脓毒症并发急性肾损伤患儿血清中miR-93-5p和miR-424-5p的表达及临床意义

目的探讨血清中微小RNA-93-5p(miR-93-5p)和微小RNA-424-5p(miR-424-5p)在脓毒症并发急性肾损伤(S-AKI)患儿中的表达水平及其临床意义。方法选取2019年11月至2021年11月南阳市中心医院综合ICU收治的116例脓毒症患儿作为研究对象,根据脓毒症患儿是否并发AKI分为AKI组60例和非AKI组56例;比较两组患儿的一般资料和血清miR-93-5p、miR-424-5p及肾功能指标[血肌酐(Scr)、胱抑素C(Cys-C)]水平;采用Pearson法分析S-AKI患儿血清miR-93-5p、miR-424-5p与肾功能指标的相关性;采用多因素Logistic回归分析脓毒症患儿并发AKI的影响因素;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-93-5p、miR-424-5p水平对脓毒症患儿并发AKI的诊断价值。结果AKI组患儿的尿量为(1.52±0.31)mL·kg^(-1)·h^(-1)、血清miR-93-5p表达水平为0.62±0.14,均明显低于非AKI组的(1.87±0.36)mL·kg^(-1)·h^(-1)、(1.02±0.21),急性生理学与慢性健康状况评分(APACHEⅡ评分)、序贯器官衰竭评分(SOFA评分)、血清miR-424-5p表达水平、Scr、Cys-C水平分别为(17.35±5.01)分、(5.77±1.80)分、(2.36±0.51)、(182.84±43.31)μmol/L、(1.63±0.39)mg/L,明显高于非AKI组的(14.96±4.12)分、(5.10±1.41)分、(1.01±0.23)、(91.51±28.34)μmol/L、(0.96±0.28)mg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson法分析结果显示,S-AKI患儿血清miR-93-5p与Scr、Cys-C呈负相关(r=-0.621、-0.720,P<0.05),miR-424-5p与Scr、Cys-C呈正相关(r=0.503、0.538,P<0.05);经多因素Logistic回归分析结果显示,miR-424-5p、Scr、Cys-C是影响脓毒症患儿并发AKI的危险因素,miR-93-5p是保护因素(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清miR-93-5p、miR-424-5p以及两者联合诊断脓毒血症患儿并发AKI的AUC分别为0.856、0.860、0.949,联合诊断的敏感度为90.00%,特异性为91.07%,两者联合优于血清miR-93-5p、miR-424-5p各自单独诊断(Z两者联合-miR-93-5p=2.897、Z两者联合-miR-424-5p=2.706,P=0.004、P=0.007)。结论S-AKI患儿血清miR-93-5p水平显著下调,miR-424-5p水平显著上调,两者联合诊断脓毒血症患儿并发AKI具有更高价值。

微RNA-93-5p对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及机制

目的探讨血浆微RNA(miR)-93-5p对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及其可能机制。方法选择2022年1月至2023年1月焦作市人民医院收治的120例育龄期PCOS患者为PCOS组,选择同期在本院体检的18例育龄期健康女性为对照组。收集2组受试者的年龄、体质量和身高,计算体质量指数(BMI)。2组受试者均在自然月经周期的卵泡期或黄体酮诱导的撤退性出血期采集空腹静脉血,采用电化学法测定血清黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、总睾酮(TT)、抗米勒管激素(AMH)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)水平,并计算胰岛素抵抗稳态模型(HOMA-IR);采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2组受试者血浆中miR-93-5p表达水平。取对数生长期人卵巢颗粒细胞KGN,以每孔3×10^(5)个细胞接种至6孔板中,随机分为miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组、阴性对照(NC)组、空白对照组。miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics;LY294002+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50 mmol·L^(-1) LY294002处理;AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50μmol·L^(-1) AZD5363处理;NC组KGN细胞转染阴性对照质粒;空白对照组KGN细胞不做任何处理。应用qRT-PCR法检测各组KGN细胞中miR-93-5p表达,细胞计数试剂盒-8试验检测各组KGN细胞增殖情况。结果PCOS组与对照组受试者的年龄及FSH、ALT、AST水平比较差异无统计学意义(P>0.05);PCOS组患者的BMI、TT、AMH、LH、FINS、FBG、HOMA-IR显著高于对照组(P<0.05)。PCOS组患者血浆中miR-93-5p相对表达量显著高于对照组(t=-5.549,P<0.001)。miR-93-5p与TT、FINS、HOMA-IR呈中度正相关(r=0.434、0.622、0.586,P<0.001),与FBG和LH呈低度正相关(r=0.398、0.398,P<0.001)。ROC曲线显示,血浆miR-93-5p诊断PCOS的最佳临界值为1.380,曲线下面积为0.906(95%置信区间:0.839~0.973,P<0.001),敏感度为0.858,特异度为0.833,约登指数为0.691。miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞中miR-93-5p相对表达量均显著高于空白对照组和NC组(P<0.05)。培养24、48、72 h时,miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞的增殖能力显著高于空白对照组和NC组(P<0.05);LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组细胞的增殖能力显著低于miR-93-5p mimics组(P<0.05)。结论PCOS患者血浆miR-93-5p呈过表达,miR-93-5p可能通过基于调控磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激B信号通路介导PCOS卵巢颗粒细胞增殖来参与PCOS的发生发展,血浆miR-93-5p水平对PCOS有一定的诊断价值。

