MicroRNA-29c表达与胃癌临床病理特征的关系研究

目的:探讨miR-29c的表达与胃癌临床病理特征之间的关系,预测miR-29c靶基因生物学功能。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载胃癌微小RNA表达及临床数据,分析miR-29c在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达情况。收集胃癌及正常组织石蜡标本,制作成组织芯片,使用miRNAscope技术检测miR-29c在胃癌及正常组织中的表达情况,通过卡方检验分析miR-29c表达与胃癌临床病理特征的关系。TargetScan、Pictar、miRTarbase和Starbase数据库预测miR-29c的靶基因,并对潜在靶基因进行富集分析。结果:TCGA数据分析显示,与正常组织相比(n=41),miR-29c在胃癌组织(n=434)中表达显著下调(P<0.001)。miRNAscope检测结果显示,与正常组织相比,miR-29c在胃癌组织中表达下调(P<0.001),其表达水平与胃癌患者TNM分期、淋巴结转移、组织学分型显著相关(P<0.05)。数据库预测得到18个潜在靶基因,主要富集在DNA甲基化转移酶活性等生物学功能,以及癌症相关miRNAs等信号通路。结论:miR-29c在胃癌组织中低表达,与胃癌患者TNM分期、淋巴结转移、组织学分型相关,有望成为判断胃癌预后的潜在标记物及分子治疗的新靶点。

Relationship between microRNA‑29c expression and clinicopathological features of gastric cancer

Objective:To explore the relationship between the expression of miR-29c and clinicopathological characteristics of gastric cancer and predict the biological functions of target genes of miR-29c.Methods:The expression and clinical data of microRNA of gastric cancer were downloaded from The Cancer Genome Atlas(TCGA)to analyze the expression of miR-29c in gastric cancer tissues and normal gastric mucosal tissues.Paraffin specimens of gastric cancer and normal tissues were collected to make tissue microarray.The expression of miR-29c in gastric cancer tissues and normal tissues were detected by miRNAscope technique.The relationship between the expression of miR-29c and clinicopathological characteristics of gastric cancer was analyzed by chi-square test.Target genes of miR-29c were predicted by TargetScan,Pictar,miRTarbase and Starbase databases,and enrichment analysis were performed on potential target genens.Results:TCGA analysis showed that the expression of miR-29c was significantly lower in gastric cancer tissue(n=434)than normal tissues(n=41,P<0.001).miRNAscope analysis showed that the expression of miR-29c was significantly lower in gastric cancer tissue than normal tissues(P<0.001),and was significantly associated with TNM staging,lymph node metastasis and histological type of gastric cancer patients(P<0.05).Database predicted 18 potential target genes that were enriched in DNA methyltransferase activity and cancer-associated miRNA signal pathways.Conclusion:miR-29c was expressed at a low level in gastric cancer tissue and associated with TNM staging,lymph node metastasis and histological type,and could become a potential prognosis marker of gastric cancer and a new target of molecular treatment.

MicroRNA-29c靶向CDC42调控MCF-7细胞的增殖与侵袭

目的:研究MicroRNA-29c(miR-29c)在乳腺癌中的表达及对乳腺癌MCF-7细胞增殖与侵袭的影响。方法:收集20例乳腺癌患者肿瘤组织和癌旁组织,利用qPCR检测miR-29c的表达情况;构建miR-29c过表达载体,转染MCF-7细胞,设立miR-29c组,NC组(转染空病毒)和control组,CCK8检测细胞增殖,Transwell检测细胞侵袭能力,同时利用双荧光素酶报告基因验证miR-29c靶基因。结果:乳腺癌组织中的miR-29c相对表达量明显低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05),MCF-7细胞过表达miR-29c后,细胞增殖能力显著低于NC组和control组,细胞侵袭能力显著低于NC组和control组(P<0.05),双荧光素酶报告系统显示miR-29c能够抑制靶基因CDC42载体荧光素酶活性。结论:miR-29c通过靶向CDC42蛋白抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖与侵袭,为乳腺癌的治疗提供候选分子靶点和理论依据。

