微小RNA-150及靶基因SRC激酶信号抑制剂1在下肢深静脉血栓中的表达及作用机制

目的探讨微小RNA(miRNA)-150及靶基因SRC激酶信号抑制剂1(SRCIN1)在下肢深静脉血栓(LEDVT)中的表达及作用机制。方法收集2022年1月至2023年1月柳州市人民医院收治的60例LEDVT患者的临床资料作为LEDVT组,另纳入同期进行体检的60例健康者作为对照组。采集两组受试者的外周静脉血,并分离内皮祖细胞。通过荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-150的表达水平,利用生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-150的靶基因,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测SRCIN1蛋白的表达,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测内皮祖细胞增殖情况。结果与对照组相比,LEDVT组内皮祖细胞中miRNA-150的相对表达量明显降低(P﹤0.01)。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验证实SRCIN1是miRNA-150的靶基因;在野生型SRCIN1中,与转染miRNA-NC的细胞相比,转染miRNA-150 agomir细胞的荧光素酶活性明显降低(P﹤0.01)。在突变型SRCIN1中,miRNA-150对SRCIN1的负向调控作用消失。Western blot检测结果显示,与miRNA-150antagomir组内皮祖细胞相比,miRNA-150 agomir组内皮祖细胞中SRCIN1蛋白的表达水平降低(P﹤0.05);与对照组相比,LDVT组内皮祖细胞中SRCIN1蛋白的表达水平升高(P﹤0.05)。MTT实验检测结果显示,与miRNA-150antagomir组相比,miRNA-150 agomir组的吸光度(OD)值在48、72 h时均明显升高(P﹤0.01)。结论miRNA-150在内皮祖细胞中的表达水平降低可能与LEDVT的发生、发展有关。高表达的miRNA-150可能通过靶向SRCIN1促进内皮祖细胞的增殖,从而达到治疗LEDVT的目的。

房颤患者射频消融术后血浆微小RNA-21、微小RNA-150水平变化及其检测价值分析

目的:探讨房颤(AF)患者射频消融术(RFA)后血浆微小RNA-21(miR-21)、微小RNA-150(miR-150)水平变化及其检测价值。方法:选取86例AF患者为观察对象,按RFA术后AF是否复发分为复发组(n=22)、非复发组(n=64)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法测定血浆miR-21、miR-150水平,对比受试者手术前后以及复发组、未复发组血浆miR-21、miR-150表达差异,采用Spearman相关性分析RFA术后血浆miR-21、miR-150水平与AF复发的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析RFA术后血浆miR-21、miR-150水平对AF复发的预测价值。结果:RFA术后血浆miR-21水平低于术前(P<0.05),miR-150水平高于术前(P<0.05)。复发组RFA术后血浆miR-21水平高于未复发组(P<0.05),miR-150水平低于未复发组(P<0.05)。Spearman相关分析发现,RFA术后血浆miR-21水平与复发情况呈正相关(P<0.05),miR-150水平与复发情况呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,RFA术后血浆miR-21、miR-150水平及联合检测对AF复发均有预测效能(均P<0.05),曲线下面积(AUC)分别为0.783、0.675、0.812,其中联合检验预测效能最高,敏感度、特异性分别为86.36%、67.19%。结论:AF患者RFA术后血浆miR-21水平降低,miR-150水平升高,且其术后miR-21、miR-150水平与AF复发存在相关性,可通过联合检测患者RFA术后血浆miR-21、miR-150水平预测AF复律后复发情况。

