循环microRNA-499与肌钙蛋白T早期诊断急性心肌梗死

【目的】比较分析心肌特异性microRNA-499(miR-499)与心肌肌钙蛋白T(cTnT)在早期诊断急性心肌梗死(AMI)中的价值。【方法】收集67名AMI病人和32名健康人的血浆标本,通过定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血浆中miR-499的含量,同时通过电化学发光法检测血浆cTnT的变化。【结果】AMI病人血浆中miR-499的含量较健康人显著升高(P<0.01),而当这些AMI病人康复后出院时miR-499的含量已下降到基线水平。MiR-499含量的变化与研究病例的自身特征无相关性(P>0.05)。另外,受试者工作特征曲线(ROC)分析表明,miR-499在诊断AMI方面具有明确的心肌特异性和敏感性,但并不优于cTnT。【结论】循环miR-499可作为AMI诊断的生物标志物,但在AMI早期诊断价值上不优于cTnT。

冠状动脉粥样硬化性心脏病慢性心力衰竭患者血清microRNA-499水平及与心功能和心肌重构的相关性

目的探究冠状动脉粥样硬化性心脏病(以下简称冠心病)慢性心力衰竭(CHF)患者血清microRNA-499(miR-499)水平及与心功能和心肌重构的关系,探讨其在CHF中的临床价值。方法选择2016年1月-2018年12月在大连市第三人民医院心内科就诊的冠心病CHF患者90例作为CHF组,同期该院健康体检者90例为对照组。测定血清miR-499水平。测定研究对象心功能指标:左室射血分数(LVEF)、心输出量(CO),以及心肌重构指标:左心房内径(LAP)、左室舒张末内径(LVEDD)、左室后壁厚度(LVPW)、左室重构指数(LVRI)、左室质量指数(LVMI)。结果 CHF组血清miR-499水平高于对照组(P<0.05),LVEF、CO、LVRI低于对照组(P<0.05),LAP、LVEDD、LVPW、LVMI高于对照组(P<0.05)。不同心功能分级患者的血清miR-499水平及LVEF、CO、LAP、LVPW、LVRI、LVMI比较,差异均有统计学意义(P <0.05),随心功能分级升高,血清miR-499水平升高,LVEF、CO、LVRI降低,LAP、LVPW、LVMI升高。CHF患者血清miR-499水平与LVEF、CO、LVRI呈负相关(P<0.05),与LAP、LVPW、LVMI呈正相关(P<0.05)。结论 miR-499在冠心病CHF患者血清中升高,与患者病情严重程度、心功能和心肌重构关系密切。

microRNA-499通过靶向调节SOX6抵抗缺氧诱导的神经细胞损伤

目的:探讨microRNA-499(miR-499)在缺氧诱导的PC12细胞损伤中的作用及其调控机制。方法:将PC12细胞随机分为:对照(control)组、缺氧(hypoxia)组、miR-499过表达(miR-499 mimic+hypoxia)组、mimic阴性对照(mimic-NC+hypoxia)组、SOX6过表达(miR-499 mimic+pc DNA3.1-SOX6+hypoxia)组和SOX6阴性对照(miR-499 mimic+pc DNA3.1+hypoxia)组。MTT试剂检测细胞活力;乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)试剂盒检测LDH漏出量;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光素酶活性检测测定miR-499和SOX6的靶向关系;Western Blot检测SOX6的蛋白表达。结果:与对照组相比,缺氧组的miR-499表达下调,细胞活性降低,LDH漏出量增加,细胞凋亡率提高;与缺氧组相比,miR-499过表达组的细胞活性提高,LDH漏出量减少,细胞凋亡率降低。MiR-499直接靶向SOX6,SOX6过表达能够逆转miR-499过表达的作用。结论:MiR-499过表达能够通过直接靶向SOX6来抵抗缺氧诱导的PC12细胞损伤,提高细胞活力,减少LDH漏出量,并降低细胞凋亡率。

