血清miR-218-5p、LncRNA OIP5-AS1在急性呼吸窘迫综合征患儿中表达及临床预后预测效能分析

目的探讨急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患儿血清长链非编码RNA OIP5-AS1(LncRNA OIP5-AS1)、微小RNA-218-5p(miR-218-5p)表达情况及二者在临床预后预测中的价值。方法回顾性选择2020年7月至2022年2月秦皇岛市第一医院收治的104例ARDS患儿为ARDS组。根据氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))将ARDS患儿分为重度亚组(PaO_(2)/FiO_(2)≤100 mmHg,n=32)、中度亚组(100 mmHg<PaO_(2)/FiO_(2)≤200 mmHg,n=38)、轻度亚组(200 mmHg<PaO_(2)/FiO_(2)≤300 mmHg,n=34)。根据ARDS患儿28 d院内死亡情况将其分为存活亚组(n=74)和死亡亚组(n=30)。另选择同期于本院进行健康体检的98例儿童作为对照组。比较各组血清LncRNA OIP5-AS1、miR-218-5p表达水平;收集患儿性别、年龄、气道峰值压、通气时间、入住ICU时间、动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、动脉血氧分压(PaO_(2))、入院急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、入院序贯器官功能衰竭评分(SOFA)、平均气道压、潮气量、白蛋白等资料。采用Pearson相关分析ARDS死亡患儿中血清LncRNA OIP5-AS1与miR-218-5p表达水平的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA OIP5-AS1、miR-218-5p表达水平对ARDS患儿预后的预测价值;采用Logistic回归分析影响ARDS患儿死亡的因素。结果ARDS组血清LncRNA OIP5-AS1为2.04±0.38,显著高于对照组(1.01±0.21),miR-218-5p为0.45±0.16,显著低于对照组(1.02±0.20),差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组、轻度亚组、中度亚组、重度亚组ARDS患儿血清LncRNA OIP5-AS1表达水平依次升高,miR-218-5p表达水平依次降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡亚组血清LncRNA OIP5-AS1表达水平及入院APACHEⅡ评分、入院SOFA、平均气道压、潮气量均高于存活亚组,miR-218-5p表达水平及PaO_(2)、白蛋白均低于存活亚组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ARDS死亡患儿中血清LncRNA OIP5-AS1与miR-218-5p表达水平呈负相关(r=-0.503,P<0.05)。血清LncRNA OIP5-AS1、miR-218-5p及二者联合预测ARDS患儿死亡的曲线下面积分别为0.852、0.812、0.904。LncRNA OIP5-AS1是ARDS患儿死亡的独立危险因素(P<0.05),miR-218-5p是ARDS患儿死亡的保护因素(P<0.05)。结论ARDS患儿血清LncRNA OIP5-AS1>2.04,miR-218-5p<0.39,均与病情严重程度及预后不良有关。

miR-218-5p靶向PDE7A调节人非小细胞肺癌A549细胞的糖酵解

目的:探究miR-218-5p靶向磷酸二酯酶7A(PDE7A)调节人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞糖酵解过程的机制。方法:常规培养A549细胞,用Lipo3000将miR-218-5pmimic、mimic-NC、PDE7A过表达质粒(PDE7A-oe)和PDE7A对照质粒(PDE7A-NC)转染A549细胞,记为miR-218-5pmimic组、mimic-NC组、PDE7A-oe组和PDE7A-NC组。qPCR法验证转染效率,WB法检测糖酵解关键酶蛋白的表达,葡萄糖测定法和乳酸生成测定法检测各转染组A549细胞中2脱氧葡萄糖和乳酸含量,双萤光素酶报告基因实验验证miR-218-5p与PDE7A靶向结合关系,用TCGA数据库数据分析PDE7AmRNA在肺癌组织中的表达水平。结果:在A549细胞中成功地过表达了miR-218-5p(P<0.01)。过表达miR-218-5p均能显著抑制A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达(均P<0.01)、葡萄糖摄取量和乳酸生成量(均P<0.01)。过表达PDE7A均可显著促进A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达(均P<0.01),以及葡萄糖摄取量和乳酸生成量(均P<0.01)。A549细胞中miR-218-5p可与PDE7AmRNA的3´-UTR直接结合。数据库数据分析结果显示,PDE7AmRNA在肺鳞状细胞癌组织中呈高表达(P<0.01)。结论:miR-218-5p靶向PDE7A调控A549细胞中HK2和PKM2的表达水平,进而抑制糖酵解过程,miR-218-5p/PDE7A可能是NSCLC临床诊断和治疗的潜在靶点。

