艾拉莫德联合甲氨蝶呤治疗难治性类风湿关节炎疗效及对患者血清微小RNA-141和微小RNA-335-5p表达的影响

目的:观察艾拉莫德联合甲氨蝶呤治疗难治性类风湿关节炎(RA)的疗效及对患者血清微小RNA-141(miR-141)和miR-335-5p表达的影响。方法:将难治性RA患者80例随机分为甲氨蝶呤组(单纯甲氨蝶呤治疗,40例)和联合艾拉莫德组(艾拉莫德联合甲氨蝶呤治疗,40例),均治疗3个月。比较两组临床疗效、免疫功能指标、骨代谢指标、炎症因子水平、症状改善情况以及miR-141和miR-335-5p表达水平。记录治疗期间不良反应发生情况。结果:联合艾拉莫德组总有效率高于甲氨蝶呤组(P<0.05)。两组血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(CTX-Ⅰ)、类风湿因子(RF)、分泌型糖蛋白-3α(Wnt-3α)、白细胞介素-1(IL-1)、IL-6、C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、miR-141水平,以及28个关节疾病活动度(DAS28)评分、关节压痛指数、关节肿胀指数较治疗前降低,且联合艾拉莫德组低于甲氨蝶呤组(均P<0.05)。血清miR-335-5p、骨碱性磷酸酶(B-ALP)水平较治疗前升高,且联合艾拉莫德组高于甲氨蝶呤组(均P<0.05)。晨僵时间较治疗前缩短,且联合艾拉莫德组短于甲氨蝶呤组(均P<0.05)。治疗期间,联合艾拉莫德组与甲氨蝶呤组总不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:相较于单纯甲氨蝶呤治疗,艾拉莫德联合甲氨蝶呤可进一步改善难治性RA患者免疫功能,改善相关细胞因子水平及炎症反应,缓解患者症状,同时具有良好安全性。艾拉莫德的治疗作用可能与调控血清miR-141、miR-335-5p水平有关。

血管性认知功能障碍病人血清微RNA-335-5p、血清应答因子水平及其临床意义

目的 探究血管性认知功能障碍(VCI)病人血清微RNA(miR)-335-5p、血清应答因子(SRF)水平及临床意义。方法以石家庄市人民医院2019年1月至2020年12月因脑卒中治疗后6个月出现VCI的110例病人为研究对象(VCI组),其中非痴呆型血管性认知功能障碍(VCIND)者48例(VCIND组)、血管性痴呆(VD)者62例(VD组)。同时间段该院脑卒中未合并认知障碍者110例为对照组。分析各组病人发病时(入院次日)、发病后6个月、发病后1年血清miR-335-5p、SRF水平。logistic回归模型分析脑卒中病人发生VCI的影响因素。Pearson法分析血清miR-335-5p与SRF水平的相关性。受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清miR-335-5p、SRF水平对VCI的预测价值。结果 VCI组发病时miR-335-5p水平0.76±0.15低于对照组1.06±0.07,而SRF水平1.52±0.24高于对照组1.01±0.09,差异有统计学意义(P<0.05)。发病时,对照组、VCIND组、VD组的miR-335-5p水平逐次降低(1.06±0.07比0.86±0.17比0.68±0.14),SRF水平依次增加(1.01±0.09比1.32±0.25比1.67±0.24),差异有统计学意义(P<0.05)。VD组、VCIND组受试者在发病后6个月及1年时SRF水平低于发病时,而miR-335-5p水平高于发病时(P<0.05)。三组蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分、miR-335-5p、SRF组间、时间、交互作用差异有统计学意义(P<0.05)。发病时,VCI组血清miR-335-5p与SRF水平存在负相关性(r=-0.64,P<0.001)。年龄、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、miR-335-5p、SRF是影响脑卒中病人VCI的危险因素(P<0.05)。ROC分析显示,血清miR-335-5p、SRF、miR-335-5p联合SRF预测脑卒中后VCI的曲线下面积为0.88[95%CI:(0.84,0.93)]、0.90[95%CI:(0.86,0.95)]、0.93[95%CI:(0.89,0.97)]。结论VCI病人血清miR-335-5p水平明显降低,而SRF水平升高,二者水平变化与VCI严重程度有关,是导致脑卒中后VCI的影响因素,且二者联合对脑卒中后VCI有较高预测效能。