miR-93-5p通过PI3K/AKT通路调控HepG2细胞自噬

目的:探究miR-93-5p对HepG2细胞增殖、自噬、葡萄糖消耗以及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路的影响。方法:高浓度葡萄糖诱导构建胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,设计合成miR-93-5p inhibitor和NC,结合自噬抑制剂3-MA,将细胞分为Control组、IR组、IR+inhibitor NC组、IR+inhibitor组、IR+3-MA+inhibitor组。CCK8法检测各组细胞增殖活力,试剂盒检测各组细胞葡萄糖消耗量和细胞糖原合成情况,Western-Blot法检测细胞自噬基因微管相关蛋白1轻链3(autophagy genes microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-I、LC3-II、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)蛋白、PI3K/AKT通路蛋白(AKT、p-AKT)的表达。结果:与对照组相比,IR组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达下降(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均增加(P<0.01)。与IR组和IR+inhibitor NC组相比,IR+inhibitor组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达增加(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均下降(P<0.01)。与IR+inhibitor组相比,3-MA能逆转miR-93-5p inhibitor的作用。结论:miR-93-5p通过PI3K/AKT通路促进HepG2细胞自噬,进而抑制胰岛素抵抗,缓解糖尿病造成的机体损伤。

miR-93-5p/FOXJ2轴介导胃癌细胞的生物学功能

目的:评估miR-93-5p对胃癌细胞的调节和功能。方法:采用qPCR检测miR-93-5p在胃癌组织、胃癌细胞系中表达,MTT、克隆形成、Transwell实验检测miR-93-5p对胃癌细胞增殖、侵袭的影响,双荧光素酶报告基因实验检测miR-93-5p与FOXJ2的靶向关系。结果:miR-93-5p在胃癌细胞系和胃癌组织中表达升高,抑制miR-93-5p表达后胃癌细胞增殖和侵袭能力受抑。双荧光素酶报告基因检测显示,miR-93-5p mimic显著降低MKN28和MKN45细胞Wt-FOXJ2相对荧光素酶活性,FOXJ2为胃癌细胞中miR-93-5p的直接靶基因。结论:miR-93-5p靶向FOXJ2促进胃癌细胞的增殖和侵袭,miR-93-5p/FOXJ2轴可能是判断胃癌预后的生物标志物和治疗靶点。

