大鼠脊髓损伤后MicroRNAs表达谱变化

目的:探究大鼠脊髓损伤后microRNAs表达谱变化。方法:将10只成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组,建立脊髓损伤模型。术后采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)量表进行运动功能评分,苏木精-伊红(HE)染色脊髓组织,通过Illumina高通量测序技术,对前期构建的cDNA文库进行RNA-Seq分析。将测序数据与高粱参考基因组对比后,以P<0.05为条件筛选出差异表达基因,通过GO、KEGG等数据库,对DEGs的功能以及参与的调控路径进行分析,并通过RT-qPCR验证RNA-Seq结果的可靠性。结果:假手术组与模型组BBB评分有显著性差异,HE染色观察到脊髓组织结构受损较为严重,脊髓损伤前后microRNAs表达有显著差异。结论:脊髓损伤许多基因表达失调。

多囊卵巢综合征患者外周血微RNA-320a-3p的表达及意义

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者外周血微RNA(miR)-320a-3p的表达水平及miR-320a-3p调控PCOS的可能机制。方法选择2021年7月至2022年7月就诊于焦作市人民医院的149例PCOS患者为研究对象(PCOS组),另选择月经周期规律(28~35 d)、无高雄激素临床或生化表现、超声检查未发现卵巢多囊样变的健康志愿者18例为对照组。收集并比较2组受试者临床资料。应用实时荧光定量聚合酶链式反应检测2组受试者血浆中miR-320a-3p表达水平,采用Pearson偏相关分析血浆中miR-320a-3p表达与临床指标的相关性,受试者操作特征曲线分析miR-320a-3p对PCOS的预测价值,双荧光素酶报告基因测定评估miR-320a-3p与雄激素受体的关系。结果2组受试者的年龄、臀围、促卵泡激素(FSH)、催乳素(PRL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)比较差异无统计学意义(P>0.05)。PCOS组患者的体质量指数、腰围、总睾酮(TT)、抗米勒管激素(AMH)、黄体生成素(LH)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h BG)、胰岛素抵抗稳态模型(HOMA-IR)、总胆固醇、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)显著高于对照组,雌二醇(E_(2))水平显著低于对照组(P<0.05)。PCOS组患者血浆中miR-320a-3p相对表达量显著低于对照组(P<0.05)。miR-320a-3p水平与TT呈中度负相关(r=-0.594,P<0.05);与腰围、FINS、2h BG、HOMA-IR、LDL-C呈低度负相关(r=-0.293、-0.208、-0.227、-0.208、-0.208,P<0.05);与臀围、AMH、FSH、E_(2)、PRL、FBG、TG、HDL-C无明显相关性(r=-0.079、0.020、-0.042、0.089、0.005、-0.141、-0.116、0.059,P>0.05)。miR-320a-3p预测PCOS的曲线下面积为0.968(95%置信区间为0.922~1.000,P<0.05),截断值为0.515,敏感度为0.917,特异度为0.789,约登指数为0.706。miR-320a-3p能够负调控雄激素受体。结论PCOS患者外周血中miR-320a-3p呈异常低表达,其可能通过负向调控雄激素受体使TT水平升高来参与PCOS的发生发展,对PCOS具有较高的预测价值。

咪达唑仑通过上调miR-320抑制缺氧/复氧诱导的PC12细胞凋亡

目的 为了明确咪达唑仑在缺血性中风中的作用,探讨咪达唑仑对缺氧/复氧(H/R)诱导的PC12细胞增殖和凋亡的影响和潜在机制。方法 体外培养PC12细胞,分为Control组、H/R组、不同剂量咪达唑仑组、10μmol/L咪达唑仑+anti-miR-NC组、和10μmol/L咪达唑仑+anti-miR-320组;CCK-8法和流式细胞术分别用于检测细胞增殖和凋亡;Western Blot检测蛋白表达;RT-qPCR检测miR-320表达。结果 与Control组相比,H/R组细胞A值(0.43±0.02)、pro-caspase3水平(0.14±0.01)和miR-320表达(0.15±0.01)显著降低(P<0.05),而凋亡率(26.68±0.81)和Cleaved-caspase3水平(0.70±0.05)显著升高(P<0.05)。与H/R组相比,不同剂量(0.1、1.0、10μmol/L)咪达唑仑组细胞A值(0.43±0.02、0.57±0.03、0.93±0.04)、pro-caspase3水平(0.14±0.01、0.30±0.02、0.52±0.03)和miR-320表达(0.15±0.02、0.42±0.03、0.81±0.05)显著升高(P<0.05),而凋亡率(25.65±0.92、21.74±0.56、15.63±0.50)和Cleaved-caspase3水平(0.70±0.06、0.50±0.04、0.23±0.02)显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。与10μmol/L咪达唑仑+anti-miR-NC组相比,10μmol/L咪达唑仑+anti-miR-320组细胞A值(0.47±0.02)、pro-caspase3水平(0.24±0.01)和miR-320表达(0.26±0.02)显著降低(P<0.05),而凋亡率(23.52±0.59)和Cleaved-caspase3水平(0.56±0.04)显著升高(P<0.05)。结论 咪达唑仑可以上调miR-320表达,进而促进H/R诱导的PC12细胞增殖,并抑制凋亡。

