利多卡因通过降低微小RNA-181a表达抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨利多卡因通过调控微小RNA-181a(miR-181a)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞H9C2损伤的影响。方法 培养H9C2细胞,建立H/R模型,作为H/R组;正常培养的细胞作为对照(Con)组。使用1.0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L利多卡因处理H/R诱导的H9C2细胞,并分别设为1.0μmol/L组、2.5μmol/L组、5.0μmol/L组、10.0μmol/L组和20.0μmol/L组。将anti-miR-NC、anti-miR-181a分别转染至H/R诱导的H9C2细胞,记为H/R+anti-miR-NC组、H/R+anti-miR-181a组。将miR-NC、miR-181a分别转染至H/R诱导的H9C2细胞,再用20.0μmol/L利多卡因处理,分别记为H/R+miR-NC+20.0μmol/L组、H/R+miR-181a+20.0μmol/L组。采用MTT实验检测细胞活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白质印迹(Western blot)检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-181a表达;检测丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测炎性因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)]的水平。结果 与Con组相比,H/R组细胞活性降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与H/R组相比,5.0μmol/L组、10.0μmol/L组和20.0μmol/L组的细胞活性提高,差异有统计学意义(P<0.05)。因此,后续以20.0μmol/L利多卡因进行实验。与Con组相比,H/R组细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与H/R组相比,20.0μmol/L组细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与Con组相比,H/R组MDA含量、LDH活性以及炎症因子水平提高,SOD活性降低,差异有统计学意义(P<0.05);与H/R组相比,20.0μmol/L组MDA含量、LDH活性以及炎性因子水平降低,SOD活性提高,差异有统计学意义(P<0.05)。与H/R+anti-miR-NC组相比,H/R+anti-miR-181a组细胞miR-181a表达、凋亡率和Caspase-3蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与H/R+anti-miR-NC组相比,H/R+anti-miR-181a组MDA含量、LDH活性以及炎性因子水平降低,SOD活性升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与H/R+miR-NC+20.0μmol/L组相比,H/R+miR-181a+20.0μmol/L组细胞凋亡率、Caspase-3蛋白和MDA含量、LDH活性以及炎性因子水平升高,SOD活性降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 利多卡因通过干扰miR-181a表达,抑制H/R诱导的心肌细胞H9C2损伤。

微RNA-181a-5p介导Sirt1/PPARγ信号通路促进肾病综合征大鼠细胞凋亡的机制研究

目的旨在探究微RNA(miR)-181a-5p对肾病综合征大鼠细胞凋亡的调控机制。方法该研究起止年限为2021年1月至2022年12月。使用阿霉素(ADR)构建肾病综合征大鼠模型及体外肾病综合征损伤模型,转染miR-181a-5p inhibitor/NC至体外细胞模型。使用生化分析仪分析血清肌酐、血尿素氮、血清白蛋白和尿蛋白,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRTPCR)检测肾组织及大鼠肾足细胞miR-181a-5p表达水平,通过TargetScan(http://www.targetscan.org/vert_72/)预测miR-181a-5p的下游靶基因,双萤光素酶报告实验来验证miR-181a-5p与沉默信息调节因子1(Sirt1)靶向结合关系。使用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,通过蛋白质印迹法检测Sirt1及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白水平。结果肾病综合征大鼠miR-181a-5p相对表达水平为3.50±0.30,敲低miR-181a-5p,使得Sirt1蛋白表达水平从0.36±0.02上调至0.87±0.06,PPARγ蛋白表达水平从0.26±0.02上调至0.78±0.05。结论miR-181a-5p通过抑制Sirt1/PPARγ信号通路活性促进肾足细胞凋亡。