支气管哮喘患儿血清外泌体miR-93-5p检测的价值

目的探讨支气管哮喘患儿血清外泌体微小RNA-93-5p(miR-93-5p)水平检测的价值,及其与气道炎症和肺功能的相关性。方法选取2020年4月—2022年4月内江市第二人民医院支气管哮喘患儿133例(哮喘组)和体检健康儿童133名(正常对照组)。根据支气管哮喘病情将133例患儿分为急性发作期组(51例)和临床缓解期组(82例)。检测所有研究对象血清外泌体miR-93-5p相对表达量、气道炎症指标[血清IgE、白细胞介素(IL)-17、嗜酸性粒细胞绝对数(EO#)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-8]和肺功能[用力肺活量(FVC%)、一秒用力呼气容积(FEV1%)、FEV1占FVC的百分比(FEV1/FVC%)]。采用Pearson相关分析评估各项指标的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各项指标诊断支气管哮喘患儿急性发作的效能。结果与正常对照组比较,哮喘组血清外泌体miR-93-5p和IgE、IL-17、EO#、CRP、TNF-α、IL-8均升高(P<0.001),FVC%、FEV1%和FEV1/FVC%均降低(P<0.001)。Pearson相关分析结果显示,哮喘组血清外泌体miR-93-5p与IgE、IL-17、EO#、CRP、IL-8均呈正相关(r值分别为0.319、0.440、0.535、0.279、0.296,P<0.05),与FEV1%、FVC%、FEV1/FVC%均呈负相关(r值分别为-0.304、-0.295、-0.327,P<0.05)。与临床缓解期组比较,急性发作期组血清外泌体miR-93-5p相对表达量降低(P<0.001),IgE、IL-17、EO#、CRP、IL-8水平升高(P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,血清外泌体miR-93-5p、IgE、IL-17、EO#、CRP、TNF-α、IL-8诊断支气管哮喘急性发作的曲线下面积(AUC)分别为0.88、0.60、0.65、0.64、0.69、0.62、0.66。结论支气管哮喘患儿血清外泌体miR-93-5p水平显著升高,且与患儿肺功能、气道炎症密切相关,或可作为支气管哮喘病情评估的指标。

miRNA-93-5p通过调控FBXW7基因参与宫颈癌进展

目的:探究miRNA-93-5p是否可通过调控FBXW7基因影响宫颈癌进展。方法:收集20例临床宫颈癌患者组织,分组为癌旁组织、宫颈癌组织,RT-qPCR检测宫颈组织中miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平,并检测人正常宫颈上皮细胞H8、宫颈癌细胞Caski、HeLa、C33A细胞miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平。选择宫颈癌细胞C33A,分为对照组(正常培养)、miRNA-93-5p抑制组(转染低表达miRNA-93-5p),FBXW7激活组(转染高表达FBXW7),转染48h后收集细胞,RT-qPCR检测各组细胞中miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平,Western blotting检侧C33A细胞中FBXW7蛋白水平,流式细胞术检测C33A细胞凋亡率,平板克隆检测C33A细胞克隆能力,划痕实验检测C33A细胞迁移能力,Transwell实验检测C33A细胞侵袭能力。结果:与癌旁组织相比,宫颈癌组织中miRNA-93-5p mRNA水平增加、FBXW7 mRNA水平减少(P<0.001)。与H8细胞相比,Caski、HeLa、C33A细胞中miRNA-93-5p mRNA水平增加、FBXW7 mRNA水平减少(P<0.05),后续实验中选择C33A宫颈癌细胞株进行研究。与对照组相比,miRNA-93-5p抑制组C33A细胞中miRNA-93-5p mRNA水平显著降低(P<0.001),细胞凋亡率增加(P<0.001),克隆能力下降(P<0.01),细胞迁移距离减少(P<0.01),侵袭能力下降(P<0.01),FBXW7蛋白及mRNA水平显著增加(P<0.01)。与对照组相比,FBXW7激活组C33A细胞中FBXW7 mRNA水平显著增加(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.001),克隆能力下降(P<0.001),迁移距离减少(P<0.01),侵袭能力下降(P<0.01)。结论:miRNA-93-5p可通过调控FBXW7基因影响宫颈癌细胞的凋亡、增殖、迁移、侵袭水平。

miR-93-5p对胰岛素抵抗细胞模型中HGF、GLUT4表达及GLUT4分布的影响

目的探讨miR-93-5p对胰岛素抵抗细胞模型中肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)表达及GLUT4分布的影响。方法将细胞分为对照组、模型组、miR-93-5p inhibitor组、inhibitor-NC组、miR-93-5p mimics组和mimics-NC组。对照组细胞正常培养,模型组构建胰岛素抵抗细胞模型,其余组分别转染miR-93-5p inhibitor、inhibitor-NC、miR-93-5p mimics、mimics-NC,转染完成后构建胰岛素抵抗模型。CCK-8检测细胞存活率;试剂盒检测细胞上清液中葡萄糖含量,计算葡萄糖消耗量;qPCR检测miR-93-5p、HGF、GLUT4的mRNA表达水平;Western blot检测HGF、GLUT4蛋白表达水平;免疫荧光检测GLUT4的表达和分布。结果与对照组相比,模型组细胞存活率、葡萄糖消耗量、HGF、GLUT4 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(均P<0.01),miR-93-5p水平显著升高(P<0.01),GLUT4膜分布减少。与模型组相比,miR-93-5p inhibitor组细胞存活率、葡萄糖消耗量、HGF、GLUT4 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05),miR-93-5p水平显著降低(P<0.01),GLUT4膜分布增多;mimics组结果相反。结论miR-93-5p能够抑制胰岛素抵抗细胞模型中HGF和GLUT4的表达,并减少GLUT4的膜分布,具有促进胰岛素抵抗的功能。

