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靶向鸡糖皮质激素受体基因的microRNA预测与鉴定
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作者 赵敏蝶 刘杰 赵茹茜 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期489-496,共8页
[目的]本文旨在预测和筛选靶向调控鸡糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达的microRNA。[方法]用TargetScan、PicTar和miRDB软件分别预测靶向鸡GR 3′UTR microRNA并取交集;构建包含鸡GR 3′UTR的重组质粒及突变质粒,通过双... [目的]本文旨在预测和筛选靶向调控鸡糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达的microRNA。[方法]用TargetScan、PicTar和miRDB软件分别预测靶向鸡GR 3′UTR microRNA并取交集;构建包含鸡GR 3′UTR的重组质粒及突变质粒,通过双荧光素酶试验鉴定microRNA和鸡GR 3′UTR的靶向性;用TargetScan和miRDB软件分别预测候选microRNA的靶基因,用DAVID软件对预测出的共同靶基因进行GO功能分析;用Western blot检测过表达候选microRNA对鸡DF1细胞GR蛋白表达的影响。[结果]miR124-3p、miR142-3p、miR204/211、miR183、miR18-5p和miR181a/181b是3种软件预测靶向GR 3′UTR的交集microRNA;双荧光素酶试验结果表明miR142-3p、miR204/211和miR18-5p靶向结合GR 3′UTR。2种软件预测3个候选microRNA的靶基因中都有GR且富集分子功能不同;在DF1细胞中过表达3个候选microRNA后,miR142-3p和miR204/211显著降低GR蛋白的表达水平(P<0.05)。[结论]miR142-3p、miR204/211和miR18-5p靶向结合鸡GR 3′UTR,且miR142-3p和miR204/21可以降低鸡DF1细胞中GR蛋白的表达水平。 展开更多
关键词 糖皮质激素受体 microrna 靶向基因
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绵羊肺炎支原体核糖体蛋白30S rpsE基因的原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 刘晓艳 王永飞 +3 位作者 邓博文 哈尔勒哈·阿曼太 蔡江 李有文 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第7期78-84,共7页
旨在了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)30S rpsE蛋白的生物学特性及其蛋白免疫原性。用在线分析软件预测30S rpsE蛋白的理化性质、B细胞抗原表位、糖基化位点、二级结构及三级结构等;采用PCR方法从病羊鼻拭子样品中扩增得到... 旨在了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)30S rpsE蛋白的生物学特性及其蛋白免疫原性。用在线分析软件预测30S rpsE蛋白的理化性质、B细胞抗原表位、糖基化位点、二级结构及三级结构等;采用PCR方法从病羊鼻拭子样品中扩增得到30S rpsE基因片段,经NdeⅠ、XhoⅠ酶切纯化后,将其连接到pET-42b载体上,构建原核表达载体pET-42b-30S rpsE,使用不同浓度IPTG诱导蛋白在大肠杆菌BL21中表达;重组蛋白通过SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,用镍层析法纯化蛋白后,与弗氏佐剂1∶1混合注射免疫家兔,然后采取全血,检测血清抗体效价及特异性。结果:经预测30S rpsE蛋白是亲水无信号肽的膜外蛋白,无跨膜结构域,有一个糖基化位点;成功构建了原核表达载体pET-42b-30S rpsE,表达的重组蛋白分子量约为25.9 ku,以包涵体和可溶性的形式存在;免疫家兔后血清抗体效价为1∶25 600,证实30S rpsE蛋白具有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 肺炎支原体 30S rpsE基因 原核表达 多克隆抗体
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急性心肌梗死发病过程中miR-30a-5p的变化及其潜在的分子机制
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作者 梁国新 郭畅 +1 位作者 唐红悦 张明明 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期567-574,共8页
目的 评估miR-30a-5p作为急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)新诊断指标的潜力和潜在的分子机制。方法 下载GEO数据库中AMI相关microRNAs(miRNAs)和mRNA芯片数据集。qRT-PCR技术检测血清样本中miRNAs的水平,全自动生化仪... 目的 评估miR-30a-5p作为急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)新诊断指标的潜力和潜在的分子机制。方法 下载GEO数据库中AMI相关microRNAs(miRNAs)和mRNA芯片数据集。qRT-PCR技术检测血清样本中miRNAs的水平,全自动生化仪检测其他的生化指标。受试者工作特征(ROC)曲线分析和Spearman相关性分析评估miR-30a-5p作为诊断AMI标志物的价值。R语言multiMiR包对miR-30a-5p的靶基因进行预测,STRING数据库构建蛋白相互作用网络,将结果导入Cytoscape3.7.1软件,筛选网络的中枢基因。R语言clusterProfiler包对中枢基因进行KEGG及GO分析,探索miR-30a-5p在AMI中的临床意义及其潜在的分子机制。结果 与对照组比较,AMI组患者血清中的miR-30a-5p上调,差异有统计学意义(P<0.05);miR-30a-5p与CK-MB、CK、TnT、proBNP和CRP水平呈正相关(rs=0.489,P<0.001;rs=0.347,P<0.001;rs=0.545,P<0.001;rs=0.533,P<0.001;rs=0.206,P<0.05),ROC曲线下面积(AUC)为0.862,灵敏度为84.4%,特异度为74.2%;2个数据集共得到差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs)780个,miR-30a-5p的靶基因共1 061个,取交集共鉴定出61个共同基因。在PPI的中枢基因中BCL6、FOSL2、JDP2、LYN、PDE4D、SOCS3和SOX4得分较高且与AMI的发生密切相关;KEGG和GO富集分析显示,miR-30a-5p可能调节JAK-STAT、NF-kappaB及Wnt等信号通路参与炎症反应、细胞凋亡、自噬及心肌梗死后重塑等过程进而参与AMI的发生。结论 血清miR-30a-5p在AMI早期表达上调,对miR-30a-5p及其调控通路的研究,有助于诊断及治疗AMI。 展开更多