miRNA-34a、miRNA-145、miRNA-335在脑胶质瘤组织中的表达分析

目的分析微小RNA(miRNA)-34a、miRNA-145及miRNA-335在脑胶质瘤组织的表达意义。方法选取2018年1月~2023年2月沧州市中心医院神经外一科收治的60例脑胶质瘤患者为观察组,同时期到院体检的20例健康者为对照组,比较2组miRNA-34a、miRNA-145、miRNA-335水平,并分析不同疾病脑胶质瘤患者的mi RNA-34a、mi RNA-145、mi RNA-335水平表达情况。结果观察组mi RNA-34a、mi RNA-145、mi RNA-335水平低于对照组,且高级别胶质瘤组各指标水平更低(P<0.05)。结论在脑胶质瘤患者中,miRNA-34a、miRNA-145、miRNA-335水平表达均呈现较低状态,且分级越高,其水平越低,可为患者病情诊断及病理分级提供可靠参考。

多囊卵巢综合征患者血清miR-335-5p、miR-141-3p水平变化及其诊断价值

目的探究多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清微小RNA-335-5p(miR-335-5p)、miR-141-3p水平变化及其诊断价值。方法选择2019年2月—2022年6月南通市中医院妇科治疗PCOS患者145例为PCOS组,根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)分为IR亚组和非IR亚组;根据体质量指数(BMI)分为肥胖亚组和非肥胖亚组;根据睾酮水平分为高雄激素亚组和非高雄激素亚组;另选取同时期女性健康体检者110例为健康对照组。荧光定量PCR检测并比较2组血清miR-335-5p、miR-141-3p水平,以及2指标在不同临床/病情特点中的差异;Pearson相关或Spearman秩相关系数描述血清miR-335-5p、miR-141-3p与临床指标之间相关性;多因素Logistic分析影响PCOS发生的因素;ROC曲线分析血清miR-335-5p、miR-141-3p水平对PCOS的诊断价值。结果PCOS组患者的BMI、空腹胰岛素(FINS)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平及HOMA-IR显著高于健康对照组(t/P=4.881/<0.001、16.326/<0.001、37.901/<0.001、43.690/<0.001、15.395/<0.001);与健康对照组比较,PCOS组患者血清miR-335-5p、miR-141-3p水平均下降(t/P=10.516/<0.001、8.767/<0.001);IR亚组、肥胖亚组、高雄激素亚组血清miR-335-5p、miR-141-3p水平均低于非IR亚组、非肥胖亚组、非高雄激素亚组(t/P=2.882/0.005、3.783/<0.001,5.196/<0.001、4.515/<0.001,5.069/<0.001、4.296/<0.001);相关性分析显示,血清miR-335-5p、miR-141-3p水平均与IR、BMI、睾酮呈负相关(P均<0.01);血清miR-335-5p低、miR-141-3p低、BMI高、FINS高、LH高、睾酮高、HOMA-IR高均为影响PCOS发生的危险因素[OR(95%CI)=1.812(1.348~2.436)、2.536(1.647~3.842)、2.913(1.523~5.573)、1.293(1.207~1.385)、1.692(1.180~2.427)、3.452(2.518~4.733)、4.620(1.916~11.139)];血清miR-335-5p、miR-141-3p及二者联合诊断PCOS患者的曲线下面积(AUC)分别为0.818、0.733、0.873,二者联合检测较血清miR-335-5p、miR-141-3p单独检测更具诊断效能(Z=2.882、4.767,P均<0.001)。结论血清miR-335-5p、miR-141-3p在PCOS患者中低表达,可能参与了PCOS患者IR、肥胖及高雄激素分泌,二者联合诊断对PCOS更具诊断效能。

