膀胱癌组织微RNA-212、微RNA-137、微RNA-200表达与临床病理特征的相关性及预测经尿道膀胱肿瘤切除术后复发的效能研究

目的 探讨膀胱癌组织微RNA-212(miRNA-212)、微RNA-137(miRNA-137)、微RNA-200(miRNA-200)表达与临床病理特征的相关性及预测经尿道膀胱肿瘤切除(TURBT)术后复发的效能。方法 选取2017年6月至2021年6月河北燕达医院100例膀胱癌病人,比较癌组织和癌旁组织及不同病理特征病人miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达,并根据术后复发情况分为复发组、未复发组。比较两组miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达,采用受试者操作特征(ROC)曲线分析miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200预测复发的价值,比较不同miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达水平病人复发率。结果 癌组织miRNA-212为2.03±0.56低于癌旁组织4.52±1.18(P<0.05),癌组织miRNA-137、miRNA-200表达分别为2.69±0.45、24.56±7.39,高于癌旁组织的1.28±0.30、7.33±2.21(P<0.05);随着组织学分级、TNM分期递增,miRNA-212表达逐渐降低,miRNA-137、miRNA-200表达逐渐升高(P<0.05);肌层浸润性膀胱癌病人miRNA-212低于非肌层浸润性膀胱癌,miRNA-137、miRNA-200高于非肌层浸润性膀胱癌(P<0.05);复发组miRNA-212(1.73±0.39)低于未复发组(2.28±0.44)(P<0.05),复发组miRNA-137、miRNA-200分别为3.06±0.72、37.96±12.18,高于未复发组2.35±0.40、22.86±7.50(P<0.05);miRNA-212高水平病人复发率低于低水平病人,miRNA-137、miRNA-200高水平病人复发率高于低水平病人(P<0.05)。结论 膀胱癌组织miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达与临床病理特征相关,联合检测对TURBT后复发具有良好的预测能力,可作为预测术后复发的一种方案。

MicroRNA-200a通过抑制上皮-间充质转化影响乳腺癌细胞的恶性生物学行为

目的:探讨微小RNA-200a(miR-200a)表达改变对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及其调节机制。方法:RT-qPCR法检测人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-468和MCF-7中miR-200a的表达水平与正常人乳腺上皮细胞株MCF-10A的差异。CCK-8法检测转染miR-200a mimic和miR-inhibitor后MDA-MB-231细胞活力的变化。采用流式细胞术及Transwell实验检测转染后MDA-MB-231细胞凋亡及侵袭能力的变化。采用RT-qPCR和Western blot检测上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、SIP1、Snail、Twist、ZEB1和ZEB2 mRNA及蛋白表达的变化。结果:与MCF-10A细胞相比,miR-200a在MDA-MB-231细胞中表达显著降低(P<0.05)。过表达miR-200a使MDA-MB-231细胞活力降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05),侵袭能力下降(P<0.05),SIP1、N-cadherin、Snail、Twist、ZEB1和ZEB2的mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05),而E-cadherin的mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);抑制miR-200a的表达使上述结果逆转(P<0.05)。结论:上调miR-200a能够抑制MDA-MB-231细胞的活力和侵袭,促进MDA-MB-231细胞的凋亡。miR-200a可能通过抑制上皮-间充质转化调控乳腺癌的恶性生物学行为。

