microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进展

microRNA在肌、骨代谢疾病中的作用已成为当前研究热点。本文对microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进行总结。首先,本文介绍microRNA的生物发生过程和基因调控机制。其次,本文分别介绍相关microRNA亚型在骨骼肌和骨骼重建中的作用。在microRNA对骨骼肌作用机制方面,归纳了5个方面:(1)调节转录因子MyoD的活化和表达;(2)调节其他肌肉特异性转录因子的表达;(3)影响肌肉细胞的增殖和分化;(4)影响肌肉细胞表型;(5)microRNA的协同作用。并从促进成骨和抑制破骨两方面说明microRNA影响骨重塑的作用机制。还对具有肌骨共生的microRNA进行了总结归纳。最后对相关研究中存在的问题与不足进行总结和展望,对肌少-骨质疏松症的防治具有积极意义。

结肠癌耐药细胞株LoVo/5-Fu中microRNA表达的初步研究

目的建立结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU并初步筛选可能的耐药相关的microRNA。方法采用5-FU浓度递增法建立人结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU,观察其生长规律并绘制细胞生长曲线;用MTT法鉴定耐药细胞株耐药性并计算耐药指数(RI);用microRNA芯片技术检测耐药细胞株LoVo/5-FU与其亲本细胞株LoVo中mi-croRNA的表达谱,筛选差异表达的microRNA;用实时荧光定量PCR方法对筛选出的部分差异microRNA在耐药细胞及其亲本细胞中的表达情况进行验证。结果 LoVo/5-FU细胞与LoVo细胞相比,生长缓慢,细胞体积增大,耐药株LoVo/5-FU细胞相对于其亲本LoVo细胞的耐药倍数为8.08。microRNA芯片的结果显示,耐药株LoVo/5-FU细胞与亲本LoVo细胞比较,有10个microRNA表达上调,13个microRNA表达下调;实时荧光定量pcr的结果进一步证实mir-210、mir196a、mir-1281在LoVo/5-FU中显著上调,而let-7f、mir-1228显著下调,其中mir-210在LoVo/5-FU与LoVo中的表达有明显差异。结论 LoVo/5-FU细胞株耐药性稳定,筛选获得的差异miRNA可能通过调控其靶基因而参与人结肠癌细胞对5-Fu的耐药,为进一步研究microRNA在结肠癌耐药机制中的作用奠定基础。

MicroRNA-122-5p与MicroRNA-199a-5p在EMS患者血清的表达及临床意义

目的探讨micro RNA-122-5p(mi R-122-5p)与micro RNA-199a-5p(mi R-199a-5p)在子宫内膜异位症(EMS)患者血清的表达及临床意义。方法前瞻性设计,随机选取2016年1月—2017年12月华北石油管理局总医院诊治的EMS患者90例(EMS组)及同期不孕症检查的患者70例(对照组)为研究对象。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组人群血清的mi R-122-5p和mi R-199a-5p的表达及白细胞介素-6(IL-6)的表达,并分析其与临床特征的相关性。构建受试者操作特征(ROC)曲线。结果 EMS组患者的血清及腹腔液中IL-6、miR-122-5p、miR-199a-5p的表达与对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05),EMS组均增高。miR-122-5p的表达与IL-6水平(r=0.578,P <0.05)、miR-199a-5p表达(r=0.721,P <0.05)呈正相关。miR-199a-5p的表达与IL-6水平(r=0.562,P<0.05)呈正相关。miR-122-5p和miR-199a-5p检测EMS的敏感性分别为94.7%和92.1%,特异性分别为90.5%和88.6%。结论血清miR-122-5p和miR-199a-5p在EMS患者中的表达增加,miR-122-5p与miR-199a-5p有成为诊断子宫内膜异位症的生物标志物的潜力。