微小RNA-335-5p靶向轴突导向因子3B对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨微小RNA-335-5p(miR-335-5p)靶向轴突导向因子3B(SEMA3B)对子宫内膜癌细胞(Ishikawa细胞)增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:细胞转染分为miR-335-5p NC组、miR-335-5p inhibitor组、pcDNA组、pcDNA-SEMA3B组、miR-335-5p NC+si NC组、miR-335-5p inhibitor+si NC组、miR-335-5p NC+si SEMA3B组、miR-335-5p inhibitor+si SEMA3B组,未转染的Ishikawa细胞作为对照组。生物信息学预测和双荧光素酶法验证miR-335-5p和SEMA3B的靶向关系;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-335-5p和SEMA3B表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质免疫印迹(WB)检测SEMA3B蛋白表达。结果:miR-335-5p和SEMA3B存在靶向关系,并且在子宫内膜癌组织和Ishikawa细胞中检测到miR-335-5p的高表达和SEMA3B的低表达。与miR-335-5p NC组比较,miR-335-5p inhibitor组细胞增殖率显著降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-SEMA3B组细胞增殖率显著降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。与miR-335-5p NC+si NC组比较,miR-335-5p inhibitor+si NC组细胞增殖率显著降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.05),miR-335-5p NC+si SEMA3B组细胞增殖率显著升高、细胞凋亡率降低(均P<0.05)。与miR-335-5p NC+si SEMA3B比较,miR-335-5p inhibitor+si SEMA3B组细胞增殖率降低、细胞凋亡率升高(均P<0.05)。与miR-335-5p inhibitor+si NC组比较,miR-335-5p inhibitor+si SEMA3B组细胞增殖率升高、细胞凋亡率降低(均P<0.05)。结论:抑制miR-335-5p可靶向激活SEMA3B表达,从而促进子宫内膜癌细胞的凋亡、抑制癌细胞增殖。

血清PCT、IL-6、CRP/ALB、miR335-5-p对结直肠癌术后肠梗阻的预测价值分析

目的探讨血清降钙素原(PCT)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白/清蛋白(CRP/ALB)、微小RNA-335-5p(miR-335-5p)对结直肠癌(CRC)术后肠梗阻的预测价值。方法选取2022年7月至2023年7月该院收治并进行手术治疗的100例CRC患者,观察术后1周患者有无肠梗阻情况发生,根据发生情况将其分为肠梗阻组(13例)和非肠梗阻组(87例)。对比两组临床资料及血清PCT、IL-6、CRP/ALB、miR-335-5p水平,采用Logistic多因素回归分析CRC术后发生肠梗阻的危险因素,并分析血清PCT、IL-6、CRP/ALB、miR-335-5p对CRC术后发生肠梗阻的预测价值。结果CRC患者术后血清PCT、IL-6、CRP/ALB、miR-335-5p水平均高于术前(P<0.05)。100例CRC手术患者中,术后2周内发生肠梗阻共13例(13.00%)。肠梗阻组直肠肿瘤、临床分期Ⅲ期占比高于非肠梗阻组,腹腔镜手术占比低于非肠梗阻组(P<0.05)。肠梗阻组血清PCT、IL-6、CRP/ALB水平高于非肠梗阻组,miR-335-5p水平低于非肠梗阻组(P<0.05)。血清PCT、IL-6、CRP/ALB是CRC术后肠梗阻发生的独立危险因素(P<0.05),miR-335-5p是保护因素(P<0.05)。血清PCT、IL-6、CRP/ALB、miR-335-5p及联合预测CRC术后发生肠梗阻的曲线下面积(AUC)为0.818、0.805、0.862、0.938、0.980,联合预测的AUC高于单项检测(Z_(PCT-联合检测)=2.193,Z_(IL-6-联合检测)=2.210,Z_(CRP/ALB-联合检测)=2.188,Z_(miR-335-5p-联合检测)=2.437,P<0.05)。结论CRC患者术后血清PCT、IL-6、CRP/ALB、miR-335-5p对其肠梗阻的发生具有一定预测价值,联合检测很大程度上可提高预测术后肠梗阻发生的准确性。

