微小RNA-378-5p对胶质瘤血管生成的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-378-5p对胶质瘤血管生成的作用及其分子机制。方法 qRTPCR检测胶质瘤细胞miR-378-5p的表达水平。ELISA检测肿瘤细胞上清液中血管内皮生长因子A(VEGFA)的含量。收集胶质瘤细胞上清液并制成条件培养基培养HUVECs,采用CCK-8、Transwell实验和小管形成实验检测HUVECs增殖、迁移、侵袭和血管形成能力的影响,评估miR-378-5p对HUVECs生物学行为的影响。结果 在4个胶质瘤细胞中U251的miR-378-5p表达量最高,而U87 MG的表达量最低。miR-378-5p表达量高的肿瘤细胞,其条件培养基可显著促进HUVECs增殖、迁移、侵袭和血管生成。反之,降低肿瘤细胞miR-378-5p的表达量,其条件培养基促进HUVECs增殖、迁移、侵袭和血管生成的能力显著下降。ELISA结果显示miR-378-5p促进胶质瘤细胞释放VEGF-A。使用VEGF-A中和抗体干预条件培养基后,HUVECs迁移、侵袭和血管生成能力显著下调。反之外源性添加VEGF-A则可以显著提高HUVECs、迁移、侵袭和血管生成能力。结论 miR-378-5p通过增加胶质瘤细胞释放VEGF-A,进而促进HUVECs增殖、迁移、侵袭和血管生成。

脑胶质瘤患者血清miR-186-5p、miR-942-5p表达及临床意义

目的探讨脑胶质瘤患者血清miR-186-5p和miR-942-5p表达及临床意义。方法选取2019年10月至2021年12月在该院接受治疗的98例脑胶质瘤患者作为观察组,以及同期在该院体检的101例健康者作为对照组。采用荧光定量PCR(qPCR)法检测血清miR-186-5p和miR-942-5p的表达水平,多因素Cox回归分析脑胶质瘤患者预后的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)分析血清miR-186-5p、miR-942-5p对脑胶质瘤的诊断价值,Kaplan-Meier生存曲线分析血清miR-186-5p、miR-942-5p表达与患者预后的关系。结果观察组血清中miR-186-5p表达水平低于对照组(P<0.05),miR-942-5p表达水平高于对照组(P<0.05);血清miR-186-5p、miR-942-5p单独及联合诊断脑胶质瘤的AUC分别为0.735、0.809、0.895;不同术前Karnofsky功能状态(KPS)评分、世界卫生组织(WHO)分级、局部浸润患者血清miR-186-5p低表达、miR-942-5p高表达比例差异有统计学意义(P<0.05);miR-186-5p高表达患者2年生存率高于miR-186-5p低表达患者(χ^(2)=6.455,P=0.011);miR-942-5p高表达患者2年生存率低于miR-942-5p低表达患者(χ^(2)=9.858,P=0.002);miR-186-5p是脑胶质瘤患者死亡的保护因素(P<0.05),miR-942-5p是危险因素(P<0.05)。结论脑胶质瘤患者血清miR-186-5p表达水平降低、miR-942-5p表达水平升高,二者对脑胶质瘤的发生具有一定的诊断价值。

乳腺癌患者血清微小RNA-135b、微小RNA-148a-3p、微小RNA-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果相关性研究

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性。方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组。比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平。采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性。乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析。血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P<0.05)。耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P<0.05)。结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高。

血清microRNA-186-5p、microRNA-328-5p表达和乳腺癌患者临床病理特征与新辅助化疗效果的关系

目的探讨血清microRNA-186-5p(miR-186-5p)、microRNA-328-5p(miR-328-5p)表达和乳腺癌患者临床病理特征与新辅助化疗效果的关系。方法选取2019年2月—2022年2月广西壮族自治区妇幼保健院收治的乳腺癌患者105例作为乳腺癌组,另随机选取该院与乳腺癌患者年龄相匹配的57例健康体检女性作为对照组。乳腺癌患者均接受新辅助化疗,根据化疗反应分为耐药组(30例)和敏感组(75例)。qRT-PCR检测血清miR-186-5p、miR-328-5p表达,比较不同临床病理特征乳腺癌患者血清miR-186-5p、miR-328-5p表达的差异,比较耐药组和敏感组血清miR-186-5p、miR-328-5p表达的差异。多因素Logistic逐步回归分析影响乳腺癌患者新辅助化疗效果的因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析miR-186-5p、miR-328-5p预测乳腺癌患者对新辅助化疗效果的价值。结果乳腺癌组血清miR-186-5p、miR-328-5p mRNA相对表达量低于对照组(P<0.05)。T_(3)、T_(4)期、N_(1~3)期、HER2阳性乳腺癌患者血清miR-186-5p、miR-328-5p mRNA相对表达量低于T_(2)期、N_(0)期、HER2阴性乳腺癌患者(P<0.05)。耐药组血清miR-186-5p、miR-328-5p mRNA相对表达量低于敏感组(P<0.05),T_(3)、T_(4)期、N_(1~3)期占比高于敏感组(P<0.05)。N分期[OR=3.497(95%CI:1.737,7.041)]、miR-186-5p[OR=1.680(95%CI:1.169,2.415)]、miR-328-5p[OR=1.519(95%CI:1.134,2.034)]是影响乳腺癌患者新辅助化疗耐药的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-186-5p、miR-328-5p及两者联合预测乳腺癌患者新辅助化疗效果的敏感性分别为76.67%(95%CI:0.553,0.856)、70.00%(95%CI:0.510,0.808)、90.00%(95%CI:0.768,0.977),特异性分别为74.67%(95%CI:0.528,0.831)、76.00%(95%CI:0.544,0.840)、90.67%(95%CI:0.776,0.984)。结论乳腺癌患者血清miR-186-5p、miR-328-5p表达下调,可能与乳腺癌患者临床病理特征及化疗耐药有关,均可作为新辅助化疗疗效评估的标志物。