miR-93-5p靶向下调ROCK2表达对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-93-5p对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制。方法:选择类风湿性关节炎(RA)患者(RA组,n=37)和接受关节置换手术的关节创伤患者(对照组,n=30)作为研究对象,从RA患者滑膜组织分离出RA-FLSs,采用免疫荧光法和流式细胞术鉴定细胞。将RA-FLSs分为空白组、mimics NC组(转染miR-93-5p mimics NC)、mimics组(转染miR-93-5p mimics)、OE-NC组(转染ROCK2过表达空载质粒)、OE-Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK)2组(转染ROCK2过表达质粒)、mimics+OE-NC组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达空载质粒)和mimics+OE-ROCK2组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达质粒)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组患者滑膜组织和各组细胞中miR-93-5p和ROCK2 mRNA表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,EdU染色检测各组细胞中EdU阳性细胞率,Transwell小室实验检测各组RA-FLSs迁移和侵袭数,Western blotting法检测各组细胞中ROCK2、Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-93-5p与ROCK2之间的靶向关系。结果:免疫荧光法检测,Vimentin蛋白表达呈阳性。流式细胞术检测,第3代RA-FLSs表面CD55呈阳性表达,CD14和CD68呈阴性表达,证实分离的细胞为RA-FLSs。RT-qPCR法检测,与对照组比较,RA组患者滑膜组织中miR-93-5p表达水平明显降低(P<0.01),ROCK2 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。与空白组和mimics NC组比较,mimics组细胞中miR-93-5p表达水平明显升高(P<0.01),ROCK2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。CCK-8法和EdU染色检测,与mimics NC组比较,mimics组细胞增殖活性和EdU阳性细胞率明显降低(P<0.01),OE-ROCK2组细胞增殖活性和EdU阳性细胞率明显升高(P<0.01);与mimics组比较,mimics+OE-ROCK2组细胞增殖活性和EdU阳性细胞率明显升高(P<0.01)。Transwell小室实验检测,与mimics NC组比较,mimics组RA-FLSs的迁移和侵袭数明显减少(P<0.01),OE-ROCK2组RA-FLSs的迁移和侵袭数明显增加(P<0.01);与mimics组比较,mimics+OE-ROCK2组RA-FLSs的迁移和侵袭数明显增加(P<0.01)。Western blotting法检测,与mimics NC组比较,mimics组细胞中ROCK2、Ki-67、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低(P<0.01),OE-ROCK2组细胞中ROCK2、Ki-67、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与mimics组比较,mimics+OE-ROCK2组细胞中ROCK2、Ki-67、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。miR-93-5p与ROCK2-3’-UTR之间存在靶向结合位点。双荧光素酶报告实验验证转染miR-93-5p mimic可明显降低ROCK野生型(ROCK2-WT)组细胞中荧光素酶活性(P<0.01)。结论:过表达miR-93-5p通过靶向下调ROCK2表达抑制RA-FLSs的增殖、迁移和侵袭。

miR-93-5p在骨碎补总黄酮介导的兔骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用及机制

目的:探讨miR-93-5p在骨碎补总黄酮(TFRD)介导的兔骨髓间充质干细胞(rBMSCs)成骨分化中的作用。方法:采用成骨培养液对rBMSCs进行成骨诱导分化,通过茜素红S和油红O染色分别检测rBMSCs的成骨和成脂分化。运用荧光定量PCR(qPCR)检测miR-93-5p的表达,Western免疫印迹检测FZD6、ALP、Runx2和WNT通路相关蛋白(Dishevelled和β-catenin)的蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因分析法检验miR-93-5p和FZD6的结合。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与对照组相比,TFRD促进rBMSCs的成骨分化,抑制miR-93-5p的表达,促进FZD6和成骨相关基因ALP和Runx2的表达。双荧光素酶报告基因分析表明,FZD6是miR-93-5p的下游靶基因。过表达miR-93-5p抑制rBMSCs的成骨分化和FZD6、ALP和Runx2的蛋白表达,而过表达FZD6逆转miR-93-5p的抑制作用。使用WNT通路抑制剂(KYA1797K)处理rBMSCs,可逆转TFRD对成骨分化的促进作用,导致成骨细胞分化减少,ALP、Runx2和WNT通路相关蛋白(Dishevelled和β-catenin)表达下调。结论:TFRD通过下调miR-93-5p,促进FZD6的表达,激活WNT信号通路,促进rBMSCs成骨分化,从而有助于口腔种植体骨结合。