血清微RNA-181b、促甲状腺激素在甲状腺结节患者体内表达状态及意义

目的:探究血清微RNA-181b(miRNA-181b)和促甲状腺激素(TSH)在甲状腺结节(TNS)患者体内表达水平及意义。方法:依据细针穿刺细胞活检结果将40例TNS患者分为良性组和恶性组,测定比较两组患者血清TSH和miRNA-181b,分析血清TSH和miRNA-181b在TNS良恶性鉴别中的价值,比较不同TNS恶性肿瘤患者血清TSH和miRNA-181b表达水平。结果:TNS恶性组中甲状腺超声报告和数据系统(TI-RADS)分类4c/5类占比明显大于良性组(均P<0.05),血清甲状腺球蛋白抗体(TG-Ab)、TSH、miRNA-181b水平明显高于良性组(均P<0.05)。Logistic回归分析显示,TI-RADS分类、TG-Ab、TSH、miRNA-181b是影响TNS恶性肿瘤发生的危险因素(均P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清TSH、miRNA-181b均可用于TNS良恶性鉴别诊断(AUC=0.759、0.719),灵敏度和特异度分别为56.3%、68.8%和83.3%、91.7%,两者联合检测对诊断TNS良恶性具有更高灵敏度(87.5%,AUC=0.891)。病灶最大径线≥14.5 mm和TI-RADS分类4c/5类者血清TSH和miRNA-181b明显高于病灶最大径线<14.5 mm和TI-RADS分类4a/4b类(均P<0.05)。结论:血清TSH和miRNA-181b在恶性TNS患者体内上调表达,是甲状腺癌变发生的危险因素;联合检测血清TSH和miRNA-181b在TNS良恶性鉴别诊断方面具有良好应用价值。

胃癌组织微小RNA-181d-5p和三基序蛋白22表达与患者术后5年内生存相关性研究

目的:探讨胃癌组织微小RNA-181d-5p(miR-181d-5p)和三基序蛋白22(TRIM22)表达与患者术后5年内生存的关系。方法:收集110例胃癌患者(均是胃腺癌)术中切除的胃癌组织标本及癌旁组织标本。荧光定量PCR和免疫组织化学法分别检测miR-181d-5p和TRIM22蛋白表达。患者术后随访5年,记录生存情况。Starbase数据库预测miR-181d-5p与TRIM22结合位点,并验证miR-181d-5p与TRIM22的靶向关系。比较癌旁和胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达,不同临床病理特征患者胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达差异。分析胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达与患者预后的关系,胃癌患者预后的影响因素,以及胃癌组织miR-181d-5p与TRIM22及它们与不同临床病理特征的相关性。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织miR-181d-5p表达升高,TRIM22阳性率降低(均P<0.05)。肿瘤低分化、肌层或外膜浸润、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ期在miR-181d-5p高表达和TRIM22阴性表达患者中的比例分别高于肿瘤高分化、黏膜或膜下层浸润、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ-Ⅱ期(均P<0.05)。miR-181d-5p与TRIM22具有靶向结合位点,miR-181d-5p可负向调控TRIM22表达。miR-181d-5p高表达和TRIM22阴性表达患者5年总生存率分别低于miR-181d-5p低表达和TRIM22阳性表达患者(均P<0.05)。影响胃癌患者术后5年内生存的独立危险因素有miR-181d-5p高表达、TRIM22阴性表达、肿瘤低分化、肌层或外膜浸润、有淋巴结转移和TNM分期Ⅲ期(均P<0.05)。胃癌组织miR-181d-5p与TRIM22、肿瘤分化程度呈负相关,与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈正相关(均P<0.05);TRIM22与肿瘤分化程度呈正相关,与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈负相关(均P<0.05)。结论:胃癌组织miR-181d-5p表达升高,TRIM22阳性率降低,两者与患者临床病理特征和术后5年内生存有密切关系。

微小RNA-181c-5p和Kruppel样因子6在子宫内膜样腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征关系研究

目的:检测子宫内膜样腺癌组织中微小RNA-181c-5p(miR-181c-5p)和Kruppel样因子6(KLF6)的表达,探讨其相关性及临床意义。方法:选择49例子宫内膜样腺癌行手术治疗的患者作为观察组,选择49例增生期子宫内膜组织作为对照组。应用实时荧光定量PCR法检测术后组织中miR-181c-5p的表达,应用免疫组化方法检测KLF6的表达。应用线性相关分析观察miR-181c-5p和KLF6的关系,应用K-M生存分析观察miR-181c-5p和KLF6与术后生存时间的关系。结果:观察组miR-181c-5p表达量明显低于对照组(P<0.05),KLF6的阳性率明显低于对照组(P<0.05)。观察组miR-181c-5p与KLF6表达与肿瘤肌层浸润深度、宫颈管累犯及病理分级密切相关(均P<0.05),且两者具有正相关性,两者的表达与术后生存时间相关(均P<0.05)。结论:子宫内膜样腺癌中miR-181c-5p和KLF6均异常表达且具有正相关性,联合检测miR-181c-5p和KLF6的表达对判断肿瘤预后可能有一定价值。

