microRNA-103b在急性淋巴细胞白血病患者中的表达及意义

目的微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长度为21-25nt的内源性单链非编码RNA小分子。本研究旨在探讨miR-103b在急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及临床意义。方法用实时定量聚合酶链反应(qRTPCR)技术检测80例初诊ALL患者和20例正常人骨髓单个核细胞标本中miR-103b的相对表达量,并与患者临床资料进行相关性分析。结果 miR-103b在ALL患者中的相对表达量高于正常对照组(P<0.05),但其在急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)及急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)中的表达水平差异无统计学意义(P>0.05),miR-103b的表达与是否存在bcr-abl融合基因及其mRNA的表达水平无相关性(P>0.05)。结论 miR-103b在ALL患者中表达上调,可作为临床诊断ALL的潜在分子标记物,bcr-abl融合基因的表达对miR-103b在ALL中的表达无明显影响。

MicroRNA-103-3p对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化早期的影响

目的:探讨miR-103-3p对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化早期的影响。方法:以小鼠前成骨细胞MC3T3-E1为实验对象,对MC3T3-E1细胞进行成骨诱导,分别在0、3、5、7 d应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测细胞中Runx2、Osx、ALP、miR-103-3p表达水平,Western免疫印迹(Western blotting)检测Runx2、Osx蛋白表达并进行碱性磷酸酶(ALP)染色。通过脂质体lipofectamine2000瞬时转染miR-103-3p模拟物(miR-103-3p mimics)及模拟物阴性对照进入MC3T3-E1细胞内,Real-time PCR检测2组细胞miR-103-3p的表达水平,CCK-8试剂盒检测细胞增殖。分别对2组细胞进行成骨诱导,在成骨诱导后0、3、7 d,分别使用Real-time PCR和Western免疫印迹检测2组细胞Runx2、Osx等成骨相关基因m RNA和蛋白的表达变化,并对2组细胞进行ALP染色。实验数据采用SPSS19.0软件包进行统计学分析。结果:MC3T3-E1经成骨诱导0、3、5、7 d后,细胞内Runx2、Osx、ALP转录水平持续显著升高;Runx2、Osx蛋白表达升高。ALP染色逐渐加深。在成骨诱导3、5、7 d的MC3T3-E1细胞中,miR-103-3p水平较诱导前受到持续显著抑制(P<0.05)。瞬时转染miR-103-3p mimics后,MC3T3-E1细胞中的miR-103-3p表达水平较对照组显著上调(P<0.05),细胞增殖受到抑制,Runx2、ALP转录水平显著抑制(P<0.05),Runx2蛋白表达显著抑制。对转染后的细胞进行成骨诱导3、7 d后,miR-103-3p转染组细胞Runx2、Osx、ALP在转录水平的表达较对照组显著降低,Runx2、Osx在蛋白水平的表达较对照组显著降低,且miR-103-3p转染组细胞ALP活性较对照组显著降低。结论:miR-103-3p可能对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的成骨分化早期起抑制作用。

microRNA-103通过调节自噬参与调控妊娠期糖尿病机制的临床研究

目的:研究microRNA-103通过调节自噬参与调控妊娠期糖尿病的作用机制。方法:选取2020年8月-2021年8月在莆田学院附属医院住院分娩的30例妊娠期糖尿病孕妇纳入研究组;另选取同时期住院分娩的30例健康孕妇纳入对照组。两组均于产妇分娩后立刻收集胎盘组织,运用实时荧光定量聚合酶链式反应法测定microRNA-103表达水平,运用蛋白质印迹法检测胎盘组织微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬相关蛋白5(Atg5)蛋白表达水平,运用电镜检测组织自噬小体。比较研究组与对照组胎盘组织microRNA-103、LC3-Ⅱ与Atg5蛋白的表达水平及自噬小体数量,运用Pearson相关性分析法分析观察组LC3-Ⅱ蛋白、Atg5蛋白与microRNA-103的相关性。结果:研究组胎盘组织microRNA-103、LC3-Ⅱ与Atg5蛋白的表达水平均高于对照组(P<0.05)。研究组胎盘组织中的自噬小体数量多于对照组(P<0.05)。LC3-Ⅱ蛋白、Atg5蛋白与microRNA-103均呈正相关(P<0.05)。结论:microRNA-103在妊娠期糖尿病胎盘组织中的表达水平上调,自噬增强,可通过调节自噬参与该病的致病过程。

