免疫性血小板减少症患儿 T淋巴细胞亚群、甲状腺自身抗体、微小RNA-106b-5p 和微小RNA-181a-5p表达水平检测及临床意义

目的:分析免疫性血小板减少症(ITP)患儿T淋巴细胞亚群、甲状腺自身抗体、微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)和微小RNA-181a-5p(miR-181a-5p)表达水平及临床意义。方法:以158例ITP患儿为ITP组,依据临床分型不同分为慢性ITP组(34例)、持续性ITP组(60例)和新诊断ITP组(64例)。另选取同期健康儿童102例为对照组。所有患儿均给予静脉滴注人免疫球蛋白及口服醋酸泼尼松片等常规治疗,均治疗5 d。比较ITP组与对照组全血T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+))细胞及血清甲状腺自身抗体[甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)]、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。比较慢性ITP组、持续性ITP组和新诊断ITP组患儿全血T淋巴细胞亚群及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。比较ITP患儿治疗前、治疗5 d后全血T淋巴细胞亚群及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平。结果:与对照组比较,ITP组全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平更低,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平更高(均P<0.05)。慢性ITP组全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平低于持续性ITP组和新诊断ITP组,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平高于持续性ITP组和新诊断ITP组(均P<0.05)。与治疗前比较,治疗5 d后ITP患儿全血CD3^(+)、CD4^(+)细胞及血清miR-181a-5p水平升高,全血CD8^(+)细胞及血清TGAb、TPOAb、miR-106b-5p水平降低(均P<0.05)。结论:ITP患儿存在T淋巴细胞亚群失衡、甲状腺自身抗体和miR-106b-5p高表达以及miR-181a-5p低表达情况。治疗期间积极检测患儿全血T淋巴细胞亚群及血清甲状腺自身抗体、miR-106b-5p、miR-181a-5p水平,有助于患儿的疗效评估。

彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的诊断价值

目的 探讨彩色多普勒超声检查联合血清微小RNA(miRNA)-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的早期诊断价值以及与卵巢癌周围血管侵袭的相关性。方法 回顾性选取2019年5月至2021年12月沧州市中心医院收治的102例卵巢肿瘤患者为研究对象,所有患者均行彩色多普勒超声检查,采用实时定量聚合酶链反应测定血清中miR-122-5p和miR-106b的表达水平。以病理诊断结果作为金标准,将研究对象分为卵巢癌组(n=51)和良性卵巢肿瘤组(n=51);卵巢癌组又分为侵袭组(n=32)和非侵袭组(n=19)。比较卵巢癌组与良性卵巢肿瘤组的临床资料(年龄、体重指数、生育和绝经)、彩色多普勒超声图像特征(实性包块、伴腹水、乳头状结构≥4、肿瘤最大直径>10 cm)、彩色多普勒超声血流参数[搏动指数(PI)和血流阻力指数(RI)]、血清miR-122-5p、miR-106b水平。应用多因素Logistic回归模型探究相关变量对卵巢癌的独立预测作用。应用受试者工作特征(ROC)曲线评估彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的诊断价值。并比较侵袭组与非侵袭组彩色多普勒超声血流参数及血清miR-122-5p、miR-106b水平,采用Pearson相关性分析对彩色多普勒超声血流参数、miR-122-5p、miR-106b与卵巢癌周围血管侵袭的相关性进行分析。结果 卵巢癌组实性包块、伴腹水、乳头状结构≥4以及肿瘤最大直径>10 cm所占比例分别为80.39%、76.47%、74.51%、78.43%,均高于良性卵巢肿瘤组(9.80%、11.76%、29.41%、45.10%),PI、RI、血清miR-122-5p表达水平分别为0.94±0.27、0.48±0.11、1.01±0.27,均低于良性卵巢肿瘤组(1.47±0.32、0.71±0.19、1.42±0.30),miR-106b表达水平为4.57±1.13,高于良性卵巢肿瘤组(2.86±0.65),差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归模型分析显示,PI、RI、miR-122-5p、miR-106b是卵巢癌的独立预测因子,OR值分别为1.080、1.116、1.689、1.301(P<0.05)。ROC曲线分析显示,PI、RI、miR-122-5p和miR-106b以及联合诊断卵巢癌的曲线下面积(AUC)分别为0.869、0.874、0.859、0.898、0.969,其联合诊断的价值高于单独应用。侵袭组PI、RI和血清miR-122-5p表达水平均低于非侵袭组,血清miR-106b表达水平高于非侵袭组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,彩色多普勒超声血流参数PI、RI及血清miR-122-5p水平与卵巢癌周围血管侵袭呈负相关(r=-0.743、-0.696、-0.822,P<0.05),血清miR-106b水平与卵巢癌周围血管侵袭呈正相关(r=0.863,P<0.05)。结论 彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平可以提高卵巢癌的早期诊断价值,并且可根据这些指标评估卵巢癌周围血管侵袭程度,值得应用推广。