微小RNA-150在脓毒症患者外周血白细胞的表达及其临床意义

目的观察脓毒症患者外周血白细胞中微小RNA-150（miR-150）的表达变化,探讨其与脓毒症免疫细胞因子水平及严重程度的关系。方法采用实时定量PCR（qRT-PCR）检测40例脓毒症患者、20例全身性炎症反应综合征（SIRS）患者和20例正常对照外周血白细胞中miR-150表达量,并评价miRNA检测的稳定性和线性。酶联免疫吸附法测定TNF-α和IL-10浓度,序贯器官衰竭估计（SOFA）评分系统评价脓毒症患者的严重程度。对miR-150与白细胞总数、TNF-α、IL-10和SOFA评分之间进行相关分析。结果外周血标本在4℃保存5 d,白细胞中miR-150表达量无明显变化;最低检出限为6.97 pg/μL RNA,在6.97~6.97×104pg/μL RNA之间有良好的线性关系（r=0.999）。脓毒症组miR-150表达量较正常对照组显著降低（P〈0.01）,白细胞总数、IL-10水平和IL-10/TNF-α比值显著升高（P〈0.05）;而脓毒症组与SIRS组间差异均无统计学意义（P〉0.05）。血清TNF-α水平在三组间差异均无统计学意义（P〉0.05）。脓毒症患者中,死亡组miR-150表达量较存活组显著降低（P〈0.05）,而IL-10水平和IL-10/TNF-α比值显著升高（P〈0.01）,TNF-α水平差异无统计学意义（P〉0.05）。脓毒症患者miR-150表达量与SOFA评分、血清TNF-α和IL-10呈显著负相关（r值分别为-0.619、-0.457和-0.431,P〈0.05）;与WBC无显著相关性（P〉0.05）。血清TNF-α、IL-10和IL-10/TNF-α比值与SOFA评分无显著相关性（P〉0.05）。结论脓毒症患者外周血miR-150表达量显著降低,其水平不但能反映机体炎症反应状态,而且在一定程度上能作为判断疾病严重程度及预后的指标。

糖尿病肾病患者血清microRNA-21含量及其与氧化应激指标的相关性

目的分析糖尿病肾病(DN)患者血清micro RNA-21(mi R-21)含量及其与氧化应激指标的相关性。方法选择在该院接受治疗的DN患者82例作为观察组,根据病情严重程度分为轻度DN组(47例)、中重度DN组(35例),另取同期体检健康人60例作为对照组。检测各组患者的血清mi R-21含量,超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、晚期蛋白氧化产物(AOPP)等氧化应激指标水平,进一步分析两者之间的相关性。结果 1早期DN组、中晚期DN组患者血清mi R-21含量低于对照组,中晚期DN组患者血清mi R-21含量低于早期DN组;2早期DN组、中晚期DN组患者血清SOD、MDA、AOPP水平高于对照组,中晚期DN组患者血清SOD、MDA、AOPP水平高于早期DN组;3血清mi R-21含量与SOD、MDA、AOPP等氧化应激指标水平呈负相关。结论 DN患者的血清mi R-21含量降低,且与患者的氧化应激指标水平相关,有望成为诊断及指导疾病治疗的有效指标之一。

LncRNA ZFAS1靶向微小RNA-150-5p对胃癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA ZNFX1反义RNA 1(ZFAS1)靶向调控微小RNA-150-5p(miR-150-5p)表达及对胃癌细胞侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测正常胃黏膜上皮细胞GES-1及不同胃癌细胞(SGC-7901、HGC-27、MGC-803和BGC-823)的ZFAS1水平。脂质体法向BGC-823细胞转染针对ZFAS1的小干扰RNA片段si-ZFAS1(干扰组)或无关序列si-NC(NC组)并设未转染的细胞为对照组。QPCR、MTT法、Transwell小室实验和划痕实验测定BGC-823细胞的ZFAS1水平、增殖、侵袭和迁移能力的变化,QPCR和Western blotting检测Bcl-2和基质金属蛋白酶(MMP)-9的水平;双荧光素酶报告基因实验验证ZFAS1对miR-150-5p的靶向调控作用。结果胃癌细胞的ZFAS1水平均高于GES-1细胞(P<0.05),后续干扰实验选取ZFAS1水平最高的BGC-823细胞。干扰组的ZFAS1水平为0.269±0.074,低于对照组的1.171±0.263和NC组的1.088±0.142(P<0.05)。与NC组和对照组相比,干扰组BGC-823细胞的增殖活力下降(P<0.05);干扰组的划痕愈合率和穿膜细胞数目分别为(51.509±5.348)%和(145.662±12.328)个,低于NC组的(82.317±7.459)%和(341.342±21.814)个及对照组的(80.770±6.163)%和(339.234±17.255)个(P<0.05);干扰组的Bcl-2和MMP-9水平均低于其余两组(P<0.05)。对照组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。miR-150-5p模拟物能够抑制含有其结合位点的ZFAS1野生型质粒的荧光素酶活性(P<0.05),不影响ZFAS1突变型质粒的荧光素酶活性(P>0.05)。结论ZFAS1在胃癌细胞中高表达,下调其水平可抑制BGC-823细胞的增殖和迁移侵袭能力并发挥类似癌基因的作用,可能与靶向调控miR-150-5p有关,在胃癌靶向治疗中有一定应用前景。