MicroRNA转录后调控欧美杨R2R3-MYBs抗锈菌表达

[目的]强致病锈菌亲和型树种欧美杨适合做寄主感病分子机理研究。研究表明转录因子及其调控miRNA在杨树抗/感病过程中起重要的信号传导和调控作用,决定杨树与锈菌的亲和性。为深入研究杨树感病性,对欧美杨R2R3-MYB转录因子及其调控miRNA进行研究。[方法]构建锈菌侵染和未侵染miRNA组、降解组文库和基因表达谱文库,进行高通量测序。对基因表达谱结果进行生物信息学分析鉴定R2R3-MYBs,根据miRNA组和降解组数据确定R2R3-MYBs调控miRNA。应用定量PCR技术鉴定候选R2R3-MYBs和其调控miRNA的表达量。[结果]共鉴定到230个欧美杨R2R3-MYBs,其中55个R2R3-MYBs在锈菌侵染和未侵染叶片间表达量差异显著,其余表达量变化不显著。基于降解组,共鉴定到由22个miRNA调控18个R2R3-MYBs的86个转录后调控关系。定量PCR结果表明PC-3p-2521022_1与Pnd MYB173存在转录后负调控关系。预测的R2R3-MYB靶基因涉及水杨酸、茉莉酸、乙烯和脱落酸等多个植物激素抗性路径。[结论]E4强致病锈菌侵染导致亲和型树种欧美杨23.9%的R2R3-MYBs表达量发生变化,锈菌侵染不但可以影响R2R3-MYBs的表达量,还可以启动或关闭R2R3-MYBs的表达。欧美杨在E4强致病锈菌胁迫条件下,R2R3-MYBs转录后主要受miR159和miR858家族的miRNA调控。

SVA及α-干扰素对PK-15细胞microRNA转录谱影响的分析

为探究猪塞内卡病毒A(SVA)感染、干扰素(IFN-α)处理对猪肾细胞(PK-15)微RNA(microRNA,miRNA)转录谱的影响,本研究分别构建SVA感染的PK-15(PK-15/SVA)、IFN-α处理的PK-15(PK-15/IFN),SVA感染再经IFN-α处理的PK-15细胞(PK-15/SVA/IFN),通过荧光定量PCR(qPCR)分别检测各组细胞中SVA VP1及IFN-αmRNA的转录水平。结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA及PK-15/SVA/IFN细胞中SVA VP1基因的转录水平极显著升高(P<0.001),PK-15/SVA/IFN中IFN-α的转录水平显著或极显著升高(P<0.05、P<0.01)。通过转录组测序技术(RNA-Seq)分析各组细胞miRNA的转录谱,采用Spss软件统计各组细胞中转录差异miRNA的数量;利用基于负二项分布的DESeq2筛选各组细胞中转录显著差异miRNA;采用miRanda、PITA和RNAhybrid 3个软件预测各组细胞转录显著差异miRNA的靶基因,通过miREvo和mirdeep2软件预测各组细胞中的新miRNA并通过与猪miRNA序列比对得到已知miRNA;分别采用GO功能和KEGG富集分析各组细胞转录显著差异miRNA涉及的生物学功能及信号通路。统计分析结果显示,与PK-15相比,PK-15/IFN、PK-15/SVA和PK-15/SVA/IFN中均存在转录显著差异miRNA,且在SVA感染后细胞中转录的miRNA数量增多,IFN-α刺激则会减少细胞中转录的miRNA数量,SVA感染后再经IFN-α处理则转录的miRNA数量又有所降低。筛选结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA中有167种转录显著差异miRNA,其中94种转录显著上调,73种转录显著下调;与PK-15相比,PK-15/IFN中有98种转录显著差异miRNA,其中55种转录显著上调,43种转录显著下调。预测结果显示,共有290种转录显著差异miRNA有对应靶基因,且共预测到292种新miRNA和345种已知miRNA。选取6种转录显著差异miRNA采用Graphpad prism6.0进行miRNA-mRNA的互作网络展示。结果显示,miR-221-5p的靶基因显著多于其他miRNA,且其靶基因主要与癌症、病毒感染的治疗及宿主的免疫反应有关。GO功能结果显示,在经IFN-α处理或SVA感染后,转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于细胞组分和生物过程等功能。KEGG分析结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA和PK-15/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于Rap1和NF-κB信号通路;与PK-15/IFN相比,PK-15/SVA/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于PI3K-Akt、NF-κB和肿瘤坏死因子(TNF)等抗病毒免疫相关信号通路;与PK-15/SVA相比,PK-15/SVA/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于Rap1、NF-κB、TNF和MAPK信号通路。16种转录显著差异miRNA的qPCR结果与RNA-Seq结果一致。综上所述,本研究首次证实IFN-α处理、SVA感染均显著影响PK-15细胞miRNA转录谱,前者促进miRNA的转录,后者则抑制miRNA的转录。其中转录显著差异miRNA的靶基因与宿主抗病毒及肿瘤免疫均等信号通路密切相关,该结果为阐明SVA感染宿主细胞后非编码RNA转录谱变化的分子机制研究奠定基础。