关键词 基因表达数据库(GEO) 急性心肌梗死(AMI) micrornas(miRNAs) 生物信息学
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hsa_circ_0013058促进食管鳞状细胞癌侵袭和迁移的机制研究
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作者 谈艳 陶菲儿 王成海 《实用临床医药杂志》 CAS 2024年第7期29-35,共7页
目的探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)中hsa_circ_0013058的作用及其促进ESCC细胞侵袭和迁移的机制。方法收集75例患者的ESCC组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和RNA原位杂交技术(RISH)检测hsa_circ_0013058表达情况... 目的探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)中hsa_circ_0013058的作用及其促进ESCC细胞侵袭和迁移的机制。方法收集75例患者的ESCC组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和RNA原位杂交技术(RISH)检测hsa_circ_0013058表达情况,并分析其与ESCC患者临床病理资料的关系。采用划痕实验和Transwell实验检测ESCC细胞侵袭和迁移能力。采用生物信息学方法预测hsa_circ_0013058的靶基因。采用Rescue实验检测hsa_circ_0013058对下游基因的调控及对ESCC细胞侵袭、迁移的影响。结果qRT-PCR结果显示,ESCC组织中hsa_circ_0013058表达量高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(t=5.078,P<0.05)。ESCC细胞株KYSE70中hsa_circ_0013058表达量高于人正常食管上皮细胞Het-1A,差异有统计学意义(P<0.05)。在RNA水平上,hsa_circ_0013058与miR-548p呈负相关(r=-0.2542,P<0.05)。ESCC组织中,hsa_circ_0013058 RNA阳性表达率为72.00%,高于癌旁正常组织的17.33%,差异有统计学意义(χ2=6.862,P<0.05)。hsa_circ_0013058阳性表达与肿瘤浸润深度、分化程度和淋巴结转移均密切相关(P<0.05)。划痕实验结果表明,过表达hsa_circ_0013058增强KYSE70细胞的迁移能力(P<0.05);敲低hsa_circ_0013058表达减弱KYSE70细胞的迁移能力(P<0.05)。过表达hsa_circ_0013058后,ESCC细胞侵袭和迁移细胞数目增加,敲低hsa_circ_0013058表达后,侵袭和迁移细胞数目下降(P<0.05)。qRT-PCR实验证实,hsa_circ_0013058可调控微小RNA-548p(miR-548p)表达。双荧光素酶报告基因实验表明,miR-548p与LPAR3为特异性结合,LPAR3是miR-548p的直接靶基因。Rescue实验结果表明,hsa_circ_0013058通过miR-548p/LPAR3信号轴调控ESCC细胞的侵袭、转移。结论ESCC中,hsa_circ_0013058抑制miR-548p表达,进而激活LPAR3信号通路,促进ESCC细胞的侵袭、迁移。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 hsa_circ_0013058 微小RNA-548p LPAR3基因 侵袭 迁移
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钙黏蛋白家族成员3及11号染色体开放阅读框30基因多态性与支气管哮喘病儿易感性及糖皮质激素疗效的研究
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作者 吴彩云 凌娟 王晓丽 《安徽医药》 CAS 2024年第6期1226-1231,共6页
目的探讨钙黏蛋白家族成员3(CDHR3)及11号染色体开放阅读框30(C11orf30,EMSY)基因多态性与支气管哮喘病儿易感性及糖皮质激素疗效。方法前瞻性选取2020年5月至2021年10月于泰州市第二人民医院就诊的支气管哮喘病儿132例作为易感组。均... 目的探讨钙黏蛋白家族成员3(CDHR3)及11号染色体开放阅读框30(C11orf30,EMSY)基因多态性与支气管哮喘病儿易感性及糖皮质激素疗效。方法前瞻性选取2020年5月至2021年10月于泰州市第二人民医院就诊的支气管哮喘病儿132例作为易感组。均接受糖皮质激素吸入治疗,并根据疗效分为疗效良好组和疗效不良组。选取同期体检的48例儿童作为对照组,采用倾向性匹配方法对易感组和对照组性别、年龄等基线资料进行匹配;采用PCR检测CDHR3及EMSY基因的单核苷酸多态性,计算其基因型频率和等位基因频率,基因位点的多态性与儿童支气管哮喘易感风险间的关系采用多因素logistic回归分析。对比疗效良好组和疗效不良组不同基因型分布。结果易感组和对照组经倾向性评分匹配后有36组配对成功(每组36例),匹配后基线资料对比差异无统计学意义(P>0.05)。匹配后易感组和对照组CDHR3基因rs6967330位点、EMSY基因rs12278256位点基因型频率及A等位基因频率比较差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示:EMSY基因rs12278256位点AA基因型[OR=9.91,95%CI:(1.02,96.65)]、CDHR3基因rs6967330位点AA基因型[OR=10.09,95%CI:(1.08,94.02)]是支气管哮喘易感的危险因素(均P<0.05)。治疗12周后,24例(66.67%)为疗效良好组,其余12例(33.33%)归为疗效不佳组,两组CDHR3基因rs6967330位点基因型分布对比差异无统计学意义(P>0.05);两组EMSY基因rs12278256位点基因型分布对比差异有统计学意义(P<0.05),其中疗效良好组AA基因型分布频率[37.50%(9/24)]明显高于疗效不良组[0(0/12)](P<0.05)。结论CDHR3基因rs3847076位点以及EMSY基因rs12278256位点与儿童支气管哮喘易感有关,EMSY基因rs12278256位点与糖皮质激素治疗疗效相关。 展开更多
关键词 哮喘 钙黏蛋白家族成员3 11号染色体开放阅读框30 基因多态性 糖皮质激素 倾向性评分匹配
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microRNA-132及其靶基因NAG-1在评估强直性脊柱炎患者非甾体类抗炎药治疗效果中的预测价值
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作者 张连锁 蔡金生 +3 位作者 王会旺 孙亚东 宁胜华 徐伟坤 《颈腰痛杂志》 2024年第4期634-638,共5页