miR-200c/ZEB1/E-cadherin轴在胆管癌转移侵袭中的作用及对胆管癌预后评估的价值

目的:探讨微小RNA-200c(miR-200c)/锌指转录因子(ZEB1)/E-钙黏蛋白(E-cadherin)在胆管癌(HCCA)转移、侵袭中的作用及对HCCA预后评估的临床价值。方法:选取2020年08月至2022年12月间我院收治的胆管癌患者36例为研究对象,同时选取胆管良性疾病患者(胆总管结石或胆管良性狭窄)20例作为对照。采用原位杂交、实时荧光定量PCR检测miR-200c在HCCA患者组织及血清中的表达;生存曲线分析miR-200c表达与总生存期的相关性;Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力;免疫印迹检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达。体内研究构建裸鼠成瘤实验,采用免疫组化检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达;Tunel技术检测组织中的凋亡情况。受试者工作特征(ROC)曲线评估生物标志物对胆管癌预后的诊断效能。结果:miR-200c低表达于HCCA组织及血清中;生存曲线分析显示,miR-200c表达与患者的总生存期呈正相关性,TNM分期与患者的总生存期呈负相关性;miR-200c mimics抑制了胆管癌细胞的迁移和侵袭能力,并降低ZEB1表达而诱导E-cadherin表达;转染ZEB1逆转miR-200c的作用效应,促进胆管癌细胞的迁移和侵袭特性,抑制胆管癌细胞的凋亡。CA199、CEA和miR-200c联合检测诊断胆管癌预后的ROC曲线下面积为0.892,灵敏度0.8611,特异度0.8000。结论:miR-200c/ZEB1/Ecadherin轴参与胆管癌的转移侵袭;CA199、CEA和miR-200c联合检测对胆管癌预后的诊断效能良好,对临床胆管癌的治疗策略具有重要指导价值。

老年原发性肝癌病人血清微小RNA-200a、微小RNA-221表达与介入术后感染的相关性分析

目的探究老年原发性肝癌病人血清微小RNA(miR)-200a、miR-221表达与介入术后感染的相关性。方法选取2017年5月至2020年4月武汉市汉口医院45例老年原发性肝癌介入术后感染病人作为观察组,另自同期住院的老年原发性肝癌介入术后未出现感染病人中通过SPSS 21.0统计软件采取随机数字表法抽取45例作为对照组。比较两组临床资料、血清miR-200a、miR-221表达,分析老年原发性肝癌病人介入术后感染影响因素及血清miR-200a、miR-221表达与影响因素的关系,绘制受试者操作曲线(ROC曲线),评价血清miR-200a、miR-221表达对老年原发性肝癌病人介入术后感染的预测价值,并绘制卡普兰-迈耶曲线(KM),对比不同血清miR-200a、miR-221表达病人死亡情况。结果观察组腹水、白蛋白<30 g/L、异位栓塞、部分脾脏栓塞比例高于对照组(P<0.05);术后,观察组血清miR-200a表达(2.84±0.74)低于对照组(4.69±1.14),miR-221表达(12.37±3.02)高于对照组(9.05±2.43)(P<0.05);logistic回归分析,结果显示腹水、白蛋白<30 g/L、异位栓塞、部分脾脏栓塞、术后血清miR-200a、miR-221表达均为老年原发性肝癌病人介入术后感染影响因素(P<0.05);老年原发性肝癌介入术后感染病人术后血清miR-200a表达与腹水、异位栓塞、部分脾脏栓塞呈负相关关系,与白蛋白呈正相关关系(P<0.05);术后血清miR-221表达与腹水、异位栓塞、部分脾脏栓塞呈正相关关系,与白蛋白呈负相关关系(P<0.05);绘制ROC曲线,评价血清miR-200a、miR-221表达对老年原发性肝癌病人介入术后感染的预测价值,发现,二者联合预测AUC最大,预测效能良好;以ROC曲线中截断值为界,将原发性肝癌病人分为血清miR-200a、miR-221高表达与低表达组,miR-200a高表达组术后3个月病死率低于低表达组,miR-221高表达组病死率高于低表达组(P<0.05)。结论老年原发性肝癌介入术后感染病人血清miR-200a表达明显下调,miR-221显著上调,临床检测其水平,可早期诊断感染,合理制定治疗方案,有助于改善预后。