热适应/热射病大鼠血清中microRNA let-7b的变化及意义

目的探究热适应/热射病大鼠模型血清中microRNA let-7b表达的变化及其与HSP70,IL-6,TNF-αTGF-β和IL-12的相关性,分析其临床意义。方法在第二军医大学实验动物中心选取肛温、体重、用龄基本一致的雄鼠60只随机均分为对照组、热适应组、热射病组,于仿真热气候动物舱中建立热适应/热射病大鼠模型后采集心尖血并分离血清。以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清中microRNA let-7b,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中HSP70,IL-6,TNF-α,TGF-β和IL-12的蛋白水平。三组间计量资料的比较采用Kruskal-Wallis H检验,以Spearman秩相关系数表示热射病组两变量之间的相关性。结果 miRNA let-7b在对照组、热适应组、热射病组的M分别为0.99,1.04和1.93,Q分别为0.30,0.25和0.44,差异具有统计学意义(x^2=38.95,P<0.001),组间两两比较结果显示let-7b在对照组与热适应组表达差异无统计学意义(P>0.05),在对照组与热射病组、热适应组与热射病组表达差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析显示热射病组let-7b/与HSP70,TNF-α和IL-6呈正相关,差异具有统计学意义(r_s=0.579,0.498和0.609,P<0.05)。结论 miRlet-7b可能参与了热射病病理过程,为临床监测高温湿环境下患者的状态提供了潜在的评价指标。

MicroRNA-196a在喉癌组织中的表达及其对喉癌细胞侵袭和转移的影响

目的探讨micro RNA-196a(mi R-196a)在喉癌组织中表达及其对喉癌细胞侵袭和转移的影响。方法选取2015年1月—2017年12月金华市中心医院70例喉癌手术切除标本的喉癌组织和癌旁组织。将人喉癌Hep-2细胞分为空白对照组、阴性对照组及si RNA组。si RNA组细胞转染pc DNA/mi R-196a,阴性对照组细胞转染pc DNA/mi R-NC,空白对照组不做处理。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定癌旁组织和喉癌细胞中mi R-196a水平;Transwell小室测定喉癌细胞侵袭和迁移能力;Western blotting检测喉癌细胞磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-PKB)、Bax及Bcl-2蛋白水平;RT-PCR测定喉癌细胞PI3K、p-PKB、Bax及Bcl-2 m RNA水平。结果喉癌组织中mi R-196a水平高于癌旁组织(P <0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,si RNA组喉癌细胞中mi R-196a水平降低(P<0.05),细胞侵袭和迁移能力下降(P<0.05),PI3K、p-PKB及Bcl-2蛋白和m RNA水平降低(P<0.05),Bax蛋白和m RNA水平升高(P <0.05);空白对照组与阴性对照组细胞各指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论喉癌组织中mi R-196a水平升高,沉默mi R-196a可降低喉癌细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与PI3K/PKB信号通路有关。

胃癌组织中靶向Abl相互作用蛋白-1的microRNA筛选

目的检测3种Abl相互作用蛋-1(ABI-1)相关的microRNA(miRNA)在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达模式,筛选出与胃癌组织相关的靶向ABI-1的miRNA。方法收集59例胃癌术后蜡块标本,包含胃癌组织和癌旁正常组织,抽提石蜡组织中的总RNA。在基因网选择ABI-1相关的miRNA(即miR-181c、miR-148b、miR-9),采用逆转录实时荧光定量PCR法对胃癌组织及癌旁正常组织中的3种miRNA进行检测,计算胃癌组织相对癌旁正常组织中miRNA的相对表达量(2-ΔΔCt)。结果 miR-181c、miR-148b、miR-9在胃癌组织中的相对表达量分别为(2.32±1.04)(P=0.000)、(0.82±0.67)(P=0.321)、(1.07±0.95)(P=0.774),其中miR-181c在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达差异有显著性(P=0.000)。结论 miR-181c在胃癌组织中相对高表达,提示其可能作为靶向ABI-1的miRNA调节ABI-1蛋白的表达,为进步研究靶向ABI-1miRNA在胃癌发生发展中的作用奠定基础。