microRNA-29c在雷公藤内酯醇抗克唑替尼耐药H3122肺癌细胞增殖的作用及机制研究

目的探讨microRNA-29c在雷公藤内酯醇(TP)抗克唑替尼耐药肺癌细胞增殖的作用及机制研究。方法将克唑替尼耐药H3122分为miRNA-29c inhibitor+TP组、阴性对照miRNA(miRNA-NC)+TP组、TP组和对照组。采用MTT检测细胞存活率,AnnexinV-FITC试剂盒检测细胞凋亡,Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3、DNMT3a表达,RT-qPCR检测DNA甲基转移酶3(DNMT3)mRNA、miRNA-29c表达,定量甲基化特异性PCR(QM‐SP)法检测视黄酸受体(RARb)、RAS域家族蛋白1(RASSF1)、死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)和p16 mRNA表达和甲基化状态。结果与对照组比较,TP组中,TP浓度为10 nmol/L、25 nmol/L和50 nmol/L时,miRNA-29c表达增加(t分别=43.12、61.65、83.50,P均<0.05),DNMT3a表达下降(t分别=146.56、628.05、653.16,P均<0.05)。与对照组比较,TP组细胞存活率、p16、RASSF1、DAPK1、RARb甲基化降低(t分别=14.76、94.52、103.08、67.15、72.22,P均<0.05)、细胞凋亡率增加(t=-9.32,P<0.05),Western blot结果显示DNMT3a、Bcl-2表达明显降低,Bax、cleaved-ca‐spase3表达明显增高。与miRNA-NC+TP组比较,miRNA-29c inhibitor+TP组细胞存活率、p16、RASSF1、DAPK1、RARb甲基化明显增加(t分别=-4.08、-7.77、-67.84、-59.66、-46.79,P均<0.05),细胞凋亡率明显下降(t=5.40,P<0.05)。Western blot结果显示DNMT3a、Bcl-2表达明显增加,Bax、cleaved-caspase3表达明显降低。结论 TP能够增加miRNA-29c表达,下调DNMT3表达和活性,降低抑癌基因的甲基化水平,抑制H3122CR细胞增殖,发挥抗肺癌作用。

Expression and regulation of microRNA-29a and microRNA-29c in early diabetic rat cataract formation

AIM： To determine the role of microRNA （miRNA）-29a and miRNA-29c in the regulation of apoptosis in early rat diabetic cataract formation.METHODS： Streptozotocin （STZ）-induced diabetic Sprague-Dawley （SD） rats were used in the study. The expression level of miRNA-29a, miRNA-29c, and BCL2-modifying factor （BMF） in lens epithelial cells （LECs） samples were measured using quantitative real-time polymerase chain reaction. Prediction algorithms of miRanda, TargetScan 6.2, and mirRDB to perform a miRNA gene network analysis were used for the potential miRNA-29a and miRNA-29c targets. RESULTS： The miRNA-29a and miRNA-29c expression levels were all significantly lower in the control group compared to the 2 and 4wk diabetic samples （P〈0.01）. The network analysis indicated that one miRNA-29a and miRNA-29c targets was BMF. There was significantly higher expression of BMF mRNA compared to the normal controls （P〈0.01）. CONCLUSION： Apoptosis occurs in rat LECs following high blood glucose exposure. It is likely that apoptosis during diabetic cataract formation involves the decreased expression of miRNA-29a and miRNA-29c and the increased expression of BMF.

