MicroRNA-301a在胃肠间质瘤中的表达差异与功能

目的筛选胃肠间质瘤的microRNAs(miRNAs)表达谱差异并探讨microRNA-301a(miR-301a)的功能。方法收集45例原发胃肠间质瘤患者的肿瘤及癌旁正常组织,通过miRNA芯片技术获得其中5例患者的肿瘤miRNA表达谱,并采用荧光定量PCR技术检测其余40例患者异常的miRNA表达水平作为验证实验。将显著上调的miR-301a表达量与患者临床病理特征行相关性分析,并采用MTT实验探索miR-301a对胃肠间质瘤细胞系生长的影响。结果在胃肠间质瘤组织中筛选出5种高表达的microR-NA和5种低表达的microRNA,其中miR-301a的表达上调最为明显。其表达量与肿瘤的危险度分级、肿瘤大小、肿瘤细胞核分裂象和有无坏死密切相关(P <0.05),在胃肠间质瘤细胞系中过表达miR-301a能显著增强细胞的增殖能力。结论 miR-301a在胃肠间质瘤组织中显著上调,与恶性临床病理特征密切相关并能影响体外肿瘤细胞的生长增殖,miR-301a可能是未来胃肠间质瘤治疗的潜在靶点。

microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进展

microRNA在肌、骨代谢疾病中的作用已成为当前研究热点。本文对microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进行总结。首先,本文介绍microRNA的生物发生过程和基因调控机制。其次,本文分别介绍相关microRNA亚型在骨骼肌和骨骼重建中的作用。在microRNA对骨骼肌作用机制方面,归纳了5个方面:(1)调节转录因子MyoD的活化和表达;(2)调节其他肌肉特异性转录因子的表达;(3)影响肌肉细胞的增殖和分化;(4)影响肌肉细胞表型;(5)microRNA的协同作用。并从促进成骨和抑制破骨两方面说明microRNA影响骨重塑的作用机制。还对具有肌骨共生的microRNA进行了总结归纳。最后对相关研究中存在的问题与不足进行总结和展望,对肌少-骨质疏松症的防治具有积极意义。

参斛汤对前列腺癌患者术后病灶及血清microRNA-301a-3p水平的影响

目的探讨参斛汤对前列腺癌术后病灶进展及血清microRNA-301a-3p(miRNA-301a-3p)水平的影响。方法选取2020年2月—2021年3月就诊于郑州大学第一附属医院的95例前列腺癌患者作为研究对象,按随机数表法分为对照组(47例)和研究组(48例)。患者均接受经尿道前列腺癌根治术,对照组术后接受常规化学治疗,研究组在对照组基础上增加参斛汤辅助治疗。比较两组患者术后病灶进展情况、血清学指标[前列腺特异性抗原(PSA)、游离前列腺特异性抗原(f-PSA)、游离前列腺特异抗原百分率(FPSAR)、血清肿瘤相关物质(TAM)]、免疫功能、不良反应等。结果研究组局部病灶进展时间、远处转移时间较对照组长(P<0.05)。两组患者治疗前血清PSA、FPSAR、TAM、miR-301a-3p表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),研究组FPSAR高于对照组(P<0.05),PSA、TAM、miR-301a-3p低于对照组(P<0.05)。两组患者治疗前CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),研究组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)较对照组高(P<0.05),CD8^(+)较对照组低(P<0.05)。两组患者不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论参斛汤用于前列腺癌术后辅助治疗可有效抑制病灶进展,提高患者免疫功能,抑制miR-301a-3p表达,但在减少术后化学治疗不良反应方面未见明显优势。