MicroRNA-335-5p对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞的影响

目的探讨microRNA-335-5p(miR-335-5p)对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)增殖、侵袭和凋亡的影响。方法选取2018年3月—2019年3月湖州市第三人民医院收治的50例类风湿性关节炎(RA)患者和50例接受关节置换手术的关节外伤患者的滑膜组织标本,并分离培养RASFs。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测滑膜组织和RASFs中miR-335-5p和DKK1的表达,荧光素酶报告基因检测评估miR-335-5p对DKK1荧光素酶活性的影响。将miR-335-5p模拟物、si-DKK1和pcDNA-DKK1转染RASFs,分别通过ELISA比色法、Transwell法和流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡情况。结果与正常组织和RASFs相比,miR-335-5p在RA组织和RASFs中下调(P<0.05),而DKK1在RA组织和RASFs中上调(P<0.05)。荧光素酶报告基因检测显示,miR-335-5p可特异性结合DKK1的3′UTR,抑制其荧光素酶活性(P<0.05)。此外,miR-335-5p可降低DKK1的表达(P<0.05)。过表达miR-335-5p或敲除DKK1可抑制RASFs的增殖和侵袭,诱导RASFs凋亡(P<0.05)。而过表达DKK1可逆转miR-335-5p对RASFs的影响(P<0.05)。结论miR-335-5p可通过直接靶向DKK1的表达,抑制RASFs的增殖和侵袭,诱导其凋亡。

MicroRNA:心肌缺血-再灌注损伤的调控者

近年来,大量实验表明microRNA(miRNA)参与并调控了心肌缺血-再灌注损伤的过程,为临床治疗心肌缺血性疾病提供了新的靶点和策略。该文简要介绍miRNA参与和调控心肌缺血-再灌注损伤的机制研究进展。

急性胰腺炎患者体表胃电参数与外周血miR-551-5p、MicroRNA141变化的关系

目的研究急性胰腺炎患者体表胃电参数与外周血miR-551-5p、MicroRNA141变化的关系。方法选取2017年4月至2020年7月南通大学附属如皋医院收治的重症急性胰腺炎患者98例,随机分为A组和B组,各49例。另选取98例年龄与所选患者相符的健康者作为健康组。A组给予常规治疗;B组在A组的基础上给予33%硫酸镁,10 m L,3次/d,胃管注入,西沙必利10 mg/次,3次/d。两组患者均治疗7 d。分别于治疗前后测定血清胃肠激素:胆囊收缩素(CCK)、血清胃动素(MTL)、血管活性肠肽(VIP)和胃泌素(GAS)水平;测定胃电图参数:振幅(AP)、主频率(FP)和平均频率(FC)。采用实时定量PCR扩增法检测miR-141和miR-551-5p水平;采用Spearman分析胃电图参数与血清胃肠激素水平和微循环m RNA水平的相关性;记录受试者肛门排气的时间和肠鸣音恢复的时间,记录患者住院时间。结果治疗组胃肠激素中CCK和MTL水平显著低于健康组(P<0.05),VIP和GAS水平显著高于健康组(P<0.05);胃电图参数AP、FP和FC水平均显著低于健康组(P<0.05);微循环m RNA中miR-141显著低于健康组,miR-551-5p显著高于健康组(P<0.05)。治疗后,两组患者CCK和MTL水平均增加,且B组显著高于A组(P<0.05);两组患者VIP和GAS水平均降低,且B组显著低于A组(P<0.05)。治疗后,两组患者胃电图参数AP、FP和FC水平均增加,且B组显著高于A组(P<0.05)。治疗后两组患者miR-141水平均增加,miR-551-5p水平均降低,且B组增加或降低幅度显著高于A组(P<0.05)。B组患者肛门排气的时间和肠鸣音恢复的时间和住院时间均显著少于A组(P<0.05),急性胰腺炎患者和健康者胃电图参数AP、FP和FC和血清胃肠激素CCK和MTL均成正相关,与VIP和GAS均成负相关,与miR-141成正相关,与miR-551-5p成负相关。结论血清胃肠激素、胃电图参数及微循环m RNA水平具有密切关系,硫酸镁联合西沙必利治疗急性胰腺癌患者可以显著改善患者血清胃肠激素、胃电图参数及微循环m RNA水平,且胃电图参数与胃肠激素和微循环m RNA具有一定的相关性。

MicroRNA与肿瘤上皮-间质转化关系的研究进展

上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程,在肿瘤的发生、发展、转移中发挥重要作用。microRNA(miRNA)作为一类长度为19-25个核苷酸的短链非编码RNA,是转录后调控网络中重要的调控因子,与肿瘤EMT相关基因表达之间关系密切,已成为肿瘤领域的研究热点。现对近年来miRNA与肿瘤EMT关系的研究进展做一综述。