固肺消积饮上调外泌体microRNA-186-5p表达抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭

目的:研究外泌体途径在固肺消积饮抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭中的作用,及microRNA-186-5p(miR-186-5p)在其中的作用机制。方法:制备固肺消积饮含药血清和无药血清,分别诱导A549细胞、转染miR-186-5p NC的A549细胞、转染miR-186-5p inhibitor的A549细胞,获得4种外泌体,即NC-Exo、XJD-Exo、XJD-miR-186-5p NC-Exo、XJD-miR-186-5p inhibitor-Exo。透射电镜观察外泌体形态;Western blot检测CD63、TSG101和Calnexin表达;荧光标记法检测A549细胞摄取外泌体情况;RT-qPCR检测外泌体中miR-186-5p表达。实验分为:A组(A549细胞+PBS)、B组(A549细胞+NC-Exo)、C组(A549细胞+XJD-Exo)、D组(A549细胞+XJD-miR-186-5p NC-Exo)、E组(A549细胞+XJD-miR-186-5p inhibitor-Exo)。Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;Western blot检测上皮-间质转化相关蛋白表达。结果:外泌体呈典型囊泡状,高表达表面标志物CD63和TSG101,低表达Calnexin,荧光标记的外泌体可被A549细胞大量摄取至胞浆内。NC-Exo、XJD-miR-186-5p inhibitor-Exo细胞miR-186-5p表达低于XJD-Exo、XJD-miR-186-5p NC-Exo细胞(P<0.05)。A、C、D组迁移、侵袭能力低于B、E组(P<0.05)。A、C、D组E-cadherin表达高于B、E组,N-cadherin、vimentin表达低于B、E组(P<0.05)。结论:固肺消积饮可通过上调外泌体miR-186-5p表达抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭。

急性呼吸窘迫综合征新生儿血清miR-138-5p和miR-574-5p水平的变化及临床意义

目的 探讨新生儿急性呼吸窘迫综合征(nARDS)患儿血清miR-138-5p和miR-574-5p表达水平的变化及临床意义。方法 收集2018年9月~2023年8月武汉科技大学附属孝感医院新生儿科收治的nARDS患儿112例作为观察组,并根据预后分为预后良好组(n=98)和预后不良组(n=14);选择同期出生的足月健康新生儿104例作为对照组。定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清miR-138-5p和miR-574-5p的表达水平;ROC曲线分析血清miR-574-5p,miR-138-5p水平对nARDS患儿预后的诊断价值;多因素Logistic回归分析影响nARDS患儿预后不良的因素。结果与对照组比较,观察组血清miR-574-5p表达水平(1.72±0.23 vs 1.04±0.17)升高,miR-138-5p表达水平(0.55±0.08vs 1.02±0.16)降低,差异具有统计学意义(t=24.557,25.597,均P <0.05);与预后良好组比较,预后不良组血清miR-138-5p表达水平(0.41±0.06 vs 0.57±0.08)降低,miR-574-5p表达水平(2.07±0.25 vs 1.67±0.19)升高,差异具有统计学意义(t=7.188,7.069,均P <0.05);预后不良组产妇年龄、宫内窘迫、羊水异常比例较预后良好组升高,差异具有统计学意义(t=5.359,4.257,6.577,均P <0.05)。miR-574-5p是nARDS患儿预后不良的独立危险因素,miR-138-5p是保护因素(均P <0.05)。血清miR-138-5p,miR-574-5p单独及联合诊断nADRS患儿预后不良的AUC(95%CI)分别为0.793(0.706~0.864),0.898(0.826~0.947)和0.931(0.867~0.970),二者联合预测优于miR-138-5p,miR-574-5p各自单独诊断(Z=2.151,1.982,均P <0.05)。结论 nARDS患儿血清miR-138-5p表达水平降低,miR-574-5p表达水平升高,二者对nARDS患儿预后不良具有一定的诊断价值。