外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p对缺血性脑卒中患者预后不良的预测价值

目的分析外周血缺血修饰蛋白(IMA)、色素框同源蛋白7(CBX7)信使RNA(mRNA)、微小RNA(miRNA)-181c-5p对缺血性脑卒中(IS)患者预后不良的预测价值。方法选取2021年1-12月在河北省邯郸市中医院就诊的150例IS患者作为观察组,根据改良Rankin量表(mRS)评分将IS患者分为预后良好组(mRS评分≤2分)和预后不良组(mRS评分>2分),另选取同期在河北省邯郸市中医院体检的150例健康人群作为对照组。比较观察组、对照组外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p水平,比较预后良好组和预后不良组临床资料。采用Pearson相关分析IS患者外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p水平与mRS评分的相关性;采用多因素Logistic回归分析IS患者预后不良的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p对IS患者预后不良的预测价值。结果观察组外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访结果显示预后良好组有103例患者,预后不良组有47例患者。预后良好组和预后不良组性别、年龄,以及合并高血压、糖尿病患者比例比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。预后不良组外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p水平高于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p水平升高为IS患者预后不良的危险因素(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,IS患者外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p水平与mRS评分呈正相关(r=0.629、0.475、0.419,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p 3项指标联合预测IS患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.873,高于单项指标预测的AUC(Z=3.347、3.125、2.974,P<0.05)。结论外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p水平升高为IS患者预后不良的危险因素,与其预后存在相关性,3项指标联合检测对IS患者预后不良有较高的预测价值。

精神分裂症患者血清微小RNA-181c、微小RNA-30e的表达及其临床意义

目的:探讨精神分裂症患者血清微小RNA-181c(miR-181c)、微小RNA-30e(miR-30e)的表达,并分析其与患者认知功能、预后的关系。方法:选取本院2018年5月至2020年5月收治的138例精神分裂症患者为研究组,另选取同期健康体检者123例为对照组。受试者均采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清miR-181c、miR-30e表达,使用认知功能成套测验共识版(MCCB)进行认知功能评估并进行对比分析;随访1年,根据患者预后情况将其分为预后良好组与预后不良组,采用多因素Logistic回归性分析法分析血清miR-181c、miR-30e表达与精神分裂症患者预后不良的关系。结果:研究组血清miR-181c、miR-30e表达均高于对照组(P均<0.05),MCCB测评中各分测验评分及总评分均低于对照组(P均<0.05);血清miR-181c、miR-30e表达与MCCB总评分呈负相关(P均<0.05);研究组随访1年,预后不良80例(57.97%);预后良好组的有攻击行为占比、MCCB总评分<50分占比及血清miR-181c、miR-30e表达均高于预后良好组(P均<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,有攻击行为、MCCB总评分<50分及血清miR-181c、miR-30e表达升高均是精神分裂症患者预后不良的独立危险因素(P均<0.05)。结论:精神分裂症患者血清miR-181c、miR-30e表达均明显升高,且与认知功能障碍具有相关性,可能是精神分裂症患者预后不良的危险因素。

结合外周血微RNA-181b表达水平探讨急性脑梗死病人侧支循环形成的影响因素

目的 结合外周血微RNA(miR)-181b表达水平探讨急性脑梗死病人侧支循环形成的影响因素。方法 选择2015年6月至2019年5月在深圳市龙华区中心医院住院治疗的ACI病人175例,采用计算机产生随机数按3∶1的比例将纳入病人分为训练集(129例)和测试集(46例),其中129例训练集病人根据侧支循环形成情况分为两组,其中侧支循环良好组病人90例,侧支循环不良组病人39例,采用定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测血清miR-181b表达水平,采用Spearman相关法分析ACI病人血清miR-181b表达与侧支循环形成的相关性,采用logistic回归法分析ACI病人侧支循环形成不良的影响因素,并建立预测模型。结果 侧支循环良好组病人血清miR-181b表达1.92±0.19显著高于侧支循环形成不良组1.48±0.26(P<0.05),Spearman相关性分析结果表明,血清miR-181b表达与侧支循环形成呈显著正相关关系(r=0.77,P<0.001)。logistic回归分析结果表明高血压病史高血压史、血同型半胱氨酸(Hcy)、后循环病变均为ACI病人侧支循环形成不良的独立危险因素(P<0.05);miR-181b表达水平和脑血管狭窄程度为侧支循环形成不良的保护因素(P<0.05)。基于侧支循环形成不良的影响因素构建预测模型:预测值=EXP[0.491-1.914(高血压史)-1.409(Hcy)+2.145(miR-181b相对表达量)-1.286(后循环病变)+0.594(脑血管狭窄程度)]/1+EXP[0.491-1.914(高血压史)-1.409(Hcy)+2.145(miR-181b相对表达量)-1.286(后循环病变)-0.594(脑血管狭窄)]。结论侧支循环良好ACI病人外周血血清miR-181b表达水平较高,脑血管狭窄程度轻和高水平miR-181b为侧支循环形成不良的保护因素,而高血压史、Hcy、后循环病变均为ACI病人侧支循环形成不良的独立危险因素。