MicroRNAs调控细胞“上皮-间质转换”的靶基因及相关信号途径的研究进展

MicroRNAs(miRNAs)作为转录后调节因子参与多种生物学过程的基因表达调控。其中,miRNAs是调控细胞"上皮-间质转换"(EMT)过程的重要因子,与肿瘤细胞迁移、侵袭和转移过程密切相关,并参与众多疾病的发生和发展。研究表明,受miRNAs调控的靶基因较广泛,均通过影响特定的信号通路对EMT发挥促进或抑制的效应。研究miRNAs对EMT的调控作用和机制对于肿瘤等相关疾病的防治具有重要价值。本文综合分析了近年来报道的从正向和负向调控细胞EMT发生的miRNAs的靶基因及其信号途径。

17β-雌二醇调节JEG-3细胞的microRNA表达研究

目的:探讨17β-雌二醇(E2)调节人绒毛癌细胞系JEG-3的microRNA的表达.方法:定量PCR检测E2对microRNA的表达.结果E2能够促进JEG-3 miR16、miR126、miR335、miR451、miR491-5p、miR-520g和miR612的表达,降低miR-26b和miR-29b的表达.结论:E2能够对JEG-3细胞的microRNA表达产生调节作用,提示我们在妊娠过程中E2可以通过调节microRNA来影响滋养层细胞增殖、迁移、浸润和血管重塑等功能,并可能为探讨子痫前期等的发病机制提供线索.

Wnt/β-catenin信号通路与microRNA相互作用的研究进展

Wnt 基因最早是1982年 Nusse等［1］在用小鼠乳头瘤病毒诱导小鼠产生乳腺癌的过程中发现的。 Wnt基因表达因子参与细胞生长、凋亡及干细胞分化等重要生理过程。 Wnt基因所编码的蛋白是一类分泌型糖蛋白，它具有分泌型生长因子的特点，Wnt 被分泌后，既可与自身细胞的膜受体结合发挥自分泌调节作用，也可与邻近细胞的膜受体结合发挥旁分泌作用。现已发现的Wnt通路分支有（1）经典Wnt／β-连环蛋白（Wnt／β-catenin）信号转导通路；（2）平行细胞极性通路；（3） Wnt／Ca＋通路；（4）调节纺锤体定向和不对称细胞分裂的通路［2］。其中经典Wnt 信号通路即 Wnt／β-catenin 通路，是 Wnt 信号中研究最清楚的一条通路，在整个进化过程中高度保守。微小RNA（microRNA）是广泛存在于真核生物中的一类长度约为22个核苷酸的内源性非编码单链小分子RNA，由一段具有茎环结构、长度为70～80个核苷酸单链RNA前体剪切而成，可通过与其相关的mRNA分子3′端非编码区（untranslated region， UTR）互补配对，与Argonaute 蛋白结合形成 RNA 诱导的沉默复合体（RISCs）促进靶mRNA的降解或抑制其翻译负调控基因表达而发挥生物学作用［3-5］，也可以通过甲基化及调节转录因子参与基因表达的转录后调控［6］。

microRNA在重型β-珠蛋白生成障碍性贫血中的表达研究

目的探讨microRNA(miRNA)在重型β-珠蛋白生成障碍性贫血中的表达情况。方法采用miRNA芯片检测重型β-珠蛋白生成障碍性贫血和实时定量PCR技术研究miRNA差异表达情况。结果 miRNA芯片结果显示,在样本组中26个表达显著上调,30个表达显著下调。随机挑选表达上调的hsa-miR-618和表达下调的hsa-miR-103a-2-5p进行实时定量PCR检测,结果显示其表达趋势与芯片结果一致,验证芯片结果可靠性。使用数据库软件预测出17个表达上调和24个表达下调的miRNA与重型β-珠蛋白生成障碍性贫血可能相关的靶基因。结论 miRNA在重型β-珠蛋白生成障碍性贫血中存在显著差异表达。进一步研究miRNA在重型β-珠蛋白生成障碍性贫血中的调控通路可为其发病机理研究及疾病治疗提供新方向和思路。