依托咪酯调控miR-204-5p/HOXC8轴对胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的探讨依托咪酯(Eto)调节微小RNA(miR)-204-5p/同源盒基因C8(HOXC8)轴对人胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法2023年4月—2024年4月于武汉科技大学实验室进行实验,将胃癌细胞MKN45分为对照(Ctrl)组、低剂量Eto组(Eto-L,5μmol/L)、中剂量Eto组(Eto-M,10μmol/L)、高剂量Eto组(Eto-H,20μmol/L)、Eto-H+miR-inhibitor-NC、Eto-H+miR-204-5p inhibitor组。CCK-8法、集落形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测MKN45细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力;qRT-PCR检测细胞中miR-204-5p和HOXC8 mRNA表达水平;双荧光素酶实验检测miR-204-5p和HOXC8之间的靶向关系。结果与Ctrl组比较,Eto-L组、Eto-M组、Eto-H组、Eto-H+miR-inhibitor-NC组、Eto-H+miR-204-5p inhibitor组MKN45细胞存活率、集落形成率、细胞侵入率、HOXC8 mRNA水平均显著降低(F/P=33.391/<0.001、29.646/<0.001、44.814/<0.001、45.485/<0.001),细胞凋亡率和miR-204-5p水平显著升高(F/P=78.091/<0.001、22.665/<0.001);与Eto-H+miR-inhibitor-NC组比较,Eto-H+miR-204-5p inhibitor组MKN45细胞存活率、集落形成率、细胞侵入率、HOXC8 mRNA水平均显著升高(q/P=8.099/<0.001、7.587/<0.001、7.768/<0.001、11.162/<0.001),细胞凋亡率和miR-204-5p水平显著降低(q/P=10.254/<0.001、8.596/<0.001);与HOXC8-WT和miR-NC共转染细胞比较,HOXC8-WT和miR-204-5p mimic共转染的MKN45细胞中相对荧光酶活性显著降低(t/P=5.770/<0.001)。结论Eto可能通过上调miR-204-5p、下调HOXC8,减弱胃癌细胞MKN45增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡。

急性缺血性脑卒中患者血清LncRNA RMST,miR-582-5p表达水平与早期神经功能恶化及预后的相关性研究

目的 探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清长链非编码RNA横纹肌肉瘤相关转录物-2(LncRNA RMST)和miR-582-5p的表达水平与早期神经功能恶化(END)及预后的相关性。方法 选取2021年1月~2022年12月期间承德市中心医院收治的129例AIS患者,并根据患者一周内是否出现END将患者分为END组(n=42)和非END组(n=87),另选取同期在该院体检的健康者59例作为健康组。采用qRT-PCR法检测各组血清LncRNA RMST,miR-582-5p水平。Pearson法对END患者血清LncRNA RMST,miR-582-5p水平相关性进行分析;绘制ROC曲线评估血清LncRNA RMST,miR-582-5p水平以及二者联合对AIS患者预后情况的效能分析。结果 健康组、非END组、END组血清LncRNA RMST水平(1.01±0.28,2.10±0.41,3.99±0.52)逐渐升高,miR-582-5p水平(1.02±0.23,0.86±0.16,0.73±0.15)逐渐降低,差异具有统计学意义(F=672.974,31.907,均P <0.05)。END患者血清LncRNA RMST水平与mi R-582-5p水平存在明显的负相关(r=-0.451,P<0.001)。血清LncRNA RMST,miR-582-5p水平联合诊断AIS患者预后的AUC(95%CI)为0.961(0.912~0.987),优于单独预测(Z=2.280,4.515,均P <0.05)。结论 血清LncRNA RMST,miR-582-5p水平与END关系密切,有望成为AIS患者预后的预测因子。

LncRNA-XIST通过抑制miR-186-5p上调PSME3表达促进急性骨髓性白血病发展的机制研究

目的探讨长链非编码RNA X染色体失活特异性转录因子(long noncoding RNA X-inactive specific transcript,lncRNA-XIST)通过抑制miR-186-5p上调PSME3表达促进急性骨髓性白血病发展的分子机制。方法采用生存曲线(Kaplan-Meier曲线)生存分析XIST表达对32例急性骨髓性白血病儿童患者生存率的影响,miRNA模拟物、miRNA抑制剂、PSME3 shRNA转染KG-1细胞后,RT-qPCR检测XIST及miR-186-5p mRNA表达水平,Western-blotting检测PSME3、cleaved-caspase 3及cleaved-caspase 8的表达水平,CCK-8及细胞凋亡实验检测KG-1细胞的活力。结果XIST在急性骨髓性白血病儿童患者临床样本及细胞系中显著表达。在KG-1细胞中,敲降XIST抑制细胞的增殖,并诱导凋亡。敲降XIST的KG-1细胞移植瘤小鼠肿瘤体积及重量显著低于对照组。双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-186-5p与XIST相互作用,机制研究发现XIST通过内源性竞争海绵吸附miR-186-5p影响其下游靶基因PSME3的表达。结论XIST在急性骨髓性白血病中可通过海绵吸附miR-186-5p调控PSME3表达,XIST的异常表达可作为急性骨髓性白血病诊断及治疗的作用靶点。