MicroRNA-590-5p、microRNA-103、microRNA-34c-5p、Dicer及BRMS-1基因在肺癌中的表达研究

目的探讨microRNA-590-5p(miR-590-5p)、miR-103、miR-34c-5p、Dicer及BRMS-1在肺癌中表达及相互间关系。方法选取47例肺癌患者的癌组织及癌旁正常组织,利用Trizol提取总RNA,实时荧光定量聚合酶链反应检测基因的相对表达量。结果肺癌组织与癌旁正常组织miR-103、miR-34c-5p、Dicer及BRMS-1基因表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),miR-34c-5p与P53呈正相关(P<0.05),miR-103与多药耐药相关蛋白呈正相关(P<0.05),Dicer与miR-34c-5p、miR-103及miR-590-5p呈负相关(P<0.05)。结论在肺癌组织中Dicer基因表达与miR-34c-5p呈负相关,可能通过抑制癌基因的表达,抑制肺癌的发生。

LncRNA FGD5-AS1通过miR-103a-3p/RNF38轴影响结肠癌细胞的恶性生物学行为

目的:探讨长链非编码RNA FGD5反义RNA1(LncRNA FGD5-AS1)靶向调控miR-103a-3p/环指蛋白38(RNF38)轴对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:使用荧光定量PCR检测LncRNA FGD5-AS1、miR-103a-3p在人结肠黏膜上皮细胞和人结肠癌细胞SW480中的表达水平;通过StarBase和TargetScan数据库分析LncRNA FGD5-AS1、miR-103a-3p、RNF38之间的结合位点,使用双荧光酶报告基因检测进一步验证;将SW480细胞随机分为对照(Control)组、pcDNA-NC组、pcDNA-FGD5-AS1组、si-NC组、si-FGD5-AS1组、si-FGD5-AS1+inhibitor NC组、si-FGD5-AS1+miR-103a-3p inhibitor组,通过CCK-8、流式细胞术、Transwell试验、荧光定量PCR及Western blot法检测细胞增殖、凋亡、侵袭、FGD5-AS1、miR-103a-3p水平及RNF3蛋白表达水平。结果:与人结肠黏膜上皮细胞相比,SW480细胞中LncRNA FGD5-AS1表达水平显著降低(1.00±0.00比0.48±0.10,t=12.737,P<0.05),miR-103a-3p表达水平显著升高(1.00±0.00比1.61±0.18,t=8.301,P<0.05);LncRNA FGD5-AS1可靶向负调控miR-103a-3p表达(P<0.05);miR-103a-3p可靶向正调控RNF38表达(P<0.05);与pcDNA-NC组相比,pcDNA-FGD5-AS1组SW480细胞中FGD5-AS1水平升高(0.98±0.10比2.34±0.45,t=7.227,P<0.05),细胞凋亡率增加(8.64±1.32比16.21±2.75,t=6.079,P<0.05),而miR-103a-3p表达水平(1.01±0.12比0.42±0.07,t=10.403,P<0.05)、RNF38蛋白表达水平(0.59±0.09比0.32±0.17,t=3.438,P=0.006)、细胞增殖活性(0.63±0.09比0.34±0.06,t=6.567,P<0.05)、细胞侵袭能力(112.63±14.94比43.82±5.67,t=10.548,P<0.05)降低。si-FGD5-AS1组细胞变化趋势与pcDNA-FGD5-AS1组相反,且miR-103a-3p inhibitor可逆转si-FGD5-AS1组的变化(P<0.05)。结论:干扰LncRNA FGD5-AS1可能通过靶向上调miR-103a-3p,促进RNF38蛋白表达,从而提高结肠癌细胞增殖和侵袭能力,降低结肠癌细胞凋亡率,而上调LncRNA FGD5-AS1可抑制结肠癌细胞的恶性生物学行为。

携载microRNA-140外泌体/海藻酸钠/胶原水凝胶修复关节软骨损伤

背景:研究已证实,上调microRNA-140表达可部分抑制膝关节软骨组织与细胞的骨关节炎样改变,延缓骨关节炎进程,提示microRNA-140参与了骨关节炎的发病机制。目的:采用海藻酸钠/胶原水凝胶负载过表达microRNA-140的外泌体,进一步分析microRNA-140参与骨关节炎的相关机制。方法:利用慢病毒感染大鼠骨髓间充质干细胞使其过表达microRNA-140,随后分离提取外泌体,得到过表达microRNA-140的外泌体。制备负载外泌体的海藻酸钠/胶原水凝胶。采用随机数字表法将32只SD大鼠随机分为4组,每组8只:正常对照组不进行任何处理,骨关节炎组、未转染外泌体组、转染外泌体组均通过膝关节腔内注射碘乙酸钠的方式建立骨关节炎模型,造模2周后,骨关节炎组膝关节腔内注射PBS,未转染外泌体组、转染外泌体组膝关节腔内分别注射负载未过表达microRNA-140与过表达microRNA-140外泌体的海藻酸钠/胶原水凝胶。造模后第6周,检测大鼠机械刺激缩足反应阈值、滑膜液炎症因子浓度、软骨相关基因表达、膝关节软骨组织的组织学变化与焦亡相关蛋白表达。结果与结论:①与正常对照组比较,骨关节炎组机械刺激缩足反应阈值、Ⅱ型胶原及SOX9 mRNA表达、Ⅱ型胶原免疫荧光强度均减少(P<0.05),滑膜液中促炎症因子水平增加(P<0.05),基质金属蛋白酶13、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)mRNA表达增加(P<0.05),NLRP3、ASC、GSDMD p30、caspase-1 p20、白细胞介素1β、白细胞介素18蛋白表达均增加(P<0.05),GSDMD、cleaved caspase-1免疫荧光强度增强(P<0.05),软骨组织损伤严重。②与骨关节炎组比较,两外泌体组机械刺激缩足反应阈值、Ⅱ型胶原及SOX9 mRNA表达、Ⅱ型胶原免疫荧光强度均增加(P<0.05),滑膜液中促炎症因子水平减少(P<0.05),基质金属蛋白酶13 mRNA表达减少(P<0.05),NLRP3、ASC、GSDMD p30、caspase-1 p20、白细胞介素1β、白细胞介素18的蛋白表达均减少(P<0.05),GSDMD、cleaved caspase-1的免疫荧光强度减弱(P<0.05),软骨组织损伤减轻(P<0.05),并且转染外泌体组的作用更强。③结果表明,microRNA-140可通过抑制炎症、维持软骨稳态、抑制软骨焦亡来减轻骨关节炎大鼠的疼痛反应,降低软骨损伤,发挥骨关节炎治疗作用。