microRNA-499靶控的PI3K/Akt通路在大鼠缺血-再灌注心肌损伤中的作用

目的:探讨microRNA-499在大鼠心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)中的作用及其与PI3K/Akt通路的关系。方法:将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和干预组,每组10只。假手术组仅在冠状动脉的左前降支下穿线但并不结扎,模型组结扎冠状动脉左前降支以建立大鼠MIRI模型(缺血30 min,再灌注120 min),干预组于建立MIRI模型前48 h注射microRNA-499激动剂。采用荧光定量RT-PCR法检测大鼠心肌组织中miRNA-499及PI3K mRNA表达量,Western blot法检测Akt磷酸化活性,采用TTC染色法检测心肌梗死面积。结果:与假手术组相比,模型组miRNA-499及PI3K mRNA表达量减少,Akt磷酸化活性明显降低,心肌梗死面积明显增加(P<0.05)。与模型组比较,干预组miRNA-499及PI3K mRNA表达量、Akt磷酸化活性明显升高,心肌梗死面积明显减少(P<0.05)。心肌组织中PI3K mRNA与microRNA-499的表达量呈正相关(P<0.05)。结论:microRNA-499可能通过激活PI3K/Akt信号通路,减轻大鼠MIRI。

循环microRNA-499诊断AMI的Meta分析

目的评价循环microRNA-499（miR-499）对急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）的诊断价值。方法检索万方，中国知网，NCBI，PubmMed，EMBSASE数据库2015年5月以前发表的关于miR-499诊断AMI的文献。以QuADAs工具对文献进行质量评价，采用meta-disc1．4软件进行统计分析miR-499诊断AMI的总体敏感度、特异度、阳／阴性似然比和诊断优势比。以SROC曲线分析miR-499诊断AMI的总体性能。结果该次meta分析共纳入10项研究，其中国人研究7项，SCI文献7项。miR499诊断AMI总体诊断敏感度为83％（95％CI：0．81～0．85），总体诊断特异度为81％（95％CI：0．78～0．83），总体诊断阳性似然比为4．53（95％CI：3．12～6．58），总体诊断阴性似然比为0．22（95％CI：0．14～0．33），总体诊断优势比为22．73（95％CI：10．78～47．93）。综合SROC曲线下面积（AUC）为0．90，Q值为0．84。结论miR-499对AMI具有较高的诊断价值。

MicroRNA-499-5P在结肠癌、结肠腺瘤组织中的表达及其临床意义

目的:探讨micro RNA-499-5p(miR-499-5p)在结肠癌、结肠腺瘤中的表达水平及其与临床病理特征的相关性.方法:分别提取40例结肠癌组织、结肠腺瘤组织和正常结肠黏膜组织标本的总RNA,采用逆转录实时定量PCR检测(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)方法检测mi R-499-5p的表达量,并分析其与临床分期、分化程度、淋巴结转移等临床病理特征的关系.结果:miR-499-5P在结肠癌组织中、结肠腺瘤组织中相对表达水平均高于正常结肠黏膜组织(P<0.001),其表达与TNM分期(P=0.016)、分化程度(P<0.001)、浸润深度(P<0.001)、淋巴结转移(P=0.008)相关.结论:相对于正常结肠黏膜组织,mi R-499-5P在结肠癌、结肠腺瘤组织中表达明显上调,且在结肠癌中的表达水平与临床分期、浸润深度、分化程度及是否有淋巴结转移有关.

利用microRNA-499诊断急性心肌梗死的法医学研究

目的评价miR-499诊断急性心肌梗死的法医学应用价值。方法利用实时定量PCR技术,研究miR-499诊断急性心肌梗死的敏感性、死后稳定性及鉴别不同死因的能力。首先,在急性心肌梗死发生后不同时间,包括心梗即刻、心梗0.25、0.5、1、2、3、6、12h以及心梗7d,采用real-time PCR技术检测心血血浆中miR-499表达变化;其次,心梗1h死亡和断颈死亡后,分别在死亡即刻及3、6、12、24h采集心血检测miR-499的相对表达量;最后,将大鼠分为断颈死亡、窒息死亡、麻醉过量死亡以及心梗1h死亡组,采用实时荧光定量PCR方法检测miR-499的表达量。结果心梗1h,miR-499的相对表达倍数达到峰值,是心梗即刻的(64.90±9.26)倍,并于心梗7d逐渐回落至与心梗即刻持平;不同死亡时间中,心梗1h死后miR-499的相对表达倍数及变化幅度均大于断颈死亡组,且在死后3h心梗组miR-499的相对表达倍数是断颈死亡组的3.01倍;在不同死亡原因中,心梗1h的△CT值高于其他死因,且心梗1h与麻醉死亡及窒息死亡的△CT值存在明显差异(P<0.01)。结论miR-499用于急性心肌梗死的法医学诊断存在巨大潜力。