急性脑梗死患者血清miR⁃29c⁃3p、MDM2水平与预后的关系

目的分析微小RNA⁃29c⁃3p(miR⁃29c⁃3p)和鼠双微体2(MDM2)在急性脑梗死(ACI)患者血清中的水平及二者预测患者预后的临床价值。方法选择2021年7月—2022年7月在华北理工大学附属医院就诊的ACI患者90例为ACI组,并根据出院后3个月改良Rankin量表(mRS)评分分为预后良好亚组55例(mRS评分≤2分)和预后不良亚组35例(mRS评分>2分);同期医院健康体检者90例为健康对照组。比较所有受试者临床资料及血清miR⁃29c⁃3p、MDM2水平;Pearson法分析ACI患者血清miR⁃29c⁃3p和MDM2的相关性;多因素Logistic回归分析影响ACI患者预后不良的因素;受试者工作特征曲线评价血清miR⁃29c⁃3p、MDM2水平预测ACI患者预后不良的价值。结果与健康对照组比较,ACI组饮酒史比例、总胆固醇(TC)、高敏C反应蛋白(hs⁃CRP)、MDM2水平升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL⁃C)、尿酸(UA)、miR⁃29c⁃3p水平降低(χ^(2)/t/P=4.472/0.034、13.357/<0.001、32.246/<0.001、9.948/<0.001、9.435/<0.001、3.254/0.001、9.467/<0.001);与预后良好亚组比较,预后不良亚组血清miR⁃29c⁃3p水平降低,MDM2水平升高(t/P=9.480/<0.001、8.599/<0.001);ACI患者血清miR⁃29c⁃3p与MDM2水平呈负相关(r/P=-0.442/<0.001)。Logistic回归分析结果表明,血清hs⁃CRP高水平、MDM2高水平是ACI患者预后不良的独立危险因素[OR(95%CI)=1.563(1.181~2.069)、3.122(1.365~7.139)],血清miR⁃29c⁃3p高水平是其保护因素[OR(95%CI)=0.735(0.569~0.950)];血清miR⁃29c⁃3p、MDM2及二者联合预测ACI患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.825、0.831、0.909,二者联合预测价值高于单项检测(Z/P=2.222/0.026、2.063/0.039)。结论ACI患者血清miR⁃29c⁃3p呈低表达,MDM2呈高表达,且预后不良ACI患者二者水平变化更明显,二者联合对ACI患者预后有较高预测价值。

lnc⁃NEAT1通过miR⁃29c⁃3p/CSPG4信号轴调节黑色素瘤B16细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA⁃核富集转录本1(long non⁃coding RNA⁃nuclear enriched abundant transcript 1,lnc⁃NEAT1)对黑色素瘤(melanoma,MM)细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制。方法:体外培养MM细胞系(A375、A875、M14、B16)和人表皮黑色素细胞(HEMa⁃LP),采用实时荧光定量PCR(real⁃time quantitative PCR,RT⁃qPCR)检测细胞中lnc⁃NEAT1、microRNA⁃29c⁃3p(miR⁃29c⁃3p)、硫酸软骨素蛋白多糖4(chondroitin sulfate proteoglycan 4,CSPG4)mRNA表达。取对数生长期B16细胞,分为对照组(control组)、si⁃NC组、si⁃NEAT1组、si⁃NEAT1+inhibitor⁃NC组、si⁃NEAT1+miR⁃29c⁃3p inhibitor组,用Lipofectamine 3000将相应质粒转染到细胞中。RT⁃qPCR检测转染效率,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测细胞CSPG4及增殖、迁移与侵袭相关蛋白表达。双荧光素酶报告基因检测miR⁃29c⁃3p与lnc⁃NEAT1、CSPG4的靶向关系。裸鼠移植瘤实验探究lnc⁃NEAT1敲低对MM细胞体内生长的影响。结果:MM细胞系中lnc⁃NEAT1和CSPG4 mRNA水平显著高于HEMa⁃LP细胞,miR⁃29c⁃3p水平显著低于HEMa⁃LP细胞(P均<0.05)。敲低lnc⁃NEAT1可显著升高miR⁃29c⁃3p表达,降低CSPG4 mRNA和蛋白水平,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,并降低Ki⁃67、N⁃cadherin与Vimentin蛋白水平,升高E⁃cadherin蛋白水平(P均<0.05);下调miR⁃29c⁃3p表达可显著升高CSPG4 mRNA和蛋白水平,减弱lnc⁃NEAT1敲低对MM细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染miR⁃29c⁃3p mimic后,细胞中NEAT1⁃WT和CSPG4⁃WT的荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。裸鼠移植瘤实验结果显示,敲低lnc⁃NEAT1可显著抑制体内移植瘤生长,而抑制miR⁃29c⁃3p可显著减弱lnc⁃NEAT1敲低对移植瘤生长的抑制作用(P均<0.05)。结论:lnc⁃NEAT1可能通过调节miR⁃29c⁃3p/CSPG4轴促进MM细胞增殖、迁移和侵袭。