口腔黏膜下纤维化患者血清miR-204和miR-200b水平与临床疗效的关系研究

目的分析口腔黏膜下纤维化(OSF)患者血清微小RNA(miR)-204和miR-200b水平与临床疗效的关系。方法选取2021年12月至2022年12月在河北工程大学附属医院就诊的110例OSF患者作为研究组,另选取50例同期体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测研究组及对照组血清miR-204和miR-200b水平并进行比较。将研究组分为miR-204高表达组、低表达组和miR-200b高表达组、低表达组;比较血清miR-204和miR-200b不同水平患者的临床疗效、转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)、临床病理特征、视觉模拟评分(VAS),采用Spearman法和Pearson法分析血清miR-204和miR-200b水平与研究组各指标的相关性。结果研究组血清miR-204和miR-200b水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-204、miR-200b高表达组患者临床疗效总有效率均为100.00%,分别高于miR-204、miR-200b低表达组临床疗效总有效率(86.79%、88.89%),差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果表明,嚼槟榔、张口度≤28 mm、口腔黏膜病损面积>4 cm^(2)、VAS评分>3分的OSF患者血清miR-204和miR-200b水平显著低于不嚼槟榔、张口度>28 mm、口腔黏膜病损面积≤4 cm^(2)、VAS评分≤3分的患者,差异有统计学意义(P<0.05);miR-204、miR-200b高表达组TGF-β1和IL-6水平显著低于miR-204、miR-200b低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析结果表明,OSF患者血清miR-204和miR-200b水平与口腔黏膜病损面积、VAS评分、TGF-β1、IL-6呈负相关(P<0.05),与张口度呈正相关(P<0.05)。结论OSF患者血清miR-204和miR-200b水平与临床疗效关系密切,血清miR-204和miR-200b水平升高,OSF患者临床疗效较好。

LncRNA FEZF1-AS1靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞生物学行为的影响

目的探讨FEZ家族锌指1-反义RNA1(LncRNA FEZF1-AS1)靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞HLF生物学行为的影响。方法采用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导HLF向肌成纤维细胞转化,分为空白对照组(Blank组)和造模组(HLF+TGF-β1组),另根据转染质粒不同将细胞分为Blank组、TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组和TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1组。采用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)和波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p的表达。采用CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力;采用双萤光素酶实验检测FEZF1-AS1与miR-200c-3p的靶向作用关系。结果与Blank组比较,HLF+TGF-β1组α-SMA、CollagenⅠ、Vimentin蛋白表达及LncRNA FEZF1-AS1表达水平升高,miR-200c-3p表达水平降低(P<0.05);与TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1组细胞增殖、迁移、侵袭能力下降,LncRNA FEZF1-AS1表达及α-SMA、CollagenⅠ、Vimentin蛋白表达水平降低,miR-200c-3p表达水平升高(P<0.05);FEZF1-AS1与miR-200c-3p基因序列上存在结合位点。结论LncRNA FEZF1-AS1通过抑制miR-200c-3p促进特发性肺间质纤维化的发生、发展。

miR-200a通过上调Nrf2对老年糖尿病心肌病大鼠心肌的保护作用

目的:探讨微小RNA-200a(miR-200a)对老年糖尿病大鼠心肌的保护作用及机制。方法:采用高脂饮食+链脲菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病心肌病模型,分为对照组和STZ组。通过注射携带miR-200a腺相关病毒9(AAV9)在心肌内过表达miR-200a,分为对照+AAV9-control组、对照+AAV9-miR-200a组、STZ+AAV9-control组、STZ+AAV9-miR-200a组,每组8只。体外培养大鼠心肌细胞H9c2,分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖培养24 h)、高糖+AAV9-control+si RNA组(转染AAV9-control和si RNA 48 h后用33 mmol/L葡萄糖培养24 h)、高糖+AAV9-control+si核因子E2相关因子2(Nrf2)组(转染AAV9-control和si Nrf248 h后使用33 mmol/L葡萄糖培养24 h)、高糖+AAV9-miR-200a+siRNA组(转染AAV9-miR-200a和si RNA 48 h后用33 mmol/L葡萄糖培养24 h)、高糖+AAV9-miR-200a+si Nrf 2组(转染AAV9-miR-200a和si Nrf248 h后用33 mmol/L葡萄糖培养24 h)。使用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-200a表达水平,蛋白免疫印迹法检测相关蛋白表达水平;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色检测细胞活性氧(ROS)水平;免疫荧光检测Nrf2表达。结果:与对照组比较,STZ组心肌组织miR-200a表达下调(P<0.05)。与对照+AAV9-control组比较,STZ+AAV9-control组心肌组织LDH、CK-MB、MDA水平升高,SOD水平、血红素氧化酶1(HO-1)、细胞核Nrf2蛋白、细胞质Nrf2蛋白表达及Nrf2荧光密度降低(P<0.05)。与STZ+AAV9-control组比较,STZ+AAV9-miR-200a组心肌组织LDH、CK-MB、MDA水平及TUNEL阳性细胞率降低,SOD水平、HO-1、细胞核Nrf2蛋白、细胞质Nrf2蛋白表达及Nrf2荧光密度升高(P<0.05)。高糖处理可降低H9c2细胞存活率,提高ROS、MDA、LDH水平(P<0.05);在此基础上转染miR-200a后上述指标被抑制;同时转染miR-200a和si Nrf2后,ROS、MDA、LDH升高,细胞存活率降低(P<0.05)。结论:miR-200a提高Nrf2表达从而减轻高糖诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡,这一效应与Nrf2核易位的促进及下游抗氧化应激信号有关。