红景天苷通过micro RNA-370改善2型糖尿病小鼠糖代谢的作用机制

目的观察红景天苷改善2型糖尿病小鼠血糖作用,探讨红景天苷改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的分子机制。方法采用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病小鼠模型,检测血糖相关指标、血清和肝脏micro RNA-370表达,以及肝组织糖异生关键酶(PEPCK/G6Pase)蛋白表达水平,观察红景天苷对2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的改善作用。分离培养小鼠原代肝细胞,采用瞬时转染技术将micro RNA-370沉默或过表达,观察micro RNA-370对糖代谢的影响及红景天苷调节糖代谢的分子机制。结果与模型对照组比较,红景天苷各剂量组小鼠血糖相关指标均明显改善(P<0.05);血清和肝组织micro RNA-370表达水平以及肝组织PEPCK/G6Pase蛋白相对表达水平均不同程度降低,且呈剂量依赖性,中、大剂量组降低较明显(P<0.05),小剂量组有降低趋势,但差异无统计学意义。细胞实验中,与空白对照组比较,红景天苷组和micro RNA抑制剂组PEPCK/G6Pase表达均被抑制(P<0.05),micro RNA-370激动剂组PEPCK/G6Pase表达明显促进(P<0.05),红景天苷与micro RNA-370激动剂联用能逆转micro RNA-370激动剂所致PEPCK/G6Pase蛋白表达增高(P<0.05)。结论红景天苷能明显改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱,且该作用至少部分通过抑制micro RNA-370实现。

MicroRNA-126和血管内皮生长因子在胚胎停育绒毛组织中的表达及相关性研究

目的通过分析孕早期胚胎停育与正常胚胎绒毛组织中microRNA-126(miR-126)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异,探讨其在早期胚胎停育中的相关性。方法收集孕早期胚胎停育和正常胚胎绒毛组织各28例作为胚胎停育组和对照组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组miR-126和VEGF mRNA表达水平的变化。结果 1两组绒毛组织中均有miR-126表达,胚胎停育组绒毛组织中miR-126的表达高于对照组,但差异无统计学意义。2胚胎停育组绒毛组织中VEGF的表达低于对照组,差异有统计学意义。3胚胎停育组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈负相关;对照组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈正相关。结论 1胚胎停育绒毛组织中VEGF的表达低于正常胚胎。2VEGF的表达变化与胚胎停育的发生有一定的相关性。

microRNA-133a拮抗苯肾上腺素诱导的小鼠心肌肥大

目的利用心肌细胞肥大体外模型研究mi R-133a抗心肌肥大的作用机制。方法构建mi R-133a腺病毒表达载体,导入293细胞并收获高表达mi R-133a的病毒;取12只出生1~3 d内的小鼠心脏,采用酶消化及梯度离心法获得心肌细胞,分为对照组和模型组,模型组加入苯肾上腺素（PE）诱导;将高表达mi R-133a的腺病毒感染模型组的心肌细胞,观察细胞面积的变化,RTPCR检测Acta1、Actc1、Actb、Myh6、Myh7、BNP基因的表达。结果模型组心肌细胞加入PE培养后,较对照组面积增大3倍以上,Acta1等基因表达显著增高;肥大后模型组的心肌细胞采用mi R-133a病毒感染后较未加入mi R-133a病毒的模型组的心肌细胞的面积缩小,Acta1等基因表达显著降低。结论 mi R-133a是心肌肥大的重要调节因子,有拮抗心肌肥大的作用。