LncRNA FGD5-AS1调节miR-93-5p/BMP2轴促进人骨髓间充质干细胞成骨分化

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1调节微小RNA miR-93-5p/骨形态发生蛋白-2(BMP2)轴对人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)成骨分化的影响。方法取对数增殖期的hBM-MSCs,分别检测成骨分化前、后lncRNA FGD5-AS1、miR-93-5p、BMP2 mRNA表达水平;将细胞分别转染或共转染pcDNA FGD5-AS1、miR-93-5p inhibitor、miR-93-5p mimics及相应阴性对照,分组为pcDNA NC组、pcDNA FGD5-AS1组、inhibitor NC组、miR-93-5p inhibitor组、pcDNA FGD5-AS1+mimics NC组、pcDNA FGD5-AS1+miR-93-5p mimics组,取未转染细胞作为空白组;CCK-8法检测细胞增殖;碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测其活性;茜素红染色鉴定细胞矿化结节形成;Western blot检测BMP2及成骨相关标志物--骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、成骨相关转录因子(OSX)水平;双荧光素酶报告基因实验分别验证miR-93-5p与FGD5-AS1、BMP2的靶向关系。结果miR-93-5p分别与FGD5-AS1、BMP2存在靶向关系。与分化前相比,hBM-MSCs成骨分化后lncRNA FGD5-AS1、BMP2 mRNA表达显著增加,miR-93-5p表达显著下降(P<0.05);与pcDNA NC组相比,pcDNA FGD5-AS1组FGD5-AS1表达显著增加(P<0.05),表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);与inhibitor NC组相比,miR-93-5p inhibitor组miR-93-5p表达降低,表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);miR-93-5p过表达可抑制FGD5-AS1对细胞成骨分化的促进作用(P<0.05)。结论上调FGD5-AS1可以促进细胞成骨分化,可能与miR-93-5p/BMP2轴有关。

甲状腺癌组织中miR-93-5p、BRMS1L的表达水平及其临床意义

目的 探讨微小RNA-93-5p(miR-93-5p)与乳腺癌转移抑制基因1相似基因(BRMS1L)在甲状腺癌组织内的表达与临床意义。方法 选取68例甲状腺癌患者,术中采集甲状腺癌组织与癌旁正常组织,以逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)与免疫组织化学法分别测定miR-93-5p与BRMS1L表达水平;分析miR-93-5p、BRMS1L表达与患者性别、年龄、体重指数(BMI)、TNM分期、淋巴结转移、分化程度等病理特征之间的关系。另外,随访3年,以Kaplan-Meier法分析miR-93-5p、BRMS1L表达与患者预后的关系。结果 癌组织miR-93-5p相对表达量高于癌旁组织,BRMS1L阳性表达率低于癌旁组织,有统计学差异(P<0.05)。miR-93-5p、BRMS1L表达与患者的性别、BMI无关(P>0.05),与患者的年龄、TNM分期、淋巴结转移、分化程度有关(P<0.05)。Kaplan-Meier结果显示:随访3年内,miR-93-5p高表达患者[47.62%(20/42)]与BRMS1L阴性表达患者[51.11%(23/45)]的3年生存率低于miR-93-5p低表达患者[73.08%(19/26)]与BRMS1L阳性表达患者[78.26%(18/23)]。结论 甲状腺癌组织内miR-93-5p、BRMS1L呈异常表达,两者表达与年龄、TNM分期、淋巴结转移、分化程度密切相关,且miR-93-5p高表达与BRMS1L低表达患者生存率更低,预后更差。