结核性脑膜炎患者脑脊液中miR-200a,miR-4652-3p水平表达对疾病严重程度和预后预测价值研究

目的分析结核性脑膜炎(tuberculous meningItis,TBM)患者脑脊液miR-200a和miR-4652-3p表达及其对疾病严重程度和预后的预测价值。方法选择2018年1月~2022年12月于青岛市胸科医院就诊的187例结核性脑膜炎患者,按照病情程度分为Ⅰ期(n=62)、Ⅱ期(n=76)和Ⅲ期(n=49),根据预后情况分为预后良好组(n=131)和预后不良组(n=56)。qRT-PCR法检测脑脊液miR-200a和miR-4652-3水平表达。Spearman法分析miR-200a和miR-4652-3p与临床资料间相关性;ROC曲线分析脑脊液miR-200a和miR-4652-3p水平对结核性脑膜炎患者疾病严重程度及预后的预测价值。多因素Logistic回归分析预后不良影响因素。结果Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期结核性脑膜炎患者脑脊液miR-200a(1.05±0.14,0.91±0.14,0.76±0.13)和miR-4652-3p(0.92±0.11,0.78±0.11,0.65±0.10)表达水平依次降低,差异具有统计学意义(F=61.079,87.203,均P<0.001)。预后良好组患者脑脊液miR-200a(0.95±0.14)和miR-4652-3p(0.82±0.11)表达水平显著高于预后不良组患者(0.84±0.13,0.73±0.10),差异具有统计学意义(t=5.025,5.262,均P<0.05);预后良好患者脑脊液腺苷脱氨酶和TNF-α,IL-23,LTB4,CRP,mRS评分显著低于预后不良患者,差异具有统计学意义(t=5.649,7.721,11.150,9.455,11.314,14.407,均P<0.05)。结核性脑膜炎患者脑脊液miR-200a和miR-4652-3p水平呈正相关(r=0.405,P<0.001);miR-200a,miR-4652-3p与LTB4,TNF-α,CRP,mRS评分,IL-23,腺苷脱氨酶呈负相关(r=-0.472,-0.466,-0.461,-0.435,-0.422,-0.419;-0.459,-0.531,-0.471,-0.417,-0.513,-0.408,均P<0.05)。miR-200a,miR-4652-3p预测患者疾病严重程度的AUC(95%CI)分别为0.881(0.825~0.923)和0.878(0.822~0.921),二者联合预测的AUC(95%CI)为0.945(0.902~0.973),高于单项检测,差异具有统计学意义(Z=3.008,2.960,all P=0.003)。脑脊液miR-200a和miR-4652-3p水平评估患者预后不良的AUC(95%CI)为0.749(0.681~0.809)和0.756(0.688~0.816),二者联合评估患者预后不良的AUC(95%CI))为0.839(0.778~0.889),高于二者单独检测,差异有统计学意义(Z=2.994,2.697,P=0.003,0.007)。腺苷脱氨酶[OR(95%CI):1.106(1.033~1.185)]、miR-200a[OR(95%CI):0.529(0.369~0.744)]、miR-4652-3p[OR(95%CI):0.471(0.310~0.715)]、CRP[OR(95%CI):4.423(1.459~13.412)]、TNF-α[OR(95%CI):1.196(1.061~1.348)]、IL-23[OR(95%CI):4.809(1.086~3.013)]和LTB4[OR(95%CI):1.327(1.064~1.655)]为结核性脑膜炎患者预后不良的影响因素(均P<0.05)。结论结核性脑膜炎患者脑脊液miR-200a和miR-4652-3p表达下调,与疾病严重程度及预后密切相关,二者联合能较好地预测结核性脑膜炎严重程度及预后,具有一定临床价值。