microRNA-155在类风湿关节炎外周血中的表达及临床意义

目的通过研究micro RNA-155(mi R-155)在类风湿关节炎(RA)患者外周血的表达水平,分析mi R-155与疾病临床特征的相关性,探讨其在RA发病及疾病进展中的意义。方法抽取50例初发RA患者及36例健康对照组外周血分离PBMC(外周血单个核细胞),提取和纯化mi RNA,实时定量PCR检测mi R-155的表达,以小分子RNA U6作为内对照,对mi R-155的表达量进行相对定量分析。同时收集RA患者有关的临床参数,统计分析mi R-155的表达水平与RA合并临床参数的相关性。对RA活动组中,随机分为甲氨蝶呤(MTX)单药治疗组,肿瘤坏死因子(TNF)-α抑制剂单药治疗组,两组随访观察12周,收集患者治疗前后外周血。实时荧光定量PCR法检测RA患者治疗前后外周血mi R-155的表达水平变化。结果RA患者中PBMC中mi R-155的表达水平较健康对照组明显升高,(P<0.01);同时RA患者mi R-155的表达与患者活动度有关,与肺间质病变等无明显相关,RA患者TNF-α抑制剂单药治疗组中,mi R-155的表达较治疗前下降,而在甲氨蝶呤治疗组中无明显下降。结论 mi R-155在RA的PBMC中异常高表达,且与RA的活动度相关,提示mi R-155可能可作为RA诊断及RA活动的一个预测指标。mi R-155在RA的发病机制中可能参与了TNF-α的致炎过程。

血清microRNA-375在非小细胞肺癌中的表达水平及其临床意义

目的：探讨micro RNA-375（mi R-375）在非小细胞肺癌（non small-cell lung cancer,NSCLC）患者血清中的表达水平及临床意义。方法：采用实时荧光定量PCR方法检测82例非小细胞肺癌患者和对照组100例健康人血清的mi R-375的表达水平,分析其与临床病理参数之间的关系。结果：NSCLC组血清mi R-375表达水平显著低于对照组,并且其表达与临床分期和淋巴结转移有关（P〈0.05）。血清mi R-375在ROC曲线下面积（area under the ROC curve,AUC）为0.905（95%CI：0.860~0.950）。当血清mi R-375临界值取0.995时,对NSCLC诊断的灵敏度为92.0%,特异度为78.0%。结论：血清mi R-375可能作为一种新型NSCLC诊断的分子标志物和潜在的基因靶向治疗靶点。

microRNA-21通过促进成纤维细胞的增殖和分化调节心肌梗死后的心脏重塑

目的探讨小鼠心肌梗死模型中microRNA-21(miR-21)对心脏成纤维细胞增殖和分化的影响。方法利用左前降支结扎法构建小鼠心肌梗死模型(心肌梗死组),以心电图及病理改变作为建模成功的观察指标。采用荧光定量PCR检测各组心肌组织miR-21的表达。利用miR-21的模拟物(miR-21 mimic)转染小鼠成纤维细胞(miR-21 mimic组),使其在细胞中呈过表达状态,然后标记5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU),通过荧光显微镜观察成纤维细胞的增殖情况,蛋白质印迹法检测成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和小鼠Smad同源物7(Smad7)的表达,并与随机对照组及空白对照组比较。结果与假手术组比较,心肌梗死组梗死交界区的miR-21的表达量明显上调[(6.043±0.231)×10-4vs(1.620±0.451)×10-4,P<0.01],miR-21 mimic组成纤维细胞miR-21基因表达较随机对照组和空白对照组显著上调[(4.839±0.705)×10-4vs(1.143±0.064)×10-4vs(1.017±0.201)×10-4,P<0.01],miR-21mimic组成纤维细胞EdU染色阳性率较随机对照组和空白对照组显著增加[(27.892±1.645)%vs(12.553±1.227)%vs(13.946±1.550)%,P<0.01];同时,miR-21 mimic组成纤维细胞Smad7蛋白的表达明显下调,而α-SMA的表达显著上调。结论心肌梗死后,上调的miR-21可以通过调节转化生长因子(TGF)-β信号通路中Smad7的表达促进成纤维细胞的增殖和分化,进而调节心梗后的心脏重塑。