支气管哮喘患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平与气道炎症、肺功能的关系

目的:分析支气管哮喘患儿外周血microRNA-30a(miR-30a)、microRNA-15b-5p(miR-15b-5p)水平与气道炎症、肺功能的关系。方法:选择2020年3月—2022年3月我院收治的123例支气管哮喘患儿作为研究组,另外选择同期在我院体检的100例健康儿童作为对照组。入院后均检测外周血miR-30a、miR-15b-5p水平,利用肺功能仪检测第1秒用力呼气量(FEV_(1))、用力肺活量(FVC)及FEV_(1)/FVC等肺功能指标水平,同时检测气道炎症指标水平。比较各组血清miR-30a、miR-15b-5p水平及肺功能、气道炎症指标,采用Pearson相关分析探讨血清miR-30a、miR-15b-5p水平与气道炎症、肺功能的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)评估外周血miR-30a、miR-15b-5p水平对支气管哮喘发生的预测价值。结果:研究组患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平均高于对照组(P<0.05)。研究组患儿诱导痰中的细胞总数、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、淋巴细胞的数目均高于对照组,巨噬细胞的数目低于对照组(P<0.05)。研究组患儿FEV_(1)、FVC、FEV_(1)/FVC肺功能指标均低于对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,支气管哮喘患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平均与肺功能指标(FEV_(1)、FVC、FEV_(1)/FVC)及巨噬细胞呈负相关(P<0.05),与细胞总数、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、淋巴细胞数目呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,外周血miR-30a、miR-15b-5p预测小儿支气管哮喘发生的曲线下面积为0.841(95%CI:0.792~0.890)、0.862(95%CI:0.817~0.917),二者联合预测小儿支气管哮喘发生的曲线下面积为0.911(95%CI:0.874~0.958)。结论:支气管哮喘患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平均呈高表达,且二者水平变化与气道炎症、肺功能密切相关,另外可作为预测支气管哮喘患儿发病的有效指标。

肺动脉平滑肌细胞外泌体上调miR-106b-5p增强肺动脉内皮细胞Warburg效应促进动脉型肺动脉高压的分子机制

目的探讨肺动脉平滑肌细胞与内皮细胞的胞间通讯在促进动脉型肺动脉高压(PAH)疾病进展中的作用机制。方法采集并分离健康个体(HC)和PAH患者外周血浆中的外泌体,并对其内的miRNAs进行微阵列测定和差异表达分析。体外缺氧诱导处理原代人肺动脉平滑肌细胞(h PASMCs)和原代肺动脉内皮细胞(hPAECs),分为常氧组和缺氧诱导组。生物信息学分析miR-106b-5p和USP32的序列互作位点。腺病毒转染过表达/敲低h PASMCs内miR-106b-5p,过表达/敲低hPAECs内PKM2。双荧光素酶报告基因分析确证二者的负作用方式。Western blot法测定胞内USP32、PKM2、GLUT1、HK2、LDHA蛋白质的表达水平。结果微阵列测定和差异表达分析结果显示,与HC组相比,PAH组外周血浆中外泌体内miR-106b-5p的水平明显上调。在体外,与常氧组相比,miR-106b-5p的水平在缺氧诱导组hPASMCs上清液外泌体内明显上调,而在h PAECs细胞上清液外泌体中则无此变化。miR-106b-5p负调控USP32的表达。与miR-NC组/Inhibitor-NC组相比,在h PASMCs中miR-106b-5pmimic/miR-106b-5pinhibitor处理后,胞内PKM2、GLUT1、HK2和LDHA蛋白质表达明显增强/抑制。与shRNA-NT组/vector组相比,在hPAECs中PKM2 shRNA/PKM2-OE处理后,胞内PKM2、GLUT1、HK2和LDHA蛋白质表达明显抑制/增强(P<0.05)。结论hPASMCs通过外泌体上调miR-106b-5p增强hPAECs胞内Warburg效应,在动脉型肺动脉高压中具有潜在的促进疾病进展的作用。