MicroRNA-499对急性心肌梗死诊断价值的系统评价与Meta分析

目的系统评价microRNA-499(miRNA-499)在急性心肌梗死(AMI)患者诊断中的临床价值。方法计算机检索PubMed、EMbase、Cochrane Library、VIP、WanFang Data和CNKI等数据库,查找有关miRNA-499诊断AMI的中、英文文献,检索时限为建库至2019年3月。由2位研究者按纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料和利用QUADAS-2工具评价纳入研究的偏倚风险后,采用Stata14.0软件进行Meta分析,计算合并灵敏度(Sen)、合并特异度(Spe)、阳性似然比、阴性似然比和诊断比值比,绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)并计算曲线下面积(AUC)。结果本次Meta分析最终纳入16篇文献,其中英文12篇,中文4篇。根据miRNA-499待检测人群的不同,分健康组(7篇)和非AMI疾病组(9篇)。合计AMI患者2124例,健康者431例,非AMI患者1390例。结果显示:AMI与健康人群比较,miRNA-499诊断AMI的合并Sen、Spe和ROC面积分别为0.88(95%CI:0.83~0.92)、0.95(95%CI:0.88~0.98)和0.96;AMI与非AMI疾病人群比较,miRNA-499诊断AMI的合并Sen、Spe和ROC面积分别为0.76(95%CI:0.64~0.85)、0.83(95%CI:0.77~0.88)和0.87;AMI与对照组比较,miRNA-499诊断AMI的合并Sen、Spe和ROC面积分别为0.83(95%CI:0.76~0.88)、0.91(95%CI:0.85~0.94)和0.93。结论当前证据显示,miRNA-499对诊断AMI具有较高的灵敏度和特异度,诊断效能较高,可用于早期诊断AMI。

急性心肌梗死患者microRNA-499的表达及临床意义

目的分析急性心肌梗死患者microRNA-499的表达及临床意义。方法选取2015年2月—2016年12月中国人民解放军第三军医大学第二附属医院急诊科收治的急性心肌梗死患者178例为研究对象(研究组),按照Killip分级分为Ⅰ级亚组43例、Ⅱ级亚组46例、Ⅲ级亚组45例以及Ⅳ级亚组44例,另取同期于医院接受体检的健康人员50例作为健康对照组。分别采用实时定量PCR法检测各组血液microRNA-499表达情况,同时采用酶联免疫吸附法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)以及心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平,并作相关性分析。采用ROC分析法研究microRNA-499对急性心肌梗死早期诊断价值。结果随着Killip分级的上升,研究组患者microRNA-499表达水平以及血清CK-MB、cTnI水平均高于健康对照组,且各亚组呈升高趋势,4亚组血液microRNA-499表达水平以及血清CK-MB、cTnI水平整体比较差异有统计学意义(F=1 635.379、192.184、321.842,P=0.000、0.000、0.000)。经Pearson相关性分析,心肌梗死患者microRNA-499表达水平与血清CK-MB、cTnI水平均呈正相关关系(r=0.584、0.747,P=0.000、0.000)。经ROC分析,microRNA-499表达水平对急性心肌梗死早期诊断价值较高,其AUC为0.839,理论阈值为1.8,敏感度、特异度分别为0.824、0.778。结论急性心肌梗死患者microRNA-499存在明显高表达,且与病情严重程度存在密切相关,可作为早期诊断急性心肌梗死的生物学指标之一。

