子痫前期患者胎盘微小RNA-30d表达与内质网应激的相关性分析

目的探讨微小RNA-30d(micro-RNA-30d,miR-30d)异常表达与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的关系,以及其在子痫前期致病中的作用。方法2018年10月至2019年9月在海南医学院第二附属医院产科收治的子痫前期患者30例为研究对象,同时选择同期在本院正常分娩产妇30例作为对照组。实时荧光定量聚合酶链式反应检测(real-time polymerase chain reaction,RTPCR)胎盘组织中miR-30d表达,免疫组化学染色检测胎盘组织中CHOP、激活转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)、葡萄糖调节蛋白78(glucose regulatory protein 78,GRP78)蛋白表达,并分析miR-30d与胎盘组织中CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT enhancer binding protein homologous protein,CHOP)、ATF6、GRP78等蛋白表达的相关性。采用t检验、Pearson相关系数分析法进行统计分析。结果子痫前期患者胎盘组织中miR-30d表达的2^(-△△Ct)值为0.308±0.072,显著高于对照组的0.115±0.014,差异有统计学意义(P<0.01)。子痫前期胎盘组织中CHOP、ATF6和GRP78 ERS标志蛋白表达较对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。Pearson相关分析显示子痫前期患者胎盘组织中miR-30d表达与CHOP(r=0.517,P<0.05)、ATF6(r=0.452,P<0.05)和GRP78(r=0.484,P<0.05)ERS标志蛋白表达呈显著正相关(P<0.05)。结论子痫前期患者胎盘组织miR-30d高表达,升高的miR-30d激活了ERS,可能是导致子痫前期发生的原因。

LncRNA PVT1 miR-30d表达与上皮性卵巢癌患者化疗敏感性及预后的关系

目的探讨LncRNA PVT1、miR-30d表达与上皮性卵巢癌患者化疗敏感性及预后的关系。方法选取2012年2月~2014年1月行手术治疗的76例上皮性卵巢癌患者的癌组织标本作为上皮性卵巢癌组,另选取本院收治的76例良性卵巢肿瘤作为对照组。检测LncRNA PVT1、miR-30d相对表达量,根据表达水平分为高表达组与低表达组;根据对顺铂(DDP)、阿霉素(ADM)、环磷酰胺(CTX)的敏感性将患者分为敏感组和耐药组并对比LncRNA PVT1、miR-30d表达情况;应用Pearson法对miR-30d和LncRNA PVT1表达的相关性进行分析;采用Kaplan-Meier对上皮性卵巢癌患者5年的生存情况进行分析。结果与对照组相比,上皮性卵巢癌组miR-30d表达水平降低(P<0.05),LncRNA PVT1表达水平升高(P<0.05)。miR-30d、LncRNA PVT1表达均与FIGO分期、分化程度密切相关(P<0.05)。DDP、ADM敏感组miR-30d表达水平显著高于耐药组(P<0.05),LncRNA PVT1表达水平显著低于耐药组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示上皮性卵巢癌组织中miR-30d和LncRNA PVT1表达呈负相关(P<0.05)。Kaplan-Meier法分析显示miR-30d高表达组5年内总生存率及中位生存时间远高于低表达组(73.7%VS 33.3%,28.0月VS 20.0月,P<0.05);LncRNA PVT1低表达组5年内总生存率及中位生存时间远高于高表达组(81.5%VS 22.4%,27.0月VS 18.0月,P<0.05)。结论上皮性卵巢癌患者癌组织miR-30d低表达,LncRNA PVT1高表达,miR-30d、LncRNA PVT1表达与上皮性卵巢癌患者化疗敏感性及预后有关。

LncRNA HOTAIR通过调控miR-30d影响鼻咽癌细胞的侵袭和迁移

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)HOX转录本反义RNA(HOTAIR)通过调控靶向小分子RNA-30d(miR-30d)影响鼻咽癌细胞侵袭和迁移的机制。方法在鼻咽癌CNE-2细胞中转染HOTAIRsiRNA,使用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)测定转染效果,Transwell法测定肿瘤细胞侵袭及迁移能力,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达;生物信息学软件分析HOTAIR与miR-30d区域结合位点,利用双荧光素酶报告系统确定两者结合关系;用RT-qPCR方法检测下调HOTAIR后鼻咽癌细胞中miR-30d表达的变化。将HOTAIR siRNA和miR-30d inhibitor共转染至CNE-2细胞中,用上述方法分析细胞侵袭、迁移及E-cadherin、vimentin和GRP78蛋白表达的变化。结果敲减HOTAIR表达后,CNE-2细胞的侵袭和迁移能力下降,细胞中vimentin和GRP78蛋白水平降低,E-cadherin蛋白水平升高;HOTAIR靶向调控miR-30d的表达,敲减HOTAIR的表达可以提高CNE-2细胞中miR-30d的水平,miR-30d inhibitor可以明显逆转敲减HOTAIR对CNE-2细胞侵袭、迁移能力以及E-cadherin、vimentin和GRP78蛋白表达的影响。结论HOTAIR通过负调控miR-30d影响GRP78和上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白的表达,有利于促进鼻咽癌细胞的侵袭和迁移。