LncRNA MEG3调控microRNA-181b-5p/TIMP3对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响

目的探究长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)调控微小RNA-181b-5p(microRNA-1816-5P,简称miR-181b-5p)/组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响。方法收集2019年12月—2021年12月本院所收治的20例前列腺癌患者前列腺癌组织及其对应癌旁组织;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织MEG3、miR-181b-5p表达;将前列腺癌细胞(PC3细胞)随机分为对照组(未处理)、pcDNA3.1-NC组(转染pcDNA3.1-NC)、pcDNA3.1-MEG3组(转染pcDNA3.1-MEG)、pcDNA3.1-MEG3+miR-NC组(pcDNA3.1-MEG3与miR-NC共转染)、pcDNA3.1-MEG3+miR-181b-5p mimic组(pcDNA3.1-MEG3与miR-181b-5p mimic共转染);qRT-PCR检测细胞MEG3、miR-181b-5p表达;MTT实验、Transwell实验、划痕实验分别检测PC3细胞活力、侵袭及迁移能力;Western blot检测PC3细胞TIMP3、基质金属蛋白酶(MMP)9、MMP2蛋白表达;双荧光素酶实验检测MEG3、miR-181b-5p、TIMP3的靶向关系。结果与癌旁组织的表达相比,MEG3在前列腺癌组织(0.37±0.05 vs.1.00±0.04)及细胞(0.31±0.06 vs.1.00±0.01)中表达显著降低(P<0.05);与对照组相比,pcDNA3.1-MEG3组miR-181b-5p表达(0.26±0.04 vs.1.00±0.02)、细胞存活率(53.60±5.22 vs.100.00±0.00)、侵袭细胞数(62.33±9.85 vs.162.34±21.30)、细胞迁移率(32.85±3.80 vs.75.22±5.96)、MMP9(0.61±0.08 vs.1.62±0.23)、MMP2(0.73±0.10 vs.1.20±0.16)表达显著降低,MEG3(2.31±0.36 vs.1.00±0.01)、TIMP3蛋白(1.32±0.24 vs.0.53±0.08)表达显著增加(P<0.05);miR-181b-5p过表达可逆转上述指标变化(P<0.05);miR-181b-5p与MEG3、TIMP3间均存在靶向关系。结论lncRNA MEG3过表达可通过抑制miR-181b-5p来促进TIMP3表达,从而抑制PC3细胞侵袭、迁移。

免疫性血小板减少症患儿 T淋巴细胞亚群、甲状腺自身抗体、微小RNA-106b-5p 和微小RNA-181a-5p表达水平检测及临床意义

目的:分析免疫性血小板减少症(ITP)患儿T淋巴细胞亚群、甲状腺自身抗体、微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)和微小RNA-181a-5p(miR-181a-5p)表达水平及临床意义。方法:以158例ITP患儿为ITP组,依据临床分型不同分为慢性ITP组(34例)、持续性ITP组(60例)和新诊断ITP组(64例)。另选取同期健康儿童102例为对照组。所有患儿均给予静脉滴注人免疫球蛋白及口服醋酸泼尼松片等常规治疗,均治疗5 d。比较ITP组与对照组全血T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+))细胞及血清甲状腺自身抗体[甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)]、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。比较慢性ITP组、持续性ITP组和新诊断ITP组患儿全血T淋巴细胞亚群及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。比较ITP患儿治疗前、治疗5 d后全血T淋巴细胞亚群及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。结果:与对照组比较,ITP组全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平更低,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平更高(均P<0.05)。慢性ITP组全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平低于持续性ITP组和新诊断ITP组,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平高于持续性ITP组和新诊断ITP组(均P<0.05)。与治疗前比较,治疗5 d后ITP患儿全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平升高,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平降低(均P<0.05)。结论:ITP患儿存在T淋巴细胞亚群失衡、甲状腺自身抗体和miR-106b-5p高表达以及miR-181a-5p低表达情况。治疗期间积极检测患儿全血T淋巴细胞亚群及血清甲状腺自身抗体、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平,有助于患儿的疗效评估。