MicroRNA-196b、IGFBP-3在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后关系

目的 探究microRNA-196b(miR-196b)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与预后的关系。方法 选取2020年4月—2022年4月在无锡市第二人民医院手术治疗的NSCLC患者78例。收集患者的病历资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织中miR-196b、IGFBP-3的表达。所有患者随访12个月,根据预后结局分为进展组、稳定组。筛查NSCLC患者预后的影响因素,评估组织中miR-196b、IGFBP-3表达对NSCLC患者预后的预测效能。分析癌组织中miR-196b、IGFBP-3不同表达患者生存曲线的差异。结果 进展组临床分期Ⅲ期占比、术前淋巴结转移率均高于稳定组(P <0.05)。进展组癌组织miR-196b相对表达量高于稳定组(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于稳定组(P <0.05)。癌组织miR-196b相对表达量高于癌旁组织(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于癌旁组织(P <0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:临床分期[O^R=3.684(95%CI:1.259,10.778)]、术前淋巴结转移[O^R=3.557(95%CI:1.216,10.408)]、癌组织miR-196b表达[O^R=3.979(95%CI:1.359,11.641)]是NSCLC患者预后的危险因素(P <0.05),癌组织IGFBP-3表达阳性[O^R=0.220(95%CI:0.075,0.642)]是NSCLC患者预后的保护因素(P <0.05)。癌组织miR-196b、IGFBP-3及联合预测NSCLC患者预后的敏感性分别为66.25%(95%CI:0.512,0.797)、60.00%(95%CI:0.496,0.781)、87.50%(95%CI:0.725,0.963),特异性分别为69.74%(95%CI:0.534,0.825)、76.32%(95%CI:0.603,0.892)、72.37%(95%CI:0.576,0.861),曲线下面积分别为0.703、0.680、0.805。miR-196b低表达组生存情况优于高表达组(P <0.05)。IGFBP-3阳性表达组生存情况优于阴性表达组(P <0.05)。结论 NSCLC患者癌组织miR-196b、IGFBP-3表达与预后相关,且联合预测NSCLC患者预后效能良好。

血清microRNA-155、microRNA-21、趋化素、瘦素与糖尿病肥胖患者胰岛素抵抗的相关性

目的 探讨糖尿病肥胖患者血清microRNA-155(miR-155)、microRNA-21(miR-21)、趋化素、瘦素水平与胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法 选取2022年1月—2023年4月山东中医药大学第二附属医院收治的138例2型糖尿病(T2DM)患者为研究对象,其中肥胖患者73例(肥胖组),非肥胖患者65例(非肥胖组)。肥胖组中有IR 45例(IR组),无IR 28例(非IR组)。收集患者一般资料,包括性别、体质量指数(BMI)、年龄、颈围(NC)、腰围(WC)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、空腹胰岛素(FINS)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、miR-155、miR-21、趋化素、瘦素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平;通过多因素逐步Logistic回归模型分析T2DM肥胖患者发生IR的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析miR-155、miR-21、趋化素、瘦素诊断T2DM肥胖患者IR的效能;Pearson法分析miR-155、miR-21、趋化素、瘦素与HOMA-IR的相关性。结果 肥胖组miR-155相对表达量低于非肥胖组(P <0.05),miR-21、趋化素、瘦素、HOMA-IR高于非肥胖组(P <0.05)。IR组miR-155相对表达量低于非IR组(P <0.05),NC、WC、miR-21、趋化素、瘦素水平高于非IR组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:NC [O^R=1.416(95%CI:1.038,1.932)]、WC [O^R=1.227(95%CI:1.049,1.435)]、miR-155 [O^R=1.763(95%CI:1.205,2.579)]、miR-21[O^R=1.932(95%CI:1.356,2.753)]、趋化素[O^R=2.074(95%CI:1.492,2.883)]、瘦素[O^R=1.628(95%CI:1.246,2.127)]是T2DM肥胖患者发生IR的危险因素(P <0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-155、miR-21、趋化素、瘦素诊断T2DM肥胖患者IR的曲线下面积分别为0.865、0.909、0.874和0.871;敏感性为77.8%(95%CI:0.614,0.825)、86.7%(95%CI:0.792,0.917)、95.6%(95%CI:0.713,0.965)和80.0%(95%CI:0.692,0.917);特异性为85.7%(95%CI:0.647,0.903)、82.1%(95%CI:0.732,0.914)、75.0%(95%CI:0.675,0.928)和89.3%(95%CI:0.656,0.944)。miR-155与HOMA-IR呈负相关(r=-0.573,P=0.000),miR-21、趋化素、瘦素与HOMA-IR均呈正相关(r=0.531、0.558和0.568,均P=0.000)。结论 T2DM肥胖患者中IR较多,且miR-155、miR-21、趋化素、瘦素是T2DM肥胖患者发生IR的危险因素。