microRNA-325-3p在体外受精-胚胎移植反复自然流产中的作用及机制

目的研究在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者中,microRNA-325-3p(miR-325-3p)是否参与反复自然流产的发生和发展,以及在其中的作用机制。方法选取2015年1月至2019年6月在唐山市妇幼保健院就诊的89例IVF-ET反复自然流产患者和202例正常妊娠行人工流产患者作为研究对象。获取其妊娠4~12周的流产组织。通过原位杂交及实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)比较IVF-ET反复自然流产患者组织与正常人工流产患者组织中miR-325-3p表达差异;通过生物信息学网站预测miR-325-3p的可能靶基因,采用免疫印迹(Western blot)、qRT-PCR技术在细胞及组织水平对其进行验证,探究两者在IVF-ET反复自然流产患者中的作用机制。结果原位杂交显示,IVF-ET反复自然流产患者组织均表达miR-325-3p强信号,而正常人工流产患者组织仅存在miR-325-3p弱表达(P<0.01),qRT-PCR进一步证实该结果。Western blot、qRT-PCR检测miR-325-3p模拟物、抑制物转染的细胞,证实叉头框转录因子p3(Foxp3)为miR-325-3p的靶基因之一,且Foxp3蛋白及mRNA水平的表达量被miR-325-3p模拟物显著降调,被抑制物显著上调。与正常人工流产患者组织比较,IVF-ET反复自然流产患者组织Foxp3蛋白及mRNA表达均显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 MiR-325-3p的其中一个靶基因是Foxp3,通过miR-325-3p增高进而降调Foxp3的表达,来实现免疫耐受降低,可能是IVF-ET患者发生反复自然流产的机制之一。

基于microRNA调控的HBeAg(-)轻度慢性乙型肝炎脾胃湿热证发生的分子机制研究

目的:从microRNAs角度揭示HBe Ag(-)轻度慢乙型脾胃湿热证发生的分子机制。方法:将符合标准的病例分为HBe Ag(-)轻度慢乙肝脾胃湿热证组与HBe Ag(-)轻度慢乙肝无症状组,借助Agilent Human miRNA 8×60k微阵列芯片检测血浆中microRNAs表达谱,求得两组间的差异表达microRNAs谱(P<0.05),借助miRNA生物信息学分析软件预测其靶基因并对靶基因进行GO功能富集分析和pathway分析。结果:两组间的差异表达microRNAs共86条(P<0.05),37条上调,49条下调;GO分级及Pathway分析得到其功能主要涉及细胞黏附、生物合成过程的正/负调控、蛋白质定位、Wnt信号通路、RNA的代谢过程正/负调控基因表达的正/负调控、蛋白氨基酸的磷酸化、Notch信号传导途径、细胞凋亡、Hedgehog信号通路、T细胞受体信号通路等。结论:HBe Ag(-)轻度慢乙肝脾胃湿热证受特异性差异microRNAs调控,并涉及多个生命过程,其中Wnt信号通路可能是HBe Ag(-)轻度慢乙肝脾胃湿热证发生的关键分子机制。

MicroRNA-136-5p靶向STAT3调控对脊髓损伤大鼠炎症因子的影响

目的研究microRNA-136-5p(miR-136-5p)靶向信号转导和转录激活子3(STAT3)调控对脊髓损伤大鼠炎症因子的影响。方法选取60只SD健康大鼠,随机分为对照组、脊髓损伤组、沉默组及过表达组,每组15只。将脊髓损伤组、沉默组、过表达组大鼠复制脊髓损伤模型,对照组在模型复制期间不做任何处理。无菌环境下将10μlmiR-136-5p慢病毒悬液(病毒滴度为108 TU/ml)注射于沉默组、过表达组大鼠脊髓损伤区。对照组、脊髓损伤组大鼠注射等量的生理盐水。使用BBB评分、联合行为评分法(CBS)对4组大鼠运动功能、脊髓神经功能进行评价,检测4组大鼠脊髓组织白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-21(IL-21)、白细胞介素-23(IL-23)表达水平及STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白相对表达量,以及IL-17 mRNA表达水平。结果沉默组大鼠BBB评分高于脊髓损伤组和过表达组(P<0.05);沉默组大鼠CBS评分低于脊髓损伤组和过表达组(P<0.05)。沉默组大鼠脊髓组织IL-6、IL-21、IL-23表达水平低于脊髓损伤组和过表达组(P<0.05)。沉默组大鼠脊髓组织STAT3、p-STAT3蛋白相对表达量、IL-17 mRNA表达水平均低于对照组、脊髓损伤组及过表达组(P<0.05)。结论脊髓损伤后miR-136-5p沉默可抑制STAT3的表达,进而抑制炎症因子的过度表达,最终抑制脊髓炎症反应。