血清微小RNA-499和鸢尾素水平与维持性血液透析患者心血管事件发生的关系

目的探讨血清微小RNA(miR)-499和鸢尾素水平与维持性血液透析(MHD)患者发生心血管事件(CVE)的关系。方法选取2017年1月至2020年1月江苏省徐州市中心医院收治的196例接受MHD治疗的患者作为观察组,根据6个月后CVE发生情况分为CVE组(74例)和无CVE组(122例),另选取同期60名体检健康者为对照组,对比各组血清miR-499、鸢尾素水平,多因素Logistic回归方法分析MHD患者发生CVE的影响因素,受试者工作特征曲线分析血清miR-499、鸢尾素水平对MHD患者发生CVE的预测价值。结果 CVE组年龄、基线低密度脂蛋白胆固醇、甲状旁腺激素、血钙水平明显大于/高于无CVE组,基线收缩压、高密度脂蛋白胆固醇、总蛋白水平明显低于无CVE组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。对照组、无CVE组、CVE组血清miR-499水平逐渐提升[1.04(0.81,1.27)、1.55(1.14,1.78)、2.76(2.37,3.18)],鸢尾素水平逐渐降低[356.25 (280.99,429.81)、69.20 (63.26,74.74)、49.02 (42.00,56.41)μg/L],两两比较差异均有统计学意义(均P <0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,基线低密度脂蛋白胆固醇、基线甲状旁腺激素、基线血钙、miR-499为MHD患者发生CVE的独立危险因素,鸢尾素为独立保护因素(均P <0.05)。miR-499联合鸢尾素预测MHD患者发生CVE的敏感度和特异度高于miR-499、鸢尾素单独预测。结论 MHD患者血清miR-499水平明显提升,鸢尾素水平明显降低,与CVE发生密切相关。血清miR-499和鸢尾素水平联合检测可提升对MHD患者发生CVE的预测价值。

miR-499通过Drp1介导线粒体自噬保护缺氧/复氧心肌细胞

目的探究miR-499对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用,并从线粒体自噬方面探究其可能机制。方法缺血/再灌注(I/R)诱导心肌细胞H9c2(2-1),建立缺氧/复氧(H/R)心肌细胞模型,使用miR-499 mimics和(或)P110处理细胞。将细胞分为BC组、I/R组、I/R+mi组、I/R+NC组、I/R+mi+P110组、I/R+NC+P110组。使用CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测ROS、线粒体膜电位和细胞凋亡,试剂盒检测MDA、SOD、ATP含量,qRT-PCR和Western blot检测线粒体融合、分裂、自噬相关基因Fis1、Mfn1、Parkin、LC3-Ⅱ、p62和Drp1的mRNA和蛋白表达水平,透射电镜观察线粒体自噬。结果miR-499 mimics和/或P110可使I/R诱导的心肌细胞增殖抑制率和凋亡率下降;线粒体膜电位下降、线粒体自噬减少、ATP含量上升;Fis1、Parkin、LC3-Ⅱ和Drp1的基因和蛋白表达水平下降,Mfn1和p62的基因和蛋白表达水平上升;细胞内ROS和MDA含量减少,SOD含量增加。结论miR-499可通过降低Drp1介导的线粒体自噬减少氧化应激的发生,从而保护I/R诱导的心肌细胞。

血清miR-499和miR-652用于急性冠脉综合征早期诊断的临床试验

目的·评估血清mi RNA用于急性冠脉综合征(ACS)早期诊断的潜在价值。方法·急诊入院的28例疑似ACS患者,在3 h内采集血液样本;根据ACS诊疗指南,最终将患者分为ACS组(18例)和非ACS组(10例)。采用q RT-PCR技术检测心肌特异性mi R-499以及与心肌损伤密切相关的mi R-652的含量,同时监测肌钙蛋白I(c Tn I)变化,分析mi RNA和c Tn I之间的相关性,并采用95%界值建立医学参考值范围。结果·研究对象急诊入院3 h内,ACS患者的血清中已检测到mi RNA的升高;并且ACS组患者血清mi R-499的表达水平为非ACS组的9.2倍(P=0.009)。mi R-499(r=0.595,P=0.001)和mi R-652(r=0.579,P=0.001)均与c Tn I呈显著正相关;mi R-499和mi R-652的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.786和0.583;mi R-499的敏感度与特异度分别为72.22%和80.00%,mi R-652则为72.22%和60.00%;mi R-499和mi R-652医学参考值范围分别为0.001~2.723和0.122~9.660。结论·血清中的心肌特异性mi R-499有望成为ACS早期诊断的生物标志物。

