血清 microRNA-155、microRNA-23b-3p、 microRNA-16-5p与难治性肺炎支原体肺炎 患儿病情严重程度及预后的关系

目的探讨血清microRNA-155(miR-155)、microRNA-23b-3p(miR-23b-3p)、microRNA-16-5p(miR-16-5p)水平与难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)患儿病情严重程度及预后的关系。方法前瞻性选取2023年6月—2023年12月杭州市儿童医院收治的101例RMPP患儿为研究对象,收集治疗前血清miR-155、miR-23b-3p、miR-16-5p水平。根据病情严重程度将患儿分为重症组39例与轻症组62例。所有患儿自治疗起随访1个月,根据治疗效果将患儿分为预后不良组22例与预后良好组79例。分析不同病情严重程度及不同预后RMPP患儿血清miR-155、miR-23b-3p、miR-16-5p水平;采用多因素逐步Logistic回归模型分析影响RMPP患儿预后的因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-155、miR-23b-3p、miR-16-5p预测RMPP患儿预后的价值。结果重症组患儿血清miR-155基因相对表达量高于轻症组(P<0.05),miR-23b-3p、miR-16-5p基因相对表达量均低于轻症组(P<0.05)。预后不良组患儿血清miR-155基因相对表达量高于预后良好组(P<0.05),miR-23b-3p、miR-16-5p基因相对表达量均低于预后良好组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示,儿童器官功能障碍评分2(PELOD-2)[O^R=5.129(95%CI:2.111,12.466)]、miR-155[O^R=3.924(95%CI:1.614,9.535)]、miR-23b-3p[O^R=3.850(95%CI:1.584,9.356)]、miR-16-5p[O^R=3.777(95%CI:1.554,9.179)]是影响RMPP患儿预后的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-155、miR-23b-3p、miR-16-5p及三者联合预测RMPP患儿预后的敏感性分别为63.64%(95%CI:0.408,0.820)、72.73%(95%CI:0.496,0.884)、68.18%(95%CI:0.451,0.853)、86.36%(95%CI:0.640,0.964),特异性分别为70.89%(95%CI:0.594,0.803)、78.48%(95%CI:0.675,0.866)、72.15%(95%CI:0.608,0.814)、91.14%(95%CI:0.820,0.961),曲线下面积分别为0.725(95%CI:0.622,0.827)、0.718(95%CI:0.604,0.831)、0.710(95%CI:0.591,0.829)、0.923(95%CI:0.866,0.980)。结论血清miR-155、miR-23b-3p、miR-16-5p水平与RMPP患儿病情严重程度及预后有关,三者联合预测RMPP患儿的效能良好。

支气管哮喘患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平与气道炎症、肺功能的关系

目的:分析支气管哮喘患儿外周血microRNA-30a(miR-30a)、microRNA-15b-5p(miR-15b-5p)水平与气道炎症、肺功能的关系。方法:选择2020年3月—2022年3月我院收治的123例支气管哮喘患儿作为研究组,另外选择同期在我院体检的100例健康儿童作为对照组。入院后均检测外周血miR-30a、miR-15b-5p水平,利用肺功能仪检测第1秒用力呼气量(FEV_(1))、用力肺活量(FVC)及FEV_(1)/FVC等肺功能指标水平,同时检测气道炎症指标水平。比较各组血清miR-30a、miR-15b-5p水平及肺功能、气道炎症指标,采用Pearson相关分析探讨血清miR-30a、miR-15b-5p水平与气道炎症、肺功能的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)评估外周血miR-30a、miR-15b-5p水平对支气管哮喘发生的预测价值。结果:研究组患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平均高于对照组(P<0.05)。研究组患儿诱导痰中的细胞总数、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、淋巴细胞的数目均高于对照组,巨噬细胞的数目低于对照组(P<0.05)。研究组患儿FEV_(1)、FVC、FEV_(1)/FVC肺功能指标均低于对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,支气管哮喘患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平均与肺功能指标(FEV_(1)、FVC、FEV_(1)/FVC)及巨噬细胞呈负相关(P<0.05),与细胞总数、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、淋巴细胞数目呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,外周血miR-30a、miR-15b-5p预测小儿支气管哮喘发生的曲线下面积为0.841(95%CI:0.792~0.890)、0.862(95%CI:0.817~0.917),二者联合预测小儿支气管哮喘发生的曲线下面积为0.911(95%CI:0.874~0.958)。结论:支气管哮喘患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平均呈高表达,且二者水平变化与气道炎症、肺功能密切相关,另外可作为预测支气管哮喘患儿发病的有效指标。