结直肠癌患者血清miR-150-5p和miR-200b-3p水平及临床意义

目的结直肠癌患者血清微小RNA(miR)-150-5p和miR-200b-3p水平及临床意义。方法回顾性选择2020年6月至2022年11月在沧州市人民医院就诊的结直肠癌患者116例为结直肠癌组,同时选取同期在本院治疗的结肠息肉患者60例作为结直肠良性肿瘤组,选择同期在本院行健康体检者60名为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测受试者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平;采用Pearson相关性分析对结直肠癌患者血清miR-150-5p与miR-200b-3p表达水平的相关性进行分析;分析结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平与病理特征的关系;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-150-5p、miR-200b-3p表达水平对结直肠癌的诊断价值。结果结直肠癌组、结直肠良性肿瘤组血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平均显著低于对照组,且结直肠癌组血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平均显著低于结直肠良性肿瘤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,结直肠癌患者血清miR-150-5p与miR-200b-3p表达水平呈正相关(r=0.562,P<0.05)。结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平与分化程度、淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关(P<0.05),其中低分化、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、浸润深度T 3~T 4的结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平显著低于中高分化、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、浸润深度T_(1)~T_(2)的患者(P<0.05)。血清miR-150-5p、miR-200b-3p单独及联合诊断结直肠癌的曲线下面积(AUC)分别为0.800、0.828、0.893,联合诊断AUC显著高于单独预测AUC(P<0.05)。结论结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平降低,二者可作为诊断结直肠癌发生的辅助指标。

糖尿病肾病患者血清microRNA-21含量及其与氧化应激指标的相关性

目的分析糖尿病肾病(DN)患者血清micro RNA-21(mi R-21)含量及其与氧化应激指标的相关性。方法选择在该院接受治疗的DN患者82例作为观察组,根据病情严重程度分为轻度DN组(47例)、中重度DN组(35例),另取同期体检健康人60例作为对照组。检测各组患者的血清mi R-21含量,超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、晚期蛋白氧化产物(AOPP)等氧化应激指标水平,进一步分析两者之间的相关性。结果 1早期DN组、中晚期DN组患者血清mi R-21含量低于对照组,中晚期DN组患者血清mi R-21含量低于早期DN组;2早期DN组、中晚期DN组患者血清SOD、MDA、AOPP水平高于对照组,中晚期DN组患者血清SOD、MDA、AOPP水平高于早期DN组;3血清mi R-21含量与SOD、MDA、AOPP等氧化应激指标水平呈负相关。结论 DN患者的血清mi R-21含量降低,且与患者的氧化应激指标水平相关,有望成为诊断及指导疾病治疗的有效指标之一。

微小RNA-200c靶向抑制EFNA1基因对胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miR)-200c靶向抑制肝配蛋白A1(EFNA1)基因对胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法选取胃癌细胞株SGC7901,随机分为miR-200c模拟物组、模拟物对照组、miR-200c抑制物组、抑制物对照组,分别转染miR-200c模拟物、模拟物对照寡核苷酸、miR-200c抑制物、抑制物对照寡核苷酸,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞侵袭。采用双荧光素酶实验验证miR-200c对EFNA1基因的靶向抑制作用。取本院手术切除的胃癌和相应癌旁组织标本48例份,通过免疫组化法检测EFNA1蛋白表达,分析胃癌组织中EFNA1蛋白表达与患者性别、年龄、吸烟、饮酒、病理类型、浸润深度、淋巴结及远处转移、肿瘤部位间的关系。结果与模拟物对照组相比,miR-200c模拟物组胃癌细胞SGC7901增殖活性降低(P<0.05),总凋亡率升高(P<0.05),侵袭能力降低(P<0.05)。miR-200c模拟物组的荧光素酶活性低于模拟物对照组(P<0.05),而miR-200c抑制物组的荧光素酶活性高于抑制物对照组(P<0.05)。EFNA1蛋白在胃癌组织中表达高于癌旁组织,其高表达与胃癌淋巴结转移有关(P<0.05),与其他临床病理特征均不相关(P均>0.05)。结论胃癌组织中EFNA1基因呈高表达,miR-200c可通过靶向EFNA1基因抑制胃癌细胞增殖及侵袭,促进凋亡。