LncRNA SNHG16通过miR-106b-5p/PHF1轴调节结直肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因16(SNHG16)通过miR-106b-5p/聚梳组蛋白家族指蛋白1(PHF1)轴对结直肠癌(CRC)细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CRC组织、相邻正常组织及体外培养的CRC细胞系(LoVo、Caco-2、HCT116和SW480)和正常人结肠上皮细胞(CCD 841 CON)中SNHG16、miR-106b-5p、PHF1表达。将SW480细胞随机分组为对照组、si-NC组、si-SNHG16组、si-SNHG16+inhibitor-NC组、si-SNHG16+miR-106b-5p inhibitor组、si-PHF1组、miR-NC组、miR-106b-5p组、miR-106b-5p+pcDNA组、miR-106b-5p+pcDNA-PHF1组。采用qRT-PCR检测各组SW480细胞中SNHG16、miR-106b-5p和PHF1的表达水平。MTT法、流式细胞术和Transwell法分别检测SW480细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验验证SNHG16、miR-106b-5p和PHF1之间的相互作用。Western blot检测PHF1的蛋白水平。结果SNHG16和PHF1在CRC组织和细胞中高表达,miR-106b-5p低表达(P<0.05)。选择SNHG16表达最高的SW480细胞进行转染实验。SNHG16的下调降低了SW480细胞的增殖、迁移、侵袭,促进了SW480细胞的凋亡(P<0.05)。miR-106b-5p可与SNHG16相互作用,其抑制剂恢复沉默SNHG16对SW480细胞进展的抑制作用(P<0.05)。PHF1是miR-106b-5p的靶点,沉默PHF1可抑制SW480细胞的进展(P<0.05)。PHF1过表达恢复了miR-106b-5p对SW480细胞进展的抑制作用(P<0.05)。SNHG16通过下调miR-106b-5p促进SW480细胞中PHF1的表达(P<0.05)。结论LncRNA SNHG16通过靶向调控miR-106b-5p/PHF1轴促进CRC细胞的增殖、迁移和侵袭并抑制凋亡。

白皮杉醇调控miR-106b-5p/RUNX3轴对宫颈癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探究白皮杉醇(PIC)调控微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)/RUNT相关转录因子3(RUNX3)轴对宫颈癌(CC)细胞迁移及侵袭的影响。方法使用不同浓度PIC(0、20、40、80和160μmol/L)培养液处理人CC Hela细胞,通过CCK-8法检测PIC对细胞增殖活力的影响,以确定PIC最佳使用浓度。将Hela细胞分为Control组、PIC组、PIC+NC mimics组、PIC+miR-106b-5p mimics组、NC inhibitor组、miR-106b-5p inhibitor组、miR-106b-5p inhibitor+si-RNA组及miR-106b-5p inhibitor+si-RUNX3组。实时荧光定量PCR检测各组Hela细胞miR-106b-5p表达水平;Transwell法检测各组Hela细胞迁移及侵袭能力;Western blot法检测各组Hela细胞中RUNX3、基质金属蛋白酶(MMP)2和MMP9蛋白表达水平;双萤光素酶报告基因实验检测miR-106b-5p与RUNX3靶向关系。结果Hela细胞增殖活力随着PIC处理浓度的增高而呈现降低趋势(P<0.05),其中80μmol/L PIC对Hela细胞的抑制作用接近半数抑制浓度(IC50),故选择80μmol/L为后续研究的PIC浓度。与Control组相比,PIC组miR-106b-5p、MMP2和MMP9表达水平均降低,迁移和侵袭细胞数量减少,RUNX3表达水平增加(P<0.05);与PIC+NC mimics组相比,PIC+miR-106b-5p mimics组miR-106b-5p、MMP2和MMP9表达水平增加,迁移和侵袭细胞数量增多,RUNX3表达水平降低(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验证实RUNX3为miR-106b-5p的靶基因。与NC inhibitor组相比,miR-106b-5p inhibitor组RUNX3表达水平增加,miR-106b-5p、MMP2与MMP9表达水平降低,迁移和侵袭细胞数量减少(P<0.05);与miR-106b-5p inhibitor+si-RNA组相比,miR-106b-5p inhibitor+si-RUNX3组RUNX3表达水平降低,miR-106b-5p、MMP2和MMP9表达水平增加,迁移和侵袭细胞数量增多(P<0.05)。结论PIC通过抑制miR-106b-5p表达、促进RUNX3表达来抑制CC细胞迁移及侵袭。

长链非编码RNA alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1靶向微小RNA-106b-5p调控氧化型低密度脂蛋白诱导的人脑微血管内皮细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1(A2M-AS1)靶向微小RNA(miR)-106b-5p对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的影响。方法用ox-LDL诱导人脑微血管内皮细胞设为ox-LDL组,正常培养细胞为对照(Ctrl)组;A2M-AS1过表达(pcDNA-A2M-AS1组)、空载体(pcDNA组)、miR-106b-5p抑制剂(anti-miR-106b-5p组)、阴性对照(anti-miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与对照mimic NC(miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与miR-106b-5p模拟物(miR-106b-5p mimics组)转染细胞后加ox-LDL处理,n=9;Real-time PCR检测A2M-AS1与miR-106b-5p表达;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测A2M-AS1与miR-106b-5p靶向关系;Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达量。结果与Ctrl组比较,ox-LDL组A2M-AS1表达水平、SOD和CAT活性、Bcl-2蛋白水平降低,miR-106b-5p表达水平、MDA水平、凋亡率、Bax蛋白水平升高(P<0.05);过表达A2M-AS1或干扰miR-106b-5p降低ox-LDL诱导细胞后MDA水平、凋亡率与Bax蛋白水平,升高SOD、CAT活性和Bcl-2蛋白水平(P<0.05);A2M-AS1靶向miR-106b-5p;上调miR-106b-5p逆转过表达lncRNA A2M-AS1对ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的作用。结论A2M-AS1通过靶向miR-106b-5p减轻ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤。