大疱性类天疱疮患者血清及疱液外泌体microRNA-146b-5p的表达及其临床意义

目的探讨大疱性类天疱疮(BP)患者血清及疱液外泌体microRNA-146b-5p表达的意义。方法选取2019年6月—2021年12月青岛市中医医院收治的79例BP患者作为研究组。另选取同期该院体检的61例健康群众作为对照组。收集两组基本资料、生化指标,采用实时荧光定量聚合酶链反应测定microRNA-146b-5p表达情况。采用多因素Logistic逐步回归分析影响BP诊断的因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清外泌体microRNA-146b-5p对早期BP的诊断效能,采用Pearson分析BP患者血清及疱液外泌体microRNA-146b-5p表达与病情严重程度的相关性。结果两组性别、年龄、体质量指数≥25 kg/m^(2)、合并高血压、合并糖尿病、合并高脂血症、合并冠心病、吸烟史、饮酒史,血肌酐、血尿酸、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、血红蛋白、白蛋白、白细胞计数、血小板计数、降钙素原、肿瘤坏死因子α、CD14^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞、白细胞介素6、白细胞介素4、白细胞介素21、血清25-羟维生素D比较,差异无统计学意义(P>0.05)。研究组C反应蛋白、OX40、OX40L、巨噬细胞游走抑制因子、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白、血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量均高于对照组,研究组CD4^(+)T淋巴细胞水平低于对照组。多因素Logistic逐步回归分析结果显示:血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量[O^R=5.191(95%CI:2.136,12.617)]、CD4^(+)T淋巴细胞水平[O^R=4.894(95%CI:2.014,11.894)]、ECP[O^R=4.076(95%CI:1.677,9.905)]是BP诊断的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量诊断BP的最佳截断值为1.11,敏感性为73.42%(95%CI:0.621,0.824),特异性为80.33%(95%CI:0.678,0.890),曲线下面积为0.766(95%CI:0.671,0.861)。Pearson相关性分析显示,BP患者疱液外泌体microRNA-146b-5p与BPDAI评分呈正相关(r=0.741,P<0.05),血清microRNA-146b-5p相对表达量与BPDAI评分呈正相关(r=0.736,P<0.05)。结论外泌体microRNA-146b-5p不仅与BP发生有关,也可能与其病情进展有关,且血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量诊断BP发生效能良好。

MiR-10b-5p通过靶向NCOR2调控乳腺浸润性导管癌细胞的迁移和侵袭

目的探讨miR-10b-5p通过靶向人源重组蛋白(NCOR2)调控乳腺浸润性导管癌细胞的迁移和侵袭。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析了1109例乳腺浸润性导管癌和113例相邻正常组织中miR-10b-5p和NCOR2的mRNA水平,根据miR-10b-5p表达中位数分为高表达组和低表达组,分析两组的总生存率(OS)、无进展生存期(PFI),同时采用实时荧光定量PCR法检测20例患者乳腺癌组织及对应的相邻正常组织miR-10b-5p和NCOR2的mRNA水平。在细胞水平应用乳腺癌细胞系MCF-7构建miR-10b-5p对照组(转染miR-NC),miR-10b-5p过表达组(转染miR-10b-5p mimics),运用qRT-PCR法和Western blot法检测NCOR2 mRNA水平和蛋白水平表达量,采用MTT法检测细胞增殖情况,采用划痕法检测细胞水平迁移情况,采用transwell法检测细胞垂直迁移情况。结果miR-10b-5p在乳腺癌组织中的表达明显低于相邻正常组织(P<0.05),而NCOR2在乳腺癌组织中的表达明显高于相邻正常组织(P<0.05)。与低表达组相比,高表达组miR-10b-5p影响着乳腺浸润性导管癌患者的OS(P>0.05,HR=0.94)、PFI(P<0.05,HR=0.69)。与miR-10b-5p对照组相比,miR-10b-5p过表达组的乳腺癌细胞系MCF-7中NCOR2 mRNA表达水平和蛋白水平均下调(P<0.05),MCF-7细胞过表达组后水平和垂直迁移能力下降。结论过表达的miR-10b-5p可能通过调节NCOR2分子抑制乳腺浸润性导管癌细胞的迁移和侵袭。

miR-10b-5p靶向JARID2及PTEN/Akt/PI3K信号通路调控人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力