microRNA-181家族与疾病的相关性研究进展

人类microRNA-181家族的成熟序列现有8个组成成员,拥有成千上万的预测靶标,其中少数靶标如OPN、BCL-2、SHP2和K-ras等已被实验证实。microRNA-181家族在恶性肿瘤、中风、毒瘾形成及慢性麻风病等许多疾病的发生发展中发挥重要作用,并与肿瘤干细胞分化、肌母细胞终末分化及免疫细胞的活化增殖等密切相关。

运动通过微小RNA-181b/磷酸酶和张力蛋白同源物调控平滑肌表型缓解糖尿病大鼠血管损伤的研究

目的:观察有氧运动对2型糖尿病大鼠血管损伤的作用,探讨潜在的分子调控机制。方法:高糖高脂喂养联合链脲佐菌素注射建立大鼠2型糖尿病模型。选模型鼠20只随机分为糖尿病对照组(DC)和糖尿病运动组(DE),同龄正常饮食大鼠为正常对照组(NC),每组10只。DE组进行8周中等强度的跑台运动,其它组不运动。无创血压仪测试大鼠的心率、血压,HE染色观察血管壁病理学变化,电镜观察血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的超微结构,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测血管微小RNA-181b(microRNA-181b,miR-181b)的表达,Western Blot检测血管α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、磷酸肌醇3激酶(phospho inositide-3 kinase,PI3K)、磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue,PTEN)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)等蛋白表达。结果:相比NC组,DC组大鼠心率(heart rate,HR)、收缩压(systolic blood pressure,SBP)、舒张压(diastolic blood pressure,DBP)、平均血压(mean blood pressure,MBP)显著降低(P<0.001);VSMCs失去典型的长梭形特征,表现为菱形,核膨大而不规则,细胞膜边界不清晰,密体、密斑少见;腹主动脉中膜显著增厚(P<0.05);收缩型特异蛋白α-SMA表达降低而合成型特异蛋白Vimentin表达升高(P<0.01);血管miR-181b的表达升高(P<0.001),其靶蛋白PTEN的表达降低(P<0.01),PI3K、AKT表达升高(P<0.01)。相比DC组,8周有氧运动使DE组的SBP、DBP、MBP显著升高(P<0.05或P<0.001);VSMCs呈长方形,核呈长椭圆形,细胞膜清晰完整,可见少许密体和密斑;收缩型特异蛋白α-SMA表达升高而合成型特异蛋白Vimentin表达降低(P<0.05);血管miR-181b的表达显著降低(P<0.001),PTEN蛋白表达升高而AKT表达下降(P<0.01或P<0.05)。结论:有氧运动具有缓解2型糖尿病大鼠血管损伤的作用,且可能机制为运动激活miR-181b/PTEN通路抑制下游AKT信号从而逆转糖尿病大鼠动脉VSMCs向合成表型转化。

大鼠肝纤维化与microRNA-181a调控肝星状细胞自噬的关系

目的:观察四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化(HF)大鼠肝脏结构的改变、肝组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、微小RNA-181a(microRNA-181a)、自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ/-Ⅰ和beclin-1水平及胶原沉积的变化,以及microRNA-181a对TGF-β1诱导大鼠肝星状细胞(HSCs)自噬的作用,探讨microRNA-181a调控HSCs活化及HF的可能机制。方法:(1)40只健康雄性Wistar大鼠随机分为空白对照(control)组和CCl4诱导HF模型2周(W2)、4周(W4)、6周(W6)及8周(W8)组,每组8只。control组给予皮下注射橄榄油3 mL/kg;W2、W4、W6及W8组给予皮下注射40%CCl4(4∶6混合橄榄油)3 mL/kg,每周2次,分别连续作用2、4、6及8周;Masson染色评估大鼠HF改变;ELISA法检测大鼠血清及肝组织中TGF-β1的水平;RT-qPCR检测肝组织中microRNA-181a的表达;Western blot检测肝组织中LC3-Ⅱ/-Ⅰ、beclin-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)和Ⅲ型胶原(ColⅢ)的蛋白水平;(2)microRNA-181a inhibitor转染大鼠HSC-T6细胞,或采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理细胞后,以TGF-β1诱导细胞自噬,RT-qPCR和Western blot分别检测HSC-T6细胞中microRNA-181a的表达及LC3-Ⅱ/-Ⅰ、beclin-1、α-SMA、Col Ⅰ和ColⅢ的蛋白水平。结果:(1)大鼠肝组织中TGF-β1和micro RNA-181a表达、自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ/-Ⅰ比值和beclin-1水平均随HF程度加重而呈上升趋势,microRNA-181a表达水平与细胞自噬呈正相关(P<0.01);(2)体外TGF-β1诱导HSC-T6细胞自噬及活化时伴有microRNA-181a表达显著上调;转染microRNA-181a inhibitor后HSC-T6细胞中microRNA-181a表达显著下降,细胞自噬及活化受到显著抑制(P<0.01),这一结果与3-MA作用相似。结论:CCl4呈时间依赖性地促进大鼠HF,上调肝组织microRNA-181a表达及自噬水平;降低HSC-T6细胞microRNA-181a表达可抑制TGF-β1诱导的细胞自噬;大鼠HF与microRNA-181a调控HSCs自噬有关。