大疱性类天疱疮患者血清及疱液外泌体microRNA-146b-5p的表达及其临床意义

目的探讨大疱性类天疱疮(BP)患者血清及疱液外泌体microRNA-146b-5p表达的意义。方法选取2019年6月—2021年12月青岛市中医医院收治的79例BP患者作为研究组。另选取同期该院体检的61例健康群众作为对照组。收集两组基本资料、生化指标,采用实时荧光定量聚合酶链反应测定microRNA-146b-5p表达情况。采用多因素Logistic逐步回归分析影响BP诊断的因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清外泌体microRNA-146b-5p对早期BP的诊断效能,采用Pearson分析BP患者血清及疱液外泌体microRNA-146b-5p表达与病情严重程度的相关性。结果两组性别、年龄、体质量指数≥25 kg/m^(2)、合并高血压、合并糖尿病、合并高脂血症、合并冠心病、吸烟史、饮酒史,血肌酐、血尿酸、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、血红蛋白、白蛋白、白细胞计数、血小板计数、降钙素原、肿瘤坏死因子α、CD14^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞、白细胞介素6、白细胞介素4、白细胞介素21、血清25-羟维生素D比较,差异无统计学意义(P>0.05)。研究组C反应蛋白、OX40、OX40L、巨噬细胞游走抑制因子、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白、血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量均高于对照组,研究组CD4^(+)T淋巴细胞水平低于对照组。多因素Logistic逐步回归分析结果显示:血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量[O^R=5.191(95%CI:2.136,12.617)]、CD4^(+)T淋巴细胞水平[O^R=4.894(95%CI:2.014,11.894)]、ECP[O^R=4.076(95%CI:1.677,9.905)]是BP诊断的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量诊断BP的最佳截断值为1.11,敏感性为73.42%(95%CI:0.621,0.824),特异性为80.33%(95%CI:0.678,0.890),曲线下面积为0.766(95%CI:0.671,0.861)。Pearson相关性分析显示,BP患者疱液外泌体microRNA-146b-5p与BPDAI评分呈正相关(r=0.741,P<0.05),血清microRNA-146b-5p相对表达量与BPDAI评分呈正相关(r=0.736,P<0.05)。结论外泌体microRNA-146b-5p不仅与BP发生有关,也可能与其病情进展有关,且血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量诊断BP发生效能良好。

IL-37调控miR-106b-5p/PTEN抑制肾细胞癌细胞生物学行为

目的:探讨IL-37对肾细胞癌细胞生物学行为的影响和潜在机制。方法:RT-qPCR检测肾细胞癌组织中IL-37mRNA和miR-106b-5p表达。Western blot检测肾细胞癌组织中10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达。将肾细胞癌细胞786-0分为对照组、IL-37(10、50、100 ng/ml)组、anti-miR-NC组、anti-miR-106b-5p组、IL-37+miR-NC组、IL-37+miR-106b-5p组。采用MTT法、平板克隆实验、划痕愈合实验、流式细胞术检测786-0细胞增殖、迁移和凋亡能力。荧光素酶实验检测miR-106b-5p与PTEN的靶向关系。结果:肾细胞癌组织中miR-106b-5p表达量显著升高(P<0.05),IL-37 mRNA和PTEN蛋白表达量显著降低(P<0.05)。与对照组比较,IL-37(10、50、100 ng/ml)组细胞活力、集落形成数、迁移距离、miR-106b-5p表达显著降低(P<0.05),凋亡率、PTEN蛋白表达显著升高(P<0.05)。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-106b-5p组细胞活力、集落形成数、迁移距离显著降低(P<0.05),凋亡率、PTEN蛋白表达显著升高(P<0.05)。与IL-37+miR-NC组比较,IL-37+miR-106b-5p组细胞活力、集落形成数、迁移距离显著升高(P<0.05),凋亡率、PTEN蛋白表达显著降低(P<0.05)。PTEN是miR-106b-5p的靶基因。结论:外源性IL-37可抑制肾细胞癌细胞的增殖和迁移,诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能是通过抑制miR-106b-5p/PTEN途径发挥作用。

微RNA-106b-5p通过靶向α-烯醇化酶调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、炎症的研究