MicroRNA-214调控骨关节炎软骨和软骨下骨代谢的机制

背景:microRNA-214(miR-214)在骨质疏松中的作用国内外已有相关报道,而miR-214与骨关节炎关节软骨及软骨下骨退变之间的相互关系尚不清楚。目的:探讨miR-214与小鼠膝骨关节炎软骨及软骨下骨退变之间存在的关系。方法:取30只C57BL/6J小鼠随机分组:①实验一:分为假手术组和内侧半月板失稳组(n=3),分别进行苏木精-伊红染色和荧光定量PCR检测miR-214基因的表达变化;②实验二:分为假手术组、内侧半月板失稳组、内侧半月板失稳+空载腺病毒组(空载组)、内侧半月板失稳+miR-214拮抗剂过表达腺病毒组(拮抗剂组)(n=6),术后4周各组分别取软骨组织,进行苏木精-伊红、番红O固绿、甲苯胺蓝染色分析;荧光定量PCR、Western blot检测关节软骨中相关因子的表达情况。结果与结论:①实验一中,苏木精-伊红染色结果显示,与假手术组相比,内侧半月板失稳组可见软骨退变;荧光定量PCR检测结果显示,所有样本均有miR-214表达,而内侧半月板失稳组软骨样本中miR-214的表达水平明显高于假手术组(P<0.05);②实验二中,苏木精-伊红染色、番红O固绿染色、甲苯胺蓝染色结果显示,拮抗剂组软骨退变程度低于内侧半月板失稳组;腺病毒验证PCR检测结果显示,空载组软骨中miR-214表达水平高于拮抗剂组(P<0.05);③实验二中,X射线片显示,内侧半月板失稳组和空载组呈典型骨关节炎影像学变化,拮抗剂组关节退行性病变程度相对较轻;Mirco-CT检测结果显示,拮抗剂组在注入miR-214拮抗剂后,骨小梁结构模型指数变小,各项数据整体好于内侧半月板失稳组及空载组;④实验二Western blot检测结果显示,内侧半月板失稳组、空载组软骨标本中软骨相关因子Ⅱ型胶原α1、性别决定区Y框转录因子9、Runt相关转录因子2、骨桥蛋白的相对表达水平低于假手术组及拮抗剂组(P<0.05);而金属基质蛋白酶13的相对表达水平在内侧半月板失稳组、空载组高于假手术组及拮抗剂组(P<0.05);⑤实验二荧光定量PCR检测结果显示,与假手术组比较,肿瘤坏死因子α和白细胞介素6 mRNA的相对表达量在内侧半月板失稳组、空载组中表达相对较高,拮抗剂组中表达相对较低(P<0.05);内侧半月板失稳组、空载组高于拮抗剂组(P<0.05);⑥结果表明,骨关节炎小鼠模型的关节软骨中miR-214表达水平明显升高,提示miR-214表达水平的升高与骨关节炎有密切联系;而在骨关节炎小鼠模型膝关节腔内注入miR-214拮抗剂,可以延缓关节软骨退化、促进软骨下骨重塑,改善骨关节炎进展。