自身免疫性甲状腺炎甲状腺组织和外周血单个核细胞中微小RNA-142-3p、微小RNA-150表达及临床意义

目的探讨甲状腺组织和外周血单个核细胞中微小RNA-142-3p(miR-142-3p)、微小RNA-150(miR-150)在桥本甲状腺炎(HT)中的表达水平及临床意义。方法选取2017年3月至2019年6月南阳市中心医院行甲状腺手术切除并经病理确诊为HT病人87例为HT组;同期选取南阳市中心医院行甲状腺腺瘤切除术的非癌病人73例为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组甲状腺组织和外周血单个核细胞中miR-142-3p、miR-150表达水平;分析HF病人miR-142-3p、miR-150水平与甲状腺功能参数及相关细胞因子相关性。结果HT组甲状腺组织和外周血单个核细胞中miR-142-3p[(1.54±0.32)、(2.25±0.54)]比[(1.00±0.23)、(1.00±0.24)]、miR-150[(2.21±0.43)、(3.78±1.14)]比[(1.00±0.16)、(1.00±0.19)]表达水平均显著高于对照组(P<0.05);两组甲状腺功能参数及相关细胞因子水平比较,均差异有统计学意义,HT组促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平显著高于对照组(P<0.05),游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)水平显著低于对照组(P<0.05);HT病人甲状腺组织和外周血单个核细胞中miR-142-3p、miR-150水平呈正相关,且与TSH、TPOAb、IL-17、IL-6、IFN-γ、TGF-β1呈正相关,与FT3、FT4呈负相关(P<0.05)。结论甲状腺组织和外周血单个核细胞中miR-142-3p、miR-150水平的变化与HT有关。miR-142-3p、miR-150对评价HT的早期危险性、降低患病率有重要意义。

MicroRNA-146a与风湿性疾病

MicroRNAs（miRNAs）是一类短小（20～24nt）的非编码RNA,通过对基因表达的转录后调节参与很多生物学过程。越来越多的研究证明,miRNAs尤其miRNA-146a在免疫和自身免疫中发挥着重要作用。本文将miRNA-146a在风湿性疾病中的生物学功能及研究进展作一综述。

微小RNA-150在非小细胞肺癌外周血中的表达及其临床意义

目的:探讨微小RNA-150(miR-150)在非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)患者外周血单个核细胞(peripheralblood mononuclear cells,PBMC)中的表达及其临床意义。方法:采用实时定量PCR(quantitative reverse-transcriptase PCR,RT-qPCR)检测64例NSCLC患者、26例正常对照患者PBMC中miR-150表达量,并且分析其对NSCLC的诊断价值及与NSCLC临床病理参数间的关系。结果:miR-150水平在NSCLC组和对照组间差异无统计学意义(P=0.260),但是肺腺癌组miR-150水平显著高于对照组(P=0.001)、肺鳞癌组(P<0.001)。ROC曲线分析miR-150对NSCLC诊断的AUC为0.610(95%CI:0.493～0.728,P=0.060),miR-150对肺腺癌诊断的AUC为0.834(95%CI:0.734～0.934,P<0.01),而miR-150对肺腺癌和肺鳞癌鉴别诊断的AUC为0.951(95%CI:0.903～0.999,P<0.01)。NSCLC患者miR-150水平与肿瘤远处转移密切相关(P=0.014),与临床分期、淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:肺腺癌患者PBMC中miR-150表达明显升高,并且可能成为鉴别诊断肺腺癌和肺鳞癌的新标志物。