目的观察微RNA-106b-5p、α-烯醇化酶(ENO1)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(MH7A)增殖、炎症的影响,并探究二者之间的联系。方法2018年1月至2021年12月长安医院接诊手术的8例RA病人获得了滑膜组织,4例意外事故引起关节损伤的无RA、骨关节炎史健康病人作为对照。运用RT-qPCR实验检测RA滑膜、正常滑膜及对照组(正常MH7A)、白细胞介素(IL)-1β组细胞(10μg/L IL-1β处理)中miR-106b-5p、ENO1的表达;脂质体法将mimic-NC组(转染mimic)、miR-106b-5p mimic组(转染miR-106b-5p mimic)、inhibitor-NC组(转染inhibitor)、miR-106b-5p inhibitor组(转染miR-106b-5p inhibitor)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-ENO1组(转染pcDNA-ENO1)、si-NC组(转染si-NC)、si-ENO1组(转染si-ENO1)、miR-106b-5p mimic+pcDNA组(共转染miR-106b-5p mimic+pcDNA)、miR-106b-5p mimic+pcDNA-ENO1组(共转染miR-106b-5p mimic+pcDNA-ENO1)、miR-106b-5p inhibitor+si-NC组(共转染miR-106b-5p inhibitor+si-NC)、miR-106b-5p inhibitor+si-ENO1组(共转染miR-106b-5p inhibitor+si-ENO1)转染至MH7A,再IL-1β处理。细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞IL-6、IL-8、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的含量。双萤光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性;蛋白质印迹法实验检测细胞ENO1蛋白。结果与对照组(0.52±0.05、147.32±12.54、0.45±0.03、1.55±0.12)相比,IL-1β组细胞活性(1.13±0.06)、IL-6(433.21±37.84)、IL-8(1.38±0.10)、MMP-3(2.78±0.22)均升高(P<0.05)。与mimic-NC组(1.12±0.06、435.15±39.67、1.39±0.12、2.77±0.25)相比,miR-106b-5p mimic组细胞活性(1.98±0.11)、IL-6(164.12±15.74)、IL-8(0.65±0.05)、MMP-3(1.94±0.17)均降低(P<0.05),且抑制miR-106b-5p具有相反的作用。双萤光素酶报告实验显示,miR-106b-5p靶向负调控ENO1,且二者在RA组织中的表达呈负相关。与pcDNA组(1.14±0.06、434.93±37.89、1.37±0.11、2.79±0.22)相比,pcDNA-ENO1组细胞活性(1.96±0.08)、IL-6(867.83±71.84)、IL-8(2.83±0.23)、MMP-3(4.93±0.34)升高(P<0.05);与si-NC组相比,si-ENO1组细胞活性、IL-6、IL-8、MMP-3降低(P<0.05)。过表达ENO1减弱miR-106b-5p对IL-1β处理细胞增殖、炎性因子的促进作用,敲减ENO1减弱抑制miR-106b-5p对IL-1β处理细胞增殖、炎性因子的抑制作用。结论miR-106b-5p能够抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖和炎症反应,产生这种调控作用的潜在机制与靶向ENO1有关。

lncRNA MALAT1调节miR-106b-5p/TLR4轴对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织炎性损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(lncRNA MALAT1)调节miR-106b-5p/Toll样受体4(TLR4)轴对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织炎性损伤的影响。方法以气管滴注脂多糖溶液并联合烟熏法构建COPD模型大鼠,随机分成5组(每组12只模型大鼠):模型组、lncRNA MALAT1敲低组、miR-106b-5p antagomir组、阴性对照组、lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir组,选12只正常大鼠气管内滴注与造模大鼠等剂量的生理盐水,且不进行烟熏,作对照组,分组干预处理后,检测大鼠肺功能,比较各组用力肺活量(FVC)、呼气峰流值(PEF)、吸气阻力(Ri)、潮气量(VT);实时荧光定量PCR实验检测肺组织lncRNA MALAT1、miR-106b-5p及TLR4 mRNA表达;Giemsa染色对肺泡灌洗液(BALF)中白细胞计数;HE染色观察各组大鼠肺组织炎性损伤,并做Holfbauer评分;酶联免疫吸附测定(ELASA)法测量各组大鼠BALF和血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-10(IL-10)水平;双荧光素酶报告基因实验检测L2细胞中lncRNA MALAT1对miR-106b-5p、miR-106b-5p对TLR4的靶向调节。结果与对照组比较,模型组大鼠肺组织发生炎性损伤,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平降低(P<0.05),Ri、VT、肺组织lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05)。与模型组比较,lncRNA MALAT1敲低组大鼠肺组织肺炎性损伤减轻,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平升高(P<0.05),Ri、VT、肺组织lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平降低(P<0.05);miR-106b-5p antagomir组大鼠肺组织肺炎性损伤加重,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平降低(P<0.05),Ri、VT、肺组织TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05);阴性对照组大鼠各指标无显著差异(P>0.05)。与lncRNA MALAT1敲低组比较,lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir组大鼠肺组织肺炎性损伤加重,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平降低(P<0.05),Ri、VT、肺组织lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05)。L2细胞中lncRNA MALAT1可靶向下调miR-106b-5p,且miR-106b-5p可靶向下调TLR4表达。结论下调lncRNA MALAT1可通过促进miR-106b-5p分泌而降低TLR4表达,进而减少促炎因子产生,增加抗炎因子产生,阻止炎症发生发展,最终减轻COPD大鼠肺组织炎性损伤。