目的探讨microRNA-132及其靶基因NAG-1在评估强直性脊柱炎(AS)患者非甾体类抗炎药治疗效果中的预测价值。方法选择在该院就诊的AS患者154例作为观察组,抽取同期在该院体检的健康受试者154例作为对照组。观察两组受试者miR-132和NAG-1 m... 目的探讨microRNA-132及其靶基因NAG-1在评估强直性脊柱炎(AS)患者非甾体类抗炎药治疗效果中的预测价值。方法选择在该院就诊的AS患者154例作为观察组,抽取同期在该院体检的健康受试者154例作为对照组。观察两组受试者miR-132和NAG-1 mRNA表达水平。观察组患者采用双氯芬酸钠治疗16周,根据美国风湿病学协会(ACR)制定的ACR20标准,将观察组达到标准患者分为ACR20组,其余患者归为非ACR20组,比较两组治疗前miR-132和NAG-1mRNA表达水平及其对疗效的预测价值。结果观察组患者单核细胞miR-132 mRNA表达水平高于对照组,NAG-1 mRNA表达水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-132预测AS的灵敏度为83.8%,特异性为98.1%,最佳截断值为1.373,曲线下面积(AUC)为0.964,95%CI为0.936~0.982;NAG-1预测AS的灵敏度为76.0%,特异度为86.4%,最佳截断值为0.826,AUC为0.879,95%CI为0.838~0.914。ACR20组患者miR-132mRNA表达水平低于非ACR20组患者,NAG-1mRNA表达水平高于非ACR20组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-132预测ACR20的敏感度为81.8%,特异性为94.2%,AUC为0.950,95%CI为0.903~0.979;NAG-1预测ACR20的敏感度为97.0%,特异性为46.3%,AUC为0.751,95%CI为0.675~0.817。结论miR-132及NAG-1可能是诊断AS及预测非甾体类抗炎药治疗效果的潜在生物学指标。 展开更多
关键词 微小RNA 非甾体类抗炎药激活基因 强直性脊柱炎 非甾体类抗炎药
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Cloning and Sequence Analysis of Sheeppox Virus RPO30 Gene
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作者 赵志荀 吴国华 +3 位作者 颜新敏 李健 朱海霞 张强 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第11期1721-1723,1728,共4页
[Objective] The study aimed to clone RPO30 gene from Sheeppox virus (SPPV) and predict the structure and function of the sequence. [Method] RPO30 gene of SPPV was cloned with PCR, linked into pMD18-T simple vector a... [Objective] The study aimed to clone RPO30 gene from Sheeppox virus (SPPV) and predict the structure and function of the sequence. [Method] RPO30 gene of SPPV was cloned with PCR, linked into pMD18-T simple vector and then transformed into E. coli DH5a. In blue-white screen, the white colonies were selected to prepare plasmids. The positive plasmids were selected by double digestion and PCR, and then sequenced. Finally, the structure and function of the sequence obtained were predicted by bioinformatics methods. [Results] The RPO30 gene was successfully obtained; its ORF was 585 bp, encoding 193 amino acids and containing a recognition site for Hind III. Moreover, the SPPV RPO30 gene shared different homologies with the RPO30 gene sequences of other pox virus strains from GenBank database. Further analysis by biological software showed that in RPO30 protein, amino acids 4-12, 18-26, 50- 61, 68- 92 and 176-190 had a high possibility to form the active center, and acting to these regions was likely to inactivate the enzyme encoded by the sequence, thus to inhibit viral replication efficiently. [Conclusion] This study will lay foundation for further study on the structure and function of RPO30. 展开更多
关键词 Sheeppox virus RPO30 gene Sequence analysis BIOINFORMATICS
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MicroRNA-30b靶向调节Sema3A对视神经损伤修复的作用 被引量:1
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作者 乔俊丽 伟伟 杨佳 《临床和实验医学杂志》 2017年第9期880-883,共4页
目的对专MicroRNA-30b靶向调节Sema3A对视神经损伤的临床修复作用进行探究,进而进一步证实Sema3A是MicroRNA-30b的靶基因,明确MicroRNA-30b可以通过对Sema3A的调节来表达、抑制其信号通路,进而保护视网膜神经节细胞并加快轴突的生长,为... 目的对专MicroRNA-30b靶向调节Sema3A对视神经损伤的临床修复作用进行探究,进而进一步证实Sema3A是MicroRNA-30b的靶基因,明确MicroRNA-30b可以通过对Sema3A的调节来表达、抑制其信号通路,进而保护视网膜神经节细胞并加快轴突的生长,为视神经受损提供系的思路与目标靶点。方法择取实验室现有的实验鼠进行SD视神经钳夹损伤模型,并分别采取qRT-PCR、Western blotting以及双荧光素酶报告基因系统对实验鼠健康及受损后,视网膜中MicroRNA-30b、Sema3A等指标的表达变化情况进行检测分析。向实验鼠损伤眼玻璃体腔内分别注射实验室现有的PBS、rAAV-miR-30b mimic、rAAV-miRNA NC以及rAAV-miR-30b Inhibitor等制剂,进而判定损伤后不同时间节点内视网膜神经节细胞(RGCs)的存活率变化,以了解不同组别间视功能恢复情况的差异。最后,进行以Sema3A为靶目标的siRNA,分别在正常情况下体外培养RGCs和取目前抑制效果最佳的siRNA进行培养RGCs状态下检测Sema3A的表达量,以掌握MicroRNA-30b调控Sema3A的信号通路情况。进而判定MicroRNA-30b靶向调节Sema3A对视神经损伤修复中的具体作用。结果在SD神经钳夹损伤模型中可知,实验鼠视网膜中MicroRNA-30b、Sema3A的表达均为先上升而后下降,一般在7 d时达最高峰,免疫组化检测显示Sema3A的表达一般发生于健康视网膜中的节细胞层与内核层中,而在视神经受损后两细胞层内阳细胞数量显著增多。同时,在实验鼠玻璃体内注射注射PBS、rAAV-miR-30b mimic、rAAV-miRNA NC以及rAAV-miR-30b Inhibitor后受损四组RGCs存活率均有不同程度下降,且mimic组最高、inhibitor组最低。结论实验表明,Sema3A为MicroRNA-30b的靶基因,在对视神经修复中具有显著的作用,能够有效提升视神经损伤后RGCs的存活率,进而促进视神经的修复。 展开更多