血清miR-1及miR-499在老年急性心肌梗死患者中的表达及其与左室重构的关系

目的探讨血清microRNA-1(miR-1)及microRNA-499(miR-499)在老年急性心肌梗死(AMI)患者中的表达及其与左室重构(LVR)的关系。方法选取2015年1月至2018年6月本院收治的182例老年AMI患者和65例体检健康者,根据AMI后是否发生LVR分为LVR组(n=56)和非LVR组(n=126)。检测两组血清miR-1、miR-499、心肌肌钙蛋白I(cTnI)及脑钠肽(BNP)水平,并进行比较。应用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-1、miR-499、cTnI及BNP水平对老年AMI患者发生LVR的预测价值。血清miR-1、miR-499、cTnI、BNP水平与左心室舒张末期容积(LVEDV)的相关性采用Pearson相关分析。结果LVR组血清miR-1[(5.84±1.82)vs(3.18±1.17)vs.(0.95±0.36)]、miR-499[(4.30±1.35)vs.(2.38±0.91)vs.(0.62±0.25)]、cTnI[(4.18±1.63)ng/mLvs.(2.52±1.20)ng/mLvs.(0.04±0.01)ng/mL]及BNP[(918.73±265.40)ng/Lvs.(265.42±30.28)ng/Lvs.(38.42±3.64)ng/L]水平均明显高于非LVR组和对照组(P<0.05)。血清miR-1和miR-499预测老年AMI患者发生LVR的曲线下面积(AUC)为0.895(95%CI0.831~0.962)和0.874(95%CI0.809~0.937),最佳截断值取4.36和3.15时,其敏感度和特异度分别为88.4%、85.0%和86.0%、82.7%。相关分析显示,LVR患者血清miR-1、miR-499、cTnI及BNP水平与LVEDV均呈正相关(r=0.847、0.805、0.704、0.862,P<0.01)。结论血清miR-1及miR-499高表达与LVR发生有关,有望作为预测老年AMI患者发生LVR的生物学标志物。

miRNA-499预测心脏术后新发心房颤动的研究

目的研究心脏术后病人外周血miRNA-499的表达对心脏手术后新发心房颤动(postoperative atrialfibrillation,POAF)的预测作用及对胺碘酮治疗的反应。方法采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测109例POAF病人和96例非POAF病人外周血miRNA-499及其靶mRNA的表达,同时结合胺碘酮治疗分析其预后。结果miRNA-499在POAF病人中呈明显高表达(1.86±0.35 vs.2.77±0.51,4.23±1.37,P<0.05)。与非POAF组相比,胺碘酮治疗阴性组[胺碘酮(-)组]与胺碘酮治疗阳性组[胺碘酮(+)组]miRNA-499表达量均上调,且miR-499在胺碘酮(-)组上调明显高于胺碘酮(+)组患者(2.77±0.51 vs.4.23±1.37,P=0.005)。ROC曲线分析显示miRNA-499可作为潜在的POAF胺碘酮治疗反应生物标志物(AUC=0.72,P=0.006)。结论miRNA-499表达量增加可能有助于临床判断心脏术后POAF的发生,同时还可以预测POAF对胺碘酮治疗的转归及预后。

血液微小RNA-499对早期诊断急性心肌梗死价值的Meta分析

目的评估病人血液微小RNA-499诊断早期急性心肌梗死的应用价值。方法通过数据库Pub Med、Embase、Medline、Cochrane Library检索已经发表的英文文献,经文献质量评价后提取研究所需数据,利用Stata 14.0软件进行Meta分析。结果初步检索出113篇英文文献,经纳入与排除标准筛选后,最终纳入研究的文献共9篇。参与病例数1 091例,合并研究间的异质性I^2=23.3%,敏感性0.83,特异性0.88,诊断优势比36,受试者工作特征曲线下面积0.84。结论血液中微小RNA-499在急性心肌梗死患者是升高的,可以作为早期诊断的分子生物学标志。