CircBICD2调节miR-218-5p/RhoA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探讨环状RNA(CircRNA)·BICD2调节miR-218-5p/Ras同源基因家族成员A·(RhoA)轴对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:qRT-PCR、Western·blot分别检测OSCC组织、癌旁组织、人口腔上皮细胞系HOEC及OSCC细胞系HSC-4、CAL-27、SCC-15中Circ·BICD2、miR-218-5p表达及Rho·A蛋白表达;将SCC-15细胞分为Ct组(A,未转染对照)、si-NC组(B)、si-Circ·BICD2组(C)、miR-NC组(D)、miR-218-5p组(E)、si-Circ·BICD2+anti-NC组(F)、si-Circ·BICD2+anti-miR-218-5p组(G),qRT-PCR检测细胞中Circ·BICD2、miR-218-5p表达;·CCK-8法和平板克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;·Western·blot检测Rho·A、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin表达;双荧光素酶验证Circ·BICD2与miR-218-5p、miR-218-5p与Rho·A的关系。结果:在OSCC组织和细胞中,Circ·BICD2、Rho·A蛋白高表达,miR-218-5p低表达,在SCC-15细胞中miR-218-5p相对表达量最低,Circ·BICD2表达及Rho·A蛋白相对表达量最高(P<0.05)。后续实验取SCC-15细胞为研究对象;与B组比较,C组Circ·BICD2、Rho·A蛋白表达降低,miR-218-5p表达升高(P<0.05);与D组比较,E组miR-218-5p表达上调,Rho·A蛋白表达下调(P<0.05);与C组、F组相比,G组miR-218-5p表达降低,Rho·A蛋白表达升高(P<0.05)。下调Circ·BICD2或过表达miR-218-5p均可抑制SCC-15细胞增殖和EMT,促进细胞凋亡;下调miR-218-5p减弱了沉默Circ·BICD2对SCC-15细胞增殖、EMT的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用;·Circ·BICD2靶向调控miR-218-5p/Rho·A轴。结论:沉默Circ·BICD2可能通过上调miR-218-5p来抑制Rho·A表达,抑制SCC-15细胞增殖、EMT,促进细胞凋亡。

miRNA-218、miRNA-21在Hp感染相关胃癌组织中的表达及临床意义

目的探究微小RNA-218(miR-218)、miR-21在幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染相关胃癌组织中的表达及临床意义。方法选取接受手术切除的胃癌患者104例,分析miR-218和miR-21表达与Hp感染胃癌患者临床病理因素及术后复发的关系。结果Hp阳性组患者胃癌组织中miR-218水平低于Hp阴性组,miR-21水平、2年复发率高于Hp阴性组(P均<0.05);Hp感染胃癌患者胃癌组织中miR-218水平低于癌旁组织,miR-21水平高于癌旁组织(P均<0.05);miR-218和miR-21表达与患者分化程度、TNM分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及无疾病进展生存率相关,对术后2年复发情况具有较高的预测价值。结论miR-218和miR-21水平在Hp感染和无Hp感染的胃癌患者中存在差异表达,其异常表达与Hp感染胃癌患者临床病理因素及预后存在关联。

肿瘤抑制因子microRNA-218对前列腺癌细胞恶性进展及肿瘤干细胞特性的调控作用

目的 探究miRNA-218(miR-218)在调节前列腺癌(PCa)细胞干性以及上皮-间质转化(EMT)方面的作用。方法 通过慢病毒转染构建稳定过表达miR-218的前列腺癌细胞系,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测前列腺癌细胞中miR-218的表达;Transwell迁移实验检测不同组细胞迁移能力;Western blot检测各组细胞中EMT相关蛋白的表达;集落形成和肿瘤成球实验检测不同组别肿瘤干细胞特征。结果 qPCR结果显示,miR-218的表达水平在前列腺癌细胞系LNCaP和C4-2中较BPH-1显著下调;Transwell迁移实验结果表明,miR-218可抑制前列腺癌细胞的迁移作用;Western blot结果显示,过表达miR-218后,EMT相关蛋白表达受到抑制;在集落形成和肿瘤成球实验中,过表达miR-218可显著抑制前列腺癌细胞的干性特征。结论 miR-218在PCa细胞系中表达下调,且能抑制PCa细胞迁移、EMT和肿瘤干细胞特性。

microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进展

microRNA在肌、骨代谢疾病中的作用已成为当前研究热点。本文对microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进行总结。首先,本文介绍microRNA的生物发生过程和基因调控机制。其次,本文分别介绍相关microRNA亚型在骨骼肌和骨骼重建中的作用。在microRNA对骨骼肌作用机制方面,归纳了5个方面:(1)调节转录因子MyoD的活化和表达;(2)调节其他肌肉特异性转录因子的表达;(3)影响肌肉细胞的增殖和分化;(4)影响肌肉细胞表型;(5)microRNA的协同作用。并从促进成骨和抑制破骨两方面说明microRNA影响骨重塑的作用机制。还对具有肌骨共生的microRNA进行了总结归纳。最后对相关研究中存在的问题与不足进行总结和展望,对肌少-骨质疏松症的防治具有积极意义。

miR-218-5p调控安哥拉兔毛囊毛乳头细胞增殖的研究

本文旨在探讨miRNA-218-5p对兔毛乳头细胞毛囊发育相关基因的影响,为研究家兔毛囊发育中的作用机制提供理论依据。用酶消化法分离兔毛乳头细胞,用MSCM培养基培养毛乳头细胞。将培养的毛乳头细胞分为4组,分别转染miR-218-5p mimics、miR-218-5p mimics NC、miR-218-5p inhibitor、miR-218-5p inhibitor NC。培养48 h后,收集细胞。使用RNA提取试剂盒提取各组RNA,使用RT-qPCR检测各组miR-218-5p的mRNA表达水平和毛囊生长发育相关基因表达水平。使用CCK-8检测各组细胞增殖情况。结果发现,在兔DPCs(Dermal Papilla Cells)中过表达miR-218-5p能够显著上调毛囊生长发育相关基因如CCND1、CTNNB1、LEF1的mRNA表达水平,显著下调TGF-β1、BMP4的mRNA表达水平;敲减miR-218-5p能够显著下调毛囊生长发育相关基因如CCND1、CTNNB1、LEF1的mRNA表达水平,显著上调TGF-β1、BMP4的mRNA表达水平。过表达miR-218-5p后,极显著上调了毛乳头细胞的增殖。敲减miR-218-5p后,极显著下调了毛乳头细胞的增殖。本研究发现,miR-218-5p能上调家兔毛囊生长发育相关基因CCND1、CTNNB1、LEF1的表达水平,下调TGF-β1、BMP4的表达水平,同时具有促进毛乳头细胞增殖的功能。

CircRASSF2靶向miR-218-5p调控胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的研究

背景胃癌是常见的消化道肿瘤,具有较高的发病率和死亡率.环状RNAs(circular RNAs,circRNAs)被认为是多种人类癌症进展的关键调控子,包括胃癌.研究显示circRASSF2作为促癌因子调控癌症进程.然而其在胃癌进展中的作用及潜在分子机制尚不清楚.目的探讨circRASSF2影响胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的分子机制.方法用实时荧光定量PCR分析胃癌组织、癌旁组织及GES-1、HGC-27和AGS细胞中circRASSF2和miR-218-5p的表达;双荧光素酶报告实验分析靶向关系;将HGC-27和AGS细胞分为si-circRASSF2组、si-NC组、miR-218-5p mimic组、miR-NC组、si-circRASSF2+anti-miR-NC组、si-circRASSF2+miR-218-5p Inhibitor组;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐检测细胞抑制率;克隆形成实验检测克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell检测细胞迁移数.结果胃癌组织中circRASSF2表达上升,miR-218-5p表达下降,且二者表达呈负相关(P<0.05);在胃癌HGC-27和AGS细胞中,circRASSF2表达上调,而miR-218-5p表达下调(P<0.05).circRASSF2靶向调控miR-218-5p;敲低circRASSF2或过表达miR-218-5p促进HGC-27和AGS细胞抑制率和凋亡率,而降低克隆形成数和迁移细胞数(P<0.05).下调miR-218-5p可逆转circRASSF2敲低对细胞增殖、迁移、凋亡的影响.结论circRASSF2通过靶向miR-218-5p加速胃癌细胞增殖、迁移、抑制凋亡.