孕早期孕妇促甲状腺激素、甲状腺过氧化物酶抗体及微小RNA-873-5p水平与妊娠期糖尿病相关性研究

目的:分析研究孕早期促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)及微小RNA-873-5p(miR-873-5p)水平与妊娠期糖尿病(GDM)的相关性。方法:选取定期产检的GDM孕妇命名为GDM组(n=109),另选同期在本院产检的糖耐量正常孕妇为对照组(n=60)。收集两组孕妇的一般资料及孕早期实验室检测指标(TSH、TPOAb、miR-873-5p),采用单因素、多因素分析TSH、TPOAb、miR-873-5p水平与GDM的关系;并绘制ROC曲线分析血清TSH、TPOAb、miR-873-5p水平对GDM的预测价值。结果:GDM组的血清TSH、TPOAb、miR-873-5p水平均高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,年龄>30岁(OR=1.982)、孕前BMI≥24 kg/m^(2)(OR=2.020)、TSH升高(OR=2.113)、TPOAb升高(OR=2.307)及miR-873-5p水平升高(OR=2.059)是发生GDM的独立危险因素(均P<0.05);ROC曲线分析显示,血清TSH、TPOAb、miR-873-5p及联合检测的曲线下面积(AUC)分别为0.830、0.829、0.762、0.936,联合检测优于单一检测(P<0.05)。结论:TSH、TPOAb及miR-873-5p在GDM孕妇体内呈高表达,可能成为GDM发生的辅助预测指标。

灰树花多糖通过LncRNA HULC/miR-186-5p轴调控胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:分析灰树花多糖(Grifola frondose polysaccharide,GFP)对胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:将对数期GBC-SD细胞随机分组:对照组、GFP组(0.5、1、2µg/mL GFP)、shNC组、shHULC组、miR-NC组、miR-186-5p mimics组、GFP+pcDNA组、GFP+pcDNA-HULC组。CCK-8法检测细胞抑制率;Transwell小室法检测GBC-SD细胞迁移和侵袭;Western Blot印迹检测Cyclin D1、P21、MMP-2、MM-9蛋白水平;qRT-PCR检测LncRNA HULC和miR-186-5p的水平;Starbase在线软件预测HULC与miR-186-5p的结合位点,双荧光素酶报告实验检测LncRNA HULC和miR-186-5p的靶向关系。裸鼠移植瘤实验检测GFP对GBC-SD细胞移植瘤体内生长的影响。结果:0.25~8µg/mL GFP对胆囊癌GBC-SD细胞具有一定的抑制作用;与对照组比较,0.5、1、2µg/mL的GFP(极)显著(P<0.05,P<0.01)抑制GBC-SD细胞迁移和侵袭,(极)显著降低Cyclin D1、MMP-2和MM-9水平(P<0.05,P<0.01),(极)显著(P<0.05,P<0.01)增加P21水平,极显著(P<0.01)下调LncRNA HULC,上调miR-186-5p的表达(P<0.05,P<0.01);Starbase在线软件预测HULC与miR-186-5p存在结合位点,与miR-NC组比较,miR-186-5p mimics组HULC-WT的荧光素酶活性极显著降低(P<0.01),而HULC-MUT荧光素酶活性无统计学差异(P>0.05);与shNC组比较,shHULC组HULC相对表达水平极显著(P<0.01)降低,miR-186-5p相对表达水平极显著(P<0.01)增加,细胞存活率、迁移数目、侵袭数目极显著(P<0.01)降低,Cylin D1、MMP-2和MM-9水平极显著下调(P<0.01);与GFP+pcDNA组比较,GFP+pcDN-HULC组抑制率显著降低(P<0.05),迁移数目、侵袭数目极显著增加(P<0.01),Cylin D1、MMP-2和MM-9水平显著上调(P<0.05);与GFP+pcDNA给药组比较,GFP+pcDN-HULC给药组瘤体体积、质量极显著增加(P<0.01),miR-186-5p水平极显著下调(P<0.01)。结论:GFP可抑制胆囊癌细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制与调控LncRNA HULC/miR-186-5p有关。