干预microRNA-181a调控线粒体自噬促进骨髓瘤细胞凋亡的研究

目的探讨干预微RNA-181a(miR-181a)促进多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡的机制。方法检测健康志愿者外周血、MM患者骨髓、MM细胞株MM1S中miR-181a的表达水平。分别转染miR-181a抑制剂、对照siRNA入MM1S细胞,回复实验进一步验证miR-181a功能。流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位,透射电镜观察线粒体超微结构及自噬泡,Western blotting检测cleaved-caspase-3、Bcl-2/Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62、Parkin蛋白的表达。结果MM患者骨髓和MM1S细胞株中,miR-181a相对表达水平显著升高(1.57±0.09和1.64±0.06,P<0.05)。miRNA-181a抑制剂作用下,MM1S细胞的凋亡率及cleaved-caspase-3表达水平显著高于对照组及阴性对照组,电镜下自噬泡数目增加,线粒体结构毁坏严重,线粒体膜电位水平低下,Bcl-2/Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平显著升高,而P62表达水平显著降低。敲减Parkin的回复实验显示,miRNA-181a抑制剂对MM细胞的作用明显降低。结论抑制miRNA-181a可增强Parkin表达,促进Parkin通路介导的线粒体自噬,从而促进MM细胞凋亡。

下调microRNA-181b在小鼠缺血性脑损伤中的神经保护作用

目的:探讨microRNA-181b(miR-181b)在缺血性小鼠脑损伤病理过程中的神经保护作用。方法:应用N2A细胞氧-糖剥夺(OGD)模型模拟神经细胞缺血损伤;应用小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型模拟缺血性脑损伤(成功率约60%),原位细胞凋亡检测试剂盒检测N2A细胞损伤程度,蛋白印迹检测miR-181b靶蛋白自噬蛋白5(Atg5)及caspase-9的变化情况,萤光素酶报告基因技术检测miR-181b对Atg5 mRNA的直接调控作用。结果:在OGD致N2A细胞缺血损伤过程中,通过上调或抑制miR-181b的表达水平可以显著影响N2A细胞的凋亡(P<0.05);miR-181b表达水平的改变可显著影响Atg5蛋白表达水平(P<0.05);共转染miR-181b前体或miR-181b抑制剂可显著抑制或增高含有Atg5 mRNA 3’-UTR的萤光素酶报告基因的活性(P<0.05);MCAO后活化caspase-9的表达显著升高,而miR-181b拮抗剂可使MCAO后剪切的caspase-9表达明显减少(P<0.05)。结论:下调miR-181b可能通过调节Atg5的蛋白表达在缺血性小鼠脑损伤中发挥神经保护作用。