长链非编码RNA MALAT1靶向miR-218对卵巢癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响及其作用机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MALAT1靶向miR-218对卵巢癌细胞系OVCAR3增殖、侵袭及凋亡的影响及作用机制。方法应用实时PCR检测lncRNA MALAT1和miR-218在人卵巢癌细胞系(OVCAR3)和正常人卵巢上皮细胞系(HOSE)中的表达。利用脂质体转染法将无意义序列阴性对照(si-NC)组、MALAT1干扰序列(si-MALAT1)组以及si-MALAT1+miR-218抑制剂组分别转染卵巢癌细胞,MTT法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,Transwell实验检测各组细胞侵袭情况。生物信息学分析及双荧光素酶报告基因实验验证MALAT1和miR-218的靶向关系。实时PCR检测各组OVCAR3细胞中MALAT1、miR-218的表达;Western blotting检测各组OVCAR3细胞中Runx2的表达。结果与人正常卵巢上皮细胞比较,卵巢癌OVCAR3细胞中MALAT1表达升高(P<0.05),miR-218表达下降(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MALAT1组OVCAR3细胞的增殖和侵袭能力下降,凋亡率升高(均P<0.05)。与si-MALAT组比较,si-MALAT1+miR-218抑制剂组OVCAR3细胞的增殖和侵袭能力升高,凋亡率下降(均P<0.05)。与si-NC组比较,si-MALAT1组OVCAR3细胞中miR-218表达升高(P<0.05)。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验结果显示MALAT1可以靶向调控miR-218。Western blotting结果显示,与si-NC组比较,si-MALAT1组Runx2蛋白表达降低(P<0.05),与si-MALAT1组比较,si-MALAT1+miR-218抑制剂组Runx2蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论lncRNA MALAT1在卵巢癌细胞中高表达,抑制MALAT1表达能够抑制卵巢癌OVCAR3细胞的增殖和侵袭,并促进OVCAR3细胞凋亡,其机制可能与通过miR-218调控Runx2蛋白表达有关。

非小细胞肺癌组织中lncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p的表达及临床意义

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中长链非编码RNA(LncRNA)MNX1-AS1、微RNA(miR)-218-5p表达及临床意义。方法选取2015年1月至2017年1月湖北省中医院诊治的120例NSCLC患者,取术中获取的NSCLC组织和癌旁组织,应用荧光定量PCR检测LncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p表达。分析NSCLC组织中LncRNA MNX1-AS1与miR-218-5p的相关性及与临床病理特征的关系。以LncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p相对表达量的均值(2.321、1.213)为界分为高、低表达组,分析其对NSCLC患者生存预后的影响。结果NSCLC组织中LncRNA MNX1-AS1表达高于癌旁组织,miR-218-5p表达低于癌旁组织(P<0.05)。LncRNA MNX1-AS1与miR-218-5p呈负相关(r=-0.561,P<0.01)。不同淋巴结转移、肿瘤分期患者LncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA MNX1-AS1高表达组生存曲线低于LncRNA MNX1-AS1低表达组,miR-218-5p低表达组生存曲线低于miR-218-5p高表达组(P<0.05)。结论NSCLC组织中LncRNA MNX1-AS1表达升高,miR-218-5p表达降低,两者与患者预后不良有关,可能作为预后评估指标。