血清微RNA-183-5p和微RNA-144-3p水平与脑出血病人脑出血量及认知功能的相关性

目的检测脑出血病人血清中微RNA(miRNA)-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,分析两者与脑出血量及认知功能的相关性。方法回顾性分析2020年8月至2021年8月荆州市第一人民医院收治的符合纳入、排除标准的89例脑出血病人的临床资料(观察组),另收集体检健康者89例为对照组。根据头颅影像学检查结果,将观察组分为少量出血组(<15 mL)31例,中量出血组(15~30 mL)36例和大量出血组(>30 mL)22例。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,Pearson相关分析脑出血量与血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p表达水平的相关性,根据是否出现认知功能障碍,将观察组病人分为预后良好组57例和预后不良组32例;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p水平对脑出血病人预后的评估价值。结果观察组血清miRNA-183-5p表达水平0.67±0.16低于对照组1.01±0.24,血清miRNA-144-3p的表达水平3.53±0.73高于对照组1.05±0.21(P<0.05)。大、中、少出血组血清miRNA-183-5p水平为0.49±0.11、0.69±0.11、0.78±0.21,依次显著降低(P<0.05):大量出血组血清miRNA-144-3p水平3.86±0.75与中量出血组水平3.58±0.68显著高于少量出血组水平3.17±0.65(P<0.05)。脑出血量与血清miRNA-183-5p表达呈负相关(r=−0.51,P<0.05)、与miRNA-144-3p表达呈正相关(r=0.54,P<0.05)。预后不良组血清miRNA-183-5p水平0.50±0.12低于预后良好组0.77±0.18,血清miRNA-144-3p水平3.75±0.62高于预后良好组3.41±0.34(P<0.05)。血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p单独及联合评估病人预后的AUC分别是0.94、0.79和0.96,二者联合检测的AUC、灵敏度高于各自单独检测。结论脑出血病人血清miRNA-183-5p水平降低,miRNA-144-3p水平升高,与脑出血量相关性较强,二者联合可评估病人认知功能障碍的发生。

微小RNA-199a-5p保护大鼠脑缺血后血-脑屏障完整性

目的探讨微小RNA(miR)-199a-5p保护脑缺血后血-脑屏障(BBB)完整性的机制。方法通过SPF级成年雄性SD大鼠建立永久性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,48只大鼠随机分为假手术组、模型组、MCAO+miR-199a-5p组和MCAO+miR-199a-5p阴性对照组,每组12只。应用Ludmila Belayev 12分评分法评估大鼠的神经行为学表现;采用Evans蓝染色检测脑缺血后BBB的完整性;免疫荧光染色检测脑缺血后细胞凋亡;Western blotting技术检测claudin-5、磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基2(PIK3R2)、p-Akt、Akt和血管内皮生长因子(VEGF)-A的蛋白表达;利用Real-time PCR检测脑缺血半暗带、梗死区miR-199a-5p、claudin-5及VEGF-A表达水平。结果MiR-199a-5p mimic干预增强MCAO大鼠本体感觉和运动能力。MiR-199a-5p降低脑缺血后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,并增加缺血半暗带中claudin-5和VEGF-A的表达。此外,miR-199a-5p减轻了脑缺血后的炎症。MiR-199a-5p降低脑缺血后BBB渗透性,减少神经细胞凋亡。结论MiR-199a-5p可降低缺血性脑卒中后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,降低炎性细胞因子的表达,减轻缺血性脑卒中对BBB的破坏。

紫檀芪调控微小RNA-340-5p/髓细胞白血病-1轴对胆囊癌SD细胞生物学行为的影响实验研究

目的:探究紫檀芪(PTS)调控微小RNA-340-5p(miR-340-5p)/髓细胞白血病-1(MCL-1)轴对胆囊癌SD(GBC-SD)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人GBC-SD细胞,使用不同浓度PTS(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理GBC-SD细胞,然后检测细胞存活率。将GBC-SD细胞分为对照组(DMEM培养基常规培养GBC-SD细胞)、PTS组(加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞)、PTS+空载质粒组(加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞,并转染空载质粒)、PTS+miR-340-5p沉默组[加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞,并转染miR-340-5p小干扰RNA(siRNA)质粒]。分别检测各组GBC-SD细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-340-5p和MCL-1 mRNA表达。蛋白印迹法检测MCL-1及增殖凋亡相关蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-340-5p与MCL-1的靶向关系。裸鼠移植瘤实验检测PTS对裸鼠肿瘤生长及miR-340-5p/MCL-1轴的影响。结果:随着PTS浓度的升高,GBC-SD细胞存活率逐渐降低(均P<0.05)。与对照组比较,PTS组细胞存活率、集落形成数、细胞迁移率、细胞侵袭数、MCL-1 mRNA和蛋白、Ki67、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达降低,细胞凋亡率、miR-340-5p、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达升高(均P<0.05)。沉默miR-340-5p可逆转PTS对GBC-SD细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及miR-340-5p/MCL-1轴的作用效果(均P<0.05)。miR-340-5p与MCL-1存在靶向调控关系。PTS能抑制裸鼠肿瘤生长和MCL-1 mRNA和蛋白表达,促进miR-340-5p表达(均P<0.05)。结论:PTS可通过上调miR-340-5p表达下调MCL-1表达,抑制GBC-SD细胞增殖、迁移和侵袭,促进GBC-SD细胞凋亡。