胶质瘤miR-29c表达异常减少及其对肿瘤细胞增殖的影响

目的：探讨microRNA-29c（miR-29c）在胶质瘤中的表达及其对细胞分裂周期蛋白42（CDC42）的调控作用和对细胞增殖的影响。方法：用锁定寡核苷酸原位杂交法和免疫组织化学法检测60例不同级别胶质瘤及10例非肿瘤对照脑组织中miR-29c和CDC42的表达水平，实时荧光定量RT-PCR、Western blot及MTS法分别检测U87MG细胞中miR-29c瞬时表达、CDC42 mRNA和蛋白表达及其对胶质瘤细胞增殖的影响。结果：各级别胶质瘤的miR-29c表达水平均明显低于非肿瘤对照脑组织，且随肿瘤级别升高而显著降低，各组间的差异均有统计学意义（P〈0.001）。而CDC42表达水平则呈相反趋势，其表达水平随胶质瘤良恶性级别增加相应升高，除Ⅰ～Ⅱ级组与非肿瘤对照组之间外，其余各组间的差异均有统计学意义（P〈0.001）。与对照组相比， miR-29c转染组的CDC42 mRNA（P〈0.001）和蛋白表达水平（P〈0.01）均明显降低。miR-29c转染组细胞的增殖能力明显低于U87MG空白对照组和Scr转染组（P〈0.05）。结论：miR-29c是胶质瘤的抑瘤miRNA，其表达水平可作为评价胶质瘤良恶性级别的重要参考指标。miR-29c在胶质瘤中表达减少解除了其对靶基因CDC42转录后水平的抑制作用，并导致肿瘤细胞无限增殖。表明miR-29c表达异常减少可能是引起胶质瘤发生、发展的关键事件。

miR-29c通过Tiam1抑制人食管鳞状细胞癌侵袭和转移的研究

目的研究微小RNA(mi R)-29c通过靶向T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)基因对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞侵袭和迁移的影响。方法通过细胞划痕和transwell实验观察mi R-29c过表达的ESCC细胞侵袭迁移能力的变化;通过免疫印迹法和sensor reporter实验研究mi R-29c对Tiam1的调控作用和靶标位点;在细胞"拯救"实验中通过免疫印迹法检测相关蛋白表达量的变化以及用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观察细胞形态的改变,研究mi R-29c抑制ESCC细胞侵袭迁移的调节机制。结果细胞划痕实验和transwell实验显示mi R-29c能抑制ESCC细胞的侵袭迁移;通过生物信息学方法预测mi R-29c的靶基因是Tiam1;免疫印迹法和sensor reporter检测结果显示mi R-29c通过与Tiam1 3'-非翻译区(UTR)结合降解Tiam1;细胞功能"拯救"实验的细胞划痕、免疫印迹法和免疫荧光结果显示mi R-29c能抑制Tiam1的表达,导致激活态Rac1-三磷酸鸟苷(GTP)减少,致使细胞运动状态改变,迁移能力减弱;而人工合成的针对Tiam1的特异si RNA分子si Tiam1的干涉作用能"拯救"mi R-29C对ESCC细胞迁移能力的抑制。结论 mi R-29C通过降解Tiam1 m RNA,下调了Rac1的激活水平,导致细胞运动状态变化,从而抑制ESCC细胞的侵袭迁移。

宫颈癌组织中微小RNA-29c的水平及临床意义

目的探讨微小RNA-29c(miR-29c)在宫颈癌组织中的表达及临床意义。方法收集本院2013年6月至2018年7月经病理确诊的100例宫颈癌患者的组织标本,采用实时定量PCR(QPCR)检测以上组织中的miR-29c水平,分析miR-29c水平与宫颈癌临床病理特征(年龄、FIGO分期、肿瘤大小、分化程度、病理类型、宫旁浸润、间质浸润、LVSI和淋巴结转移)的关系,以114例子宫肌瘤全子宫切除术后的正常宫颈组织作对照。基于Kaplan-Meier plotter在线生存分析数据库(http://kmplot.com/analysis/)分析miR-29c表达与宫颈癌患者临床预后的关系。结果 QPCR检测发现宫颈癌组织中的miR-29c水平为0.326±0.090,低于正常宫颈组织的1.039±0.372,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-29c水平与宫颈癌患者的年龄、病理类型和宫旁浸润无关(P>0.05),但与FIGO分期、肿瘤大小、分化程度、间质浸润、LVSI和淋巴结转移有关(P<0.05),其中FIGO分期较晚(Ⅱ期)、肿瘤较大(>4 cm)、低分化、间质浸润较深(>1/2)、有LVSI和淋巴结转移的miR-29c水平和高表达率均低于FIGO分期较早(Ⅰ期)、肿瘤较小(≤4 cm)、高中分化、间质浸润较浅(>1/2)和无LVSI和淋巴结转移者(P<0.05)。Kaplan-Meier Plotter数据库分析发现,miR-29c高表达在宫颈癌中与良好的预后有关(HR=0.57,95%CI:0.36～0.91,P=0.018)。结论 miR-29c在宫颈癌组织中呈低表达,且与临床分期、血管侵犯和淋巴结转移有关,参与宫颈癌的发生发展,在宫颈癌的防治中有一定价值。