红景天苷通过micro RNA-370改善2型糖尿病小鼠糖代谢的作用机制

目的观察红景天苷改善2型糖尿病小鼠血糖作用,探讨红景天苷改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的分子机制。方法采用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病小鼠模型,检测血糖相关指标、血清和肝脏micro RNA-370表达,以及肝组织糖异生关键酶(PEPCK/G6Pase)蛋白表达水平,观察红景天苷对2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的改善作用。分离培养小鼠原代肝细胞,采用瞬时转染技术将micro RNA-370沉默或过表达,观察micro RNA-370对糖代谢的影响及红景天苷调节糖代谢的分子机制。结果与模型对照组比较,红景天苷各剂量组小鼠血糖相关指标均明显改善(P<0.05);血清和肝组织micro RNA-370表达水平以及肝组织PEPCK/G6Pase蛋白相对表达水平均不同程度降低,且呈剂量依赖性,中、大剂量组降低较明显(P<0.05),小剂量组有降低趋势,但差异无统计学意义。细胞实验中,与空白对照组比较,红景天苷组和micro RNA抑制剂组PEPCK/G6Pase表达均被抑制(P<0.05),micro RNA-370激动剂组PEPCK/G6Pase表达明显促进(P<0.05),红景天苷与micro RNA-370激动剂联用能逆转micro RNA-370激动剂所致PEPCK/G6Pase蛋白表达增高(P<0.05)。结论红景天苷能明显改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱,且该作用至少部分通过抑制micro RNA-370实现。

MicroRNA-126和血管内皮生长因子在胚胎停育绒毛组织中的表达及相关性研究

目的通过分析孕早期胚胎停育与正常胚胎绒毛组织中microRNA-126(miR-126)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异,探讨其在早期胚胎停育中的相关性。方法收集孕早期胚胎停育和正常胚胎绒毛组织各28例作为胚胎停育组和对照组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组miR-126和VEGF mRNA表达水平的变化。结果 1两组绒毛组织中均有miR-126表达,胚胎停育组绒毛组织中miR-126的表达高于对照组,但差异无统计学意义。2胚胎停育组绒毛组织中VEGF的表达低于对照组,差异有统计学意义。3胚胎停育组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈负相关;对照组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈正相关。结论 1胚胎停育绒毛组织中VEGF的表达低于正常胚胎。2VEGF的表达变化与胚胎停育的发生有一定的相关性。

microRNA-133a拮抗苯肾上腺素诱导的小鼠心肌肥大

目的利用心肌细胞肥大体外模型研究mi R-133a抗心肌肥大的作用机制。方法构建mi R-133a腺病毒表达载体,导入293细胞并收获高表达mi R-133a的病毒;取12只出生1~3 d内的小鼠心脏,采用酶消化及梯度离心法获得心肌细胞,分为对照组和模型组,模型组加入苯肾上腺素（PE）诱导;将高表达mi R-133a的腺病毒感染模型组的心肌细胞,观察细胞面积的变化,RTPCR检测Acta1、Actc1、Actb、Myh6、Myh7、BNP基因的表达。结果模型组心肌细胞加入PE培养后,较对照组面积增大3倍以上,Acta1等基因表达显著增高;肥大后模型组的心肌细胞采用mi R-133a病毒感染后较未加入mi R-133a病毒的模型组的心肌细胞的面积缩小,Acta1等基因表达显著降低。结论 mi R-133a是心肌肥大的重要调节因子,有拮抗心肌肥大的作用。