环状RNA-SCAF8通过miR-93-5p/TXNIP通路促进血管内皮细胞焦亡

目的:探究环状RNA(circRNA)-SR相关CTD相关因子8(SCAF8)在高糖环境下对血管内皮细胞焦亡发挥的作用及机制。方法:将来源于人脐静脉内皮细胞分为正常对照组、高糖对照组分别置于5、33 mmol/L葡萄糖浓度的细胞培养基培养,RNA对照组、circRNA-SCAF8抑制组、微RNA(miR)-93-5p过表达组和miR-93-5p抑制组分别在高糖环境下加入无功能siRNA、circRNA-SCAF8抑制分子、miR-93-5p过表达分子和miR-93-5p抑制剂。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、流式细胞术和Hoechst 33342/碘化丙啶双荧光染色法检测细胞存活率和焦亡率,采用蛋白质印迹法和酶联免疫吸附法检测凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、Gasdermin D蛋白(GSDMD)、NOD样受体家族蛋白3(NLRP-3)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)、IL-18和IL-1β等焦亡相关因子表达,采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circRNA-SCAF8、miR-93-5p和TXNIP的基因表达,采用荧光原位杂交法定位circRNA-SCAF8和miR-93-5p,采用双荧光素酶实验验证miR-93-5p与上下游分子的靶向调控关系。结果:与RNA对照组比较,circRNASCAF8抑制组和miR-93-5p过表达组细胞存活率升高(均P<0.01),细胞焦亡率降低(均P<0.01),TXNIP、NLRP-3、caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18和IL-1β等焦亡相关因子的表达量显著减少(均P<0.05);抑制circRNA-SCAF8后miR-93-5p的表达量显著增加(P<0.01),过表达miR-93-5p后circRNA-SCAF8的表达有降低趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。miR-93-5p通过与circRNA-SCAF8的3'UTR区结合下调circRNA-SCAF8表达,miR-93-5p通过与TXNIP的3'UTR区结合下调TXNIP表达。circRNA-SCAF8和miR-93-5p均位于细胞质中,在细胞中高度关联。qRT-PCR结果显示,过表达或抑制miR-93-5p后,TXNIP的相对表达量较RNA对照组分别增加或减少(均P<0.05),证明miR-93-5p可调控TXNIP基因表达。结论:circRNASCAF8/miR-93-5p/TXNIP通路可能参与调控高糖环境下血管内皮细胞焦亡。

miR-93-5p靶向PKMYT1对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-93-5p靶向蛋白激酶膜相关酪氨酸/苏氨酸1(protein kinase membrane associated tyrosine/threonine 1,PKMYT1)对肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法使用LipofectamineTM2000分别将质粒inhibitor NC、miR-93-5p inhibitor、pcDNA、pc-PKMYT1转染至A549细胞中,记为inhibitor NC组、miR-93-5p inhibitor组、pcDNA组和pc-PKMYT1组,同时将未转染的细胞记为control组。利用qRT-PCR检测细胞中miR-93-5p、PKMYT1 mRNA的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-93-5p与PKMYT1的靶向关系;CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测细胞中PKMYT1、细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期素B1(Cyclin B1)的蛋白表达水平。结果与BEAS-2B细胞相比,SPC-A-1细胞、A549细胞、LTEP-α-2细胞中miR-93-5p表达水平均升高(均P<0.01),PKMYT1 mRNA和蛋白表达水平均降低(均P<0.001)。转染24 h后,分别与control组、inhibitor NC组相比,miR-93-5p inhibitor组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低(均P<0.05),G2/M期细胞比例升高(P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR-93-5p NC+3′UTR-WT组相比,miR-93-5p mimic+3′UTR-WT组细胞相对荧光素酶活性下降(P<0.001)。转染24 h后,与pcDNA组相比,pc-PKMYT1组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低(均P<0.001),G2/M期细胞比例升高(P<0.001)。结论沉默miR-93-5p可能通过上调PKMYT1表达水平抑制肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。

miR-93-5p对缺氧/复氧H9c2心肌细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨miR-93-5p对缺氧/复氧(H/R)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的作用机制。方法:取对数生长期的H9c2心肌细胞用于实验,将细胞分为control组、H/R组、miR-NC组、miR-93-5p mimic组。miR-NC组转染miR-93-5p阴性对照片段50μmol/L,miR-93-5p mimic组转染miR-93-5p模拟物。24 h后,除control组外,H/R组、miR-NC组、miR-93-5p mimic组建立H/R模型。2 h后采用聚合酶链式反应(PCR)法检测心肌细胞中miR-93-5p表达水平,噻唑蓝(MTT)比色法检测心肌细胞存活率,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,二硫双硝基苯甲酸定量法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量,蛋白免疫印迹法检测活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果:与control组比较,H/R组miR-93-5p表达、心肌细胞存活率、SOD和GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达降低,心肌细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与H/R组和miR-NC组比较,miR-93-5p mimic组miR-93-5p表达、心肌细胞存活率、SOD和GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达升高,心肌细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-93-5p通过降低H/R心肌细胞的炎症和氧化应激水平,发挥抗细胞凋亡作用。