miR-499通过靶向调控PTEN基因减轻大鼠心肌损伤

目的:探究微小RNA-499(miR-499)对PTEN基因的靶向作用以及在大鼠心肌损伤中的作用机制。方法:构建大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤模型,RT-qPCR检测miR-499表达水平的变化;分离培养原代心肌细胞,分别转染miR-499模拟物和siR-PTEN,加入过氧化氢刺激后用CCK-8法检测细胞活力,试剂盒检测LDH释放量;分别使用TargetScan和萤光素酶实验预测验证miR-499和PTEN的靶向关系;RT-qPCR和Western blot检测miR-499模拟物和抑制剂对PTEN的mRNA和蛋白表达水平的影响;共转染anti-miR-499和siR-PTEN至细胞内,CCK-8和LDH检测试剂盒检测心肌细胞在过氧化氢刺激下细胞活力和LDH的变化。结果:在大鼠心肌I/R损伤模型中,miR-499表达水平显著迅速提升,之后逐渐呈时间依赖性下降(P<0.05);miR-499模拟物和siR-PTEN使过氧化氢刺激下的心肌细胞活力显著提升,LDH释放量显著减少(P<0.05);miR-499可靶向调控PTEN,miR-499模拟物促使PTEN表达显著下调,miR-499抑制剂则使PTEN表达显著上调(P<0.05);转染siR-PTEN能够回补miR-499抑制剂对细胞的抑制作用(P<0.05)。结论:miR-499可通过靶向PTEN减轻大鼠心肌细胞损伤。

血清miR-499联合PLTP水平对不停跳冠状动脉旁路移植术后心房颤动的预测价值

目的:探讨血清微小RNA-499(miR-499)联合磷脂转移蛋白(PLTP)水平对不停跳冠状动脉旁路移植术(OPCABG)后心房颤动(AF)的预测价值。方法:选取2018年1月至2022年6月我院收治的237例接受OPCABG术的冠心病患者,根据OPCABG术后是否发生AF分为AF组69例和非AF组168例。采用qPCR和酶联免疫吸附法检测血清miR-499与PLTP水平。采用Spearman相关性分析OPCABG后AF患者血清miR-499与PLTP水平的相关性,采用多因素Logistic回归分析OPCABG后AF的影响因素,采用ROC曲线分析血清miR-499、PLTP水平对OPCABG后AF的预测价值。结果:AF组血清miR-499水平(1.53±0.29)高于非AF组(1.22±0.33),PLTP水平[1.36(1.00,2.01)]低于非AF组[2.33(1.39,3.53)],差异有统计学意义(t/Z=6.731、5.879,P均<0.001)。Spearman相关性分析显示,OPCABG后AF患者血清miR-499与PLTP水平呈负相关(rs=-0.789,P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,年龄(OR=1.085,95%CI:1.036~1.136)、糖尿病(OR=3.399,95%CI:1.472~7.853)、左心房内径(OR=1.194,95%CI:1.063~1.341)、miR-499(OR=2.961,95%CI:1.944~4.508)为OPCABG后AF的独立危险因素,PLTP(OR=0.319,95%CI:0.195~0.522)为独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-499联合PLTP水平(AUC=0.842,95%CI:0.789~0.886)预测OPCABG后AF的AUC大于miR-499(AUC=0.759,95%CI:0.699~0.812)、PLTP(AUC=0.743,95%CI:0.683~0.798)单独预测(Z=3.154、3.804,P均<0.05)。结论:血清miR-499水平升高和PLTP水平降低与OPCABG后AF独立相关,血清miR-499联合PLTP水平预测OPCABG后AF的价值较高。