非小细胞肺癌中microRNA-21表达与患者生存预后的相关性研究

探讨非小细胞肺癌患者中 microRNA-21 表达水平与生存预后的相关性,评估其作为生物标志物的价值。方法 前瞻性队列研究,纳入 100 例 2023 年 5 月至 2024 年 1 月确诊的 NSCLC 患者,用实时定量 PCR 检测肿瘤组织中 microRNA-21 表达水平,与临床病理特征及随访数据关联分析,分为高、低表达组。结果 高表达组总生存时间显著短于低表达组。多因素 Cox 回归分析显示其为不良预后因子。结论 microRNA-21 高表达与 NSCLC 患者较差生存预后相关,可作为预后生物标志物。

microRNA-103下调Dicer1对卵巢癌侵袭转移影响及其机制探讨

目的探讨卵巢癌细胞中microRNA-103对Dicer1的调控作用以及对侵袭转移能力的影响,研究其作用分子机制。方法收集华中科技大学同济医学附属同济医院2009-02-01-2012-07-02确诊为浆液性卵巢癌患者石蜡切片共135例,免疫组织化学检测配对原位转移卵巢癌病灶,高低级别浆液性卵巢癌病灶Dicer1表达水平;收集武汉同济医院2013-01-03-2013-03-20新鲜卵巢癌标本组织和正常卵巢标本各5例,提取RNA后qRT-PCR法比较卵巢癌组织、正常卵巢组织、卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞中miR-103表达差异;用生物信息学的方法特异预测出miR-103特异作用Dicer1位点,后通过双荧光素酶报告体系进行验证。上调miR-103表达后,蛋白质印迹法检测Dicer1的表达变化;上调miR-103或下调Dicer1水平后Transwell实验观察卵巢癌细胞迁移侵袭能力的改变;Confocal观察EMT相关分子N-cadherin的表达。结果 Dicer1在卵巢癌发生发展过程中表达下降,转移灶与原位灶相比显著表达下调,χ2=15.0,P<0.01;高级别浆液性癌较低级别Dicer1明显表达下调,χ2=21.4,P<0.01。miR-103在上皮性卵巢癌组织的相对表达量为4.28±1.22,较正常卵巢(0.69±0.13)明显增加,t′=-6.381,P=0.002;同时在卵巢癌细胞系中相对表达量为3.71±1.36,较正常卵巢上皮细胞(0.98±0.19)显著增加,t=-4.851,P=0.005。荧光素酶报告系统示,miR-103能特异结合Dicer1-3′-UTR区域;卵巢癌细胞系SKOV3中过表达miR-103后其迁移细胞数目为77.5±8.4,较对照组(17.5±3.1)明显增加,差异有统计学意义,t=-21.44,P<0.001;侵袭数目为50.7±4.2,较对照组(13.5±1.3)增加显著,差异有统计学意义,t=-19.74,P<0.001。Dicer1蛋白水平被显著抑制;Dicer1-siRNA下调Dicer1水平后卵巢癌细胞系SKOV3(t=16.67,P<0.001)和CAOV3(t=18.63,P<0.001)迁移侵袭能力增加;miR-103过表达或Dicer1-si后细胞形态呈现间质化改变,间质标志分子N-cadherin表达明显上升。结论 miR-103在卵巢癌中作为一个促癌miR促进卵巢癌侵袭转移,其分子机制是通过下调Dicer1介导卵巢癌细胞EMT的发生;抑制miR-103或恢复Dicer1水平可能成为上皮性卵巢癌治疗的有效方法。

血清microRNA-21、microRNA-193a-3p表达与结直肠癌患者手术预后的关系

目的探究血清microRNA-21(miR-21)、microRNA-193a-3p(miR-193a-3p)水平与结直肠癌患者手术预后的关系。方法回顾性分析2020年1月—2022年1月苏州大学附属第一医院收治112例结直肠癌患者的病历资料。患者均接受结直肠癌根治术,术后随访16个月,记录患者的预后生存结局,多因素逐步Logistic回归分析结直肠癌患者手术预后的影响因素,评估血清miR-21、miR-193a-3p对结直肠癌患者预后的预测效能。结果112例结直肠癌患者死亡22例,病死率为19.64%;生存90例,生存率为80.36%。死亡组术前血清miR-21 mRNA相对表达量、临床分期Ⅲ期占比、淋巴结转移率均高于生存组(P<0.05),血清miR-193a-3p m RNA相对表达量低于生存组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示,临床分期Ⅲ期[OR=3.777(95%CI:1.399,10.194)]、淋巴结转移[OR=5.099(95%CI:1.715,15.156)]、miR-21表达升高[OR=4.889(95%CI:1.645,14.533)]、miR-193a-3p表达降低[OR=4.402(95%CI:1.481,13.084)]均是直肠癌患者预后的影响因素(P<0.05)。受试者工作特性曲线分析结果显示,血清miR-21、miR-193a-3p单一及联合预测结直肠癌预后的敏感性分别为69.04%(95%CI:0.487,0.813)、72.73%(95%CI:0.495,0.884)、86.36%(95%CI:0.640,0.964),特异性分别为62.22%(95%CI:0.513,0.720)、68.89%(95%CI:0.581,0.780)、90.00%(95%CI:0.814,0.950),曲线下面积分别为0.782、0.731和0.901。结论结直肠癌患者术前miR-21、miR-193a-3p表达与术后预后密切相关,且在结直肠癌患者的预后结局中表现出良好的预测效能。

MicroRNA-196b、IGFBP-3在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后关系

目的 探究microRNA-196b(miR-196b)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与预后的关系。方法 选取2020年4月—2022年4月在无锡市第二人民医院手术治疗的NSCLC患者78例。收集患者的病历资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织中miR-196b、IGFBP-3的表达。所有患者随访12个月,根据预后结局分为进展组、稳定组。筛查NSCLC患者预后的影响因素,评估组织中miR-196b、IGFBP-3表达对NSCLC患者预后的预测效能。分析癌组织中miR-196b、IGFBP-3不同表达患者生存曲线的差异。结果 进展组临床分期Ⅲ期占比、术前淋巴结转移率均高于稳定组(P <0.05)。进展组癌组织miR-196b相对表达量高于稳定组(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于稳定组(P <0.05)。癌组织miR-196b相对表达量高于癌旁组织(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于癌旁组织(P <0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:临床分期[O^R=3.684(95%CI:1.259,10.778)]、术前淋巴结转移[O^R=3.557(95%CI:1.216,10.408)]、癌组织miR-196b表达[O^R=3.979(95%CI:1.359,11.641)]是NSCLC患者预后的危险因素(P <0.05),癌组织IGFBP-3表达阳性[O^R=0.220(95%CI:0.075,0.642)]是NSCLC患者预后的保护因素(P <0.05)。癌组织miR-196b、IGFBP-3及联合预测NSCLC患者预后的敏感性分别为66.25%(95%CI:0.512,0.797)、60.00%(95%CI:0.496,0.781)、87.50%(95%CI:0.725,0.963),特异性分别为69.74%(95%CI:0.534,0.825)、76.32%(95%CI:0.603,0.892)、72.37%(95%CI:0.576,0.861),曲线下面积分别为0.703、0.680、0.805。miR-196b低表达组生存情况优于高表达组(P <0.05)。IGFBP-3阳性表达组生存情况优于阴性表达组(P <0.05)。结论 NSCLC患者癌组织miR-196b、IGFBP-3表达与预后相关,且联合预测NSCLC患者预后效能良好。

鸡不同组织及细胞中gga-miR-103-3p的表达分析及其关键靶基因筛选

为初步阐明gga-miR-103-3p对鸡脂肪沉积和肌肉发育的调控作用,采用荧光定量PCR(qPCR)检测gga-miR-103-3p在S3系鸡和隐性白羽鸡(RR)腹部脂肪、肝脏、腿肌及腹部脂肪细胞、肌内脂肪细胞、成肌细胞中的表达情况,并筛选其关键靶基因。结果表明,gga-miR-103-3p在肝脏、腹部脂肪、腿肌及腹部脂肪细胞、肌内脂肪细胞、成肌细胞中均表达,并存在组织和品种(系)差异性。在肝脏中,ggamiR-103-3p在0周龄(0W)S3系鸡中的表达量显著高于RR鸡,对于S3系鸡,16周龄(16W)时gga-miR-103-3p的表达量最高,显著高于0W、2周龄(2W)、8周龄(8W)和14周龄(14W);对于RR鸡,16W和14W时gga-miR-103-3p的表达量显著高于0W和8W。在腹部脂肪中,gga-miR-103-3p在0W RR鸡中的表达量显著高于S3系鸡。2个品种(系)鸡在0W时gga-miR-103-3p的表达量均显著高于2W、8W、14W和16W,S3系鸡的表达量随着发育时期的推进而下降。在腿肌中,gga-miR-103-3p在16W时RR鸡中的表达量显著高于S3系鸡,在0W时则相反;S3系鸡中gga-miR-103-3p的表达量随着发育时期的推进总体上下降,在0W时表达量显著高于其他周龄;RR鸡中gga-miR-103-3p的表达量随着发育时期的推进呈现先下降后升高的趋势,16W时显著高于其他周龄。在腹部脂肪细胞和肌内脂肪细胞中,gga-miR-103-3p在分化4 d和分化6 d的表达量均显著高于增殖期;在成肌细胞中,gga-miR-103-3p的表达量随分化时间的延长而升高,分化5 d和分化7 d时的表达量均显著高于增殖期。gga-miR-103-3p靶基因的GO、KEGG富集及蛋白质互作分析结果表明,FBXW7、CDK6、NF1和PIK3R1是gga-miR-103-3p的重要靶基因,其中FBXW7和PIK3R1基因尤为关键。综上,gga-miR-103-3p可能是通过FBXW7、CDK6、NF1和PIK3R1影响肌肉发育、脂肪沉积,其中FBXW7和PIK3R1基因尤为关键。

miR-103a-3P调控PFK-2对结直肠癌细胞增殖及糖酵解的作用机制

目的探究微小RNA(miR)-103a-3P调控6-磷酸果糖激酶(PFK)-2对结直肠癌细胞增殖及糖酵解的作用机制研究。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测正常结肠上皮细胞及4种结直肠癌细胞系中miR-103a-3p、PFK-2表达水平,将阴性对照、miR-103a-3P、PFK-2类似物转染至结直肠癌细胞中,EdU法检测细胞增殖,葡萄糖检测试剂盒和乳酸检测试剂盒检测糖酵解相关指标,双荧光素酶报告实验证实miR-103a-3P和PFK-2的相互作用。结果结直肠癌细胞系中的miR-103a-3P、PFK-2 mRNA表达量显著高于正常结直肠癌上皮细胞系NCM460(P<0.05),其中HCT116的miR-103a-3P、PFK-2 mRNA升高最大(P<0.05),选其备用。与CC组相比,MN组及PN组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量无统计学差异(P>0.05),MI组、PI组、MP组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05)。与MN组相比,MM组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显升高(P<0.05)。与MM组相比,MI组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05)。与PN组相比,PM组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显升高(P<0.05)。与PM组相比,PI组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05);MI组与PI组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量无统计学差异(P>0.05)。与PI组相比,MP组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告结果显示,转染miR-103a-3P后可显著促进PFK-2-3′-UTR-WT的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变基因无显著影响(P>0.05),且PFK-2与miR-103a-3P呈正相关。结论抑制miR-103a-3P表达可降低结直肠癌细胞增殖,并有效改善糖酵解,其作用机制可能与抑制PFK-2有关。

血清microRNA-155、microRNA-21、趋化素、瘦素与糖尿病肥胖患者胰岛素抵抗的相关性

目的 探讨糖尿病肥胖患者血清microRNA-155(miR-155)、microRNA-21(miR-21)、趋化素、瘦素水平与胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法 选取2022年1月—2023年4月山东中医药大学第二附属医院收治的138例2型糖尿病(T2DM)患者为研究对象,其中肥胖患者73例(肥胖组),非肥胖患者65例(非肥胖组)。肥胖组中有IR 45例(IR组),无IR 28例(非IR组)。收集患者一般资料,包括性别、体质量指数(BMI)、年龄、颈围(NC)、腰围(WC)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、空腹胰岛素(FINS)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、miR-155、miR-21、趋化素、瘦素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平;通过多因素逐步Logistic回归模型分析T2DM肥胖患者发生IR的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析miR-155、miR-21、趋化素、瘦素诊断T2DM肥胖患者IR的效能;Pearson法分析miR-155、miR-21、趋化素、瘦素与HOMA-IR的相关性。结果 肥胖组miR-155相对表达量低于非肥胖组(P <0.05),miR-21、趋化素、瘦素、HOMA-IR高于非肥胖组(P <0.05)。IR组miR-155相对表达量低于非IR组(P <0.05),NC、WC、miR-21、趋化素、瘦素水平高于非IR组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:NC [O^R=1.416(95%CI:1.038,1.932)]、WC [O^R=1.227(95%CI:1.049,1.435)]、miR-155 [O^R=1.763(95%CI:1.205,2.579)]、miR-21[O^R=1.932(95%CI:1.356,2.753)]、趋化素[O^R=2.074(95%CI:1.492,2.883)]、瘦素[O^R=1.628(95%CI:1.246,2.127)]是T2DM肥胖患者发生IR的危险因素(P <0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-155、miR-21、趋化素、瘦素诊断T2DM肥胖患者IR的曲线下面积分别为0.865、0.909、0.874和0.871;敏感性为77.8%(95%CI:0.614,0.825)、86.7%(95%CI:0.792,0.917)、95.6%(95%CI:0.713,0.965)和80.0%(95%CI:0.692,0.917);特异性为85.7%(95%CI:0.647,0.903)、82.1%(95%CI:0.732,0.914)、75.0%(95%CI:0.675,0.928)和89.3%(95%CI:0.656,0.944)。miR-155与HOMA-IR呈负相关(r=-0.573,P=0.000),miR-21、趋化素、瘦素与HOMA-IR均呈正相关(r=0.531、0.558和0.568,均P=0.000)。结论 T2DM肥胖患者中IR较多,且miR-155、miR-21、趋化素、瘦素是T2DM肥胖患者发生IR的危险因素。

清肾颗粒对非透析慢性肾脏病湿热证患者血清microRNA-21、Wnt4及β-catenin的影响

目的观察清肾颗粒对非透析慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)湿热证患者血microRNA-21、Wnt4及β-catenin的影响,探讨其保护肾功能、改善临床症状的作用机制。方法选取66例符合纳入标准的CKD湿热证患者,最终完成64例,对照组和观察组各32例。对照组采用CKD常规基础治疗,观察组在对照组治疗基础上加用清肾颗粒口服,疗程均为12周。观察和比较两组患者治疗前后中医症状积分及证候疗效,肾功能指标[血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)、血清肌酐(serum creatinine,SCr)],微炎症、营养指标[超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)、白蛋白(albumin,Alb)、前白蛋白(prealbumin,PAB)],血清microRNA-21、Wnt4及β-catenin水平。结果两组患者治疗后中医症状积分较治疗前均显著降低(P<0.05),且观察组降低程度显著大于对照组(P<0.05);两组患者临床疗效比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组BUN、SCr水平,eGFR较治疗前显著改善(P<0.05),且改善程度显著优于对照组(P<0.05);与治疗前比较,两组患者治疗后血清hs-CRP水平均显著降低(P<0.05),Alb、PAB水平均显著升高(P<0.05),且观察组血清hs-CRP、Alb、PAB水平改善程度优于对照组(P<0.05);治疗前两组患者血清microRNA-21、Wnt4、β-catenin水平均显著高于正常组(P<0.05),观察组患者治疗后血清microRNA-21、Wnt4、β-catenin水平均显著降低(P<0.05),且降低程度显著大于对照组(P<0.05)。结论清肾颗粒能够改善CKD湿热证患者肾功能及微炎症、营养不良状态,减轻临床症状,其机制可能与降低microRNA-21表达水平,靶向抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

血管内超声参数联合microRNA-206评估非ST段抬高型急性心肌梗死患者病变严重程度及预后的价值

目的探讨血管内超声(IVUS)参数联合microRNA-206(miR-206)评估非ST段抬高型急性心肌梗死(NSTEAMI)患者病变严重程度及预后的价值。方法选取2019年3月-2021年4月河北北方学院附属第一医院收治的105例NSTEAMI患者,所有患者行经皮冠状动脉介入术(PCI),根据病变严重程度将患者分为单支病变组(55例)、双支病变组(32例)、多支病变组(18例)。对比不同病变程度患者IVUS参数、血清miR-206,分析IVUS参数、血清miR-206与NSTEAMI患者病变严重程度的相关性。随访2年,根据是否发生MACE分为发生组与非发生组。对比发生组与非发生组的临床资料,采用多因素逐步Logistic回归模型分析NSTEAMI患者发生主要不良心脏事件(MACE)的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评估IVUS参数、血清miR-206预测NSTEAMI患者发生MACE的效能。结果多支病变组斑块负荷、斑块面积、重构指数、偏心指数、血清miR-206相对表达量均高于单支、双支组(P<0.05),且双支病变组均高于单支病变组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血管外弹力膜面积与NSTEAMI患者病变严重程度无相关性(r=0.271,P=0.325);斑块负荷、斑块面积、重构指数、偏心指数、血清miR-206与NSTEAMI患者病变严重程度呈正相关(r=0.416、0.382、0.423、0.507和0.394,均P=0.000)。随访2年,失访2例,剩余103例患者中32例(31.07%)发生MACE,71例(68.93%)未发生MACE。发生组多支病变、血运未重建占比、斑块负荷、斑块面积、重构指数、偏心指数、血清miR-206相对表达量均高于非发生组(P<0.05),淋巴细胞计数、血红蛋白水平均低于非发生组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:多支病变[OR=3.466(95%CI:1.523,7.884)]、血运未重建[OR=2.776(95%CI:1.220,6.315)]、斑块负荷[OR=3.155(95%CI:1.387,7.177)]、重构指数[OR=3.842(95%CI:1.689,8.740)]、偏心指数[OR=4.166(95%CI:1.831,9.477)]、血清miR-206[OR=4.500(95%CI:1.978,10.236)]为NSTEAMI患者发生MACE的危险因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,斑块负荷、重构指数、偏心指数、血清miR-206四者联合预测NSTEAMI患者发生MACE的敏感性为88.52%(95%CI:0.674,0.957),特异性为92.86%(95%CI:0.713,0.968),曲线下面积为0.900(95%CI:0.812,0.953)。结论IVUS参数(斑块负荷、重构指数、偏心指数)、血清miR-206在评估NSTEAMI患者病变严重程度与预后中具有重要价值,且四者联合具有更高的预测价值。