微RNA-93-5p对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及机制

目的探讨血浆微RNA(miR)-93-5p对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及其可能机制。方法选择2022年1月至2023年1月焦作市人民医院收治的120例育龄期PCOS患者为PCOS组,选择同期在本院体检的18例育龄期健康女性为对照组。收集2组受试者的年龄、体质量和身高,计算体质量指数(BMI)。2组受试者均在自然月经周期的卵泡期或黄体酮诱导的撤退性出血期采集空腹静脉血,采用电化学法测定血清黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、总睾酮(TT)、抗米勒管激素(AMH)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)水平,并计算胰岛素抵抗稳态模型(HOMA-IR);采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2组受试者血浆中miR-93-5p表达水平。取对数生长期人卵巢颗粒细胞KGN,以每孔3×10^(5)个细胞接种至6孔板中,随机分为miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组、阴性对照(NC)组、空白对照组。miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics;LY294002+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50 mmol·L^(-1) LY294002处理;AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50μmol·L^(-1) AZD5363处理;NC组KGN细胞转染阴性对照质粒;空白对照组KGN细胞不做任何处理。应用qRT-PCR法检测各组KGN细胞中miR-93-5p表达,细胞计数试剂盒-8试验检测各组KGN细胞增殖情况。结果PCOS组与对照组受试者的年龄及FSH、ALT、AST水平比较差异无统计学意义(P>0.05);PCOS组患者的BMI、TT、AMH、LH、FINS、FBG、HOMA-IR显著高于对照组(P<0.05)。PCOS组患者血浆中miR-93-5p相对表达量显著高于对照组(t=-5.549,P<0.001)。miR-93-5p与TT、FINS、HOMA-IR呈中度正相关(r=0.434、0.622、0.586,P<0.001),与FBG和LH呈低度正相关(r=0.398、0.398,P<0.001)。ROC曲线显示,血浆miR-93-5p诊断PCOS的最佳临界值为1.380,曲线下面积为0.906(95%置信区间:0.839~0.973,P<0.001),敏感度为0.858,特异度为0.833,约登指数为0.691。miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞中miR-93-5p相对表达量均显著高于空白对照组和NC组(P<0.05)。培养24、48、72 h时,miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞的增殖能力显著高于空白对照组和NC组(P<0.05);LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组细胞的增殖能力显著低于miR-93-5p mimics组(P<0.05)。结论PCOS患者血浆miR-93-5p呈过表达,miR-93-5p可能通过基于调控磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激B信号通路介导PCOS卵巢颗粒细胞增殖来参与PCOS的发生发展,血浆miR-93-5p水平对PCOS有一定的诊断价值。

外泌体微小RNA-877-5p通过调控Nrf2/HO-1轴诱导铁死亡对肝癌细胞的影响

目的分析外泌体微小RNA-877-5p(miR-877-5p)通过调控转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)轴诱导铁死亡对肝癌细胞增殖、凋亡的影响。方法检测正常肝细胞与肝癌细胞株中miR-877-5p表达量,并对MHCC97H细胞进行转染,分为空白组、miR-877-5p抑制剂组、miR-877-5p模拟物组,检测各组铁死亡相关因子Nrf2、HO-1表达量,观察并分析各组MHCC97H细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡情况。结果与正常肝细胞L02相比,肝癌细胞株中HEP3B、HCCLM3、HepG2、MHCC97H mRNA表达量降低(P<0.05);与肝癌细胞HEP3B、HCCLM3、HepG2相比,肝癌细胞MHCC97H mRNA表达量降低(P<0.05);与空白组相比,miR-877-5p抑制剂组miR-877-5p mRNA表达量、细胞凋亡率降低(P<0.05),溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达量、增殖活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Nrf2、HO-1表达量升高(P<0.05),miR-877-5p模拟物组miR-877-5p mRNA表达量、细胞凋亡率升高(P<0.05),SLC7A11、GPX4的表达量、增殖活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Nrf2、HO-1表达量降低(P<0.05);与miR-877-5p抑制剂组相比,miR-877-5p模拟物组miR-877-5p mRNA表达量、细胞凋亡率升高(P<0.05),SLC7A11、GPX4的表达量、增殖活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Nrf2、HO-1的表达量降低(P<0.05)。结论上调外泌体miR-877-5p可抑制Nrf2/HO-1轴的激活,促使铁死亡,抑制肝癌细胞增殖,加快癌细胞的凋亡速度。