脐带血miR-499-5p、PTEN在缺氧缺血性脑病新生儿中的水平变化及临床意义

目的探讨缺氧缺血性脑病(HIE)新生儿脐带血微小RNA-499-5p(miR-499-5p)、磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)水平变化及临床意义。方法选取2018年1月至2020年4月该院收治的61例HIE新生儿为研究对象,根据HIE严重程度分为HIE轻度、中度和重度组,分别为27例、21例、13例,选取同期50例健康新生儿作为对照组。于研究对象出生后6 h内采集静脉血进行血清S100B和神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平检测,于研究对象出生后1 h内采集脐带血进行miR-499-5p、PTEN水平检测。对研究对象进行新生儿行为神经测定(NBNA)评分,并对HIE新生儿在出生后40周和52周时进行Gesell发育诊断量表评价。结果HIE轻度、中度、重度组miR-499-5p水平、NBNA评分明显低于对照组,PTEN、S100B、NSE水平明显高于对照组,且随着HIE严重程度的增加,miR-499-5p水平、NBNA评分逐渐下降,PTEN、S100B、NSE水平逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-499-5p、PTEN、S100B、NSE联合检测诊断新生儿HIE的曲线下面积为0.896。HIE轻度、中度、重度组出生后40周、52周时的发展商数(DQ)明显低于对照组,且随着HIE严重程度的增加,新生儿出生后40周、52周时的DQ逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05)。HIE新生儿miR-499-5p水平与出生后40周、52周时的DQ呈正相关(P<0.05),PTEN、S100B、NSE水平与出生后40周、52周时的DQ呈负相关(P<0.05)。结论脐带血中miR-499-5p和PTEN水平与新生儿HIE的发生、发展有关,且在HIE诊断和预后评估中具有一定价值,可为临床治疗提供参考。

miR-499 rs3746444多态性抑制宫颈癌细胞的增殖作用及分子机制

目的探讨miR-499 rs3746444多态性与宫颈癌临床特征相关性及对宫颈癌细胞增殖的影响作用与机制。方法应用病例对照研究方法,选取2012年6月至2018年12月于内蒙古自治区人民医院就诊的宫颈癌病人857例作为实验组,同期873例健康志愿者作为对照组,两组年龄均在23~62岁,采用TaqMan探针法对rs3746444位点的多态性进行基因分型;构建包含pGL3-Sox63'UTR和miR-499的GG或AA的海肾荧光素酶载体(Renilla luciferase vector)于prl-sV40质粒中,并采用lipo2000转染人宫颈上皮永生化细胞H8和人宫颈癌细胞系:腺癌样SiHa、上皮样HeLa和C33A,CCK-8法检测细胞增殖;双荧光素报告基因检测法分析Frefly和Renilla荧光素酶活性;Western blot检测Hela和SiHa细胞Cyclin D1、CyclinE、CDK4、CDK6和Sox6蛋白表达。结果AG和GG基因型宫颈癌发生风险分别是AA基因型个体的1.09倍和2.41倍,携带G等位基因的个体患宫颈癌的风险是AA基因型个体的1.28倍,GG基因型宫颈癌患者III期及以上的比例显著高于AA基因型。GG表型肿瘤高度分化比例明显高于AA表型组,rs3746444不同基因型对正常宫颈H8细胞的增殖无显著影响。miR-499 GG+Sox6-3'UTR处理组Hela、C33A和SiHa细胞72 h时OD450显著低于miR-499 AA+Sox6-3'UTR组,且高于Sox6-3'UTR组(P<0.05)。miR-499 GG+Sox6-3'UTR处理组Hela和SiHa细胞Cyclin D1、CyclinE、CDK4和CDK6显著高于miR-499 AA+Sox6-3'UTR组,低于Sox6-3'UTR组(P<0.05)。与miR-499 AA+Sox6-3'UTR处理组相比,miR-499 GG+Sox6-3'UTR处理组Sox6的表达水平增加(P<0.05),且均低于Sox6-3'UTR对照组(P<0.05)。结论miR-499的rs3746444突变(A>G)与宫颈癌肿瘤生长和分化程度密切相关,其通过上调Sox6介导的CyclinD1高表达具有明显的促进宫颈癌细胞生长增殖作用。

MIR-499在急性冠脉综合征患者血清中的表达及与QT离散度的相关性研究

目的探讨急性冠脉综合征患者外周血微小RNA-499(miR-499)的表达及其与QT离散度(QTd)的关系。方法 2014年5月至2015年4月大理大学附属医院心血管内科收治的128例ACS患者血清并收集临床资料,以48例健康体检者为对照组。分析miR-499在ACS患者血清中的表达及其与QT离散度的关系。结果 ACS患者miR-499和QTd及校正的QTd(QTcd)值均高于正常对照组,并且miR-499表达的升高和QTd值呈正相关。结论 MiR-499表达在ACS患者血清中上调,并与QTd相关,其可能成为ACS新的潜在诊疗靶点并为预后评估提供重要的临床参考价值。