MicroRNA-218下调肝细胞癌中的E2F2基因表达抑制细胞增殖的研究

目的探讨MicroRNA-218(miRNA-218)下调肝细胞癌中的E2F2基因表达,从而抑制细胞增殖的机制。方法从细胞库中取得人类肝癌细胞株HepG2、Huh7、MHCC-97H、BEL-7402和正常肝细胞株L02。随后进行细胞培养和转移、反转录多聚酶链反应、免疫印迹分析、细胞增殖和集落形成试验、细胞周期分析和相应的统计学处理。结果 miR-218表达水平在癌细胞中下调。MTT生长曲线表明,当miR-218过度表达时(Huh7中的miR-218 P=0.001;在MHCC-97中的miR-218 P=0.013)细胞增殖能力明显降低。双荧光素酶实验证实,转染了miRNA-218模拟物的细胞的荧光素酶活性显著降低(P<0.01),荧光酶报告基因含有E2F2野生型的第3′非翻译区。这些结果表明E2F2是miR-218的直接作用对象。与阴性对照组相比,转染了miR-218模拟物的Huh7和MHCC-97细胞株中的E2F2的相对mRNA表达显著下调(P<0.05)。结论 miR-218通过直接作用于E2F2基因的第3′非翻译区调节E2F2的表达,从而抑制HCC细胞增殖。

MicroRNA-218靶向神经元表达发育下调基因9对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

目的观察microRNA-218(miR-218)对胃癌细胞SGC-7901增殖和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养人胃癌细胞SGC-7901,将对数生长期细胞分为空白对照组、阴性对照组和miR-218 mimics组,阴性对照组和miR-218 mimics组细胞分别转染阴性对照序列和miR-218 mimics,空白对照组细胞不进行转染。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测3组细胞中miR-218表达,细胞计数试剂盒-8检测3组细胞培养24、48、72、96 h时的增殖活性;平板细胞克隆形成实验检测3组细胞克隆能力;Transwell实验检测3组细胞侵袭能力;Western blot法检测3组细胞中神经元表达发育下调基因9(NEDD9)蛋白、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)的表达。将SGC-7901细胞分为阴性对照组+NEDD93′非编码区(3′UTR)-Wt组(阴性对照序列、pCHECK2-NEDD93′UTR-Wt共转入SGC-7901细胞)、miR-218 mimics+NEDD93′UTR-Wt组(miR-218 mimics、pCHECK2-NEDD93′UTR-Wt共转入SGC-7901细胞)、阴性对照组+NEDD93′UTR-Mut组(阴性对照序列、pCHECK2-NEDD93′UTR-Mut共转入SGC-7901细胞)、miR-218 mimics+NEDD93′UTR-Mut组(miR-218 mimics、pCHECK2-NEDD93′UTR-Mut共转入SGC-7901细胞),常规培养48 h后收集各组细胞,采用发光检测仪测定各组细胞中荧光素酶活性,分析miR-218与NEDD9的靶向关系。结果与空白对照组和阴性对照组比较,miR-218 mimics组细胞中miR-218表达及培养24、48、72、96 h时细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),NEDD9蛋白表达及细胞克隆形成数量和侵袭细胞数量显著减少(P<0.05);空白对照组与阴性对照组细胞中以上各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-218 mimics+NEDD93′UTR-Wt组细胞中荧光素酶活性显著低于阴性对照组+NEDD93′UTR-Wt组、阴性对照组+NEDD93′UTR-Mut组和miR-218 mimics+NEDD93′UTR-Mut组(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,miR-218 mimics组细胞中E-cadherin蛋白表达显著升高,vimentin、N-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05)。空白对照组与阴性对照组细胞中E-cadherin、vimentin、N-cadherin蛋白表达比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论miR-218过表达胃癌细胞SGC-7901中NEDD9蛋白表达显著下调,microRNA-218可能通过靶向下调NEDD9表达而抑制SGC-7901细胞的增殖及侵袭能力。

MicroRNA-218-1-3p在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

MicroRNA-218-1-3p(miR-218-1-3p)是新发现的MicroRNAs的重要成员,其在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达还没有明确的报道。本研究使用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测其在42例NSCLC组织和相应癌旁组织中的表达情况。结果表明miR-218-1-3p在NSCLC中低表达,并与淋巴结转移负相关。

microRNA-218在肝细胞癌中的表达及功能研究

目的探讨microRNA-218在肝细胞癌(HCC)中的表达水平及功能。方法选取该院肝胆外科收治的46例HCC手术患者,并将其分为转染组和未转染组,比较两组HepG2细胞的microRNA-218表达、增殖、凋亡情况,以及B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1(Bmi-1)和周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)的表达水平。结果肝癌组织中microRNA-218表达水平明显低于癌旁组织(P<0.05);microRNA218的表达水平与HCC的肿瘤大小、肿瘤TNM分期等临床病理特征密切相关(P<0.05);转染组HepG2细胞增殖率在转染后24、48、72h均明显低于未转染组(P<0.05);转染组HepG2细胞凋亡率明显高于未转染组(P<0.05);HepG2细胞转染后的Bim-1、CDK6表达水平均明显低于未转染组(P<0.05)。结论 microRNA-218可通过下调潜在靶点的Bim-1、CDK6表达水平来抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡。

miR-218-5p靶向TPX2调节p53通路影响肺腺癌恶性进展

背景与目的肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)是肺癌的一种主要亚型,其治疗与诊断依然是目前的研究热点。靶向Xklp2靶蛋白(targeting protein for Xenopus kinesin-like protein 2,TPX2)在多种癌细胞中高表达,可能与LUAD的发生发展相关。本研究旨在探究TPX2对LUAD细胞恶性进程的影响以及调控机制。方法通过生物信息学分析技术,对癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中LUAD组织中基因TPX2的表达情况进行分析。实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测人肺正常细胞系和人LUAD细胞系中TPX2和miR-218-5p的表达水平。蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞系中TPX2蛋白表达以及其对p53信号通路关键蛋白表达的影响。使用生物信息学预测并通过双荧光素酶报告基因检测验证TPX2与miR-218-5p的关系,细胞活力检测(cell counting kit-8,CCK-8)、细胞克隆形成、细胞划痕、Transwell实验、流式细胞术检测miR-218-5p和TPX2对LUAD细胞功能的影响。结果LUAD细胞中TPX2显著高表达,敲低TPX2可以抑制LUAD细胞的增殖、迁移、侵袭,促进凋亡并产生G_(2)/M期阻滞,并且促进p53信号通路关键蛋白的表达。miR-218-5p是TPX2的上游调控因子,可以抑制其表达。过表达miR-218-5p能消除TPX2高表达导致的恶性发展,抑制LUAD细胞的增殖、迁移等恶性进程以及促进p53信号通路。结论miR-218-5p靶向抑制TPX2表达,并通过p53发挥抑制LUAD细胞恶性发展的作用。

运动通过microRNA-218-5p/HMGB1/TLR4途径改善OJ致肠黏膜屏障损伤的研究

目的:研究miR-218-5p在阻塞性黄疸(OJ)致肠黏膜屏障损伤中的机理,以及有氧运动改善肠黏膜屏障损伤的效果,并探讨其作用机制。方法:30只雄性KM小鼠随机分为3组:假手术组(S)、模型组(M)及运动组(TM)。M及TM组小鼠均采用手术线直角悬挂胆总管法构建阻塞性黄疸模型。在术后7天,TM组进行坡度为0、速度为10 m·min-1的无负重训练(30 min/天)。干预6周后,HE染色观察小鼠肠粘膜形态学变化;生物化学分析法和ELISA法检测血清ALT、AST和TBIL肝功能指标、DAO和D-乳酸肠屏障功能生化指标;qRT-PCR检测miR-218-5p和HMGB1,TLR4,NF-κBp65 mRNA在肠组织中的表达变化;免疫组织化学染色法观察HMGB1,TLR4,NF-κBp65蛋白在肠组织中的表达。结果:HE染色显示,S组小鼠肠黏膜正常;M组肠黏膜萎缩,绒毛断裂;TM组小鼠肠黏膜排列相对规则。血清检测结果显示,S组DAO表达水平最低,TM组较M组降低。D-乳酸水平变化同DAO。qRT-PCR和免疫组织化学染色结果显示,TM组小鼠肠组织中HMGB1,TLR4,NF-κBp65 mRNA和蛋白表达均显著低于M组,S组表达水平最低;miR-218-5p的表达则呈相反趋势。结论:在阻塞性黄疸回肠组织中,miR-218-5p可以直接负性调控HMGB1的表达,进而影响其及其下游信号因子的表达,从而参与肠黏膜损伤的发生发展过程;有氧运动通过上调miR-218-5p,抑制HMGB1-TLR4通路及其下游信号因子的表达,从而发挥对肠粘膜屏障的保护作用。

SVA及α-干扰素对PK-15细胞microRNA转录谱影响的分析

为探究猪塞内卡病毒A(SVA)感染、干扰素(IFN-α)处理对猪肾细胞(PK-15)微RNA(microRNA,miRNA)转录谱的影响,本研究分别构建SVA感染的PK-15(PK-15/SVA)、IFN-α处理的PK-15(PK-15/IFN),SVA感染再经IFN-α处理的PK-15细胞(PK-15/SVA/IFN),通过荧光定量PCR(qPCR)分别检测各组细胞中SVA VP1及IFN-αmRNA的转录水平。结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA及PK-15/SVA/IFN细胞中SVA VP1基因的转录水平极显著升高(P<0.001),PK-15/SVA/IFN中IFN-α的转录水平显著或极显著升高(P<0.05、P<0.01)。通过转录组测序技术(RNA-Seq)分析各组细胞miRNA的转录谱,采用Spss软件统计各组细胞中转录差异miRNA的数量;利用基于负二项分布的DESeq2筛选各组细胞中转录显著差异miRNA;采用miRanda、PITA和RNAhybrid 3个软件预测各组细胞转录显著差异miRNA的靶基因,通过miREvo和mirdeep2软件预测各组细胞中的新miRNA并通过与猪miRNA序列比对得到已知miRNA;分别采用GO功能和KEGG富集分析各组细胞转录显著差异miRNA涉及的生物学功能及信号通路。统计分析结果显示,与PK-15相比,PK-15/IFN、PK-15/SVA和PK-15/SVA/IFN中均存在转录显著差异miRNA,且在SVA感染后细胞中转录的miRNA数量增多,IFN-α刺激则会减少细胞中转录的miRNA数量,SVA感染后再经IFN-α处理则转录的miRNA数量又有所降低。筛选结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA中有167种转录显著差异miRNA,其中94种转录显著上调,73种转录显著下调;与PK-15相比,PK-15/IFN中有98种转录显著差异miRNA,其中55种转录显著上调,43种转录显著下调。预测结果显示,共有290种转录显著差异miRNA有对应靶基因,且共预测到292种新miRNA和345种已知miRNA。选取6种转录显著差异miRNA采用Graphpad prism6.0进行miRNA-mRNA的互作网络展示。结果显示,miR-221-5p的靶基因显著多于其他miRNA,且其靶基因主要与癌症、病毒感染的治疗及宿主的免疫反应有关。GO功能结果显示,在经IFN-α处理或SVA感染后,转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于细胞组分和生物过程等功能。KEGG分析结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA和PK-15/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于Rap1和NF-κB信号通路;与PK-15/IFN相比,PK-15/SVA/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于PI3K-Akt、NF-κB和肿瘤坏死因子(TNF)等抗病毒免疫相关信号通路;与PK-15/SVA相比,PK-15/SVA/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于Rap1、NF-κB、TNF和MAPK信号通路。16种转录显著差异miRNA的qPCR结果与RNA-Seq结果一致。综上所述,本研究首次证实IFN-α处理、SVA感染均显著影响PK-15细胞miRNA转录谱,前者促进miRNA的转录,后者则抑制miRNA的转录。其中转录显著差异miRNA的靶基因与宿主抗病毒及肿瘤免疫均等信号通路密切相关,该结果为阐明SVA感染宿主细胞后非编码RNA转录谱变化的分子机制研究奠定基础。