糖尿病视网膜病变病人血清微小RNA-29c、微小RNA-194的表达

目的检测微小RNA-29c(miR-29c)和微小RNA-194(miR-194)在糖尿病视网膜病变(DR)病人血清中的表达特点及其临床意义。方法通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测在汉中市人民医院就诊的98例DR病人、98名Ⅱ型糖尿病(T2DM)病人和98例同期体检健康者(NC)血清中miR-29c和miR-194的表达水平,多因素logistic回归分析影响DR发生的危险因素。Pearson相关分析DR病人血清miR-29c和miR-194与各生化指标的相关性。结果DR组、DM组和NC组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)、踝臂指数(ABI)、脉搏波传导速度(PWV)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);DR组和DM组血清中糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)水平及miR-29c表达水平分别为(9.40±1.61)%比(8.53±1.78)%、(9.41±1.76)比(8.42±1.67)mmol/L、(1.29±0.57)比(1.12±0.25)明显高于NC组:(7.93±2.64)%、(6.41±1.62)mmol/L、(1.01±0.10),DR组明显高于DM组,而DR组和DM组miR-194表达水平明显低于NC组,DR组明显低于DM组(P<0.05);DR病人血清中miR-29c相对表达量与HbA1c、FPG水平均呈正相关(P<0.05),与血清miR-194相对表达量负相关(P<0.05);DR病人miR-194与miR-29c相对表达量呈负相关(P<0.05);多因素logistic回归分析发现,FPG水平高、HbA1c水平高、miR-29c水平高是DR发生的独立危险因素(均P<0.05),miR-194水平高是DR发生的保护因素(P<0.05)。结论DR病人血清中miR-29c表达相对DM病人和健康者上调,miR-194表达下调,miR-29c和miR-194与DR的发生发展有关。

^(125)碘粒子植入联合肿瘤切除术治疗脑胶质瘤患者疗效及对血清miR-128、miR-29c表达的影响

目的探究^(125)碘粒子植入联合肿瘤切除术治疗脑胶质瘤的临床效果及对患者血清miR-128、miR-29c表达的影响。方法选取2015年3月-2018年3月于郴州市第一人民医院神经外科接受治疗的脑胶质瘤患者80例,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组各40例。对照组患者给予开颅肿瘤切除术,观察组患者在对照组的基础上给予^(125)碘粒子植入治疗。荧光定量PCR法检测血清中miR-128和miR-29c表达水平,选用KPS功能状态评分对患者的功能状态进行衡量,比较2组患者的不良反应发生情况。结果观察组患者治疗总有效率为95. 00%,显著高于对照组的80.00%,差异具有统计学意义(χ~2=4.114,P=0.043)。肿瘤分化程度Ⅰ～Ⅱ级患者血清miR-128表达高于Ⅲ～Ⅳ级患者(χ~2=3.643,P=0.000),miR-29c表达水平低于Ⅲ～Ⅳ级患者(χ~2=3.934,P=0.000)。治疗后,2组患者血清中miR-128水平均降低,miR-29c水平均升高,且观察组的变化明显优于对照组,差异有统计学意义(t/P=3.468/0.001,t/P=5.926/0.000)。治疗后2组患者KPS评分均明显提高,且观察组患者的KPS评分显著高于对照组,差异具有统计学意义(t=8. 519,P=0. 000)。观察组患者的不良反应发生率为5. 00%,显著低于对照组的20.00%,差异有统计学意义(χ~2=4.114,P=0.043)。结论采用^(125)碘粒子植入联合肿瘤切除术治疗脑胶质瘤的效果明显优于单独采用肿瘤切除术,不仅可以改善患者血清中miR-128、miR-29c的表达水平,且不良反应发生率较低。