微RNA-30b-5p通过靶向Atg5抑制多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞自噬

目的·探究microRNA-30b-5p(miR-30b-5p)在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠中的表达及miR-30b-5p过表达对卵巢颗粒细胞(granulosa cell,GC)自噬的影响。方法·采用脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)建立PCOS大鼠模型,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)和Western blotting检测正常组和PCOS组大鼠卵巢组织中miR-30b-5p和自噬相关蛋白5同源物(autophagy-associated protein 5 homologue,Atg5)的表达。分离并培养原代PCOS大鼠卵巢GC,分为对照组、miR-NC组、miR-30b-5p过表达组、miR-30b-5p过表达+pcDNA3.1-NC组、miR-30b-5p过表达+pcDNA3.1-Atg5组,另取正常组大鼠卵巢GC为空白组;将miR-30b-5p mimic和pcDNA3.1-Atg5及相应的阴性对照转染到细胞中,转染48 h后,qRT-PCR检测各组细胞中miR-30b-5p和Atg5 mRNA表达,验证转染效果。CCK-8及流式细胞仪分别检测细胞活力和凋亡率;免疫荧光染色检测各组细胞微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)阳性表达;Western blotting检测自噬相关蛋白Atg5、p62、Beclin-1和LC3蛋白表达。结果·PCOS组大鼠卵巢组织中miR-30b-5p表达水平显著低于正常组,Atg5 mRNA和蛋白水平显著高于正常组(均P=0.000)。转染后,与空白组相比,对照组卵巢GC中miR-30b-5p水平、细胞凋亡率、p62蛋白水平显著降低,Atg5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、LC3阳性细胞百分比、Beclin-1蛋白水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高(均P=0.000);与对照组相比,miR-30b-5p过表达组卵巢GC中miR-30b-5p水平、细胞凋亡率、p62蛋白水平显著升高,Atg5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、LC3阳性细胞百分比、Beclin-1蛋白水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著降低(均P=0.000)。上调Atg5可明显减弱miR-30b-5p过表达对卵巢GC增殖和自噬的抑制作用(均P=0.000)。结论·MiR-30b-5p在PCOS中呈低表达;过表达miR-30b-5p可抑制PCOS大鼠卵巢GC增殖和自噬,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Atg5表达有关。

子宫内膜异位症患者内膜中miR-20b-5p、miR-106a-5p的表达及机制探讨

目的检测miR-20b-5p、miR-106a-5p、PTEN mRNA、CCNE1 mRNA在正常子宫内膜(N)、子宫内膜异位症(endometriosis,EM)患者在位内膜(eutopic endometrial,Eu)、子宫内膜异位症患者异位内膜(ectopic endometrial,Ec)组织中的表达,并探讨miR-20b-5p、miR-106a-5p对子宫内膜异位症细胞增殖与凋亡的影响。方法选择2017年5月-2018年5月在本院妇产科行腹腔镜手术及术后病理检查确诊的EM患者30例,年龄(32.4±6.2)岁,对照组选择同期行腹腔镜子宫肌瘤剔除术的患者30例,年龄(36.35±5.89)岁。采用qRT-PCR法检测Eu(n=30)、Ec(n=37)以及N(n=30)组织中miR-20b-5p、miR-106a-5p、PTEN mRNA、CCNE1 mRNA的表达,并用Pearson相关检验分析miR-20b-5p、miR-106a-5p与PTEN mRNA、CCNE1 mRNA的相关性。结果 Ec与Eu相比,miR-20b-5p、miR-106a-5p表达下降(P <0.001),PTEN mRNA的表达上升(P <0.001),CCNE1 mRNA的表达下降(P=0.005);Eu与N相比,miR-20b-5p表达上升(P=0.038),PTEN表达下降(P=0.049),miR-106a-5p及CCNE1的表达未见明显差异(P> 0.05);miR-20b-5p与PTEN mRNA在Eu及Ec中的表达呈负相关(r=-0.63,P <0.001;r=-0.42,P=0.01);mi R-106a-5p与PTEN mRNA的表达在Eu(r=-0.14,P=0.465)及Ec(r=-0.25,P=0.142)中不存在相关性。结论 miR-20b-5p可能通过PTEN上调细胞增殖,促进EM的发病。