miRNA-181a、胱天蛋白酶富集域家族成员11、核因子κB在弥漫大B细胞淋巴瘤患者中的表达及临床意义

目的探讨微小RNA-181a(miRNA-181a)、胱天蛋白酶富集域家族成员11(CARD11)、核因子κB(NF-κB)在弥漫大B细胞淋巴瘤患者中的表达及临床意义。方法选取85例弥漫大B细胞淋巴瘤患者和60例增生性淋巴结炎患者,分别作为观察组和对照组,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miRNA-181a、CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量。比较不同临床特征弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a、CARD11 m RNA、NF-κB mRNA相对表达量,比较Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期观察组和对照组患者miRNA-181a、CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量,比较不同疗效弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a、CARD11mRNA、NF-κB mRNA相对表达量。采用受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)分析miRNA-181a、CARD11、NF-κB单独及联合检测对弥漫大B细胞淋巴瘤患者临床分期的诊断价值及对疗效的预测价值。结果Ann Arbor分期为Ⅲ~Ⅳ期、国际预后指数(IPI)评分为3~5分弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a相对表达量分别明显高于Ann Arbor分期为Ⅰ~Ⅱ期、IPI评分为0~2分的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结外累及数目﹥1个、Ann Arbor分期为Ⅲ~Ⅳ期、IPI评分为3~5分弥漫大B细胞淋巴瘤患者CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均明显高于结外累及数目≤1个、Ann Arbor分期为Ⅰ~Ⅱ期、IPI评分为0~2分的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a、CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均高于对照组,Ⅲ~Ⅳ期弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a、CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。疗效为完全缓解(CR)/部分缓解(PR)/疾病稳定(SD)弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a、CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均低于疗效为疾病进展(PD)的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。ROC曲线显示,miRNA-181a、CARD11、NF-κB联合检测诊断弥漫大B细胞淋巴瘤患者临床分期的AUC为0.968,高于三者单独检测的0.852、0.841、0.830;miRNA-181a、CARD11、NF-κB联合检测预测弥漫大B细胞淋巴瘤患者疗效的AUC为0.953,高于三者单独检测的0.847、0.684、0.816。结论miRNA-181a、CARD11、NF-κB可作为弥漫大B细胞淋巴瘤患者病情监测和预后预测指标,其表达水平升高提示患者病情可能加重,三者联合检测对弥漫大B细胞淋巴瘤的诊断价值较高,且对预后的预测价值较高。

外周血单个核细胞YY1、miR-181a-5p表达水平对妊娠期糖尿病不良妊娠结局的预测价值

目的 探究外周血单个核细胞YY1转录因子(YY1)、微小RNA(miR)-181a-5p表达水平对妊娠期糖尿病(GDM)不良妊娠结局的预测价值。方法 纳入2020年6月至2022年6月该院收治的GDM患者200例作为GDM组,选取同期产检健康孕妇100例作为对照组。采用荧光定量PCR检测外周血单个核细胞YY1、miR-181a-5p表达水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析YY1、miR-181a-5p表达水平对GDM患者不良妊娠结局的预测价值。结果 与对照组比较,GDM组外周血单个核细胞中YY1、miR-181a-5p表达水平均下降(P<0.05),GDM组产后出血、巨大儿、新生儿低血糖的发生率均上升(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄、血糖控制不良是GDM患者妊娠不良结局的独立危险因素(P<0.05),外周血单个核细胞YY1、miR-181a-5p表达水平均是GDM患者妊娠不良结局的独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,外周血单个核细胞YY1、miR-181a-5p表达水平单独及二者联合预测GDM患者不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)分别为0.717、0.751、0.832,其中联合预测的AUC明显高于二者单独预测(P<0.05)。结论 GDM患者外周血单个核细胞YY1、miR-181a-5p表达水平降低可增加不良妊娠结局的风险,YY1、miR-181a-5p与GDM患者不良妊娠结局的关系密切,二者均可作为GDM患者不良妊娠结局的预测因子。

血清miR-181c-miR-144-3p表达在心力衰竭诊断及预后评估中的价值

目的探讨血清中微小RNA-181c(miR-181c)、微小RNA-144-3p(miR-144-3p)表达在心力衰竭诊断及预后评估中的价值。方法选取2020年6月至2022年6月接诊的心力衰竭患者118例,根据患者1年预后情况,将心力衰竭患者分为预后良好组86例和预后不良组32例,选择体检的健康人员80例作为对照组,实时荧光定量PCR检测血清中miR-181c、miR-144-3p水平,比较各组血清中miR-181c、miR-144-3p水平,多因素Logistic回归分析心力衰竭患者1年预后不良的危险因素,ROC曲线评价miR-181c、miR-144-3p水平对心力衰竭患者预后不良的预测价值。结果与对照组比较,心力衰竭组患者血清中miR-181c表达水平显著降低,miR-144-3p表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与Ⅰ~Ⅱ级患者比较,Ⅲ、Ⅳ级的心力衰竭患者中血清中miR-181c水平显著降低,miR-144-3p水平显著升高(P<0.05);与Ⅲ级患者比较,Ⅳ级心力衰竭患者血清中miR-181c水平显著降低,miR-144-3p水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组的Hcy、miR-144-3p水平显著高于预后良好组,LVEF、血红蛋白、miR-181c水平显著低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Hcy、miR-144-3p是影响心力衰竭患者1年预后不良的独立危险因素,而miR-181c的是保护因素(P<0.05)。血清miR-181c、miR-144-3p水平单独和二者联合预测心力衰竭患者1年预后不良的AUC分别为0.896、0.797、0.948,二者联合预测价值优于单独预测。结论心力衰竭患者血清miR-181c表达水平降低,miR-144-3p表达水平升高,与患者心功能及预后有关,可能作为心力衰竭诊断和预后评估的标志物。