宫颈脱落细胞miR-218-5p和FOXP3的表达与宫颈病变及HPV感染状态的关系

目的探究宫颈脱落细胞miR-218-5p和叉头蛋白3(FOXP3)的表达与宫颈病变及人乳头状瘤病毒(HPV)感染状态的关系。方法选取2020年2月至2022年2月收治的98例慢性宫颈炎患者作为慢性宫颈炎患者组;宫颈上皮内瘤变(CIN)患者92例作为CIN组,其中CINⅠ级45例为CINⅠ组,CINⅡ级25例为CINⅡ组,CINⅢ级22例为CINⅢ组;宫颈鳞癌患者88例为宫颈鳞癌组。qRT-PCR法检测宫颈脱落细胞miR-218-5p表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测FOXP3以及炎性因子白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-10(IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平;采用Pearson法分析miR-218-5p和FOXP3表达以及二者与炎性因子的相关性。Spearman法分析宫颈脱落细胞miR-218-5p、FOXP3表达水平与CIN组以及宫颈鳞癌组HPV感染的相关性。结果慢性宫颈炎患者组、CIN组、宫颈鳞癌组miR-218-5p水平依次显著降低,FOXP3水平依次显著升高,HPV感染率依次增加(P<0.05)。CINⅢ组miR-218-5p、IL-2的表达水平显著低于CINⅡ组及CINⅠ组,CINⅡ组显著低于CINⅠ组;CINⅢ组FOXP3、IL-10、TNF-α的表达水平显著高于CINⅡ组及CINⅠ组,CINⅡ组显著高于CINⅠ组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,miR-218-5p的表达水平与IL-2水平呈正相关(P<0.05),与FOXP3、IL-10、TNF-α水平呈负相关(P<0.05);FOXP3的表达水平与IL-2水平呈负相关(P<0.05),与IL-10、TNF-α水平呈正相关(P<0.05)。宫颈脱落细胞中miR-218-5p表达水平与CIN组以及宫颈鳞癌组患者HPV感染呈负相关(P<0.05),FOXP3表达水平与CIN组以及宫颈鳞癌组患者HPV感染呈正相关(P<0.05)。结论CIN以及宫颈鳞癌患者宫颈脱落细胞FOXP3的表达水平显著升高,miR-218-5p水平显著降低,二者与宫颈病变以及HPV感染状态有关。

miR-218-5p与SOST在内翻型膝关节炎内外髁软骨下骨中的表达

目的:检测miR-218-5p和骨硬化蛋白(SOST)在内翻型膝关节炎内外髁软骨下骨中的表达情况,分析其两者在膝关节炎形成过程可能存在的调控关系以及两者与应力之间的关系。方法:收集Kellgren-Lawrence分级Ⅳ型内翻型膝关节炎需要行膝关节置换手术患者手术过程中截下的股骨内髁、外侧髁各10例。应用qRT-PCR、Western印迹、免疫组化技术检测内髁、外髁中miR-218-5p和SOST的表达情况,对数据进行分析。结果:miR-218-5p和SOST在内外髁的软骨下骨中均有表达。通过qRT-PCR检测到内翻型膝关节炎中miR-218-5p在软骨下骨中的表达量内髁明显高于外髁(P<0.01),SOST在软骨下骨的相对表达量内髁低于外髁(P<0.01)。Western印迹和免疫组化检测结果显示,在内翻型膝关节炎中SOST在内髁中的表达量低于外髁中的表达量(P<0.01)。结论:miR-218-5p和SOST在软骨下骨中均有表达,且内翻性膝关节炎内髁较外髁miR-218-5p呈高表达、SOST呈低表达,结合前期细胞学实验,考虑两者可能存在负性调控关系,且内髁在超负荷的应力下可能导致了这一表达状态。

miR-218-5p/GTSE1调控轴抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的探讨GTSE1在肺腺癌中的分子机制,以及其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。方法将PC-9和A549细胞分为多组,进行过表达或沉默GTSE1、miR-218-5p。通过TCGA数据确定和评估miR-218-5p和靶基因GTSE1在肺腺癌中的预后意义。qRT-PCR和Western blot分别检测GTSE1和miR-218-5p的mRNA和蛋白表达水平。CCK-8、克隆形成、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告实验分析miR-218-5p和GTSE1的靶向关系。结果GTSE1在肺腺癌组织和细胞中高表达,且高表达GTSE1的肺腺癌患者预后不良。过表达GTSE1可促进肺腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。另外,miR-218-5p在肺腺癌组织和细胞中低表达,并且能够靶向下调GTSE1的表达。实验结果显示,高表达miR-218-5p能够抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭,而其抑制作用能够被GTSE1过表达处理所恢复。结论miR-218-5p/GTSE1轴能够抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。