早发型子痫前期患者血清microRNA-26b表达及其与胎盘早剥发生的关系

目的分析早发型子痫前期患者血清microRNA-26b(miR-26b)表达及其与胎盘早剥发生的关系。方法选取2019年8月至2022年8月荆州市中心医院收治的102例早发型子痫前期患者作为研究对象。检测所有患者miR-26b相对表达量,随访至患者分娩,根据胎盘早剥发生情况分成胎盘早剥组与非胎盘早剥组,分析早发型子痫前期患者血清miR-26b表达及其与胎盘早剥发生的关系。结果随访至产妇分娩,102例早发型子痫前期患者胎盘早剥发生率为17.65%(18/102)。胎盘早剥组血清miR-26b相对表达量高于非胎盘早剥组(P<0.05)。根据确诊疾病时血清miR-26b四分位数将患者分为Q1组(n=25)、Q2组(n=27)、Q3组(n=24)及Q4组(n=26),Q4组胎盘早剥发生率高于Q1组、Q2组及Q3组(P<0.05)。经点二列相关性分析检验,血清miR-26b与早发型子痫前期患者胎盘早剥发生率呈正相关(r=0.458,P<0.05)。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,血清miR-26b对早发型子痫前期患者胎盘早剥具有中等预测价值,且当血清miR-26b相对表达量为2.465时,可获得最佳预测价值。结论早发型子痫前期患者血清miR-26b与胎盘早剥发生有关,检测血清miR-26b相对表达量能为预测胎盘早剥发生提供重要价值。

化瘀杀胚汤联合甲氨蝶呤治疗异位妊娠的疗效及对TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p表达量的影响

【目的】探讨化瘀杀胚汤(由丹参、赤芍、桃仁、蜈蚣、紫草、天花粉、三七等中药组成)联合甲氨蝶呤治疗异位妊娠疗效及对患者TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p表达量的影响。【方法】将104例异位妊娠患者随机分为观察组和对照组,每组各52例。对照组给予甲氨蝶呤联合米非司酮治疗,观察组在对照组的基础上加用化瘀杀胚汤治疗,连续用药3 d并随访观察1个月。比较2组患者保守治疗成功率、血β人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)水平恢复正常时间以及异位妊娠包块吸收时间、治疗后输卵管完全通畅率与不通畅率,观察2组保守治疗成功患者治疗前后血清TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p相对表达量的变化情况。【结果】(1)观察组的保守治疗成功率为94.23%(49/52),明显高于对照组的71.15%(37/52),差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组比较,观察组的血β-HCG恢复正常时间及包块吸收时间均明显缩短,差异均有统计学意义(P<0.01)。(3)观察组治疗后的输卵管完全通畅率为55.77%(29/52),明显高于对照组的21.15%(11/52);不通畅率为19.23%(10/52),明显低于对照组的59.62%(31/52),差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(4)与治疗前比较,2组保守治疗成功患者治疗结束1个月后的TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p相对表达量均明显降低(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,观察组治疗结束1个月后的TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p相对表达量均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。(5)2组患者的不良反应均以胃肠道不适为主,观察组的不良反应发生率为25.00%(13/52),明显低于对照组的46.15%(24/52),组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】化瘀杀胚汤联合甲氨蝶呤治疗异位妊娠,可有效提高药物保守治疗的成功率,有助于包块的吸收以及输卵管通畅,能有效降低患者的TGF-β/Smad2/3蛋白水平及microRNA-30d-5p的相对表达量,且药物安全性较高。

血清microRNA-103、Dicer1在上皮性卵巢癌中的表达及意义

文章旨在探讨血清micro RNA-103、Dicer1在上皮性卵巢癌中的表达及意义。收集2013年4月至2015年12月于该院接受治疗58例上皮性卵巢癌患者设为研究组,并同期收集36例健康体检者设为对照组,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)检测血清micro RNA-103(mi R-103)和Dicer1水平。分析两种生物标志物在上皮性卵巢癌中的表达,及其与临床病理特征的相关性。与对照组相比,研究组患者的血清mi R-103水平明显更高(P<0.05),血清Dicer1水平明显更低(P<0.05);上皮性卵巢癌患者血清中mi R-103高表达41例,低表达17例,Ⅲ、Ⅳ期患者的血清mi R-103水平更高(P<0.05);淋巴结转移阳性患者的血清mi R-103水平更高(P<0.05);上皮性卵巢癌患者血清中Dicer1高表达20例,低表达38例,Ⅰ、Ⅱ期患者的血清Dicer1水平更高(P<0.05);淋巴结转移阴性患者的血清Dicer1水平更高(P<0.05)。上皮性卵巢癌患者血清中mi RNA-103水平显著升高,Dicer1水平均显著下降,且mi R-103、Dicer的高表达均分别与上皮性卵巢癌患者的分期、淋巴结转移密切相关。

山东省103省道泗水段路面病害分析及养护对策研究

在长期的重交通荷载和大交通流量作用下,导致路面过早出现破损,因此,需要根据不通的损坏状况,准确选择合理的养护方案进行养护维修。文章基于山东省S103省道路面养护大中修工程,对S103省道泗水段的路面损坏状况进行了调查,分析了沥青路面病害的损坏类型,对路面的损坏状况进行评价,并针对不同的损坏类型,提出了相应的养护维修措施和维修施工方案,指出只有从路面技术状况评价、路面养护维修、路面施工等方面进行综合考虑,才能预防和减少路面病害发生,进一步提高路面技术状况和通行质量。