关键词 视神经损伤 靶基因 microrna-30b 修复 SEMA3A 靶向调节
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犬细小病毒感染F81细胞microRNA荧光定量PCR内参基因的筛选 被引量:3
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作者 周宏专 苏霞 +4 位作者 林路路 齐颀 张进 徐福洲 杨兵 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第3期96-103,共8页
犬细小病毒(canine parvovirus, CPV)是犬急性胃肠炎的主要病原之一,对犬类的健康造成极大危害。MicroRNA(miRNA)是小的、非编码的RNA,在转录后水平调节基因表达。荧光定量PCR(RT-qPCR)是评估miRNA表达水平最常用的方法,而合适的参考基... 犬细小病毒(canine parvovirus, CPV)是犬急性胃肠炎的主要病原之一,对犬类的健康造成极大危害。MicroRNA(miRNA)是小的、非编码的RNA,在转录后水平调节基因表达。荧光定量PCR(RT-qPCR)是评估miRNA表达水平最常用的方法,而合适的参考基因在RT-qPCR数据归一化中起着至关重要的作用。本研究在分析F81细胞空白对照组和感染CPV组小RNA高通量测序结果基础上,结合参考文献,在CPV感染后12 h和24 h,通过poly(A)延伸RT-qPCR定量方法检测候选内参基因小RNA的表达情况,并使用GeNorm、NormFinder和BestKeeper算法评估这些候选小RNA的稳定性。结果选取了5种高通量测序中表达相对稳定的miRNAs(dno-miR-186-5p、pha-miR-152、dno-miR-374a-5p、tch-miR-26a-2-5p和oga-miR-26b)和常用作参考基因的小核RNA U6(RNU6-1)、核仁小RNA(small nucleolar RNA)SNORD95以及SNORD96a,经过扩增分析及对高通量测序中差异表达的dno-miR-7-5p的定量验证发现,这些候选小RNA均具有较好的稳定性。其中pha-miR-152在检测样品中稳定性最好,可在CPV感染F81细胞中作为RT-qPCR法定量miRNA表达及数据均一化的合适参考基因。筛选出的pha-miR-152有助于研究miRNAs在CPV感染过程中的定量表达分析,为进一步研究F81细胞中miRNA调控CPV感染复制的分子机制研究提供可靠手段,也为其他相关物种miRNA定量研究中内参基因的选择提供参考。 展开更多
关键词 犬细小病毒 microrna 内参基因 逆转录定量PCR
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LncRNA MALAT-1靶向microRNA-370-3p调节Akt通路对肺癌细胞生物学行为影响的机制研究 被引量:1
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作者 李亮 李建忠 +2 位作者 张丹杰 马跃峰 李少民 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期38-47,共10页
目的 探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子-1(LncRNA MALAT-1)是否能靶向调节microRNA-370-3p(miR-370-3p)的表达,以及对Akt通路和肺癌细胞生物学行为的影响。方法 选用非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞体外培养,分别抑制LncRNA MALAT... 目的 探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子-1(LncRNA MALAT-1)是否能靶向调节microRNA-370-3p(miR-370-3p)的表达,以及对Akt通路和肺癌细胞生物学行为的影响。方法 选用非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞体外培养,分别抑制LncRNA MALAT-1(转染si-MALAT-1)或过表达miR-370-3p(转染miR-370-3p mimic),抑制LncRNA MALAT-1和干扰miR-370-3p(同时转染si-MALAT-1和antimiR-370-3p),观察A549细胞的生物学行为和Akt通路蛋白的表达。qRT-PCR检测LncRNA MALAT-1、miR-370-3p mRNA的表达;MMT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移与侵袭;Western blotting检测Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K蛋白相对表达量。构建MALAT-1野生型(MALAT-1WT_1uc)与突变型(MALAT-1MUT_1uc)荧光素酶报告基因质粒并分别与miR-370-3p、miR-NC转染至A549细胞,观察荧光结合强度并检测miR-370-3p的表达。结果 抑制LncRNA MALAT-1或过表达miR-370-3p能抑制A549细胞迁移、侵袭,促进细胞凋亡,减少A549细胞活性(P <0.05),并下调p-Akt和p-PI3K蛋白的表达(P <0.05)。与单纯抑制LncRNA MALAT-1比较,抑制LncRNA MALAT-1并干扰miR-370-3p能促进A549细胞迁移、侵袭,抑制细胞凋亡,增加A549细胞活性(P <0.05),并上调p-Akt和p-PI3K蛋白的表达(P <0.05)。TargetScan靶基因预测发现LncRNA MALAT-1与miR-370-3p存在结合位点,荧光素酶报告基因实验验证发现,与MALAT-1WT_1uc+Control组和MALAT-1WT_1uc+miR NC组比较,MALAT-1WT_1uc+miR-370-3p组相对荧光强度下降(P <0.05),MALAT-1MUT_1uc+miR-370-3p荧光强度无变化(P>0.05),进一步qRT-PCR结果发现,与Control组比较,si-MALAT-1组的miR-370-3p mRNA相对表达量升高(P <0.05),与si-MALAT-1组比较,si-MALAT-1+anti-miR-370-3p组的miR-370-3pmRNA相对表达量降低(P <0.05)。结论LncRNA MALAT-1可以靶向负调控miR-370-3p。抑制LncRNA MALAT-1可以上调miR-370-3p的表达,抑制A549细胞的增殖、迁移及侵袭,促进A549细胞的凋亡,并下调Akt通路蛋白的磷酸化。 展开更多