阿尔茨海默病中miR-29c对APP表达调控的初步研究

目的探讨microRNA29c(miR-29c)在阿尔茨海默病中的作用。方法采用了microarray芯片检测3月龄、6月龄APPswe/PSΔE9双转基因阿尔茨海默病小鼠大脑中microRNA表达情况并利用实时定量PCR验证结果可靠性,通过microRNA靶基因数据库预测选出与阿尔茨海默病相关的靶基因,构建miR-29c表达载体,将其转染SH-SY5Y及HEK-293T细胞,在高表达miR-29c的SH-SY5Y及HEK-293T细胞系中验证miR-29c对靶基因的调控作用。将靶基因APP mRNA的野生及突变3’UTR序列克隆到双荧光素酶报告基因载体,用双荧光素酶报告检测系统检测miR-29c与靶基因的结合位点。结果根据microRNA芯片结果筛选出在3、6月龄APPSWE/PS1ΔE9双转基因小鼠大脑表达均有差异的miR-29c,通过实时定量PCR证实miR-29c在3月、6月、9月龄小鼠中表达明显升高。通过microRNA靶基因数据库预测miR-29c可以调控阿尔茨海默病的靶基因APP,利用Western blot检测到高表达miR-29c的SH-SY5Y细胞及HEK-293T细胞中APP蛋白表达减少。将miR-29c表达载体与带有野生及突变APPmRNA的3’UTR的双荧光素酶报告载体共转染HEK-293T细胞,通过双荧光素酶检测系统检测未找到miR-29c与APP mRNA 3’UTR的结合位点。结论 miR-29c对APP表达的具有负向调控作用,但其调控位点可能不位于其3’UTR区域。

疼痛调控相关miRNAs的筛选及脊髓miR-29c对神经病理性痛大鼠痛阈的影响

目的通过microRNAs(miRNAs)芯片技术筛选疼痛调控相关的miRNAs,观察microRNA-29c(miR-29c)对神经病理性痛大鼠痛阈的影响。方法实验一:雌性SD大鼠,随机分为神经病理性痛组(SNI组)及妊娠神经病理性痛组(PSNI组),测定机械缩足阈值(MWT),观察分娩对疼痛的影响。在SNI组及PSNI组大鼠分娩后MWT差异显著时,取脊髓腰膨大组织,筛选差异表达的miRNAs。实验二:选取目的miRNAs,包被过表达或沉默慢病毒,脊髓内注射干预后观察SNI组大鼠MWT变化。结果与SNI组大鼠比较,PSNI组大鼠分娩后第3天MWT明显升高,脊髓c-Fos蛋白含量明显降低(P<0.05);miRNAs芯片分析共发现71条差异表达的miRNAs,在PSNI大鼠显著上调37条,显著下调34条;选取并包被miR-124a过表达、miR-29c沉默慢病毒注射,miR-29c表达沉默可明显提高SNI组大鼠MWT。结论miR-29c是通过基因芯片筛选获得的miRNA,下调SNI大鼠脊髓miR-29c表达,能够显著改善病理性痛状态。

卵巢癌组织中miR-29c、miR-133b和miR-1的水平分析及临床意义

目的探讨卵巢癌组织中miR-29c、miR-133b和miR-1的表达水平,分析3者与卵巢癌临床病理特征的关系。方法收集本院确诊的65例卵巢癌患者经手术切除的上皮性卵巢癌组织标本(卵巢癌组),采用实时定量RT-PCR(qRTPCR)法检测miR-29c、miR-133b及miR-1水平,收集对应卵巢癌患者的临床病理参数(年龄、临床分期、分化程度、组织类型及淋巴结转移),同时选取32例正常卵巢上皮组织(正常组)和39例良性卵巢上皮囊肿组织(良性组)作对照,以正常组的各指标均数为界值,将卵巢癌组miR-29c、miR-133b及miR-1水平分为高水平组(>正常组)和低水平组(≤正常组),比较miR-29c、miR-133b及miR-1不同表达水平与卵巢癌临床病理参数的关系,同时分析卵巢癌组织中3者水平的关系。结果卵巢癌组miR-29c水平高于正常组和良性组,而miR-133b和miR-1水平均低于正常组和良性组,差异有统计学意义(P<0.05);卵巢癌组miR-29c、miR-133b及miR-1水平均与分化程度有关,miR-29c水平与临床分期及淋巴结转移有关,而miR-133b亦与淋巴结转移有关,差异均有统计学意义(P<0.05);卵巢癌miR-29c水平与miR-133b和miR-1均呈负相关(r=-0.541、-0.361),miR-133b与miR-1呈正相关(r=0.447),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢癌患者组织中miR-29c呈高表达,miR-133b及miR-1呈低表达,与临床病理学特征有关,且在卵巢癌诊断中有一定的价值,可用于辅助卵巢癌的诊断和病情评估。