miRNA-106b-5p表达水平与急性ST段抬高型心肌梗死患者心室重构的关系

目的分析急性ST段抬高型心肌梗死(ST segment elevation myocardial infarction,STEMI)患者外周血微小核糖核酸-106b-5p(microRNA-106b-5p,miR-106b-5p)水平与梗死后出现心室重构(ventricular remodeling,VR)和发生主要心脏不良事件(major adverse cardiac events,MACE)的相关性。方法选取2018年1月~2020年2月我院就诊的STEMI患者90例作为STEMI组,同期临床及冠脉造影证实为稳定型冠心病(stable coronary heart disease,SCAD)90例作为对照组。使用荧光实时定量法(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测两组入院时外周血miR-106b-5p水平,根据STEMI组术后及出院6个月的心脏彩超结果,判断STEMI组VR的情况。以STEMI最佳诊断阈值为分界,分析STEMI组不同miR-106b-5p水平与VR的关系。采用Kaplan-Meier生存曲线分析STEMI组不同miR-106b-5p水平患者出院后12个月的MACE发生情况。结果低表达组较高表达组CK.CK-MB和CTnI显著增大(P<0.01),CK、CK-MB和CTnI与miRNA-0.6-5P呈负相关关系(均P<0.05)。高表达组(miR-106b-5p≥0.41,58例)出院后6个月出现VR 1例(2%),显著低于低表达组(miR-106b-5p<0.41,32例)5例(16%),(P<0.05);高表达组随访12月2例(3%)发生MACE(心肌梗死1例和卒中1例),显著低于低表达组5例(16%)(心肌梗死3例和卒中2例)(Log-rankχ^2=4.725,P<0.05)。出院后6个月外周血miRNA-106-5p水平与左室舒张末内径(LVEDd)呈负相关(r=-0.437,P<0.05),与左室射血分数(LVEF)呈正相关(r=0.414,P<0.05)。结论外周血miR-106b-5p水平与心梗后VR及MACE存在相关性。

血清微小RNA-106b-5p、RNA-30a-5p水平与结直肠癌患者预后的关系及其诊断价值

目的分析结直肠癌患者血清微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)、miR-30a-5p表达水平与结直肠癌患者预后的关系及其诊断结直肠癌的临床价值。方法选取2013年1月—2014年12月安徽省安庆市第一人民医院肿瘤科手术治疗的结直肠癌患者(结直肠癌组)、门诊确诊的结直肠腺瘤患者(结直肠腺瘤组)和同期健康体检者(健康对照组)作为研究对象,各90例,检测其血清miR-106b-5p、miR-30a-5p表达水平,随访结直肠癌患者的预后情况,并以受试者工作特征曲线(ROC)评估血清miR-106b-5p、miR-30a-5p诊断结直肠癌的价值。结果结直肠癌组血清miR-106b-5p表达水平高于结直肠腺瘤组及健康对照组,血清miR-30a-5p表达水平低于结直肠腺瘤组及健康对照组(F=295.073、374.052,P均=0.000);结直肠癌患者血清miR-106b-5p表达在不同肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移及临床分期比较差异有统计学意义(t/P=3.382/0.001、3.130/0.002、3.069/0.003、4.638/0.000),而血清miR-30a-5p表达在不同肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期比较差异有统计学意义(t/P=3.626/0.000、2.605/0.011、3.265/0.002、3.113/0.002);血清miR-106b-5p高表达亚组、miR-30a-5p低表达亚组患者的术后5年总生存率及中位生存时间均分别低于血清miR-106b-5p低表达亚组、miR-30a-5p高表达亚组(χ^2=11.449,12.613,P均<0.01);ROC分析结果表明,血清miR-106b-5p、miR-30a-5p诊断结直肠癌的AUC为0.785、0.692,敏感度为0.824、0.676,特异度为0.794、0.739,约登指数为0.618、0.415。结论血清miR-106b-5p在结直肠癌患者中升高,血清miR-30a-5p在结直肠癌患者中降低,二者均与不良预后有关,具有作为结直肠癌预后预测和诊断生物标志物的潜能。

MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p在大肠癌中的表达及意义

目的研究MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p在大肠癌中的表达和临床意义。方法选取大肠癌组织和癌旁正常组织50例,应用qPCR法,检测MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p表达水平;应用免疫组化法,检测PI3K表达水平。结果 MicroRNA-21-5p、MicroRNA-18b-5p和PI3K在大肠癌组织中的的表达量显著高于癌旁正常组织(P<0.05),且MicroRNA-21-5p、MicroRNA-18b-5p均和PI3K具有明显正相关性(P<0.05)。结论 MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p通过PI3K/AKT信号通路在大肠癌的发生、发展过程中起重要作用。

新肾癌标志物microRNA-130b-5p在肾细胞癌中的表达及临床意义

目的本研究通过检测比较microRNA-130b-5p(miR-130b-5p)在肾癌及癌旁正常组织之间以及肾癌细胞系和正常肾细胞系之间的表达水平,并分析其表达水平与临床病理资料之间的关系,为进一步研究miR-130b-5p在肾癌中深入的功能和机制奠定基础。方法采用qPCR方法检测miR-130b-5p在42对肾癌组织和癌旁正常组织中表达量的差异,并运用秩和检验方法分析肾癌组织中miR-130b-5p表达量与患者临床病理特征之间的相关性。培养肾癌细胞系(786-O和ACHN)和正常肾上皮细胞系(293T)并采用qPCR方法检测细胞中miR-130b-5p的表达量。结果miR-130b-5p在肾癌组织中的表达量明显高于癌旁正常组织(P<0.01),且肾癌组织中miR-130b-5p表达量与患者AJCC临床分期呈正相关(P=0.041),与其他临床病理资料如年龄、性别、T分期、组织类型和Fuhrman分级未发现明显相关关系(P>0.05)。同时,miR-130b-5p表达量在肾癌细胞系中也明显高于正常肾上皮细胞系(P<0.01)。结论 miR-130b-5p在肾癌组织和细胞系中均高表达,且其在肾癌组织中的表达水平与患者AJCC临床分期呈正相关,提示miR-130b-5p与肾癌的发生、发展相关,有望成为新的肾癌肿瘤标志物。