关键词 肺癌 microrna-370-3p 长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子-1 荧光素酶报告基因实验 AKT
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葡萄砧木品种‘3309M’中microRNA的鉴定
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作者 朱旭东 安颜颖 +2 位作者 王晨 贾海锋 房经贵 《中外葡萄与葡萄酒》 2018年第3期6-15,共10页
为了解葡萄砧木microRNA(miRNA)的表达模式,采用高通量测序法对砧木品种‘3309M’根和叶片中的miRNA文库进行分析。结果表明:在葡萄砧木根和叶片文库中,共鉴定了181条保守miRNA和104条新的miRNA,长度以21 nt为主,其5'端首位碱基对U... 为了解葡萄砧木microRNA(miRNA)的表达模式,采用高通量测序法对砧木品种‘3309M’根和叶片中的miRNA文库进行分析。结果表明:在葡萄砧木根和叶片文库中,共鉴定了181条保守miRNA和104条新的miRNA,长度以21 nt为主,其5'端首位碱基对U具有很强的偏向性;不同miRNA家族其成员数量也不同,这些miRNA的靶基因功能主要为植物激素信号转导和糖酵解/糖异生等;筛选出显著差异表达的miRNA,其中54条miRNA表达量上调,33条miRNA表达量下调。本研究为认识葡萄砧木特异miRNA及进一步分析其功能提供了基础。 展开更多
关键词 葡萄 砧木 3309M MIRNA 靶基因 鉴定
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microRNA-30抑制血管紧张素Ⅱ诱导足细胞损伤的机制 被引量:4
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作者 赵越 张明超 +5 位作者 朱小东 徐孝东 杨帆 郎月 施少林 刘志红 《肾脏病与透析肾移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期14-19,共6页
目的:探讨microRNA-30(miR-30)缓解血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所致足细胞损伤的分子机制。方法:(1)通过皮下埋置渗透压泵,给予小鼠AngⅡ[1 000 ng/(kg·min)×28d]构建肾损伤模型。利用原位杂交及qRT-PCR技术检测小鼠肾小球中miR-30s... 目的:探讨microRNA-30(miR-30)缓解血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所致足细胞损伤的分子机制。方法:(1)通过皮下埋置渗透压泵,给予小鼠AngⅡ[1 000 ng/(kg·min)×28d]构建肾损伤模型。利用原位杂交及qRT-PCR技术检测小鼠肾小球中miR-30s的表达,运用免疫组化及蛋白印迹检测calcineurin信号重要分子细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6),钙调磷酸酶(PPP3CA、PPP3CB、PPP3R1)及活化T细胞核因子(NFATC3)表达。(2)给予miR-30s慢病毒尾静脉注射,观察其对AngⅡ诱导损伤模型的肾脏保护作用。(3)体外研究观察miR-30a高表达能否抑制AngⅡ(10-6mol/L)诱导的足细胞骨架损伤和足细胞凋亡。结果:(1)AngⅡ诱导小鼠肾小球中miR-30s水平下调,并上调TRPC6,激活calcium/calcineurin信号通路;(2)高表达的miR-30s能够抑制AngⅡ导致的calcium/calcineurin信号活化从而缓解AngⅡ诱导的肾小球损伤;(3)miR-30s能够逆转AngⅡ所致足细胞骨架损伤及抑制其凋亡过程。结论:miR-30s具有抑制AngⅡ诱导的足细胞损害作用,其机制可能与抑制calcium/calcineurin信号通路有关。 展开更多
关键词 microrna-30 血管紧张素Ⅱ calcium/calcineurin信号 足细胞
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MicroRNA-30与肾脏损伤 被引量:2
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作者 郎月 刘志红 《肾脏病与透析肾移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期553-557,共5页
MicroRNA(miR)是真核动物的一种内源性单链核苷酸,在细胞内起到基因表达的转录后调控作用。micorRNA-30家族由miR-30a^e五个成员组成,不仅在肾脏发育中起重要作用,而且参与了肾脏损伤。miR-30s通过p53、Notch1、钙/钙调磷酸酶通路抑制... MicroRNA(miR)是真核动物的一种内源性单链核苷酸,在细胞内起到基因表达的转录后调控作用。micorRNA-30家族由miR-30a^e五个成员组成,不仅在肾脏发育中起重要作用,而且参与了肾脏损伤。miR-30s通过p53、Notch1、钙/钙调磷酸酶通路抑制凋亡与骨架损伤,进而保护足细胞。在肾小管上皮细胞中,miR-30e可调控线粒体的功能,缓解肾间质纤维化。临床分子标志物研究提示,尿miR-30a-5p与原发性局灶节段肾小球硬化患者及原发性肾病综合征患儿疾病活动性相关,并且可预测激素的治疗效果。 展开更多
关键词 microrna-30 肾脏发育 足细胞损伤 间质纤维化 分子标志物
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MicroRNA-30e-5p通过下调泛素特异性蛋白酶22抑制非小细胞肺癌的发生和发展 被引量:4
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作者 徐高俊 蔡捷 +2 位作者 黄健兵 梅举 丁芳宝 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1410-1417,共8页
目的探讨microRNA-30e-5p(miR-30e-5p)是否可通过下调泛素特异性蛋白酶22(USP22)抑制非小细胞肺癌(NSCLC)的发生和发展。方法采用qPCR、蛋白质印迹法和免疫组织化学染色法检测miR-30e-5p、USP22在NSCLC组织和癌旁组织中的表达。NSCLC细... 目的探讨microRNA-30e-5p(miR-30e-5p)是否可通过下调泛素特异性蛋白酶22(USP22)抑制非小细胞肺癌(NSCLC)的发生和发展。方法采用qPCR、蛋白质印迹法和免疫组织化学染色法检测miR-30e-5p、USP22在NSCLC组织和癌旁组织中的表达。NSCLC细胞株H460转染miR-30e-5p模拟物或miR-30e-5p抑制物后,利用qPCR和蛋白质印迹法检测细胞中miR-30e-5p、USP22的表达。构建USP22突变载体,采用荧光素酶报告基因检测miR-30e-5p在USP22基因中的结合位点。采用MTT法检测转染后H460细胞的增殖情况,并采用异种移植法检测裸鼠体内肿瘤生长情况。流式细胞术检测转染后H460细胞的周期阻滞和凋亡情况。结果 MiR-30e-5p、USP22在肿瘤组织中的表达均高于癌旁组织(P均<0.01)。在H460细胞中过表达miR-30e-5p后USP22 mRNA和蛋白的表达均下调(P均<0.01),而抑制miR-30e-5p表达后USP22mRNA和蛋白的表达均上调(P均<0.01)。NSCLC组织中miR-30e-5p与USP22的表达呈负相关(P<0.01)。miR-30e-5p可通过结合在3′UTR的特异序列负调控USP22的表达。过表达miR-30e-5p可抑制H460细胞的增殖、诱导细胞周期阻滞和凋亡,并抑制裸鼠体内肿瘤的生长(P<0.05,P<0.01);而抑制miR-30e-5p的表达可促进H460细胞的增殖、抑制细胞周期阻滞和凋亡(P<0.05,P<0.01)。结论 MiR-30e-5p可以下调USP22的表达,从而抑制NSCLC的发生和发展,提示其可作为NSCLC患者的潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 肺肿瘤 非小细胞肺癌 miR-30e-5p 泛素特异性蛋白酶22 癌基因 肿瘤抑制基因
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Helicobacter pylori infection: Host immune response, implications on gene expression and microRNAs 被引量:18
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作者 Aline Cristina Targa Cadamuro Ana Flávia Teixeira Rossi +1 位作者 Nathália Maciel Maniezzo Ana Elizabete Silva 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2014年第6期1424-1437,共14页
Helicobacter pylori(H. pylori) infection is the most common bacterial infection worldwide. Persistent infection of the gastric mucosa leads to inflammatory processes and may remain silent for decades or progress causi... Helicobacter pylori(H. pylori) infection is the most common bacterial infection worldwide. Persistent infection of the gastric mucosa leads to inflammatory processes and may remain silent for decades or progress causing more severe diseases, such as gastric adenocarcinoma. The clinical consequences of H. pylori infection are determined by multiple factors, including host genetic predisposition, gene regulation, environmental factors and heterogeneity of H. pylori virulence factors. After decades of studies of this successful relationship between pathogen and human host, various mechanisms have been elucidated. In this review, we have made an introduction on H. pylori infection and its virulence factors, and focused mainly on modulation of host immune response triggered by bacteria, changes in the pattern of gene expression in H. pylori-infected gastric mucosa, with activation of gene transcription involved in defense mechanisms, inflammatory and immunological response, cell proliferation and apoptosis. We also highlighted the role of bacteria eradication on gene expression levels. In addition, we addressed the recent involvement of different microRNAs in precancerous lesions, gastric cancer, and inflammatory processes induced by bacteria. New discoveries in this field may allow a better understanding of the role of major factors involved in the pathogenic mechanisms of H. pylori. 展开更多
关键词 Helicobacter pylori INFLAMMATION Virulence factors Immune response Gastric lesions Gastric cancer gene expression micrornaS
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MicroRNAs Involved in the Pathogenesis of Phytophthora Root Rot of Soybean (Glycine max) 被引量:2
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作者 WANG Jing LIU Chun-yan +4 位作者 ZHANG Li-wei WANG Jia-lin HU Guo-hua DING Jun-jie CHEN Qing-shan 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2011年第8期1159-1167,共9页
Phytophthora root rot is one of the most prevalent diseases in the world,which can infect the seedlings and plants,with substantial negative impact on soybean yield and quality.MicroRNAs (miRNAs) are a class of post... Phytophthora root rot is one of the most prevalent diseases in the world,which can infect the seedlings and plants,with substantial negative impact on soybean yield and quality.MicroRNAs (miRNAs) are a class of post-transcriptional regulators of gene expression during growth and development of organisms.A soybean disease-resistance variety Suinong 10 was inoculated with Phytophthora sojae race No.1,and the specific miRNA resistant expression profile was acquired by microarray for the first time.Different expressional miRNAs have been found after comparing the results of the treated sample with the control sample.Furthermore,the target genes of different expressional miRNAs were predicted.Two miRNAs,cbr-mir-241 and ath-miR854a,regulated the disease-resistance process directly through their targets,some enzymes.Another two miRNAs,gma-miR169a and ath-miR169h,participated in disease-resistance regulation as transcription factors.Similarly,one miRNA,ptc-miR164f,has been reported to regulate the plant development.All of these studies would be served as the foundation for exploring the resistance mechanism. 展开更多
关键词 microrna (miRNA) MICROARRAY soybean (Glycine max) gene expressional regulation
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MicroRNA-mediated NBS1 Gene Silence and Its Effects on Telomerase Activation in Hela Cells 被引量:1
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作者 曹孙琼 任常山 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 2008年第3期159-163,共5页
Objective: To research the silence of NBS1 after transfection microRNA expressing eukaryotic recombinants and the changes of telomerase activation in telomerase-positive cell line Hela. Methods: According to the seq... Objective: To research the silence of NBS1 after transfection microRNA expressing eukaryotic recombinants and the changes of telomerase activation in telomerase-positive cell line Hela. Methods: According to the sequence of NBS1 mRNA, the NBS1 pre-microRNA was designed and synthesized, then cloned into the GFP reporter pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR vector and transfected into Hela cells. The integrity of the insert fragment was verified through colony PCR and sequencing analysis. The NBS1 gene expression of NBS1 microRNA recombinants was detected by Real-Time PCR and western blot. Telomerase activity in Hela cells was assayed by TRAP-PCR-EB. Results: Sequences of insert fragment in microRNA expressing recombinants were correct. The NBS1 gene expression was decreased, and the telomerase activation of Hela cell reduced. Conclusion: NBS1 microRNA inhibits NBS1 gene expression, and depresses telomerase activation of Hela cells. This confirms that there is relevance between NBS 1 gene and telomerase activity. 展开更多
关键词 NBS1 gene RNA interfere microrna Telomerase activation
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Effects of SLA-DQA Gene on Birth Weight and 30-Day-Old Weight in Piglets 被引量:1
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作者 ZHANG Dong-jie 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2010年第2期8-9,共2页
The genetic polymorphism of SLA-DQA gene was investigated by PCR-RFLP. The effects of SLA.DQA gene on birth weight and 30-day-old weight were analyzed in 250 individuals of FI hybrid pig ( Heilongjiang wild boar x Be... The genetic polymorphism of SLA-DQA gene was investigated by PCR-RFLP. The effects of SLA.DQA gene on birth weight and 30-day-old weight were analyzed in 250 individuals of FI hybrid pig ( Heilongjiang wild boar x Beijing Black sow). The analysis revealed four poly- morphic loci in the SLA-DQA gene, but only the Pvu II locus in exon 2 of SLA-DQA gene ( BB genotype) greatly increased the 30-day-old weight of piglets. 展开更多
关键词 SLA-DQA gene PIG Birth weight 30-day-old weight PCR-RFLP
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刺参响应灿烂弧菌侵染差异microRNAs鉴定及靶基因分析 被引量:1
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作者 畅孟阳 李彬 +7 位作者 荣小军 王锦锦 于永翔 王印庚 廖梅杰 张正 范瑞用 刘清兵 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2023年第2期107-117,共11页
microRNA参与基因的转录后调控,在真核生物的生长发育、细胞分化和免疫防御等过程中发挥重要作用。刺参(Apostichopusjaponicus)病害问题已成为产业发展的主要限制因素之一,而其病害发生的分子机制尚待进一步完善。本研究以刺参重大疾... microRNA参与基因的转录后调控,在真核生物的生长发育、细胞分化和免疫防御等过程中发挥重要作用。刺参(Apostichopusjaponicus)病害问题已成为产业发展的主要限制因素之一,而其病害发生的分子机制尚待进一步完善。本研究以刺参重大疾病“腐皮综合征”的重要致病原灿烂弧菌(Vibriossplendidus)为侵染菌株,通过人工侵染实验制备患病刺参样本,采用miRNA-seq技术对侵染组(PT16S)和对照组(PT10H)各3头刺参的体壁组织进行miRNA测序,通过相关生物信息学软件对miRNAs进行鉴定和分析,筛选差异表达miRNAs (DEmiRNAs)并预测其靶基因,构建关键调控途径的miRNA-mRNA调控网络。结果显示,PT10H组平均得到5 902 588条有效序列,194个已知miRNA和19个新的miRNA;PT16S组平均得到5 053 529条有效序列,182个已知miRNA和42个新的miRNA。对2组鉴定到的miRNA进行差异表达分析,共筛选到2个上调和11个下调的具有显著差异的DEmiRNAs(P≤0.05),上调的DEmiRNAs靶基因预测结合到3010个靶基因,注释到585个GO terms及24条信号通路(P≤0.05),下调的DEmiRNAs靶基因预测到19 072个靶基因,注释到514个GOterms以及22条信号通路(P≤0.05)。对筛选到的DEmiRNAs进行实时荧光定量PCR (qRT-PCR)验证,显示miRNA-seq与qRT-PCR的一致率达到70%。根据KEGG分析结果构建泛素介导的蛋白水解途径和Notch信号通路的miRNA-mRNA调控网络,结果显示,13个DEmiRNAs分别靶向结合134个与泛素介导的蛋白水解相关的m RNAs和109个与Notch信号通路相关的m RNAs,Aja-miR-184、Aja-miR-2478和Aja-miR-9277p等DEmiRNAs可能参与对Notch信号通路和对泛素介导的蛋白水解的调控。相关研究结果将为刺参疾病发生调控网络建立和机制解析提供依据。 展开更多
关键词 刺参 microrna 灿烂弧菌 胁迫应答 靶基因 miRNA-mRNA调控网络
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Role of microRNA in liver regeneration 被引量:1
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作者 Peng-Sheng Yi Ming Zhang Ming-Qing Xu 《Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International》 SCIE CAS CSCD 2016年第2期141-146,共6页
BACKGROUND: Liver regeneration is a complex process. micro RNAs(mi RNAs) are short, single-stranded RNAs that modify gene expression at the post-transcriptional level. Recent investigations have revealed that mi RN... BACKGROUND: Liver regeneration is a complex process. micro RNAs(mi RNAs) are short, single-stranded RNAs that modify gene expression at the post-transcriptional level. Recent investigations have revealed that mi RNAs are closely linked to liver regeneration.DATA SOURCES: All included studies were obtained from Pub Med, Embase, the Science Direct databases and Web of Science, with no limitation on publication year. Only studies published in English were considered.RESULTS: We grouped studies that involved mi RNA and liver regeneration into two groups: mi RNAs as promoters and as inhibitors of liver regeneration. We summarized the relevant mi RNAs separately from the related pathways.CONCLUSIONS: Blocking or stimulating the pathways of mi RNAs in liver regeneration may be novel therapeutic strategies in future regeneration-related liver managements. We may discover additional chemotherapy targets of mi RNA. 展开更多
关键词 micrornas liver regeneration gene expression target pathway
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