血清microRNA-21、microRNA-193a-3p表达与结直肠癌患者手术预后的关系

目的探究血清microRNA-21(miR-21)、microRNA-193a-3p(miR-193a-3p)水平与结直肠癌患者手术预后的关系。方法回顾性分析2020年1月—2022年1月苏州大学附属第一医院收治112例结直肠癌患者的病历资料。患者均接受结直肠癌根治术,术后随访16个月,记录患者的预后生存结局,多因素逐步Logistic回归分析结直肠癌患者手术预后的影响因素,评估血清miR-21、miR-193a-3p对结直肠癌患者预后的预测效能。结果112例结直肠癌患者死亡22例,病死率为19.64%;生存90例,生存率为80.36%。死亡组术前血清miR-21 mRNA相对表达量、临床分期Ⅲ期占比、淋巴结转移率均高于生存组(P<0.05),血清miR-193a-3p m RNA相对表达量低于生存组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示,临床分期Ⅲ期[OR=3.777(95%CI:1.399,10.194)]、淋巴结转移[OR=5.099(95%CI:1.715,15.156)]、miR-21表达升高[OR=4.889(95%CI:1.645,14.533)]、miR-193a-3p表达降低[OR=4.402(95%CI:1.481,13.084)]均是直肠癌患者预后的影响因素(P<0.05)。受试者工作特性曲线分析结果显示,血清miR-21、miR-193a-3p单一及联合预测结直肠癌预后的敏感性分别为69.04%(95%CI:0.487,0.813)、72.73%(95%CI:0.495,0.884)、86.36%(95%CI:0.640,0.964),特异性分别为62.22%(95%CI:0.513,0.720)、68.89%(95%CI:0.581,0.780)、90.00%(95%CI:0.814,0.950),曲线下面积分别为0.782、0.731和0.901。结论结直肠癌患者术前miR-21、miR-193a-3p表达与术后预后密切相关,且在结直肠癌患者的预后结局中表现出良好的预测效能。

早发型子痫前期患者血清microRNA-26b表达及其与胎盘早剥发生的关系

目的分析早发型子痫前期患者血清microRNA-26b(miR-26b)表达及其与胎盘早剥发生的关系。方法选取2019年8月至2022年8月荆州市中心医院收治的102例早发型子痫前期患者作为研究对象。检测所有患者miR-26b相对表达量,随访至患者分娩,根据胎盘早剥发生情况分成胎盘早剥组与非胎盘早剥组,分析早发型子痫前期患者血清miR-26b表达及其与胎盘早剥发生的关系。结果随访至产妇分娩,102例早发型子痫前期患者胎盘早剥发生率为17.65%(18/102)。胎盘早剥组血清miR-26b相对表达量高于非胎盘早剥组(P<0.05)。根据确诊疾病时血清miR-26b四分位数将患者分为Q1组(n=25)、Q2组(n=27)、Q3组(n=24)及Q4组(n=26),Q4组胎盘早剥发生率高于Q1组、Q2组及Q3组(P<0.05)。经点二列相关性分析检验,血清miR-26b与早发型子痫前期患者胎盘早剥发生率呈正相关(r=0.458,P<0.05)。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,血清miR-26b对早发型子痫前期患者胎盘早剥具有中等预测价值,且当血清miR-26b相对表达量为2.465时,可获得最佳预测价值。结论早发型子痫前期患者血清miR-26b与胎盘早剥发生有关,检测血清miR-26b相对表达量能为预测胎盘早剥发生提供重要价值。

清肾颗粒对非透析慢性肾脏病湿热证患者血清microRNA-21、Wnt4及β-catenin的影响

目的观察清肾颗粒对非透析慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)湿热证患者血microRNA-21、Wnt4及β-catenin的影响,探讨其保护肾功能、改善临床症状的作用机制。方法选取66例符合纳入标准的CKD湿热证患者,最终完成64例,对照组和观察组各32例。对照组采用CKD常规基础治疗,观察组在对照组治疗基础上加用清肾颗粒口服,疗程均为12周。观察和比较两组患者治疗前后中医症状积分及证候疗效,肾功能指标[血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)、血清肌酐(serum creatinine,SCr)],微炎症、营养指标[超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)、白蛋白(albumin,Alb)、前白蛋白(prealbumin,PAB)],血清microRNA-21、Wnt4及β-catenin水平。结果两组患者治疗后中医症状积分较治疗前均显著降低(P<0.05),且观察组降低程度显著大于对照组(P<0.05);两组患者临床疗效比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组BUN、SCr水平,eGFR较治疗前显著改善(P<0.05),且改善程度显著优于对照组(P<0.05);与治疗前比较,两组患者治疗后血清hs-CRP水平均显著降低(P<0.05),Alb、PAB水平均显著升高(P<0.05),且观察组血清hs-CRP、Alb、PAB水平改善程度优于对照组(P<0.05);治疗前两组患者血清microRNA-21、Wnt4、β-catenin水平均显著高于正常组(P<0.05),观察组患者治疗后血清microRNA-21、Wnt4、β-catenin水平均显著降低(P<0.05),且降低程度显著大于对照组(P<0.05)。结论清肾颗粒能够改善CKD湿热证患者肾功能及微炎症、营养不良状态,减轻临床症状,其机制可能与降低microRNA-21表达水平,靶向抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

子宫内膜癌组织中MicroRNA差异表达的分析

目的筛选子宫内膜癌差异表达的微小RNA(MicroRNA,miRNA),为深入研究miRNA与子宫内膜癌发生和发展的关系奠定基础。方法应用miRNA表达芯片检测子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中miRNA的表达谱。采用实时定量PCR法检测两种子宫内膜组织中差异表达的miRNA,初步验证miRNA芯片结果的可靠性。结果与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织中有14个miRNA表达上调,6个miRNA表达下调。实时定量PCR验证结果与芯片结果一致。结论miRNA在子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组织间存在差异表达,miRNA表达谱分析将为子宫内膜癌的诊断与治疗提供新的依据。

血管内超声参数联合microRNA-206评估非ST段抬高型急性心肌梗死患者病变严重程度及预后的价值

目的探讨血管内超声(IVUS)参数联合microRNA-206(miR-206)评估非ST段抬高型急性心肌梗死(NSTEAMI)患者病变严重程度及预后的价值。方法选取2019年3月-2021年4月河北北方学院附属第一医院收治的105例NSTEAMI患者,所有患者行经皮冠状动脉介入术(PCI),根据病变严重程度将患者分为单支病变组(55例)、双支病变组(32例)、多支病变组(18例)。对比不同病变程度患者IVUS参数、血清miR-206,分析IVUS参数、血清miR-206与NSTEAMI患者病变严重程度的相关性。随访2年,根据是否发生MACE分为发生组与非发生组。对比发生组与非发生组的临床资料,采用多因素逐步Logistic回归模型分析NSTEAMI患者发生主要不良心脏事件(MACE)的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评估IVUS参数、血清miR-206预测NSTEAMI患者发生MACE的效能。结果多支病变组斑块负荷、斑块面积、重构指数、偏心指数、血清miR-206相对表达量均高于单支、双支组(P<0.05),且双支病变组均高于单支病变组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血管外弹力膜面积与NSTEAMI患者病变严重程度无相关性(r=0.271,P=0.325);斑块负荷、斑块面积、重构指数、偏心指数、血清miR-206与NSTEAMI患者病变严重程度呈正相关(r=0.416、0.382、0.423、0.507和0.394,均P=0.000)。随访2年,失访2例,剩余103例患者中32例(31.07%)发生MACE,71例(68.93%)未发生MACE。发生组多支病变、血运未重建占比、斑块负荷、斑块面积、重构指数、偏心指数、血清miR-206相对表达量均高于非发生组(P<0.05),淋巴细胞计数、血红蛋白水平均低于非发生组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:多支病变[OR=3.466(95%CI:1.523,7.884)]、血运未重建[OR=2.776(95%CI:1.220,6.315)]、斑块负荷[OR=3.155(95%CI:1.387,7.177)]、重构指数[OR=3.842(95%CI:1.689,8.740)]、偏心指数[OR=4.166(95%CI:1.831,9.477)]、血清miR-206[OR=4.500(95%CI:1.978,10.236)]为NSTEAMI患者发生MACE的危险因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,斑块负荷、重构指数、偏心指数、血清miR-206四者联合预测NSTEAMI患者发生MACE的敏感性为88.52%(95%CI:0.674,0.957),特异性为92.86%(95%CI:0.713,0.968),曲线下面积为0.900(95%CI:0.812,0.953)。结论IVUS参数(斑块负荷、重构指数、偏心指数)、血清miR-206在评估NSTEAMI患者病变严重程度与预后中具有重要价值,且四者联合具有更高的预测价值。

血清微小miR-92a、miR-26b、miR-320对老年冠心病患者PCI术后不良心血管事件的预测价值

目的 探究血清微小RNA(miR)-92a、miR-26b、miR-320对老年冠心病患者PCI术后不良心血管事件的预测价值。方法 前瞻性选取2021年10月至2023年10月于安阳市人民医院行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术治疗的172例冠心病患者作为研究组,根据患者术后6个月是否出现主要不良心血管事件(MACE)将其分为MACE组36例和非MACE组136例,另选取同期健康体检者172例作为对照组;比较研究组和对照组受检者的血清miR-92a、miR-26b、miR-320水平,比较MACE组和非MACE组患者的一般资料、血清miR-92a、miR-26b、miR-320水平和生化指标;采用多因素Logistic回归分析老年冠心病患者PCI术后MACE的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-92a、miR-26b、miR-320对老年冠心病患者PCI术后MACE的预测价值。结果 研究组患者的血清miR-92a、miR-320水平分别为2.13±0.40、2.44±0.45,明显高于对照组的1.02±0.27、1.01±0.26,miR-26b水平为0.40±0.09,明显低于对照组的1.00±0.26,差异均有统计学意义(P<0.05);MACE组患者的血清miR-92a、miR-320水平分别为4.65±0.61、5.67±0.71,明显高于非MACE组的1.46±0.34、1.58±0.38,miR-26b水平为0.19±0.04,明显低于非MACE组的0.46±0.10,差异均有统计学意义(P<0.05);MACE组患者的总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、心肌肌钙蛋白I (cTnI)、N端脑钠肽前体(NT-proBNP)分别为(4.68±1.15) mmol/L、(2.97±0.43) mmol/L、(1.05±0.26)μg/L、(1 265.31±46.38) ng/L,明显高于非MACE组的(4.09±1.14) mmol/L、(2.42±0.39) mmol/L、(0.30±0.05)μg/L、(772.35±32.25) ng/L,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-92a、miR-320、TC、LDL-C、c TnI、NT-proBNP均是影响老年冠心病患者PCI术后MACE的危险因素(P<0.05),miR-26b为保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-92a、miR-26b、miR-320预测老年冠心病患者PCI术后MACE的AUC为0.848、0.824、0.743,三者联合预测老年冠心病患者PCI术后MACE的AUC为0.888,三者联合优于各自单独预测(Z联合vs miR-92a=2.675、Z联合vs miR-26b=2.681、Z联合vs miR-320=2.712,P<0.05)。结论 老年冠心病患者血清miR-92a、miR-320水平显著升高,miR-26b显著降低,三者联合可有效提高老年冠心病患者PCI术后MACE的预测价值。

化瘀杀胚汤联合甲氨蝶呤治疗异位妊娠的疗效及对TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p表达量的影响

【目的】探讨化瘀杀胚汤(由丹参、赤芍、桃仁、蜈蚣、紫草、天花粉、三七等中药组成)联合甲氨蝶呤治疗异位妊娠疗效及对患者TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p表达量的影响。【方法】将104例异位妊娠患者随机分为观察组和对照组,每组各52例。对照组给予甲氨蝶呤联合米非司酮治疗,观察组在对照组的基础上加用化瘀杀胚汤治疗,连续用药3 d并随访观察1个月。比较2组患者保守治疗成功率、血β人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)水平恢复正常时间以及异位妊娠包块吸收时间、治疗后输卵管完全通畅率与不通畅率,观察2组保守治疗成功患者治疗前后血清TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p相对表达量的变化情况。【结果】(1)观察组的保守治疗成功率为94.23%(49/52),明显高于对照组的71.15%(37/52),差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组比较,观察组的血β-HCG恢复正常时间及包块吸收时间均明显缩短,差异均有统计学意义(P<0.01)。(3)观察组治疗后的输卵管完全通畅率为55.77%(29/52),明显高于对照组的21.15%(11/52);不通畅率为19.23%(10/52),明显低于对照组的59.62%(31/52),差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(4)与治疗前比较,2组保守治疗成功患者治疗结束1个月后的TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p相对表达量均明显降低(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,观察组治疗结束1个月后的TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p相对表达量均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。(5)2组患者的不良反应均以胃肠道不适为主,观察组的不良反应发生率为25.00%(13/52),明显低于对照组的46.15%(24/52),组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】化瘀杀胚汤联合甲氨蝶呤治疗异位妊娠,可有效提高药物保守治疗的成功率,有助于包块的吸收以及输卵管通畅,能有效降低患者的TGF-β/Smad2/3蛋白水平及microRNA-30d-5p的相对表达量,且药物安全性较高。

microRNA25、CA199联合CT在胰腺癌诊断及预后中的价值分析

目的分析沉默微小RNA-25(microRNA25)、糖类抗原199(Carbohydrate antigen199,CA199)联合电子计算机断层扫描(Computer Tomography,CT)在胰腺癌诊断及预后中的价值。方法选取2019年6月至2022年6月中国中医科学院广安门医院收治的215例疑似胰腺癌患者为研究对象,对患者进行CT检查,确诊为胰腺癌的110例患者为观察组,剩余105例非胰腺癌者为对照组。结果与对照组相比,观察组CT参数血流量(blood flow,BF)、血流血容量(Blood bleeding volume,BV)、血流容积(Blood flow volume,PBV)下降,达峰时间(time to peak,TTP)上升,差异具有统计学意义(P<0.05);与胰腺癌Ⅰ级患者相比,Ⅱ级、Ⅲ级患者CT参数BF、BV、PBV下降,TTP上升,差异具有统计学意义(P<0.05);与Ⅱ级患者相比,Ⅲ级患者CT参数BF、BV、PBV下降,TTP上升,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,观察组microRNA25、CA199表达上升,差异具有统计学意义(P<0.05);与胰腺癌Ⅰ级患者相比,Ⅱ级、Ⅲ级患者microRNA25、CA199表达水平上升,且Ⅲ级患者microRNA25、CA199表达水平最高(P<0.05);与预后良好患者相比,预后不良患者microRNA25、CA199水平上升、TTP升高,BF、BV、PBV下降(P<0.05)。结论CT参数在胰腺癌的诊断中具有较强的参考价值,且和microRNA25、CA199有着一定的相关性,可用于对不同分期的胰腺癌患者进行对应性治疗。

microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进展

microRNA在肌、骨代谢疾病中的作用已成为当前研究热点。本文对microRNA在肌少-骨质疏松症中的作用机制研究进行总结。首先,本文介绍microRNA的生物发生过程和基因调控机制。其次,本文分别介绍相关microRNA亚型在骨骼肌和骨骼重建中的作用。在microRNA对骨骼肌作用机制方面,归纳了5个方面:(1)调节转录因子MyoD的活化和表达;(2)调节其他肌肉特异性转录因子的表达;(3)影响肌肉细胞的增殖和分化;(4)影响肌肉细胞表型;(5)microRNA的协同作用。并从促进成骨和抑制破骨两方面说明microRNA影响骨重塑的作用机制。还对具有肌骨共生的microRNA进行了总结归纳。最后对相关研究中存在的问题与不足进行总结和展望,对肌少-骨质疏松症的防治具有积极意义。

筛选的差异表达microRNAs对猪卵母细胞Npm2基因的表达调控及作用研究

旨在研究卵母细胞中筛选的差异表达microRNAs对Npm2(nucleoplasmin 2)基因的调控作用。本研究采集屠宰场卵巢,收集GV期卵母细胞进行体外成熟培养,收集MⅡ期卵母细胞。使用qPCR检测筛选的差异表达miRNAs在GV、MⅡ期卵母细胞的表达水平;双荧光素酶报告试验验证预测的miRNA是否与靶基因Npm2存在结合位点;在体外成熟培养液中添加miRNAs模拟物/抑制物,验证miRNA对卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎体外发育能力的影响。添加最适浓度的miRNAs模拟物/抑制物后,使用花生凝集素染色试验检测皮质颗粒分布和qPCR检测Npm2 mRNA表达水平。结果表明,MⅡ期卵母细胞中miR-150、miR-7138-5p表达显著高于GV期卵母细胞(P<0.05),miR-296-3p、miR-423-3p表达水平极显著低于GV期卵母细胞(P<0.01),表达趋势与测序结果一致。miR-32表达水平无显著差异(P>0.05)。双荧光素酶报告试验结果表明,miR-32、miR-7138-5p、miR-296-3p与Npm2存在结合位点,荧光强度极显著下调(P<0.01);miR-150与Npm2存在结合位点,荧光强度显著下调(P<0.05);miR-296-5p、miR-423-3p与Npm2不存在结合位点,荧光强度无显著变化(P>0.05)。通过在体外成熟培养液中添加不同浓度miRNAs模拟物/抑制物以确定最适浓度,添加miR-32抑制物、miR-296-5p模拟物、miR-296-5p抑制物、miR-423-3p模拟物、miR-423-3p抑制物、miR-7138抑制物、miR-150模拟物、miR-150抑制物后皮质颗粒荧光强度极显著下调(P<0.01);添加miR-296-3p抑制物、miR-7138-5p模拟物后皮质颗粒荧光强度显著下调(P<0.05)。MⅡ期卵母细胞Npm2 mRNA表达量极显著高于GV期卵母细胞,添加最适浓度miR-150、miR-296-3p、miR-296-5p、miR-7138-5p模拟物和/或抑制物Npm2 mRNA表达量与对照组有显著差异(P<0.05),添加miR-32、miR-423-3p模拟物/抑制物后MⅡ期卵母细胞Npm2 mRNA表达量与对照组无显著差异(P>0.05)。筛选的差异miRNA(如miR-296-3p、miR-7138-5p)可能通过调控Npm2表达影响卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育,可为猪卵母细胞microRNAs与靶基因复杂调控网络研究提供基础。

靶向鸡糖皮质激素受体基因的microRNA预测与鉴定

[目的]本文旨在预测和筛选靶向调控鸡糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达的microRNA。[方法]用TargetScan、PicTar和miRDB软件分别预测靶向鸡GR 3′UTR microRNA并取交集;构建包含鸡GR 3′UTR的重组质粒及突变质粒,通过双荧光素酶试验鉴定microRNA和鸡GR 3′UTR的靶向性;用TargetScan和miRDB软件分别预测候选microRNA的靶基因,用DAVID软件对预测出的共同靶基因进行GO功能分析;用Western blot检测过表达候选microRNA对鸡DF1细胞GR蛋白表达的影响。[结果]miR124-3p、miR142-3p、miR204/211、miR183、miR18-5p和miR181a/181b是3种软件预测靶向GR 3′UTR的交集microRNA;双荧光素酶试验结果表明miR142-3p、miR204/211和miR18-5p靶向结合GR 3′UTR。2种软件预测3个候选microRNA的靶基因中都有GR且富集分子功能不同;在DF1细胞中过表达3个候选microRNA后,miR142-3p和miR204/211显著降低GR蛋白的表达水平(P<0.05)。[结论]miR142-3p、miR204/211和miR18-5p靶向结合鸡GR 3′UTR,且miR142-3p和miR204/21可以降低鸡DF1细胞中GR蛋白的表达水平。

MicroRNA调节免疫性血小板减少症CD4^(+)T细胞亚群免疫功能的研究进展

MicroRNA(miRNA)是一种小分子非编码单链RNA,可广泛参与多种生物学过程,对调节机体的免疫功能具有重要作用。免疫性血小板减少症(ITP)是一种自身免疫性疾病,其发生和进展与miRNA介导CD4^(+)T细胞亚群的异常免疫调节密切相关。ITP患者miRNA的不同表达情况可影响CD4^(+)T细胞亚群的免疫功能,导致Th1/Th2、Th17/Treg的调节失衡和TFH的过度分化,引起细胞因子分泌异常。本文就ITP中miRNA介导的CD4^(+)T细胞亚群免疫功能失衡机制进行总结,以期为探索ITP的免疫机制和免疫治疗提供启发。

MicroRNA在畜禽生产中的研究进展

MicroRNA(miRNA)是一类短小的非编码RNA分子,在细胞调控和生物学过程中的多个方面引起广泛关注。近年来,研究发现miRNA在动物生理过程中扮演着重要的调控角色,尤其是与肌肉发育、脂肪代谢、肉品质、激素分泌和肠道健康等领域的关系。本文将深入探讨miRNA在这些生理过程中的作用及其潜在机制,以期为畜牧业和食品工业提供有益的科学依据。

微小扇头蜱microRNA文库建立及miR-275靶蛋白Vg-2的生物信息学分析

【目的】建立饱血状态雌性微小扇头蜱的microRNA文库,鉴定所含microRNA的种类,分析miR-275靶蛋白Vg-2的二、三级结构,检测其信号肽、跨膜结构域、磷酸化及糖基化位点,预测其优势抗原表位。【方法】以雌性、饱血状态的微小扇头蜱为研究对象,通过高通量测序技术建立其microRNA文库,利用软件miRDP及检索miRBase数据库,鉴定饱血状态雌性微小扇头蜱所含的microRNA种类;运用在线软件EXPASY、PRABI与SWISS-MODEL等分析Vg-2蛋白质理化性质,推断其二、三级结构;运用在线软件SignalP 5.0、TMHMM、NetPhos 3.1及NETCGlyc 1.0检测该蛋白的信号肽、跨膜结构域、磷酸化与糖基化位点;利用在线软件ABCpred Prediction、Scratch、IEDB和NetCTL预测Vg-2蛋白的B、T细胞优势抗原表位。【结果】获得成熟的microRNA 383个,其中67个为已被鉴定和注释的microRNA,316个为新发现的microRNA;微小扇头蜱的Vg-2基因序列全长5040 bp,共编码1679个氨基酸;Vg-2蛋白为亲水性酸蛋白,分子大小为189.89 kDa,理论等电点(pI)为6.08,其二级结构以无规则卷曲为主要结构成分,而其三级结构却以β-折叠为主要结构成分;Vg-2蛋白存在268个磷酸位点,20个糖基化位点,无信号肽和跨膜结构域,拥有58个B细胞优势抗原表位和8个T细胞优势抗原表位。【结论】在饱血状态雌性微小扇头蜱体内含有383个microRNA,受miR-275调控的Vg-2蛋白为结构不稳定的亲水性酸蛋白,具有良好的抗原性与免疫源性。

microRNA-933对LX-2细胞凋亡和增殖的影响及其分子机制

目的 探讨microRNA-933(miRNA-933)对人肝星状细胞系LX-2细胞凋亡和增殖的调控作用及其机制。方法 首先以人肝组织为研究对象,利用基因芯片技术,检测肝硬化与慢性乙型肝炎肝组织相较于正常肝组织中差异表达的基因,并从中筛选差异表达显著的miRNA,从而确定研究对象为miRNA-933。进而以人肝星状细胞系LX-2为研究对象,利用mi RNA-933分子模拟剂(mi RNA-933 mimic)与抑制剂(mi RNA-933 siRNA),构建LX-2过表达与敲减模型,并以转染mimic-NC(过表达)或si RNA-NC(敲减)的细胞作为阴性对照。使用实时荧光定量PCR(q PCR)和Western Blot技术,检测mi RNA-933与活化标志蛋白的表达水平;随后采用细胞增殖实验、流式细胞术等技术,检测mi RNA-933对细胞凋亡、增殖和活化的影响,并探讨其机制。计量资料两组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,并经过Bonferroni校正。结果 基于基因芯片检测结果,最终筛选出18个显著差异表达的mi RNA,其中mi RNA-933表达显著下调(P<0.05)。mi RNA-933 mimic与siRNA转染LX-2细胞后,结果显示,与阴性对照组相比,miRNA-933 siRNA显著下调miRNA-933的表达(P=0.000 7),而mi RNA-933 mimic显著上调mi RNA-933的表达(P=0.000 3);Western Blot和q PCR检测结果表明,mi RNA-933 siRNA显著上调胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达(P值均<0.001),而mi RNA-933 mimic显著抑制CollagenⅠ和α-SMA的表达(P值均<0.05)。流式细胞术检测结果显示,与阴性对照组相比,miRNA-933 siRNA显著下调LX-2细胞凋亡率(P=0.031 9),miRNA-933 mimic显著上调LX-2细胞凋亡率(P=0.005 5);Western Blot检测结果表明,与阴性对照组相比,miRNA-933 siRNA可以抑制LX-2细胞中胱天蛋白酶3(Caspase-3)和多聚ADP核糖聚合酶1(PARP-1)的表达(P值分别为0.006 7、0.003 0),上调B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达(P=0.002 0),而miRNA-933 mimic可显著上调Caspase-3(P=0.011 8)和PARP-1(P=0.049 5)的表达,下调Bcl-2的表达(P=0.002 1)。细胞增殖实验结果显示,与阴性对照组相比,miRNA-933siRNA可促进LX-2细胞增殖(P=0.011 5);相反miRNA-933 mimic可抑制LX-2细胞增殖(P=0.001 2)。Western Blot和qPCR检测显示,mi RNA-933 siRNA显著抑制Kruppel样因子6(KLF6)的表达,进而下调活化转录因子4(ATF4)、活化转录因子3(ATF3)、C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白的表达,而miRNA-933 mimic会促进以上蛋白的表达(P值均<0.05)。结论 miRNA-933可能通过促进LX-2细胞中KLF6/ATF4/ATF3/CHOP/Bcl-2信号轴的激活,进而促进细胞凋亡,抑制细胞的活化和增殖。