利拉鲁肽上调miR-93-5p对缺氧/复氧H9c2心肌细胞损伤的影响

目的:探讨利拉鲁肽上调miR-93-5p对缺氧/复氧H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法:取对数期H9c2心肌细胞,分为对照组、缺氧/复氧组、利拉鲁肽组、anti-miR-93-5p组、anti-miR-93-5p+利拉鲁肽组。anti-miR-93-5p组和anti-miR-93-5p+利拉鲁肽组细胞转染anti-miR-93-5p 50μmol/L,24 h后,anti-miR-93-5p+利拉鲁肽组、利拉鲁肽组加入利拉鲁肽100μmol/L,预处理12 h。除对照组外,其余组建立缺氧/复氧模型。检测比较各组心肌细胞存活率、心肌细胞凋亡率、氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性]、miR-93-5p表达、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。结果:与对照组比较,缺氧/复氧组心肌细胞存活率、SOD、GSH-Px活性、miR-93-5p水平、Bcl-2蛋白表达降低,心肌细胞凋亡率、MDA含量、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达升高(P<0.05);与缺氧/复氧组比较,利拉鲁肽组心肌细胞存活率、SOD、GSH-Px活性、miR-93-5p水平、Bcl-2蛋白表达升高,心肌细胞凋亡率、MDA含量、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达降低,anti-miR-93-5p组心肌细胞存活率、SOD、GSH-Px活性、miR-93-5p水平、Bcl-2蛋白表达降低,心肌细胞凋亡率、MDA含量、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与利拉鲁肽组比较,anti-miR-93-5p+利拉鲁肽组心肌细胞存活率、SOD、GSH-Px活性、miR-93-5p水平、Bcl-2蛋白表达降低,心肌细胞凋亡率、MDA含量、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达升高(P<0.05);与anti-miR-93-5p组比较,anti-miR-93-5p+利拉鲁肽组心肌细胞存活率、SOD、GSH-Px活性、miR-93-5p水平、Bcl-2蛋白表达升高,心肌细胞凋亡率、MDA含量、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。结论:利拉鲁肽可改善缺氧/复氧心肌细胞损伤,可能是通过上调miR-93-5p表达、降低细胞氧化应激水平、减少细胞凋亡发挥其心肌保护作用。

呼吸道合胞病毒下呼吸道感染患儿外周血miR-93-5p表达与Th1/Th2平衡的关系

目的 呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus,RSV)下呼吸道感染患儿外周血微小RNA-93-5p表达与辅助型T细胞1/2(Th1/Th2)平衡的关系。方法 选取儿科建档就诊的RSV下呼吸道感染患儿58例为RSV组,同时选取年龄性别匹配的健康儿童60例为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测血清miR-93-5p水平;流式细胞仪计数Th1、Th2百分率,计算Th1/Th2表达,酶联免疫吸附法检测白细胞介素2(interleukin 2,IL-2)、IL-4、IL-10及干扰素γ(interferon γ,IFN-γ)水平,Spearman分析miR-93-5p与Th1/Th2的关系;Logistics回归分析影响RSV下呼吸道感染发生的危险因素。结果 RSV组miR-93-5p水平高于对照组(P<0.05);RSV组Th1、Th1/Th2低于对照组(P<0.05),RSV组Th2高于对照组;RSV组IL-2、IFN-γ水平低于对照组(P<0.05);RSV组IL-4、IL-10水平高于对照组(P<0.05);RSV组miR-93-5p与IL-2、IFN-γ、Th1/Th2比值呈负相关性(P<0.05);与IL-4、IL-10呈正相关性(P<0.05);Logistics回归分析显示高水平miR-93-5p与低水平的Th1/Th2是影响RSV下呼吸道感染的危险因素(P<0.05)。结论 RSV下呼吸道感染患儿外周血miR-93-5p呈高表达,其高表达可能与Th1/Th2平衡密切相关。