基于miR-106b-5p调控CCND1基因研究幽门螺杆菌促进食管癌细胞增殖的功能机制

目的研究幽门螺杆菌(Hp)感染通过miR-106b-5p/细胞周期蛋白D1(CCND1)途径促进食管癌细胞增殖的作用机制。方法收集手术切除的食管癌组织46份,检测Hp感染情况及miR-106b-5p、CCND1的表达水平。培养食管癌TE-1细胞株,分别给予不处理、Hp感染、转染阴性对照(NC)序列、转染miR-106b-5p模拟物、转染NC序列同时加入Hp菌液、转染miR-106b-5p模拟物同时加入Hp菌液处理,分别作为对照组、Hp组、miR-NC组、miR-106b-5p组、miR-NC+Hp组、miR-106b-5p+Hp组,检测细胞增殖情况、细胞周期及miR-106b-5p、CCND1的表达水平。结果Hp阳性的食管癌组织中miR-106b-5p的表达水平低于Hp阴性的食管癌组织,CCND1的表达水平高于Hp阴性的食管癌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。食管癌组织中miR-106b-5p与CCND1的表达水平呈负相关(r=-0.414,P=0.004);Hp组TE-1细胞的A_(490)水平、细胞周期S期及G2/M期比例、CCND1的表达水平高于对照组,G0/G1期比例及miR-106b-5p的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-106b-5p组TE-1细胞中野生型CCND1报告基因的荧光值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-106b-5p+Hp组TE-1细胞的A_(490)水平、细胞周期S期及G2/M期比例、CCND1的表达水平低于miR-NC+Hp组,G0/G1期比例及miR-106b-5p的表达水平高于miR-NC+Hp组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Hp感染食管癌细胞促进细胞增殖、加速细胞周期,这一作用与调控miR-106b-5p/CCND1途径有关。

急诊冠状动脉介入治疗术后循环microRNA-26b-5p水平与血糖水平变化的观察性研究

目的:评估急诊冠状动脉介入治疗术(PCI)后循环microRNA-26b-5p水平和血糖水平变化的趋势及相关性。方法:根据入选标准和排除标准,共入选接受急诊PCI术的急性前壁心肌梗死患者38例。详细记录临床相关资料,分别于术前、术后24h、术后72h行循环血microRNA-26b-5p和血糖水平检测。Real Time PCR法检测血液样本中microRNA-26b-5p表达量的变化。结果:对于成功行急诊PCI的急性心肌梗死患者,术后microRNA-26b-5p表达水平较术前明显升高(P<0.01),术后血糖水平逐渐下降(P<0.01),两者之间存在负相关(r=-0.332,P<0.01)。结论:急性心肌梗死患者往往存在应激性高血糖,microRNA-26b-5p可能参与血糖水平的相关。

LncRNA HAND2-AS1靶向调控miR-106b-5p对IL-1β诱导软骨细胞损伤的影响

目的探讨LncRNA HAND2-AS1对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法采用qRT-PCR法检测对照组、骨关节炎组血浆中HAND2-AS1、miR-106b-5p的表达量;采用IL-1β诱导人正常软骨细胞C28/I2建立细胞损伤模型,随机分为con组、IL-1β组、IL-1β+pcDNA组、IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1组、IL-1β+anti-miR-NC组、IL-1β+miR-106b-5p Inhibitor组、IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1+miR-NC组、IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1+miR-106b-5p mimic组;MTT法与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡率;ELISA法检测IL-6、TNF-α的水平;双荧光素酶报告实验检测HAND2-AS1与miR-106b-5p的靶向关系。结果与对照组比较,骨关节炎组患者血浆中HAND2-AS1的表达量降低(P<0.05),miR-106b-5p的表达量升高(P<0.05);与con组比较,IL-1β组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),IL-6、TNF-α的水平升高(P<0.05);与IL-1β+pcDNA组、IL-1β组比较,IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1组细胞IL-6、TNF-α的水平降低(P<0.05),细胞增殖抑制率和凋亡率降低(P<0.05);HAND2-AS1可靶向调控miR-106b-5p的表达;与IL-1β+anti-miR-NC组比较,IL-1β+miR-106b-5p Inhibitor组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率降低(P<0.05),IL-6、TNF-α的水平降低(P<0.05);与IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1+miR-NC组比较,IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1+miR-106b-5p mimic组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),IL-6、TNF-α的水平升高(P<0.05)。结论HAND2-AS1过表达可通过靶向调控miR-106b-5p的表达而促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、炎性反应从而减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤。