miR-125b-5p靶向STAT3调控免疫因子IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-125b-5p对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法采用荧光定量PCR检测子宫内膜癌组织中miR-125b-5p的表达,免疫组织化学染色法检测子宫内膜癌组织中STAT3、IL-6/10的表达;双荧光素酶报告基因检测和Western blot检测验证miR-125b-5p和STAT3的靶向调控关系;荧光定量PCR和Western blot检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对子宫内膜癌HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达的影响;CCK-8法、Transwell小室分别检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对HEC-1B细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果与癌旁正常组织相比,子宫内膜癌组织中miR-125b-5p表达明显降低,而STAT3、IL-6/10蛋白的表达水平明显升高(P<0.05)。子宫内膜癌中STAT3表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著正相关(P<0.05),而miR-125b-5p表达与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著负相关(P<0.05)。STAT3是miR-125b-5p的潜在靶基因,miR-125b-5p可负向调控STAT3表达。miR-125b-5p过表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达水平以及细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显降低;干扰STAT3表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10表达及细胞增殖、迁移、侵袭能力与miR-125b-5p过表达的结果相一致。结论miR-125b-5p可通过靶向STAT3调控IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

微小RNA-10b-3p对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨微小RNA-10b-3p (miR-10b-3p)对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用QPCR检测miR-10b-3p在ESCC TE-1、EC109、KYSE30、KYSE150、KYSE180、KYSE450和KYSE510细胞株中的相对表达量,选取相对表达水平最高和最低的细胞株分别转染miR-10b-3p抑制剂和模拟物,并设转染对照载体的对照组。采用MTS实验、克隆集落形成实验及Transwell趋化小室实验检测miR-10b-3p对ESCC细胞增殖,克隆形成及侵袭、迁移能力的影响。结果 miR-10b-3p在TE-1、EC109、KYSE30、KYSE150、KYSE180、KYSE450以及KYSE510细胞株中的相对表达量分别为0. 14、0. 27、0. 66、0. 10、0. 12、0. 08和0. 78。选取miR-10b-3p相对表达量最低的KYSE450细胞株和相对表达量最高的KYSE510细胞进行后续实验。MTS检测显示,与对照组比较,模拟物组KYSE450细胞的增殖能力显著上调(P<0. 05),抑制剂组KYSE510细胞的增殖能力显著降低(P<0. 05)。克隆集落形成实验显示,模拟物组KYSE450细胞的集落数为(613. 7±41. 1)个,高于对照组的(243. 7±25. 3)个(P <0. 05);抑制剂组KYSE510细胞的集落数为(90. 3±11. 0)个,低于对照组的(247. 0±14. 7)个(P<0. 05)。Transwell小室实验显示,模拟物组穿过迁移小室的KYSE450细胞数为(211. 1±27. 3)个,高于对照组的(151. 7±15. 3)个(P<0. 05);模拟物组穿过侵袭小室的细胞数为(183. 3±15. 5)个,高于对照组的(133. 5±8. 8)个(P<0. 05)。抑制剂组穿过迁移小室的KYSE510细胞数为(50. 0±6. 7)个,低于对照组的(83. 3±12. 9)个(P<0. 05);抑制剂组穿过侵袭小室的KYSE510细胞数为(38. 8±8. 5)个,低于对照组的(66. 7±7. 3)个(P<0. 05)。结论 miR-10b-3p可以促进ESCC细胞的增殖、侵袭和迁移,可能作为ESCC基因治疗的有效靶点。

黄芪多糖通过miR-10b-5p/AGPAT3分子轴调控结直肠癌细胞顺铂耐药性

目的探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)通过miR-10b-5p/(1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase 3;AGPAT3)分子轴调控结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞顺铂(cisdiammine dichloroplatinum;CDDP)耐药性的分子机制。方法采用RT-qPCR检测SW620及SW620/CDDP细胞miR-10b-5p表达水平;使用MTT法或Transwell法检测不同浓度的APS或不同浓度的顺铂处理SW620及SW620/CDDP细胞后的细胞活力;通过双荧光素酶报告基因系统检测miR-10b-5p与AGPAT3的靶向结合关系;使用Western blotting检测AGPAT3、E-cadherin、Vimentin、Ki-67及zinc finger E-box binding homeobox 1(Zeb1)的表达情况。结果miR-10b-5p在SW620/CDDP细胞中表达水平显著上调(P<0.01);经不同浓度的APS处理后,SW620/CDDP细胞增殖(P<0.05)及迁移(P<0.05)水平受到显著抑制,APS与顺铂联合使用,显著增加了SW620/CDDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.05);双荧光素酶报告基因验证AGPAT3是miR-10b-5p的靶基因;Western blotting检测结果显示,过表达miR-10b-5p或敲降AGPAT3可显著抑制E-cadherin的表达(P<0.01),并上调Vimentin、Ki-67及Zeb1的表达水平(P<0.01)。结论APS通过miR-10b-5p/AGPAT3分子轴调控CRC细胞顺铂耐药性,APS可作为CRC的化疗辅助药物,调节细胞对化疗药物的敏感性。

DSCT联合miR-10b-3p在脑卒中颈动脉狭窄诊断中的应用

本文探讨双源CT(DSCT)联合miR-10b-3p在缺血性脑卒中患者颈动脉狭窄诊断中的应用价值。选择133例确诊为急性缺血性脑卒中患者作为研究对象,所有患者均进行了DSCT检查,测量狭窄率和钙化情况。通过RT-qPCR检测患者血清miR-10b-3p水平。结果显示,DSCT诊断50%狭窄的AUC为0.995,敏感性为100.00%,特异性为94.20%。随着狭窄率的升高,血清miR-10b-3p水平呈逐渐降低的趋势(P<0.05)。与软斑块组和纤维斑块组比较,钙化斑块组患者的血清miR-10b-3p水平显著降低(P<0.05)。血清miR-10b-3p诊断钙化斑块的AUC为0.823。miR-10b-3p诊断50%颈动脉狭窄的AUC为0.815。DSCT联合miR-10b-3p诊断50%颈动脉狭窄的AUC、敏感性和特异性分别为0.995、100.00%和94.20%。DSCT对脑卒中患者颈动脉狭窄的诊断价值高,血清miR-10b-3p可作为DSCT检查颈动脉狭窄的辅助指标,可作为颈动脉斑块形成的生物标志物。

MiR-10b-3p通过靶向结合INHBA抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探究miR-10b-3p对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法下载GEO数据、TCGA_BRCA乳腺癌数据矩阵和临床信息,分析miR-10b-3p、抑制素βA(INHBA)mRNA表达水平与乳腺癌的关系;构建稳定过表达miR-10b-3p的MCF-7和MDA-MB-231细胞系,CCK-8、划痕和Transwell小室实验检测乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力,体外构建裸鼠荷瘤模型,观察过表达miR-10b-3p对瘤体生长的影响,双荧光素酶报告基因检测miR-10b-3p与INHBA的靶向关系。结果GEO数据集中,与癌旁正常组织比较,乳腺癌组织中miR-10b-3p水平降低(P<0.05);miR-10b-3p水平在不同临床分期、T分期及临床组织病理学G分级患者中存在差异(P<0.05);TCGA数据库中,与癌旁对照组织比较,乳腺癌组织中INHBA mRNA水平升高(P<0.05);INHBA mRNA水平在不同临床分期、N分期、预后情况患者中存在差异(P<0.05);miR-10b-3p与INHBA存在靶向关系,与miR-NC组比较,miR-10b-3p组MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-10b-3p水平上调,INHBA表达、细胞增殖能力、迁移率及侵袭能力均降低(P<0.05),INHBA可逆转上述作用;与miR-NC组比较,miR-10b-3p组裸鼠瘤体体积、质量均降低,miR-10b-3p水平升高(P<0.05)。结论miR-10b-3p可能靶向调控INHBA,抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-10b-5p靶向JARID2及PTEN/Akt/PI3K信号通路调控人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力

目的探讨miR-10b-5p靶向Jumonji富含AT结合结构域2(JARID2)及磷脂酶和张力蛋白同源物(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调控人乳腺癌M.D.Anderson和MB代表转移性乳腺癌-231(MDA-MB-231)细胞增殖和迁移的影响。方法培养人正常乳腺细胞密歇根癌症基金会-10A(MCF-10A)及人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用Real-time聚合酶链式反应(PCR)法检测两种细胞中miR-10b-5p表达。将MDA-MB-231细胞分为对照组(Lip2000处理后正常培养细胞)、上调拟似物组(Lip2000+miR-10b-5p拟似物mimic转染)、上调转染组(Lip2000+mimic-miR-10b-5p共转染)、下调拟似物组(Lip2000+miR-10b-5p拟似物inhibitor转染)、下调转染组(Lip2000+inhibitor-miR-10b-5p共转染)。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组细胞增殖情况,Transwell检测各组细胞迁移能力,Western blot法检测各组中JARID2及PTEN/Akt/PI3K信号通路蛋白表达。结果MDA-MB-231细胞中miR-10b-5p表达量高于MCF-10A细胞(P<0.05)。上调转染组增殖抑制率低于对照组,下调转染组增殖抑制率高于对照组(P<0.05);上调拟似物组和下调拟似物组增殖抑制率与对照组比较差异无统计学意义。上调转染组细胞数量少于对照组,下调转染组细胞数量多于对照组(P<0.05);上调拟似物组和下调拟似物组与对照组细胞数量比较差异无统计学意义。上调转染组JARID2、PTEN蛋白表达量均高于对照组,PI3K、Akt蛋白表达均低于对照组(P<0.05);下调转染组JARID2、PTEN蛋白表达量均低于对照组,PI3K、Akt蛋白表达均高于对照组(P<0.05)。结论miR-10b-5p可靶向JARID2及PTEN/Akt/PI3K信号通路表达,影响人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力。

Lnc-MEG3调控miR-10b-5p/CD82轴对垂体瘤细胞增殖、侵袭的影响

目的探究lnc-MEG3对垂体瘤细胞增殖、侵袭的调控机制。方法取垂体瘤HP75细胞分为对照组、si-NC组、si-MEG3组、pcDNA3.1-NC组、oe-MEG3组、oe-MEG3+mimic-NC组、oe-MEG3+miR-10b-5p mimic组。转染后,检测细胞中lnc-MEG3、miR-10b-5p和CD82 mRNA的表达水平、细胞增殖、迁移、侵袭能力和细胞中CD82、PCNA、E-cadherin、N-cadherin、MMP-9蛋白表达。结果Lnc-MEG3过表达可降低miR-10b-5p,上调CD82和E-cadherin水平,降低PCNA、N-cadherin、MMP-9水平,抑制垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05);上调miR-10b-5p可抑制CD82,减弱lnc-MEG3过表达对垂体瘤细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染miR-10b-5p mimic后,细胞中MEG3-WT和CD82-WT的荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。结论Lnc-MEG3过表达可能通过靶向下调miR-10b-5p,进而上调CD82的表达,抑制垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭。

微小RNA-301b-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨微小RNA-301b-3p(miR-301b-3p)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法本研究起止时间为2019年3—9月。人成骨细胞(hFOB)和骨肉瘤细胞U2OS、MG63购自美国菌种保藏中心。U2OS细胞分为miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-301b-3p抑制物(anti-miR-301b-3p)组、anti-miR-301b-3p+小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、anti-miR-301b-3p+第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)小干扰RNA(si-PTEN)组;实时荧光定量PCR(RT-qP-CR)检测miR-301b-3p表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-301b-3p和PTEN的靶向关系。结果与h FOB细胞相比,U2OS、MG63中miR-301b-3p表达水平[(0.89±0.09),(0.70±0.07)比(0.20±0.02)]显著升高。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-301b-3p组U2OS细胞活性[(0.59±0.06)比(1.33±0.13)]显著降低,而凋亡率[(22.06±2.31)%比(7.48±0.78)%]、PTEN蛋白表达[(0.69±0.07)比(0.35±0.03)]显著升高。PTEN是miR-301b-3p的直接靶基因。与anti-miR-301b-3p+si-NC组比较,anti-miR-301b-3p+si-PTEN组U2OS细胞活性[(1.16±0.12)比(0.56±0.06)]显著升高,而凋亡率[(10.28±1.16)比(22.12±2.34)]显著降低。结论抑制miR-301b-3p表达可通过调控PTEN抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。