非小细胞肺癌组织微小RNA-150的水平及其临床意义

目的探讨微小RNA-150(miR-150)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况及其临床意义。方法收集本院2014年9月至2017年6月手术切除的NSCLC患者癌组织及配对癌旁组织73对,采用实时定量PCR(QPCR)检测NSCLC组织的miR-150水平,分析其与NSCLC临床病理特征(性别、年龄、吸烟史、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期和病理类型)的关系,根据随访资料分析不同miR-150水平NSCLC患者的预后情况。结果 QPCR结果显示NSCLC组织中的miR-150水平为2. 014±0. 227,高于癌旁组织的1. 023±0. 154,差异有统计学意义(P<0. 05); NSCLC患者的miR-150表达与性别、年龄、吸烟史和病理类型均无关,而与淋巴结转移、肿瘤大小和TNM分期有关(P<0. 05),且淋巴结转移阳性、肿瘤较大及临床分期较晚患者的miR-150水平较高。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,miR-150高表达者的中位生存期为27. 0个月,少于低表达者的34. 0个月(P<0. 05)。结论 MiR-150在NSCLC组织中高表达并参与了NSCLC的发生发展,该miRNA水平较高者的预后较差,可作为NSCLC潜在的分子诊断及预后监测标志物。

抑制microRNA-21表达降低HCT-116细胞侵袭转移能力的实验研究

目的:探讨抑制人结肠癌细胞HCT-116 micro RNA-21表达降低结肠癌细胞侵袭转移能力作用机制。方法:应用表达反义micro RNA-21的质粒mi RZip21转染HCT-116细胞,检测micro RNA-21的变化,Target Scan和Pic Tar等工具筛选与侵袭转移相关的靶基因,实时定量PCR方法检测转染前后靶基因m RNA的变化,Western blot检测靶基因蛋白表达变化,平皿划痕和Transwell实验观察抑制micro RNA-21与否HCT-116细胞转移和侵袭能力。结果:筛选出4种与侵袭转移相关的micro RNA-21靶基因:TIMP-3,RECK,BMPRⅡ和PCDH17;mi RZip21质粒转染HCT-116后,micro-RNA 21表达水平下降约40%,靶基因TIMP-3和RECK的m RNA及靶蛋白表达上升明显,有统计学意义(P<0.05);平皿划痕和Transwell实验结果表明抑制micro RNA-21后,HCT-116细胞转移侵袭能力明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制micro RNA-21的表达能够减弱HCT-116细胞的侵袭和转移能力。

胃癌组织中microRNA-224阳性表达与患者预后相关性分析

目的:探讨micro RNA-224于胃癌组织中的阳性表达与患者临床病理特征及预后的相关性。方法:应用原位杂交技术检测micro RNA-224在50例石蜡固定癌旁非肿瘤胃黏膜组织及112例石蜡胃肿瘤组织切片中的表达情况,分析其与肿瘤患者各病理参数及预后的相关性。原位杂交按照原位杂交试剂盒的说明书进行。结果:micro RNA-224在胃癌组织中阳性表达率49.1%(55/112),癌旁非肿瘤胃黏膜组织中阴性表达。其阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、远处转移及浸润深度存在相关性(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤的部位、分化程度、Lauren分型无关(P>0.05)。micro RNA-224阴性表达比阳性表达者5年生存率高,差异有统计学意义(P<0.001)。经COX多因素分析显示:micro RNA-224的表达是影响胃癌患者预后的独立因素之一(P<0.05)。结论:micro RNA-224在肿瘤组织中阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、远处转移及浸润深度密切相关,是影响胃癌患者预后的独立因素之一。

微小RNA-150在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨微小RNA(mi R)-150在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测肝癌及配对癌旁组织中mi R-150表达。原位杂交技术(ISH)进一步验证肝癌和配对癌旁组织mi R-150表达差异。将肝癌组织中mi R-150表达与临床病理特征进行关联分析。Kaplan-Meier法检测mi R-150阴性组和阳性组生存曲线。Cox单因素回归模型分析mi R-150表达与患者术后总生存的相关性。结果 q RT-PCR结果显示:与癌旁组织相比,12例中有8例肝癌组织低表达mi R-150,肝癌组织中mi R-150表达明显降低(P=0.034)。ISH结果与q RT-PCR结果相一致,即肝癌组织大部分为阴性或弱阳性表达,62%癌旁组织ISH染色强度高于配对的肝癌组织(P<0.001)。关联分析提示mi R-150表达与AFP、肿瘤大小、TNM分期、组织学分级、脉管癌栓存在明显负相关(P<0.05)。mi R-150阳性组患者术后总生存明显高于mi R-150阴性组(P=0.004,Kaplan-Meier法)。Cox单因素回归分析提示肝癌组织低表达mi R-150是患者不良预后指标(P=0.005)。结论肝癌组织低表达mi R-150与肿瘤侵袭表型相关,提示不良预后。

微小RNA-150对鼻咽癌细胞放疗抵抗的影响研究

目的探讨微小RNA（miR）-150对于鼻咽癌细胞放疗抵抗的影响,并分析其机制。方法 2014年1月—2015年6月,建立放疗抵抗的鼻咽癌细胞株CNE-2R。取CNE-2和CNE-2R,通过克隆形成实验计算不同放疗剂量下（0、3、6 Gy）的克隆形成率（PE）、细胞存活率,采用MTS法检测照射1、2、3、4、5 d时的细胞增殖活性,实时定量荧光聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测miR-150、糖原合成酶激酶3β（GSK3β）mRNA水平,Western blotting法检测GSK3β水平。将CNE-2随机分为miR-150模拟物组（转染miR-150模拟物）、微小RNAs（miRs）无关序列组（转染miRs无关序列）,通过荧光素酶报告载体实验检测荧光素酶活性。结果 0 Gy放疗剂量时,CNE-2与CNE-2R的PE、细胞存活率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;3 Gy、6 Gy放疗剂量时,CNE-2R的PE、细胞存活率高于CNE-2（P〈0.05）。照射1-5 d时,CNE-2R的细胞增殖活性高于CNE-2（P〈0.05）。CNE-2R中miR-150水平高于CNE-2,GSK3βmRNA水平低于CNE-2（P〈0.05）。CNE-2R中GSK3β水平低于CNE-2（P〈0.05）。转染GSK3β野生型质粒后,miR-150模拟物组荧光素酶活性低于miRs无关序列组（P〈0.05）;转染GSK3β突变型质粒后,miRs无关序列组与miR-150模拟物组荧光素酶活性比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论miR-150参与了鼻咽癌细胞的放疗抵抗,GSK3β是miR-150的直接靶基因,miR-150-GSK3β轴可能成为一种新的用于合理治疗鼻咽癌的策略。

MicroRNA-599对静脉曲张中血管平滑肌细胞去分化的影响及其机制研究

目的研究micro RNA-599(miR-599)在曲张静脉中的表达,探讨miR-599是否通过下调血小板源性生长因子B(PDGF-BB),抑制曲张静脉中血管平滑肌细胞(VSMCs)去分化。方法收集大隐静脉移植术患者中曲张静脉和正常静脉标本,通过实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测42例曲张静脉组织及39例正常静脉组织中miR-599、miR-200、miR-145、miR-146b、miR-155的表达;Western blot检测两组标本中SMactin、SM-22、SM-MCH、OPN的表达;在细胞实验中,转染miR-599mimic和miR-NC至离体培养的VSMCs中,Western blot检测VSMCs中SM-actin、SM-22、SM-MCH、OPN、PDGF-BB的表达,噻唑蓝法测细胞增殖、划痕实验观察细胞迁移,利用荧光素酶试验验证PDGF是miR-599的靶基因。结果相比于正常静脉组织,miR-599在曲张静脉中的表达降低(F=73.012,P=0.001)。两组miR-146b、miR-200、miR-30、miR-155的表达量比较,差异无统计学意义。相比于正常静脉组织,曲张静脉组织中SM-actin、SM-22、SM-MCH的表达降低(P<0.05),OPN的表达升高(F=56.414,P=0.009);在细胞实验中,相比于对照组,miR-599组VSMCs中SM-actin、SM-22、SM-MCH的表达升高(P<0.05),OPN的表达降低(F=27.353,P=0.022),细胞增殖减少(F=37.824,P=0.016),迁移减少(F=69.365,P=0.001),PDGF表达量减少(F=55.345,P=0.004)。荧光素酶试验结果显示,miR-599能够降低PDGF-3'-UTR质粒的荧光素活性(F=21.429,P=0.036)。结论在曲张静脉组织中,miR-599低表达。在VSMCs中,miR-599可以通过下调PDGF-BB而抑制VSMCs去分化。