MicroRNA-29c通过TGF-β1通路对扩张性心肌病心肌纤维化调控的实验研究

目的研究microRNA-29c(miR-29c)在扩张性心肌病(DCM)心肌纤维化过程中的作用。方法收集因DCM行心脏移植患者的心肌组织标本3例,作为DCM组,意外创伤性脑死亡而无心脏疾病患者的心肌组织3例,作为对照组;通过Masson染色观察心肌纤维化状况,阿霉素处理心肌成纤维细胞,上调miR-29c表达,观察对心肌纤维化的影响;应用RT-PCR、Western Bolt法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达水平;CCK8检测心肌成纤维细胞的活力。结果DCM组心肌组织中心肌纤维化严重,miR-29c表达下降,TGF-β1mRNA和蛋白表达增加(P<0.05);阿霉素处理后的心肌成纤维细胞活动度增加(P<0.05);转染miR-29c mimic后的细胞TGF-β1、Co.lⅠ、ColⅢmRNA表达显著降低(P<0.05)。结论DCM心肌组织心肌纤维化严重,miR-29c能减弱TGF-β1对心肌纤维化的诱导作用,抑制细胞病理性增生,可能通过TGF-β1通路调控DCM心肌纤维化。

miR-29c靶向调控AMPK/mTOR信号通路对胃癌细胞生物学行为的影响

目的探讨miR-29c靶向调控AMPK/m TOR信号通路对胃癌细胞生物学行为影响的机制。方法q PCR检测不同胃癌细胞株中miR-29c的表达情况;免疫荧光检测miR-29c-mimic转染胃癌SGC-7901细胞的转染效率;MTT增殖实验检测miR-29c对胃癌SGC-7901细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测miR-29c对胃癌SGC-7901细胞侵袭能力的影响;Western blotting检测过表达miR-29c后p-AMPK和PRR5蛋白表达情况的变化。结果胃癌SGC-7901细胞中miR-29c的表达水平低于胃癌MGC-803、AGS和HGC-27细胞(P<0.05)。转染72 h后,miR-29cmimic可以有效地转染进入胃癌SGC-7901细胞。miR-29c-mimic组细胞增殖率以及p-AMPK和PRR5蛋白的表达水平明显低于NC组(P<0.05),迁移至膜下层的细胞数量明显少于NC组(P<0.05)。结论 miR-29c可能靶向AMPK/m TOR信号通路调控胃癌SGC-7901细胞的生物学行为。

多层螺旋CT联合血清lncRNA TUG1和miR-29c-3p检测在胆囊癌诊断中的应用

目的探讨多层螺旋CT联合血清长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)、微小RNA-29c-3p(miR-29c-3p)对胆囊癌的诊断价值。方法收集2019年2月至2022年1月127例疑似胆囊癌患者作为研究对象,最终手术病理证实51例为胆囊癌(胆囊癌组),76例为非胆囊癌(对照组)。对入组患者进行多层螺旋CT检查;采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测血清lncRNA TUG1、miR-29c-3p表达水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA TUG1、miR-29c-3p对胆囊癌的诊断价值;采用Kappa检验分析比较多层螺旋CT及其联合血清lncRNA TUG1、miR-29c-3p诊断胆囊癌与手术病理结果的一致性。结果多层螺旋CT检出胆囊癌62例,手术病理确诊41例,多层螺旋CT诊断胆囊癌与手术病理结果一致性较高,Kappa值为0.510(P=0.000)。与对照组比较,胆囊癌组血清lncRNA TUG1(1.01±0.21 vs.1.46±0.36)表达水平显著升高,miR-29c-3p(1.02±0.20 vs.0.74±0.19)表达水平显著降低(P<0.05)。血清lncRNA TUG1、miR-29c-3p诊断胆囊癌的曲线下面积(AUC)分别为0.775(95%CI:0.694~0.857)、0.781(95%CI:0.703~0.859),特异度分别为65.8%、64.5%,灵敏度分别为70.6%、82.4%,截断值分别为1.20、0.83。多层螺旋CT联合血清lncRNA TUG1、miR-29c-3p检出胆囊癌47例,与手术病理结果一致性较高,Kappa值为0.701(P<0.001)。多层螺旋CT联合血清lncRNA TUG1、miR-29c-3p诊断胆囊癌的特异度和准确率分别为90.8%和85.8%,高于三者单独诊断(P<0.05)。结论多层螺旋CT联合血清lncRNA TUG1、miR-29c-3p检测诊断胆囊癌的特异度和准确率较高,有助于胆囊癌的鉴别诊断。

肺炎支原体肺炎患儿外周血miR-29c、miR-146a与炎症因子的相关性研究

目的 探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿外周血微小RNA-29c(miR-29c)、微小RNA-146a(miR-146a)与炎症因子的相关性。方法 选取2018年5月至2020年10月于本院诊治的96例MPP患儿为MPP组,同期69例细菌性肺炎患儿为细菌性肺炎组,87例体检健康儿童作为健康对照组。比较三组儿童外周血miR-29c、miR-146a及炎症因子血清白介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)水平;分析MPP患儿miR-29c、miR-146a与炎症因子的相关性。根据是否发生重症MPP将MPP患儿分为重症组(n=45)和轻症组(n=51),比较不同病情组miR-29c、miR-146a水平。结果 三组儿童外周血miR-29c、miR-146a水平的差异有统计学意义(F值分别是117.929、87.687,P<0.05),MPP组<细菌性肺炎组<健康对照组;炎症因子IL-17、TNF-α、IL-1β水平的差异有统计学意义(F值分别是129.282、107.023、386.649,P<0.05),MPP组>细菌性肺炎组>健康对照组。Pearson相关性分析显示,MPP患儿miR-29c、miR-146a与IL-17、TNF-α、IL-1β均呈负相关(r分别是-0.512、-0.550、-0.494,r分别是-0.329、-0.282、-0.340,P<0.05)。此外,重症MPP患儿miR-29c、miR-146a水平低于轻症组患儿,差异有统计学意义(t值分别是3.477、3.453,P<0.05)。结论 MPP儿童外周血miR-29c、miR-146a呈相对低水平,且与IL-17、TNF-α、IL-1β呈负相关关系;miR-29c、miR-146a可能参与MPP发病过程,其水平随病情加重而降低。

二甲双胍通过miR-29c调控SIRT1/PGC-1α通路减轻脑卒中大鼠神经损伤

目的:探究二甲双胍(MET)减轻脑卒中大鼠神经损伤的作用及其机制。方法:SD大鼠随机分为假手术(sham)组(n=15)、模型(model)组(n=30)、MET(100 mg·kg^(−1)·d^(−1))组(n=30)、MET(100 mg·kg^(−1)·d^(−1))+agomir-NC(40 nmol/d)组(n=30)和MET(100 mg·kg−1·d−1)+agomir(40 nmol/d miR-29c agomir)组(n=30)。采用改良Pulsinelli四血管阻断法制备全脑缺血脑卒中模型,sham组大鼠只分离血管,不夹闭总动脉。造模前1周,给予MET组、MET+agomir-NC组和MET+agomir组大鼠腹腔注射相应药物,而sham组和model组腹腔注射等量生理盐水,以上各组均每天1次,每次0.2 mL,连续7 d。分别于术后24、48和72 h检测各组大鼠神经功能缺损评分,HE染色观察海马组织形态学变化并计数存活神经元,RT-qPCR检测海马组织miR-29c、沉默信息调节因子1(SIRT1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)的mRNA水平,Western blot法检测SIRT1和PGC-1α的蛋白表达水平。结果:在相同时点,与model组比较,MET组大鼠神经功能缺损评分显著降低,神经元存活率显著增加(P<0.05);与MET+agomir-NC组比较,MET+agomir组大鼠神经功能缺损评分显著升高,神经元存活率显著降低(P<0.05)。随着时间的延长,除sham组外,其余各组大鼠神经功能缺损评分呈升高趋势,神经元存活率呈降低趋势。术后72 h,与sham组比较,model组大鼠海马miR-29c表达水平显著升高,SIRT1和PGC-1α的mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与model组比较,MET组大鼠海马miR-29c表达水平显著降低,SIRT1和PGC-1α的mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与MET+agomir-NC组比较,MET+agomir组大鼠海马miR-29c表达水平显著升高,SIRT1和PGC-1α的mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:MET能够缓解脑卒中大鼠神经损伤,这可能与其下调miR-29c、促进SIRT1/PGC-1α通路激活有关。