microRNA-155在类风湿关节炎外周血中的表达及临床意义

目的通过研究micro RNA-155(mi R-155)在类风湿关节炎(RA)患者外周血的表达水平,分析mi R-155与疾病临床特征的相关性,探讨其在RA发病及疾病进展中的意义。方法抽取50例初发RA患者及36例健康对照组外周血分离PBMC(外周血单个核细胞),提取和纯化mi RNA,实时定量PCR检测mi R-155的表达,以小分子RNA U6作为内对照,对mi R-155的表达量进行相对定量分析。同时收集RA患者有关的临床参数,统计分析mi R-155的表达水平与RA合并临床参数的相关性。对RA活动组中,随机分为甲氨蝶呤(MTX)单药治疗组,肿瘤坏死因子(TNF)-α抑制剂单药治疗组,两组随访观察12周,收集患者治疗前后外周血。实时荧光定量PCR法检测RA患者治疗前后外周血mi R-155的表达水平变化。结果RA患者中PBMC中mi R-155的表达水平较健康对照组明显升高,(P<0.01);同时RA患者mi R-155的表达与患者活动度有关,与肺间质病变等无明显相关,RA患者TNF-α抑制剂单药治疗组中,mi R-155的表达较治疗前下降,而在甲氨蝶呤治疗组中无明显下降。结论 mi R-155在RA的PBMC中异常高表达,且与RA的活动度相关,提示mi R-155可能可作为RA诊断及RA活动的一个预测指标。mi R-155在RA的发病机制中可能参与了TNF-α的致炎过程。

血清microRNA-375在非小细胞肺癌中的表达水平及其临床意义

目的：探讨micro RNA-375（mi R-375）在非小细胞肺癌（non small-cell lung cancer,NSCLC）患者血清中的表达水平及临床意义。方法：采用实时荧光定量PCR方法检测82例非小细胞肺癌患者和对照组100例健康人血清的mi R-375的表达水平,分析其与临床病理参数之间的关系。结果：NSCLC组血清mi R-375表达水平显著低于对照组,并且其表达与临床分期和淋巴结转移有关（P〈0.05）。血清mi R-375在ROC曲线下面积（area under the ROC curve,AUC）为0.905（95%CI：0.860~0.950）。当血清mi R-375临界值取0.995时,对NSCLC诊断的灵敏度为92.0%,特异度为78.0%。结论：血清mi R-375可能作为一种新型NSCLC诊断的分子标志物和潜在的基因靶向治疗靶点。

microRNA-21通过促进成纤维细胞的增殖和分化调节心肌梗死后的心脏重塑

目的探讨小鼠心肌梗死模型中microRNA-21(miR-21)对心脏成纤维细胞增殖和分化的影响。方法利用左前降支结扎法构建小鼠心肌梗死模型(心肌梗死组),以心电图及病理改变作为建模成功的观察指标。采用荧光定量PCR检测各组心肌组织miR-21的表达。利用miR-21的模拟物(miR-21 mimic)转染小鼠成纤维细胞(miR-21 mimic组),使其在细胞中呈过表达状态,然后标记5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU),通过荧光显微镜观察成纤维细胞的增殖情况,蛋白质印迹法检测成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和小鼠Smad同源物7(Smad7)的表达,并与随机对照组及空白对照组比较。结果与假手术组比较,心肌梗死组梗死交界区的miR-21的表达量明显上调[(6.043±0.231)×10-4vs(1.620±0.451)×10-4,P<0.01],miR-21 mimic组成纤维细胞miR-21基因表达较随机对照组和空白对照组显著上调[(4.839±0.705)×10-4vs(1.143±0.064)×10-4vs(1.017±0.201)×10-4,P<0.01],miR-21mimic组成纤维细胞EdU染色阳性率较随机对照组和空白对照组显著增加[(27.892±1.645)%vs(12.553±1.227)%vs(13.946±1.550)%,P<0.01];同时,miR-21 mimic组成纤维细胞Smad7蛋白的表达明显下调,而α-SMA的表达显著上调。结论心肌梗死后,上调的miR-21可以通过调节转化生长因子(TGF)-β信号通路中Smad7的表达促进成纤维细胞的增殖和分化,进而调节心梗后的心脏重塑。

