肾炎的病情轻重密切相关。

利用cDNARDA技术研究BXSB狼疮小鼠差异表达的基因

利用近年来发展起来的代表性差异分析cDNA RDA (cDNA representationaldifferenceanalysis)技术筛选BXSB红斑狼疮小鼠发病相关基因 .发现了 3个新的表达序列标签 (EST)片段 ,在GenBank中的登录号分别为AF0 60 113 ,AF0 60 111,AF0 60 110 ,同时发现了一些已知与自身免疫病相关的基因如逆转录病毒衣壳蛋白、Line 1逆转录酶等 .通过RDA技术可能发现系统性红斑狼疮发病相关新基因 。

脾脏CD4^+T、CD19^+B淋巴细胞凋亡在狼疮性BXSB小鼠发病机制中的意义

目的对♀、♂狼疮性BXSB小鼠外周血T、B淋巴细胞分布及脾脏T、B淋巴细胞凋亡进行比较探讨脾脏CD4+T、CD19+B淋巴细胞凋亡在狼疮性BXSB小鼠发病机制中的意义。方法运用流式细胞术、免疫双荧光染色法检测外周血CD4+T、CD8+T、CD19+B细胞分布及脾脏CD4+T、CD19+B细胞凋亡;直接免疫荧光法观察♀、♂狼疮性BXSB小鼠肾脏免疫组化。结果与♀BXSB小鼠比较,♂BXSB小鼠外周血CD4+T、CD8+T细胞分布明显降低(P<0.01),外周血CD19+B细胞分布及脾脏CD4+T、CD19+B凋亡率明显升高(P<0.01);♂BXSB小鼠绝大多数肾小球毛细血管襻上可见大量IgG呈片状沉积,而♀BXSB小鼠肾脏几乎无IgG沉积。结论♂BXSB小鼠发病较♀BXSB小鼠重,细胞凋亡在BXSB小鼠发病机制中具有重要意义。