miR-146a和miR-181a在系统性红斑狼疮患者尿液外泌体的表达及临床意义

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者尿液外泌体微小RNA(miR)-146a和miR-181a的表达及其临床意义。方法 选取2023年1月至2023年10月四川大学华西医院诊断为SLE的患者40例作为SLE组,另同期的体检健康者20例作为对照组。根据SLE病情活动指数(SLEDAI)将SLE患者分为低活动组19例(SLEDAI≤9分)和高活动组21例(SLEDAI>9分)。采用实时荧光定量PCR检测尿液外泌体miR-146a和miR-181a表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、补体C3、IgG和抗心磷脂抗体(ACA)水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析尿液外泌体miR-146a和miR-181a表达对SLE及SLE合并肾脏受累的诊断价值。结果 SLE组尿液外泌体miR-146a和miR-181a相对表达水平高于对照组(P<0.05),且高活动组尿液外泌体miR-146a和miR-181a相对表达水平高于低活动组(P<0.05)。肾脏受累的SLE患者的尿液外泌体miR-146a和miR-181a相对表达水平高于肾脏无受累的SLE患者(P<0.05)。高活动组血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IgG和ACA水平高于低活动组,血清C3水平低于低活动组(P<0.05)。SLE患者的尿液外泌体miR-146a与血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IgG和ACA水平呈正相关(r=0.443、0.493、0.410、0.381、0.340,P<0.05),与血清C3水平呈负相关(r=-0.340,P<0.05)。SLE患者的尿液外泌体miR-181a与血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IgG和ACA水平呈正相关(r=0.342、0.470、0.373、0.371、0.334,P<0.05),与血清C3水平呈负相关(r=-0.368,P<0.05)。尿液外泌体miR-146a和miR-181a表达诊断SLE的曲线下面积分别为0.907、0.897(P<0.05),诊断SLE合并肾脏受累的曲线下面积分别为0.859和0.815(P<0.05)。结论 尿液外泌体miR-146a和miR-181a表达水平对SLE患者的疾病活动具有良好的评估作用,对SLE的病情预测和诊断具有潜在应用价值。

妊娠糖尿病患者血清miR130b-3-p、miR181a-5-p表达与妊娠结局的关系

目的 探究妊娠糖尿病患者血清微小RNA(miRNA)miR-130b-3p、miR-181a-5p表达与妊娠结局的关系。方法 选取2020年6月至2022年8月在北京航天总医院及北京妇产医院诊治的124例妊娠糖尿病患者作为研究组,根据妊娠结局分为良好组和不良组;采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-130b-3p、miR-181a-5p表达;采用Pearson法分析血清miR-130b-3p、miR-181a-5p及二者与血脂和血糖的相关性;采用Logistic回归分析妊娠糖尿病患者不良妊娠结局的影响因素。结果 研究组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、miR-130b-3p相对表达水平高于对照组(P<0.05),miR-181a-5p相对表达水平低于对照组(P<0.05)。不良组TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR、miR-130b-3p相对表达水平高于良好组(P<0.05),miR-181a-5p相对表达水平低于良好组(P<0.05)。根据Pearson相关性分析可知,血清miR-130b-3p与miR-181a-5p相对表达水平呈负相关(P<0.05),血清miR-130b-3p与TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR均呈正相关(P<0.05),miR-181a-5p与TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR均呈负相关(P<0.05)。根据Logistic回归分析得知,miR-130b-3p、TC、TG、LDL-C、FBG、FINS高水平,miR-181a-5p低相对表达水平均为妊娠糖尿病不良妊娠结局的危险因素(P<0.05)。结论 妊娠糖尿病患者血清miR-130b-3p相对表达水平升高,miR-181a-5p相对表达水平降低,二者与妊娠结局密切相关。