MicroRNA-146a与风湿性疾病

MicroRNAs（miRNAs）是一类短小（20～24nt）的非编码RNA,通过对基因表达的转录后调节参与很多生物学过程。越来越多的研究证明,miRNAs尤其miRNA-146a在免疫和自身免疫中发挥着重要作用。本文将miRNA-146a在风湿性疾病中的生物学功能及研究进展作一综述。

肝细胞癌患者血清miRNA-200c表达变化及其临床意义

目的探讨肝细胞癌(HCC)患者血清miRNA-200c表达变化及其临床意义。方法选择HCC患者60例(HCC组)、体检健康者60例(对照组),采用实时荧光定量PCR技术检测两组血清miRNA-200c表达,并分析其表达与患者临床病理参数的关系。以血清miRNA-200c表达的均数为界值,分为miRNA-200c高表达和miRNA-200c低表达者,比较二者生存时间。结果 HCC组及对照组血清miRNA-200c相对表达量分别为0.51±0.11、0.78±0.13,两组比较P<0.01。HCC患者miRNA-200c低表达与肿瘤直径、TNM分期有关(P均<0.01)。miRNA-200c高表达者生存时间明显长于miRNA-200c低表达者(χ2=8.551,P<0.01)。结论 HCC患者血清miRNA-200c低表达,其表达变化可促进HCC的发生、发展,并与患者预后有关。

上调微小RNA-200a表达对非小细胞肺癌紫杉醇化疗敏感度的影响及其机制

目的探讨微小RNA-200a(miRNA-200a)对非小细胞肺癌紫杉醇化疗敏感度的影响及其机制。方法采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌A549细胞中miRNA-200a的表达情况;采用脂质体法将miRNA-200a模拟物及miRNA-200a阴性对照转染至非小细胞肺癌A549细胞,采用qRT-PCR检测转染效果;采用噻唑蓝(MTT)法检测上调miRNA-200a表达对紫杉醇处理的非小细胞肺癌A549细胞增殖抑制情况的影响;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测上调miRNA-200a表达及紫杉醇处理后非小细胞肺癌A549细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关β-catenin蛋白的表达情况。结果非小细胞肺癌A549细胞中miRNA-200a的相对表达量为(0.26±0.08),明显低于正常人肺上皮16HBE细胞的(1.02±0.03)(P﹤0.01)。转染48 h后,空白对照组、mimics NC组、miRNA-200a mimics组细胞中miRNA-200a的相对表达量分别为(1.06±0.12)、(1.18±0.25)和(5.02±0.16),3组细胞中miRNA-200a的相对表达量比较,差异有统计学意义(P﹤0.01)。miRNA-200a mimics组细胞中miRNA-200a的相对表达量明显高于空白对照组(P﹤0.01)。MTT法检测结果显示,随着紫杉醇浓度的增加,A549细胞受到的增殖抑制作用明显增强,且呈一定的浓度依赖性;与紫杉醇组相比,转染miRNA-200a mimics后,随着紫杉醇浓度的增加,A549细胞受到的增殖抑制作用增强(P﹤0.05)。Western blot检测结果显示,空白对照组、紫杉醇组、miRNA-200a mimics组和miRNA-200a+紫杉醇组细胞中β-catenin蛋白的相对表达量分别(0.78±0.03)、(0.62±0.05)、(0.48±0.05)和(0.25±0.04),4组细胞中β-catenin蛋白的相对表达量比较,差异有统计学意义(P﹤0.01)。与空白对照组相比,紫杉醇组、miRNA-200a mimics组和miRNA-200a+紫杉醇组细胞中β-catenin蛋白的相对表达量均明显降低(P﹤0.01);与紫杉醇组相比,miRNA-200a+紫杉醇组细胞中β-catenin蛋白的相对表达量明显降低(P﹤0.01)。结论上调miRNA-200a表达能够增强非小细胞肺癌A549细胞对紫杉醇化疗药物的敏感度,其作用机制与阻断Wnt/β-catenin信号通路有关。