糖尿病肾病患者血清microRNA-21含量及其与氧化应激指标的相关性

目的分析糖尿病肾病(DN)患者血清micro RNA-21(mi R-21)含量及其与氧化应激指标的相关性。方法选择在该院接受治疗的DN患者82例作为观察组,根据病情严重程度分为轻度DN组(47例)、中重度DN组(35例),另取同期体检健康人60例作为对照组。检测各组患者的血清mi R-21含量,超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、晚期蛋白氧化产物(AOPP)等氧化应激指标水平,进一步分析两者之间的相关性。结果 1早期DN组、中晚期DN组患者血清mi R-21含量低于对照组,中晚期DN组患者血清mi R-21含量低于早期DN组;2早期DN组、中晚期DN组患者血清SOD、MDA、AOPP水平高于对照组,中晚期DN组患者血清SOD、MDA、AOPP水平高于早期DN组;3血清mi R-21含量与SOD、MDA、AOPP等氧化应激指标水平呈负相关。结论 DN患者的血清mi R-21含量降低,且与患者的氧化应激指标水平相关,有望成为诊断及指导疾病治疗的有效指标之一。

急性缺血性脑卒中患者血清miRNA-335表达水平及临床意义

目的检测mi RNA-335(mi R-335)在急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清中的表达,探讨其与AIS发病的相关性。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应法测定106例AIS患者及98例健康对照者血清mi R-335表达情况,卒中患者病情评估采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)进行评分,并比较病程为3天内、4~7天和8~14天的AIS患者血清mi R-335表达水平,分析患者血清mi R-335水平与NIHSS评分的相关性。运用生物学数据库预测mi R-335的靶基因,采用DAVID数据库对靶基因集合进行功能注释分析。结果 1与健康对照组相比较,AIS组患者血清mi R-335表达明显下调(P<0.01),病程为3天内、4~7天和8~14天的AIS患者血清中mi R-335水平均低于健康对照组(P<0.01);2血清mi R-335水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.28,P<0.01),NIHSS>5分组患者血清mi R-335水平明显低于NIHSS≤5分组(P<0.01);3数据库分析显示:mi R-335预测靶基因功能分析主要富集在核酸代谢、转录调控、细胞增殖、神经元发育与分化、血管形成的生物学过程,并富集在通道活性的调节、钙离子结合活性、阳离子金属离子结合活性和转录调节的活性等分子功能,定位于细胞核质成分,并富集于MAPK信号转导、氧化应激和血管形成的信号通路中。结论 AIS患者血清mi R-335表达明显下降,与卒中后患者病情密切相关,是其可能的血清生物学标志之一。

红景天苷通过micro RNA-370改善2型糖尿病小鼠糖代谢的作用机制

目的观察红景天苷改善2型糖尿病小鼠血糖作用,探讨红景天苷改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的分子机制。方法采用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病小鼠模型,检测血糖相关指标、血清和肝脏micro RNA-370表达,以及肝组织糖异生关键酶(PEPCK/G6Pase)蛋白表达水平,观察红景天苷对2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱的改善作用。分离培养小鼠原代肝细胞,采用瞬时转染技术将micro RNA-370沉默或过表达,观察micro RNA-370对糖代谢的影响及红景天苷调节糖代谢的分子机制。结果与模型对照组比较,红景天苷各剂量组小鼠血糖相关指标均明显改善(P<0.05);血清和肝组织micro RNA-370表达水平以及肝组织PEPCK/G6Pase蛋白相对表达水平均不同程度降低,且呈剂量依赖性,中、大剂量组降低较明显(P<0.05),小剂量组有降低趋势,但差异无统计学意义。细胞实验中,与空白对照组比较,红景天苷组和micro RNA抑制剂组PEPCK/G6Pase表达均被抑制(P<0.05),micro RNA-370激动剂组PEPCK/G6Pase表达明显促进(P<0.05),红景天苷与micro RNA-370激动剂联用能逆转micro RNA-370激动剂所致PEPCK/G6Pase蛋白表达增高(P<0.05)。结论红景天苷能明显改善2型糖尿病小鼠糖代谢紊乱,且该作用至少部分通过抑制micro RNA-370实现。

MicroRNA-126和血管内皮生长因子在胚胎停育绒毛组织中的表达及相关性研究

目的通过分析孕早期胚胎停育与正常胚胎绒毛组织中microRNA-126(miR-126)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异,探讨其在早期胚胎停育中的相关性。方法收集孕早期胚胎停育和正常胚胎绒毛组织各28例作为胚胎停育组和对照组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组miR-126和VEGF mRNA表达水平的变化。结果 1两组绒毛组织中均有miR-126表达,胚胎停育组绒毛组织中miR-126的表达高于对照组,但差异无统计学意义。2胚胎停育组绒毛组织中VEGF的表达低于对照组,差异有统计学意义。3胚胎停育组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈负相关;对照组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈正相关。结论 1胚胎停育绒毛组织中VEGF的表达低于正常胚胎。2VEGF的表达变化与胚胎停育的发生有一定的相关性。

microRNA-133a拮抗苯肾上腺素诱导的小鼠心肌肥大

目的利用心肌细胞肥大体外模型研究mi R-133a抗心肌肥大的作用机制。方法构建mi R-133a腺病毒表达载体,导入293细胞并收获高表达mi R-133a的病毒;取12只出生1~3 d内的小鼠心脏,采用酶消化及梯度离心法获得心肌细胞,分为对照组和模型组,模型组加入苯肾上腺素（PE）诱导;将高表达mi R-133a的腺病毒感染模型组的心肌细胞,观察细胞面积的变化,RTPCR检测Acta1、Actc1、Actb、Myh6、Myh7、BNP基因的表达。结果模型组心肌细胞加入PE培养后,较对照组面积增大3倍以上,Acta1等基因表达显著增高;肥大后模型组的心肌细胞采用mi R-133a病毒感染后较未加入mi R-133a病毒的模型组的心肌细胞的面积缩小,Acta1等基因表达显著降低。结论 mi R-133a是心肌肥大的重要调节因子,有拮抗心肌肥大的作用。

microRNA-155在类风湿关节炎外周血中的表达及临床意义

目的通过研究micro RNA-155(mi R-155)在类风湿关节炎(RA)患者外周血的表达水平,分析mi R-155与疾病临床特征的相关性,探讨其在RA发病及疾病进展中的意义。方法抽取50例初发RA患者及36例健康对照组外周血分离PBMC(外周血单个核细胞),提取和纯化mi RNA,实时定量PCR检测mi R-155的表达,以小分子RNA U6作为内对照,对mi R-155的表达量进行相对定量分析。同时收集RA患者有关的临床参数,统计分析mi R-155的表达水平与RA合并临床参数的相关性。对RA活动组中,随机分为甲氨蝶呤(MTX)单药治疗组,肿瘤坏死因子(TNF)-α抑制剂单药治疗组,两组随访观察12周,收集患者治疗前后外周血。实时荧光定量PCR法检测RA患者治疗前后外周血mi R-155的表达水平变化。结果RA患者中PBMC中mi R-155的表达水平较健康对照组明显升高,(P<0.01);同时RA患者mi R-155的表达与患者活动度有关,与肺间质病变等无明显相关,RA患者TNF-α抑制剂单药治疗组中,mi R-155的表达较治疗前下降,而在甲氨蝶呤治疗组中无明显下降。结论 mi R-155在RA的PBMC中异常高表达,且与RA的活动度相关,提示mi R-155可能可作为RA诊断及RA活动的一个预测指标。mi R-155在RA的发病机制中可能参与了TNF-α的致炎过程。

血清microRNA-375在非小细胞肺癌中的表达水平及其临床意义

目的：探讨micro RNA-375（mi R-375）在非小细胞肺癌（non small-cell lung cancer,NSCLC）患者血清中的表达水平及临床意义。方法：采用实时荧光定量PCR方法检测82例非小细胞肺癌患者和对照组100例健康人血清的mi R-375的表达水平,分析其与临床病理参数之间的关系。结果：NSCLC组血清mi R-375表达水平显著低于对照组,并且其表达与临床分期和淋巴结转移有关（P〈0.05）。血清mi R-375在ROC曲线下面积（area under the ROC curve,AUC）为0.905（95%CI：0.860~0.950）。当血清mi R-375临界值取0.995时,对NSCLC诊断的灵敏度为92.0%,特异度为78.0%。结论：血清mi R-375可能作为一种新型NSCLC诊断的分子标志物和潜在的基因靶向治疗靶点。

microRNA-21通过促进成纤维细胞的增殖和分化调节心肌梗死后的心脏重塑

目的探讨小鼠心肌梗死模型中microRNA-21(miR-21)对心脏成纤维细胞增殖和分化的影响。方法利用左前降支结扎法构建小鼠心肌梗死模型(心肌梗死组),以心电图及病理改变作为建模成功的观察指标。采用荧光定量PCR检测各组心肌组织miR-21的表达。利用miR-21的模拟物(miR-21 mimic)转染小鼠成纤维细胞(miR-21 mimic组),使其在细胞中呈过表达状态,然后标记5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU),通过荧光显微镜观察成纤维细胞的增殖情况,蛋白质印迹法检测成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和小鼠Smad同源物7(Smad7)的表达,并与随机对照组及空白对照组比较。结果与假手术组比较,心肌梗死组梗死交界区的miR-21的表达量明显上调[(6.043±0.231)×10-4vs(1.620±0.451)×10-4,P<0.01],miR-21 mimic组成纤维细胞miR-21基因表达较随机对照组和空白对照组显著上调[(4.839±0.705)×10-4vs(1.143±0.064)×10-4vs(1.017±0.201)×10-4,P<0.01],miR-21mimic组成纤维细胞EdU染色阳性率较随机对照组和空白对照组显著增加[(27.892±1.645)%vs(12.553±1.227)%vs(13.946±1.550)%,P<0.01];同时,miR-21 mimic组成纤维细胞Smad7蛋白的表达明显下调,而α-SMA的表达显著上调。结论心肌梗死后,上调的miR-21可以通过调节转化生长因子(TGF)-β信号通路中Smad7的表达促进成纤维细胞的增殖和分化,进而调节心梗后的心脏重塑。

MicroRNA-146a与风湿性疾病

MicroRNAs（miRNAs）是一类短小（20～24nt）的非编码RNA,通过对基因表达的转录后调节参与很多生物学过程。越来越多的研究证明,miRNAs尤其miRNA-146a在免疫和自身免疫中发挥着重要作用。本文将miRNA-146a在风湿性疾病中的生物学功能及研究进展作一综述。

抑制microRNA-21表达降低HCT-116细胞侵袭转移能力的实验研究

目的:探讨抑制人结肠癌细胞HCT-116 micro RNA-21表达降低结肠癌细胞侵袭转移能力作用机制。方法:应用表达反义micro RNA-21的质粒mi RZip21转染HCT-116细胞,检测micro RNA-21的变化,Target Scan和Pic Tar等工具筛选与侵袭转移相关的靶基因,实时定量PCR方法检测转染前后靶基因m RNA的变化,Western blot检测靶基因蛋白表达变化,平皿划痕和Transwell实验观察抑制micro RNA-21与否HCT-116细胞转移和侵袭能力。结果:筛选出4种与侵袭转移相关的micro RNA-21靶基因:TIMP-3,RECK,BMPRⅡ和PCDH17;mi RZip21质粒转染HCT-116后,micro-RNA 21表达水平下降约40%,靶基因TIMP-3和RECK的m RNA及靶蛋白表达上升明显,有统计学意义(P<0.05);平皿划痕和Transwell实验结果表明抑制micro RNA-21后,HCT-116细胞转移侵袭能力明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制micro RNA-21的表达能够减弱HCT-116细胞的侵袭和转移能力。

胃癌组织中microRNA-224阳性表达与患者预后相关性分析

目的:探讨micro RNA-224于胃癌组织中的阳性表达与患者临床病理特征及预后的相关性。方法:应用原位杂交技术检测micro RNA-224在50例石蜡固定癌旁非肿瘤胃黏膜组织及112例石蜡胃肿瘤组织切片中的表达情况,分析其与肿瘤患者各病理参数及预后的相关性。原位杂交按照原位杂交试剂盒的说明书进行。结果:micro RNA-224在胃癌组织中阳性表达率49.1%(55/112),癌旁非肿瘤胃黏膜组织中阴性表达。其阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、远处转移及浸润深度存在相关性(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤的部位、分化程度、Lauren分型无关(P>0.05)。micro RNA-224阴性表达比阳性表达者5年生存率高,差异有统计学意义(P<0.001)。经COX多因素分析显示:micro RNA-224的表达是影响胃癌患者预后的独立因素之一(P<0.05)。结论:micro RNA-224在肿瘤组织中阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、远处转移及浸润深度密切相关,是影响胃癌患者预后的独立因素之一。

长基因间非编码RNA 1980靶向微小RNA-335-5p及对胃癌细胞迁移侵袭的影响

目的探讨长基因间非编码RNA 1980(LINC01980)对微小RNA-335-5p(miR-335-5p)的靶向调控作用及胃癌细胞迁移侵袭的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人胃黏膜上皮细胞GES-1及胃癌细胞(AGS、HGC-27、MKN-45和MGC80-3)的LINC01980和miR-335-5p水平,双荧光素酶报告基因实验验证LINC01980与miR-335-5p的相互关系;将MGC80-3细胞分为4组:对照组(未转染)、LINC01980干扰(si-LINC01980)组(转染si-LINC01980+miR-335-5p无关序列miR-NC)、miR-335-5p抑制物inhibitor(miR-inhibitor)组(转染无关序列si-NC+miR-335-5p inhibitor)和共转染组(转染si-LINC01980+miR-335-5p inhibitor)。MTT、划痕实验和Transwell小室实验分别检测细胞增殖活力、迁移和侵袭能力。结果与GES-1细胞相比,胃癌细胞的LINC01980水平升高,而miR-335-5p水平降低(P<0.05)。野生型LINC01980序列与miR-335-5p模拟物共转染细胞的荧光素酶活性降低且MGC80-3细胞转染si-LINC01980后的miR-335-5p水平升高(P<0.05)。对照组、si-LINC01980组、miR-inhibitor组和共转染组的细胞活力分别为1.508±0.101、0.944±0.077、1.856±0.117和1.404±0.082,划痕愈合率分别为(65.552±3.701)%、(19.920±2.571)%、(88.133±1.264)%和(75.433±7.313)%,穿膜细胞数分别为(80.349±8.763)、(31.151±1.338)、(114.064±2.983)和(78.920±7.811)个,与对照组相比,si-LINC01980组的细胞活力、划痕愈合率和穿膜细胞数均降低(P<0.05),miR-inhibitor组均升高(P<0.05),而共转染组的无明显变化(P>0.05)。结论干扰LINC01980可能通过增强miR-335-5p表达来抑制胃癌的进展,LINC01980/miR-335-5p轴有望成为胃癌治疗的潜在靶点。

MicroRNA-599对静脉曲张中血管平滑肌细胞去分化的影响及其机制研究

目的研究micro RNA-599(miR-599)在曲张静脉中的表达,探讨miR-599是否通过下调血小板源性生长因子B(PDGF-BB),抑制曲张静脉中血管平滑肌细胞(VSMCs)去分化。方法收集大隐静脉移植术患者中曲张静脉和正常静脉标本,通过实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测42例曲张静脉组织及39例正常静脉组织中miR-599、miR-200、miR-145、miR-146b、miR-155的表达;Western blot检测两组标本中SMactin、SM-22、SM-MCH、OPN的表达;在细胞实验中,转染miR-599mimic和miR-NC至离体培养的VSMCs中,Western blot检测VSMCs中SM-actin、SM-22、SM-MCH、OPN、PDGF-BB的表达,噻唑蓝法测细胞增殖、划痕实验观察细胞迁移,利用荧光素酶试验验证PDGF是miR-599的靶基因。结果相比于正常静脉组织,miR-599在曲张静脉中的表达降低(F=73.012,P=0.001)。两组miR-146b、miR-200、miR-30、miR-155的表达量比较,差异无统计学意义。相比于正常静脉组织,曲张静脉组织中SM-actin、SM-22、SM-MCH的表达降低(P<0.05),OPN的表达升高(F=56.414,P=0.009);在细胞实验中,相比于对照组,miR-599组VSMCs中SM-actin、SM-22、SM-MCH的表达升高(P<0.05),OPN的表达降低(F=27.353,P=0.022),细胞增殖减少(F=37.824,P=0.016),迁移减少(F=69.365,P=0.001),PDGF表达量减少(F=55.345,P=0.004)。荧光素酶试验结果显示,miR-599能够降低PDGF-3'-UTR质粒的荧光素活性(F=21.429,P=0.036)。结论在曲张静脉组织中,miR-599低表达。在VSMCs中,miR-599可以通过下调PDGF-BB而抑制VSMCs去分化。

微小RNA-335-3p靶向小鼠双微体基因调控骨髓瘤细胞的增殖和凋亡

目的探讨微小RNA(miR)-335-3p对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法2018年5月至2019年1月,培养正常骨髓细胞MNC和骨髓瘤细胞KM3和U266,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-335-3p表达水平。将KM3细胞分为miR-NC组(转染模拟对照序列)、miR-335-3p组[转染miR-335-3p模拟物(miR-335-3p mimics)]、pcDNA3.1+miR-335-3p组(共转染空载体和miR-335-3p mimics)和pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组[共转染小鼠双微体基因(MDM2)过表达载体和miR-335-3p mimics],MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证KM3细胞中miR-335-3p与MDM2调控关系。结果骨髓瘤细胞KM3和U266中miR-335-3p表达水平分别为0.24±0.01、0.38±0.02,显著低于正常骨髓细胞MNC中的miR-335-3p表达水平0.77±0.03(均P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.60±0.03)比(0.99±0.06);72 h:(0.82±0.05)比(1.67±0.07)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均降低(均P<0.05),细胞凋亡率[(24.31±0.99)%比(8.13±0.83)%]、细胞中P21和Bax蛋白表达均升高(均P<0.05)。miR-335-3p在KM3细胞中负调控MDM2表达。与pcDNA3.1+miR-335-3p组比较,pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.80±0.05)比(0.63±0.04);72 h:(1.28±0.06)比(0.88±0.05)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均升高(均P<0.05),凋亡率[(15.34±0.66)%比(23.98±1.41)%]、细胞中P21、Bax蛋白表达均降低(均P<0.05)。结论miR-335-3p可能通过下调MDM2表达抑制骨髓瘤细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。