老年胃癌患者血清miR-93-5p水平及其与临床特征和预后的关系

目的探讨老年胃癌患者血清miR-93-5p水平及其与临床特征和预后的关系。方法收集老年胃癌患者160例和同期老年健康体检者160例分别作为胃癌组和对照组。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定血清miR-93-5p水平。结果胃癌组血清miR-93-5p水平明显高于对照组(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤最大径、分化程度胃癌患者血清miR-93-5p水平比较差异无统计学意义(P>0.05);不同TNM分期、局部浸润深度、淋巴结转移胃癌患者血清miR-93-5p水平比较差异有统计学意义(P<0.05),TNM分期高、局部浸润深度深、有淋巴结转移胃癌患者血清miR-93-5p水平明显高于TNM分期低、局部浸润深度浅、无淋巴结转移者。血清miR-93-5p诊断胃癌的受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.871,95%CI为0.868~0.874,根据此截断值判断胃癌的灵敏度为71.25%,特异度为96.25%。血清miR-93-5p高表达组5年总生存率(51.09%)和无病生存率(39.13%)均明显低于低表达组(79.41%、70.59%,χ^2=13.477、15.516,P<0.001)。Cox比例风险模型结果显示:血清miR-93-5p水平、TNM分期、局部浸润深度、分化程度、淋巴结转移为胃癌预后的独立影响因素(P<0.05)。结论胃癌患者血清miR-93-5p水平升高,且与临床分期、浸润深度、淋巴结转移关系密切,在胃癌诊断和预后评估中具有重要价值。

MiRNA-93-5p对VEGF的转录调控及其与梅花鹿茸细胞增殖的关系

为了探讨miRNA-93-5p对梅花鹿血管内皮生长因子(VEGF)的转录调控作用及其与鹿茸细胞生长的关系,分离了鹿茸顶端软骨组织细胞,利用Trizol试剂法提取细胞总RNA,反转录合成c DNA。根据Gen Bank已发表的相关序列设计梅花鹿VEGF基因的3'端非编码区部分序列(3'UTR)特异引物并进行克隆,构建VEGF基因的3'UTR野生型及其突变体序列双荧光素酶报告基因载体并进行荧光素酶活性检测。再将人工合成的miRNA-93-5p模拟物转染鹿茸软骨细胞,MTT法检测鹿茸细胞体外增殖的变化;Western blotting分析VEGF蛋白的表达丰度。结果表明:成功获得了鹿茸组织VEGF基因的3'UTR序列,野生型序列长度为356 bp,突变体长度为336bp。荧光素酶活性检测结果表明,转染野生型质粒组细胞荧光素酶活性降低,而转染突变体组细胞荧光素酶活性无明显变化。MTT法和Western blotting结果显示,鹿茸细胞的体外增殖受到抑制,VEGF蛋白的表达水平下降,且呈时间依赖性。

miR-93-5p 靶向CCNG2基因对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:研究miR-93-5p对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR、Western blot检测甲状腺癌细胞SW579、人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-93-5p、CCNG2的表达;将anti-miR-93-5p组(转染anti-miR-93-5p)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-CCNG2组(转染pcDNA-CCNG2)、anti-miR-93-5p+si-con组(共转染anti-miR-93-5p和si-con)、anti-miR-93-5p+si-CCNG2组(共转染anti-miR-93-5p和si-CCNG2),均用脂质体法转染至SW579细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1相比,甲状腺癌细胞SW579中miR-93-5p表达显著升高,CCNG2表达显著降低(P<0.05);抑制miR-93-5p、过表达CCNG2均可抑制SW579细胞增殖,促进凋亡;miR-93-5p可直接抑制SW579细胞中CCNG2的表达,敲减CCNG2可逆转抑制miR-93-5p对SW579细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:抑制miR-93-5p可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向负调控CCNG2有关,将可为分化型甲状腺癌的预防和治疗提供新靶点。

miR-17-5p/20,miR-93-5p,miR-106-5p及FOXJ2在细胞周期中的作用研究

近年来miRNA在疾病中的作用逐渐被认识,其中miR-17-5p/20、miR-93-5p及miR-106-5p在多种疾病中的作用被发现。而且研究中发现FOXJ2与miRNA之间具有关联。目前研究发现miR-17-5p/20、miR-93-5p及miR-106-5p主要通过调节细胞周期发挥作用,而FOXJ2可作为miRNA下游因子发挥作用,本文主要对miR-17-5p/20、miR-93-5p、miR-106-5p及FOXJ2在细胞周期中的作用进行系统论述,为后续研究与疾病治疗提供新的思路。