miR-30b和miR-30d对胎盘滋养层细胞HTR8/SVneo迁移能力的影响

目的分析miR-30b和miR-30d在子痫前期(PE)胎盘组织中的表达及对胎盘滋养层细胞HTR8/SVneo迁移能力的影响。方法RT-PCR检测10例PE产妇(PE组)及10例正常分娩产妇(对照组)胎盘组织中miR-30b、miR-30d的表达;向滋养层细胞系HTR8/SVneo分别转染miR-30b mimic及miR-30d inhibitor以上调miR-30b和下调miR-30d表达,采用Transwell实验检测转染后各组细胞迁移能力。结果与对照组相比,PE组胎盘组织中miR-30b表达量显著升高,miR-30d显著降低(P<0.05)。Transwell结果显示,与空白组相比,miR-30b-mimic组和miR-30d inhibitor组的细胞迁移数目显著减少(P<0.05)。结论PE胎盘组织中存在miR-30b高表达和miR-30d低表达,其可能通过抑制胎盘滋养层细胞迁移能力参与PE发生发展。

miR-138及FOXD1在口腔鳞状细胞癌中的表达和意义

目的:探究miR-138及叉头盒蛋白D1(FOXD1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达及其临床意义。方法:选取44例行原发性OSCC根治术的患者,采用实时荧光定量PCR检测OSCC组织和配对癌旁组织中的miR-138及FOXD1的表达水平,通过卡方检验与生存分析探究miR-138与患者临床病理学特征及预后的关系;选取OSCC细胞系Cal27,对其转染并分为阴性转染(miR-NC)组、过表达miR-138(miR-138 mimics)组。采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭,观察miR-138对OSCC细胞生物学行为的影响;通过生物信息学预测miR-138的潜在靶基因;采用Western blot检测miR-138对FOXD1表达的影响。共转染miR-138 mimics和过表达FOXD1(sh-FOXD1)后,检测sh-FOXD1对OSCC生物学行为的影响,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-138对FOXD1的靶向作用。结果:miR-138在OSCC组织和细胞系中显著低表达(P<0.05),且与肿瘤患者原发肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期及远期生存率密切相关(P<0.05)。上调miR-138表达可显著抑制Cal27细胞的增殖和侵袭,并能降低Cal27细胞中FOXD1的表达(P<0.01)。FOXD1过表达能部分逆转miR-138 mimics对OSCC细胞增殖和侵袭的抑制作用。双荧光素酶报告基因显示,过表达miR-138显著抑制野生型FOXD1组的荧光表达(P<0.05),而对FOXD1突变组的荧光表达没有抑制作用。结论:miR-138可能通过调控FOXD1表达抑制OSCC的发生、发展,miR-138和FOXD1可能是OSCC潜在的治疗靶点。

黄芩苷对子痫前期大鼠胎盘滋养细胞增殖侵袭的作用机制研究

[目的]探讨黄岑苷对子痫前期大鼠胎盘组织滋养细胞增殖侵袭的影响及相关的作用机制。[方法]选择36只健康清洁级SD大鼠,其中雌性24只,雄性12只,按照2∶1比例安排雌雄合笼,24只雌鼠妊娠第13天建立子痫前期大鼠模型,成功20只。从建模成功雌鼠中随机取5只进行原代滋养细胞分离、培养及传代,倒置显微镜下观察滋养细胞形态,以免疫荧光染色法鉴定滋养细胞纯度,四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测吸光度(optical density,OD)值,评估胎盘滋养细胞增殖活性。将其余15只建模成功雌鼠分为对照组(以0.3 mL蒸馏水灌胃)、黄岑苷低剂量组(以25μg·mL;黄岑苷灌胃)、黄岑苷高剂量组(以100μg·mL;黄岑苷灌胃),灌胃后取腹主动脉血;同时将原代滋养细胞分为A组、B组、C组,分别以对照组、黄岑苷低剂量组、黄岑苷高剂量组大鼠血清培养48 h,采用Transwell法检测各组滋养细胞侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, Real-time qPCR)法检测微小RNA-30d(microRNA-30d,miR-30d)、神经胶质细胞缺失同源物-1(glial cells missing homolog-1,GCM-1)mRNA表达水平,免疫印迹法检测GCM-1蛋白相对表达量。[结果]胎盘滋养细胞经消化、传代后,倒置显微镜下观察呈上皮样细胞形态,多为长多边形,体积大,核大呈卵圆形,呈片状延展生长,贴壁后呈铺路石样;滋养细胞纯度(90.65±5.64)%。与空白组比较,20、40、60、80、100μg·mL;黄岑苷组OD值增高(P<0.05)。与A组比较,B组、C组侵袭细胞数增多,miR-30 d表达水平降低,GCM-1 mRNA及蛋白相对表达量升高(P<0.05);与B组比较,C组侵袭细胞数增多,miR-30 d表达水平降低,GCM-1 m RNA及及蛋白相对表达量升高(P<0.05)。[结论]黄岑苷可提升子痫前期大鼠胎盘滋养细胞增殖、侵袭能力,作用机制可能与抑制miR-30d表达、上调GCM-1蛋白表达有关。