血清外泌体中miR-301a与糖尿病肾病腹膜透析后心脑血管事件的相关性

目的探究血清外泌体中微小RNA-301a(microRNA-301a,miR-301a)与糖尿病肾病腹膜透析后心脑血管事件的关系。方法选取河北北方学院附属第一医院2019年6月至2020年6月接受腹膜透析治疗的211例糖尿病肾病患者作为研究对象。用实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清外泌体中miR-301a水平;以miR-301a中位数为界将患者分为高miR-301a组和低miR-301a组,比较两组患者的临床资料;用Spearman分析miR-301a与超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)相关性;用线性回归分析miR-301a的相关影响因素。随访患者2年,用Kaplan-Meier和Log-Rank比较2组的累积心脑血管事件发生率,用COX回归和限制性立方样条分析miR-301a与糖尿病肾病腹膜透析后心脑血管事件的水平-效应关系。结果随访期间37例(17.54%)发生心脑血管事件。低miR-301a组的hs-CRP水平和透析时长均低于高miR-301a组(P<0.05)。miR-301a与hs-CRP呈正相关关系(r_(s)=0.237,P=0.001)。线性回归分析结果显示,hs-CRP与miR-301a独立相关(P<0.05)。低miR-301a组的累积心脑血管事件发生率为3.70%(4/108),低于高miR-301a组[32.04%(33/103),P<0.001]。COX回归分析结果显示,高血清白蛋白水平是糖尿病肾病腹膜透析后发生心脑血管事件的独立保护因素,高hs-CRP水平和miR-301a>1.46是糖尿病肾病腹膜透析后发生心脑血管事件的独立危险因素。限制性立方样条拟合COX回归分析结果显示,miR-301a与糖尿病肾病腹膜透析后心脑血管事件呈非线性关系(P<0.05)。结论hs-CRP与糖尿病肾病腹膜透析患者miR-301a独立相关。miR-301a水平高提示糖尿病肾病腹膜透析后发生心脑血管事件风险高。

miR-301a-3p对大鼠星形胶质细胞Cx43转录后的靶向调控作用

目的:研究大鼠星形胶质细胞中微小RNA-301a-3p(miR-301a-3p)对缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的靶向调控作用及其作用位点。方法:合成miR-301a-3p agomir和miR-301a-3p antagomir,转染至星形胶质细胞,Western blot检测各组细胞中Cx43蛋白的表达情况;构建重组载体wt-pEZX-MT05-Cx43和mut-pEZX-MT05-Cx43,采用双萤光素酶报告基因实验验证miR-301a-3p的靶基因;构建表达载体pcDNA3.1-Cx43,通过回复实验分析miR-301a-3p对细胞凋亡的影响。结果:将miR-301a-3p agomir转染到星形胶质细胞后,Western blot检测显示,与对照组相比,Cx43蛋白表达显著降低(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果表明,miR-301a-3p能够与Cx43的3′-UTR结合,对其表达产生负调控;将不含Cx43 3′-UTR的重组载体pcDNA3.1-Cx43转染星形胶质细胞后,能够回复miR-301a-3p对Cx43蛋白表达的负调控作用,引起细胞凋亡。结论:Cx43是miR-301a-3p的一个靶基因,miR-301a-3p通过作用于Cx43 mRNA的3′-UTR而抑制其在大鼠星形胶质细胞中的表达。

结肠癌耐药细胞株LoVo/5-Fu中microRNA表达的初步研究

目的建立结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU并初步筛选可能的耐药相关的microRNA。方法采用5-FU浓度递增法建立人结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU,观察其生长规律并绘制细胞生长曲线;用MTT法鉴定耐药细胞株耐药性并计算耐药指数(RI);用microRNA芯片技术检测耐药细胞株LoVo/5-FU与其亲本细胞株LoVo中mi-croRNA的表达谱,筛选差异表达的microRNA;用实时荧光定量PCR方法对筛选出的部分差异microRNA在耐药细胞及其亲本细胞中的表达情况进行验证。结果 LoVo/5-FU细胞与LoVo细胞相比,生长缓慢,细胞体积增大,耐药株LoVo/5-FU细胞相对于其亲本LoVo细胞的耐药倍数为8.08。microRNA芯片的结果显示,耐药株LoVo/5-FU细胞与亲本LoVo细胞比较,有10个microRNA表达上调,13个microRNA表达下调;实时荧光定量pcr的结果进一步证实mir-210、mir196a、mir-1281在LoVo/5-FU中显著上调,而let-7f、mir-1228显著下调,其中mir-210在LoVo/5-FU与LoVo中的表达有明显差异。结论 LoVo/5-FU细胞株耐药性稳定,筛选获得的差异miRNA可能通过调控其靶基因而参与人结肠癌细胞对5-Fu的耐药,为进一步研究microRNA在结肠癌耐药机制中的作用奠定基础。

MicroRNA-122-5p与MicroRNA-199a-5p在EMS患者血清的表达及临床意义

目的探讨micro RNA-122-5p(mi R-122-5p)与micro RNA-199a-5p(mi R-199a-5p)在子宫内膜异位症(EMS)患者血清的表达及临床意义。方法前瞻性设计,随机选取2016年1月—2017年12月华北石油管理局总医院诊治的EMS患者90例(EMS组)及同期不孕症检查的患者70例(对照组)为研究对象。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组人群血清的mi R-122-5p和mi R-199a-5p的表达及白细胞介素-6(IL-6)的表达,并分析其与临床特征的相关性。构建受试者操作特征(ROC)曲线。结果 EMS组患者的血清及腹腔液中IL-6、miR-122-5p、miR-199a-5p的表达与对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05),EMS组均增高。miR-122-5p的表达与IL-6水平(r=0.578,P <0.05)、miR-199a-5p表达(r=0.721,P <0.05)呈正相关。miR-199a-5p的表达与IL-6水平(r=0.562,P<0.05)呈正相关。miR-122-5p和miR-199a-5p检测EMS的敏感性分别为94.7%和92.1%,特异性分别为90.5%和88.6%。结论血清miR-122-5p和miR-199a-5p在EMS患者中的表达增加,miR-122-5p与miR-199a-5p有成为诊断子宫内膜异位症的生物标志物的潜力。

MicroRNA转录后调控欧美杨R2R3-MYBs抗锈菌表达

[目的]强致病锈菌亲和型树种欧美杨适合做寄主感病分子机理研究。研究表明转录因子及其调控miRNA在杨树抗/感病过程中起重要的信号传导和调控作用,决定杨树与锈菌的亲和性。为深入研究杨树感病性,对欧美杨R2R3-MYB转录因子及其调控miRNA进行研究。[方法]构建锈菌侵染和未侵染miRNA组、降解组文库和基因表达谱文库,进行高通量测序。对基因表达谱结果进行生物信息学分析鉴定R2R3-MYBs,根据miRNA组和降解组数据确定R2R3-MYBs调控miRNA。应用定量PCR技术鉴定候选R2R3-MYBs和其调控miRNA的表达量。[结果]共鉴定到230个欧美杨R2R3-MYBs,其中55个R2R3-MYBs在锈菌侵染和未侵染叶片间表达量差异显著,其余表达量变化不显著。基于降解组,共鉴定到由22个miRNA调控18个R2R3-MYBs的86个转录后调控关系。定量PCR结果表明PC-3p-2521022_1与Pnd MYB173存在转录后负调控关系。预测的R2R3-MYB靶基因涉及水杨酸、茉莉酸、乙烯和脱落酸等多个植物激素抗性路径。[结论]E4强致病锈菌侵染导致亲和型树种欧美杨23.9%的R2R3-MYBs表达量发生变化,锈菌侵染不但可以影响R2R3-MYBs的表达量,还可以启动或关闭R2R3-MYBs的表达。欧美杨在E4强致病锈菌胁迫条件下,R2R3-MYBs转录后主要受miR159和miR858家族的miRNA调控。

miR-301通过激活Wnt/β-catenin信号通路改善冠心病大鼠心肌细胞凋亡

[目的]探讨miR-301影响冠心病大鼠心肌细胞凋亡的机制。[方法] SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-301激动剂组(agomir miR-301组)、miR-301激动剂对照组(agomir NC组)、Wnt/β-catenin通路抑制剂组(Dkk1组)及agomir miR-301+Dkk1组,每组10只。除对照组外,其余各组均高脂喂养建立大鼠冠心病模型,连续给药1周后,超声检测大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(FS)、左心室舒张期末内径(LVEDD)和左心室收缩期末内径(LVESD)等心功能指标。HE染色观察大鼠心肌组织形态,TUNEL检测心肌细胞凋亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测心肌组织miR-301表达,Western blot检测大鼠心肌组织Caspase-3、Bax、Wnt3a及β-catenin蛋白表达。[结果]与对照组相比,模型组大鼠LVEF、FS降低49.2%、49.1%,心肌组织miR-301表达水平降低69.0%,Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平降低60.7%、39.7%(P<0.05),LVEDD、LVESD升高32.2%、99.6%,心肌细胞凋亡率升高1362.6%,心肌组织Caspase-3、Bax蛋白表达水平升高100.0%、114.6%(P<0.05);与模型组相比,agomir miR-301组大鼠LVEF、FS升高71.4%、71.8%,心肌组织miR-301表达水平升高1935.5%,Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平升高102.4%、45.1%(P<0.05),LVEDD、LVESD降低15.6%、39.2%,心肌细胞凋亡率降低65.0%,心肌组织Caspase-3、Bax蛋白表达水平降低70.2%、78.4%(P<0.05),而Dkk1可逆转这种现象。[结论] miR-301通过激活Wnt/β-catenin信号通路改善冠心病大鼠心肌细胞凋亡。

miR-301a促进人结肠癌细胞株HT29细胞侵袭与转移的机制

目的探讨miR-301a对结肠癌侵袭转移的影响及分子机制。方法实时荧光定量PCR检测40例结肠癌患者癌组织中miR-301a的表达水平,探究结肠癌和miR-301a表达的关系。同时在人结肠癌细胞株HT29细胞过表达和干扰miR-301a,MTT法检测miR-301a对HT29细胞增殖的影响。蛋白免疫技术和实时荧光定量PCR在分子水平上检测miR-301a表达对HT29细胞中侵袭相关分子的表达水平,探究miR-301a调控下的转化生长因子(TGF)-β/Smad4/基质金属蛋白酶(MMP)-9信号通路对结肠癌侵袭转移的影响。结果实时荧光定量PCR结果显示40例结肠癌患者癌组织中miR-301a的表达水平明显升高,且随着肿瘤分期分级的升高,其水平明显升高。MTT法检测发现过表达miR-301a的HT29细胞数量明显增加,而干扰miR-301a则细胞数目减少,表明miR-301a可促进结肠癌细胞的增殖。在分子水平上蛋白免疫技术和实时荧光定量PCR检测结果显示miR-301a通过下调TGF-β和Smad-4的表达,促进MMP-9的表达,最终促进癌细胞的侵袭转移。结论 miR-301a通过下调TGF-β/Smad4信号通路,促进MMP-9的表达,最终促进结肠癌的侵袭转移。

SVA及α-干扰素对PK-15细胞microRNA转录谱影响的分析

为探究猪塞内卡病毒A(SVA)感染、干扰素(IFN-α)处理对猪肾细胞(PK-15)微RNA(microRNA,miRNA)转录谱的影响,本研究分别构建SVA感染的PK-15(PK-15/SVA)、IFN-α处理的PK-15(PK-15/IFN),SVA感染再经IFN-α处理的PK-15细胞(PK-15/SVA/IFN),通过荧光定量PCR(qPCR)分别检测各组细胞中SVA VP1及IFN-αmRNA的转录水平。结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA及PK-15/SVA/IFN细胞中SVA VP1基因的转录水平极显著升高(P<0.001),PK-15/SVA/IFN中IFN-α的转录水平显著或极显著升高(P<0.05、P<0.01)。通过转录组测序技术(RNA-Seq)分析各组细胞miRNA的转录谱,采用Spss软件统计各组细胞中转录差异miRNA的数量;利用基于负二项分布的DESeq2筛选各组细胞中转录显著差异miRNA;采用miRanda、PITA和RNAhybrid 3个软件预测各组细胞转录显著差异miRNA的靶基因,通过miREvo和mirdeep2软件预测各组细胞中的新miRNA并通过与猪miRNA序列比对得到已知miRNA;分别采用GO功能和KEGG富集分析各组细胞转录显著差异miRNA涉及的生物学功能及信号通路。统计分析结果显示,与PK-15相比,PK-15/IFN、PK-15/SVA和PK-15/SVA/IFN中均存在转录显著差异miRNA,且在SVA感染后细胞中转录的miRNA数量增多,IFN-α刺激则会减少细胞中转录的miRNA数量,SVA感染后再经IFN-α处理则转录的miRNA数量又有所降低。筛选结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA中有167种转录显著差异miRNA,其中94种转录显著上调,73种转录显著下调;与PK-15相比,PK-15/IFN中有98种转录显著差异miRNA,其中55种转录显著上调,43种转录显著下调。预测结果显示,共有290种转录显著差异miRNA有对应靶基因,且共预测到292种新miRNA和345种已知miRNA。选取6种转录显著差异miRNA采用Graphpad prism6.0进行miRNA-mRNA的互作网络展示。结果显示,miR-221-5p的靶基因显著多于其他miRNA,且其靶基因主要与癌症、病毒感染的治疗及宿主的免疫反应有关。GO功能结果显示,在经IFN-α处理或SVA感染后,转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于细胞组分和生物过程等功能。KEGG分析结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA和PK-15/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于Rap1和NF-κB信号通路;与PK-15/IFN相比,PK-15/SVA/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于PI3K-Akt、NF-κB和肿瘤坏死因子(TNF)等抗病毒免疫相关信号通路;与PK-15/SVA相比,PK-15/SVA/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于Rap1、NF-κB、TNF和MAPK信号通路。16种转录显著差异miRNA的qPCR结果与RNA-Seq结果一致。综上所述,本研究首次证实IFN-α处理、SVA感染均显著影响PK-15细胞miRNA转录谱,前者促进miRNA的转录,后者则抑制miRNA的转录。其中转录显著差异miRNA的靶基因与宿主抗病毒及肿瘤免疫均等信号通路密切相关,该结果为阐明SVA感染宿主细胞后非编码RNA转录谱变化的分子机制研究奠定基础。

热适应/热射病大鼠血清中microRNA let-7b的变化及意义

目的探究热适应/热射病大鼠模型血清中microRNA let-7b表达的变化及其与HSP70,IL-6,TNF-αTGF-β和IL-12的相关性,分析其临床意义。方法在第二军医大学实验动物中心选取肛温、体重、用龄基本一致的雄鼠60只随机均分为对照组、热适应组、热射病组,于仿真热气候动物舱中建立热适应/热射病大鼠模型后采集心尖血并分离血清。以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清中microRNA let-7b,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中HSP70,IL-6,TNF-α,TGF-β和IL-12的蛋白水平。三组间计量资料的比较采用Kruskal-Wallis H检验,以Spearman秩相关系数表示热射病组两变量之间的相关性。结果 miRNA let-7b在对照组、热适应组、热射病组的M分别为0.99,1.04和1.93,Q分别为0.30,0.25和0.44,差异具有统计学意义(x^2=38.95,P<0.001),组间两两比较结果显示let-7b在对照组与热适应组表达差异无统计学意义(P>0.05),在对照组与热射病组、热适应组与热射病组表达差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析显示热射病组let-7b/与HSP70,TNF-α和IL-6呈正相关,差异具有统计学意义(r_s=0.579,0.498和0.609,P<0.05)。结论 miRlet-7b可能参与了热射病病理过程,为临床监测高温湿环境下患者的状态提供了潜在的评价指标。

MicroRNA-196a在喉癌组织中的表达及其对喉癌细胞侵袭和转移的影响

目的探讨micro RNA-196a(mi R-196a)在喉癌组织中表达及其对喉癌细胞侵袭和转移的影响。方法选取2015年1月—2017年12月金华市中心医院70例喉癌手术切除标本的喉癌组织和癌旁组织。将人喉癌Hep-2细胞分为空白对照组、阴性对照组及si RNA组。si RNA组细胞转染pc DNA/mi R-196a,阴性对照组细胞转染pc DNA/mi R-NC,空白对照组不做处理。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定癌旁组织和喉癌细胞中mi R-196a水平;Transwell小室测定喉癌细胞侵袭和迁移能力;Western blotting检测喉癌细胞磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-PKB)、Bax及Bcl-2蛋白水平;RT-PCR测定喉癌细胞PI3K、p-PKB、Bax及Bcl-2 m RNA水平。结果喉癌组织中mi R-196a水平高于癌旁组织(P <0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,si RNA组喉癌细胞中mi R-196a水平降低(P<0.05),细胞侵袭和迁移能力下降(P<0.05),PI3K、p-PKB及Bcl-2蛋白和m RNA水平降低(P<0.05),Bax蛋白和m RNA水平升高(P <0.05);空白对照组与阴性对照组细胞各指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论喉癌组织中mi R-196a水平升高,沉默mi R-196a可降低喉癌细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与PI3K/PKB信号通路有关。

阴离子型离子交换树脂D301-g-PDMC的制备及其对AuCl_4^-的吸附性能初探

通过溶液中的过硫酸铵与D301树脂表面的叔胺基形成氧化-还原引发体系,将水溶性阳离子烯类功能单体甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵(DMC)接枝到D301树脂表面,制得了新型阴离子型离子交换树脂D301-g-PDMC。考察了主要接枝条件(时间、温度、引发剂及单体用量)对接枝度的影响,并研究了D301-g-PDMC对AuCl_4^-的吸附性能。结果表明,反应时间为10 h,反应温度为35℃,过硫酸铵用量为1.6%,DMC用量为17 m L时,PDMC的接枝度最高,可达26.67%。D301-g-PDMC对AuCl_4^-有很强的吸附能力,吸附容量可以达到748.03 mg/g。此外,D301-g-PDMC对AuCl_4^-的吸附效率可达97.83%。

胃癌组织中靶向Abl相互作用蛋白-1的microRNA筛选

目的检测3种Abl相互作用蛋-1(ABI-1)相关的microRNA(miRNA)在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达模式,筛选出与胃癌组织相关的靶向ABI-1的miRNA。方法收集59例胃癌术后蜡块标本,包含胃癌组织和癌旁正常组织,抽提石蜡组织中的总RNA。在基因网选择ABI-1相关的miRNA(即miR-181c、miR-148b、miR-9),采用逆转录实时荧光定量PCR法对胃癌组织及癌旁正常组织中的3种miRNA进行检测,计算胃癌组织相对癌旁正常组织中miRNA的相对表达量(2-ΔΔCt)。结果 miR-181c、miR-148b、miR-9在胃癌组织中的相对表达量分别为(2.32±1.04)(P=0.000)、(0.82±0.67)(P=0.321)、(1.07±0.95)(P=0.774),其中miR-181c在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达差异有显著性(P=0.000)。结论 miR-181c在胃癌组织中相对高表达,提示其可能作为靶向ABI-1的miRNA调节ABI-1蛋白的表达,为进步研究靶向ABI-1miRNA在胃癌发生发展中的作用奠定基础。

高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响

目的:探讨高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响。方法:采用实对荧光定量聚合酶链反应检测A549细胞中miR-301b和miR-769-5p的表达;使用qRT-PCR检测增殖相关基因miRNA表达的变化,并将实验组miR-301b和miR-769-5p表达量上调(与阴性对照组比较);采用MTT法检测并对比A549细胞增殖的改变;采用流式细胞仪检测并对比A549细胞周期以及凋亡的改变。结果:qRT-PCR结果表明,浸染了miR-301b和miR-769-5p过表达载体的A549细胞中miR-301b和miR-769-5p水平明显高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。miR-301b过表达使G0/G1期的A549细胞增加,S和G2/M期的细胞减少;miR-769-5p过表达使G0/G1和G2/M期细胞增加,S期细胞减少。结论:miR-301b对靶基因FOXF2具有调控作用,miR-769-5p对靶基因ARID1A具有调控作用。miR-301b和miR-769-5p的过表达对肺癌A549细胞的细胞周期产生了明显影响,但没有影响细胞增殖和凋亡,miR-301b和miR-769-5p有可能成为肺癌分子靶向治疗调控效应靶点,可以进一步探索研究。

MicroRNA-335-5p对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞的影响

目的探讨microRNA-335-5p(miR-335-5p)对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)增殖、侵袭和凋亡的影响。方法选取2018年3月—2019年3月湖州市第三人民医院收治的50例类风湿性关节炎(RA)患者和50例接受关节置换手术的关节外伤患者的滑膜组织标本,并分离培养RASFs。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测滑膜组织和RASFs中miR-335-5p和DKK1的表达,荧光素酶报告基因检测评估miR-335-5p对DKK1荧光素酶活性的影响。将miR-335-5p模拟物、si-DKK1和pcDNA-DKK1转染RASFs,分别通过ELISA比色法、Transwell法和流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡情况。结果与正常组织和RASFs相比,miR-335-5p在RA组织和RASFs中下调(P<0.05),而DKK1在RA组织和RASFs中上调(P<0.05)。荧光素酶报告基因检测显示,miR-335-5p可特异性结合DKK1的3′UTR,抑制其荧光素酶活性(P<0.05)。此外,miR-335-5p可降低DKK1的表达(P<0.05)。过表达miR-335-5p或敲除DKK1可抑制RASFs的增殖和侵袭,诱导RASFs凋亡(P<0.05)。而过表达DKK1可逆转miR-335-5p对RASFs的影响(P<0.05)。结论miR-335-5p可通过直接靶向DKK1的表达,抑制RASFs的增殖和侵袭,诱导其凋亡。

D301大孔阴离子树脂固定化β-淀粉酶的研究

[目的]对β-淀粉酶的固定化工艺进行探讨。[方法]以D301大孔阴离子树脂为载体,采用离子交换吸附法固定化β-淀粉酶,测定酶活性。[结果]加酶量为500U/g(树脂,湿重),pH值为5.6,在45℃下恒温振荡3h,固定化酶的酶活可达180U/g载体。[结论]制备的固定化酶,其温度稳定性、pH稳定性、储藏稳定性和操作稳定性较好。

MicroRNA:心肌缺血-再灌注损伤的调控者

近年来,大量实验表明microRNA(miRNA)参与并调控了心肌缺血-再灌注损伤的过程,为临床治疗心肌缺血性疾病提供了新的靶点和策略。该文简要介绍miRNA参与和调控心肌缺血-再灌注损伤的机制研究进展。