小儿急性复杂性阑尾炎血清lncRNA-DANCR、miR-214-5p水平及其诊断价值

目的 分析血清长链非编码RNA(lncRNA)-分化拮抗非蛋白编码RNA(DANCR)和miR-214-5p对小儿急性复杂性阑尾炎的诊断价值。方法 本研究选取2019年1月—2022年1月宝鸡市中医医院收治的急性阑尾炎患儿102例作为研究组,根据病理结果分为单纯性阑尾炎组和复杂性阑尾炎组,另选同期本院健康体检儿童50例作为对照组;实时荧光定量PCR检测血清lncRNA-DANCR和miR-214-5p水平;采用全自动化学发光免疫分析仪检测C反应蛋白(CRP)以及降钙素原(PCT);Pearson法分析血清lncRNA-DANCR和miR-214-5p以及二者与CRP、PCT的相关性;Logistic回归分析小儿急性复杂性阑尾炎的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA-DANCR、miR-214-5p、CRP和PCT水平对小儿急性复杂性阑尾炎的诊断价值。结果 复杂性阑尾炎组和单纯性阑尾炎组血清lncRNA-DANCR、CRP和PCT水平显著升高(P<0.05),复杂性阑尾炎组和单纯性阑尾炎组血清miR-214-5p显著降低(P<0.05)。Pearson相关性分析血清lncRNA-DANCR和miR-214-5p呈负相关(P<0.05),血清lncRNA-DANCR与CRP和PCT呈正相关(P<0.05),miR-214-5p与CRP和PCT呈负相关(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,lncRNA-DANCR、CRP和PCT高表达和miR-214-5p低表达是影响小儿急性复杂性阑尾炎的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析四者联合优于lncRNA-DANCR和miR-214-5p各自单独诊断(Z_(联合vs. lncRNA-DANCR=2.647)、Z_(联合vs. miR-214-5p=4.256)、Z_(联合vs. CRP=3.245)、Z_(联合vs. PCT=3.267),均P<0.05)。结论 在急性复杂性阑尾炎患儿血清中lncRNA-DANCR高表达,miR-214-5p低表达,二者联合可诊断小儿急性复杂性阑尾炎。

急性缺血性脑卒中患者血清微小RNA-140-3p、Krüpple样因子5表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性

目的探索急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清微小RNA-140-3p(miR-140-3p)、Krüpple样因子5(KLF5)表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性。方法选择2022年10月—2024年1月本院收治的285例AIS患者作为研究对象,依据超声结果将患者分为斑块易损组(196例)、斑块稳定组(53例)以及无斑块组(36例);将患者依据斑块狭窄程度分为狭窄重度组(42例)、狭窄中度组(57例)、狭窄轻度组(150例)以及无狭窄组(36例)。收集患者的一般资料,采用实时荧光定量PCR对血清miR-140-3p、KLF5表达水平进行检测;多因素Logistic回归分析AIS患者颈动脉斑块不稳定性的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-140-3p、KLF5水平检测对AIS患者颈动脉斑块不稳定的诊断价值;分析不同狭窄程度血清miR-140-3p、KLF5水平;Pearson法和Spearman法相关性分析血清miR-140-3p、KLF5水平的相关性及二者与AIS患者颈动脉斑块稳定及狭窄程度的相关性。结果斑块易损组患者高血压人数、糖尿病人数、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FIB)、膀抑素C(Cys-C)及KLF5水平高于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),血小板(PLT)及miR-140-3p水平低于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),斑块稳定组LDL-C、FIB、D-D、Cys-C及KLF5水平高于无斑块组(P<0.05),PLT及miR-140-3p水平低于无斑块组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示PLT、D-D、FIB、Cys-C、miR-140-3p、KLF5是AIS患者斑块不稳定性的影响因素(P<0.05);ROC分析显示,miR-140-3p、KLF5联合诊断AIS患者颈动脉斑块不稳定的ROC曲线下面积(AUC)显著大于miR-140-3p单独诊断的AUC(Z=4.617,P<0.001),KLF5单独诊断的AUC(Z=3.473,P=0.001);随着患者狭窄程度的增加,患者血清miR-140-3p水平降低(F=341.819,P<0.001),血清KLF5水平升高(F=152.186,P<0.001);Pearson法相关性分析显示,血清miR-140-3p水平与血清KLF5水平及斑块稳定性、狭窄程度呈负相关(r=-0.536,-0.529,-0.601,P<0.001),血清KLF5水平与斑块稳定性及狭窄程度呈正相关(r=0.511,0.634,P<0.001)。结论AIS患者血清miR-140-3p水平降低,血清KLF5水平升高,其水平变化与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度密切相关。

circ_0114427靶向微小RNA-330-5p调控脂多糖诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症反应

目的探讨circ_0114427对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症的影响及其机制。方法体外培养人肺泡上皮细胞,分别转染si-circ_0114427、微小RNA(miR)-330-5p mimics或共转染si-circ_0114427与anti-miR-330-5p后,用10 mg/L LPS处理24 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中circ_0114427和miR-330-5p表达量;采用蛋白免疫印迹评估活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase3)和活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(Cleaved-caspase9)蛋白水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达;采用流式细胞术分析细胞凋亡。采用双荧光素酶报告实验验证circ_0114427和miR-330-5p的互作关系。结果肺泡上皮细胞经LPS处理后,细胞中circ_0114427表达升高,miR-330-5p表达降低(P<0.05)。敲减circ_0114427或上调miR-330-5p可以抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡、Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9表达以及IL-6和TNF-α水平(P<0.05)。circ_0114427靶向结合并负调控miR-330-5p。miR-330-5p下调可以逆转circ_0114427敲低对LPS诱导的细胞凋亡和炎症的抑制作用。结论敲减circ_0114427可抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症,这可能与miR-330-5p上调有关。

LncRNA NEAT1通过miR-195-5p/CEBPA轴促进骨髓瘤细胞增殖和转移机制的实验研究

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)核富集丰富的转录本1(NEAT1)通过miR-195-5p/CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPA)轴对骨髓瘤细胞增殖和转移的影响及机制。方法 (1)收集2021年3月~2023年2月在山东省第一医科大学附属聊城市第二人民医院血液内科住院的40例多发性骨髓瘤(MM)患者和10例健康骨髓供者的骨髓单个核细胞(BMNC)及MM细胞系U266,RPMI 8226,NCI-H 929和MM.1S,RT-qPCR和Western blot检测细胞中NEAT1,miR-195-5p,CEBPA mRNA和蛋白水平。(2) U266细胞分为过表达NEAT1组(NEAT1组)及其对照组(NC组)、敲低NEAT1表达组(sh-NEAT1组)及其对照组(sh-NC组)、过表达NEAT1和miR-195-5p组(NEAT1+miR-195-5p组)及其对照组(NEAT1+miR-NC组)、过表达miR-195-5p和CEBPA组(miR-195-5p+CEBPA组)及其对照组(miR-195-5p+NC组)。CCK-8和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;RT-qPCR检测细胞中NEAT1,miR-195-5p,CEBPA mRNA水平;Western blot检测细胞中CEBPA,Ki67,增殖细胞核抗原(PCNA),基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9,磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),p-PI3K,蛋白激酶B(AKT),p-AKT,雷帕霉素靶蛋白(mTOR),p-mTOR蛋白水平。(3) 20只裸鼠分为敲低NEAT1表达组(sh-NEAT1组)及其对照组(sh-NC组),每组各10只。裸鼠皮下注射相应已转染的U266细胞悬液,四周后测定移植瘤各项指标差异。结果 (1)与正常BMNC相比,MM患者和MM细胞系中NEAT1,CEBPA mRNA和蛋白水平升高,miR-195-5p水平降低,差异具有统计学意义(t=11.697,9.272,4.352,11.639,均P<0.05)。(2)过表达NEAT1后,与NC组比较,NEAT1组细胞NEAT1,CEBPA mRNA和蛋白水平升高,miR-195-5p水平降低(t=12.825,5.874,13.893,4.797);细胞培养72h A值、EdU阳性率升高,细胞迁移、侵袭数增多(t=9.425,5.632,8.841,5.364);Ki67,PCNA,MMP-2,MMP-9,p-PI3K/PI3K,p-AKT/AKT,p-mTOR/mTOR蛋白水平升高(t=14.227,7.743,7.348,7.803,8.714,8.629,7.359),差异具有统计学意义(均P<0.05);敲低NEAT1表达后,与sh-NC组比较,sh-NEAT1组细胞NEAT1,CEBPA mRNA和蛋白水平降低(t=5.776,5.001,4.503),miR-195-5p水平升高(t=4.456),细胞迁移、侵袭能力降低(t=6.204,8.792),差异具有统计学意义(均P<0.05);过表达miR-195-5p能够部分逆转过表达NEAT1对细胞上述指标的影响,差异具有统计学意义(t=4.356~10.809,均P<0.05);过表达CEBPA能够部分逆转过表达miR-195-5p对细胞上述指标的影响,差异具有统计学意义(t=4.329~14.452,均P<0.05)。(3)敲低NEAT1表达能够抑制裸鼠移植瘤生长,差异具有统计学意义(t=5.175~18.190,均P<0.05)。结论 LncRNA NEAT1通过靶向miR-195-5p/CEBPA表达促进MM细胞增殖和转移,其可能通过激活PI3K/AKT/mTOR通路发挥作用。