目的探讨miR-10b-5p靶向Jumonji富含AT结合结构域2(JARID2)及磷脂酶和张力蛋白同源物(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调控人乳腺癌M.D.Anderson和MB代表转移性乳腺癌-231(MDA-MB-231)细胞增殖和迁移的影响。方法培养人正常乳腺细胞密歇根癌症基金会-10A(MCF-10A)及人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用Real-time聚合酶链式反应(PCR)法检测两种细胞中miR-10b-5p表达。将MDA-MB-231细胞分为对照组(Lip2000处理后正常培养细胞)、上调拟似物组(Lip2000+miR-10b-5p拟似物mimic转染)、上调转染组(Lip2000+mimic-miR-10b-5p共转染)、下调拟似物组(Lip2000+miR-10b-5p拟似物inhibitor转染)、下调转染组(Lip2000+inhibitor-miR-10b-5p共转染)。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组细胞增殖情况,Transwell检测各组细胞迁移能力,Western blot法检测各组中JARID2及PTEN/Akt/PI3K信号通路蛋白表达。结果MDA-MB-231细胞中miR-10b-5p表达量高于MCF-10A细胞(P<0.05)。上调转染组增殖抑制率低于对照组,下调转染组增殖抑制率高于对照组(P<0.05);上调拟似物组和下调拟似物组增殖抑制率与对照组比较差异无统计学意义。上调转染组细胞数量少于对照组,下调转染组细胞数量多于对照组(P<0.05);上调拟似物组和下调拟似物组与对照组细胞数量比较差异无统计学意义。上调转染组JARID2、PTEN蛋白表达量均高于对照组,PI3K、Akt蛋白表达均低于对照组(P<0.05);下调转染组JARID2、PTEN蛋白表达量均低于对照组,PI3K、Akt蛋白表达均高于对照组(P<0.05)。结论miR-10b-5p可靶向JARID2及PTEN/Akt/PI3K信号通路表达,影响人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力。

IL-37调控miR-106b-5p/PTEN抑制肾细胞癌细胞生物学行为

目的:探讨IL-37对肾细胞癌细胞生物学行为的影响和潜在机制。方法:RT-qPCR检测肾细胞癌组织中IL-37mRNA和miR-106b-5p表达。Western blot检测肾细胞癌组织中10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达。将肾细胞癌细胞786-0分为对照组、IL-37(10、50、100 ng/ml)组、anti-miR-NC组、anti-miR-106b-5p组、IL-37+miR-NC组、IL-37+miR-106b-5p组。采用MTT法、平板克隆实验、划痕愈合实验、流式细胞术检测786-0细胞增殖、迁移和凋亡能力。荧光素酶实验检测miR-106b-5p与PTEN的靶向关系。结果:肾细胞癌组织中miR-106b-5p表达量显著升高(P<0.05),IL-37 mRNA和PTEN蛋白表达量显著降低(P<0.05)。与对照组比较,IL-37(10、50、100 ng/ml)组细胞活力、集落形成数、迁移距离、miR-106b-5p表达显著降低(P<0.05),凋亡率、PTEN蛋白表达显著升高(P<0.05)。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-106b-5p组细胞活力、集落形成数、迁移距离显著降低(P<0.05),凋亡率、PTEN蛋白表达显著升高(P<0.05)。与IL-37+miR-NC组比较,IL-37+miR-106b-5p组细胞活力、集落形成数、迁移距离显著升高(P<0.05),凋亡率、PTEN蛋白表达显著降低(P<0.05)。PTEN是miR-106b-5p的靶基因。结论:外源性IL-37可抑制肾细胞癌细胞的增殖和迁移,诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能是通过抑制miR-106b-5p/PTEN途径发挥作用。

过敏性紫癜患儿血清microRNA-6769b-5p的表达及与IL-10相关性

目的本研究旨在研究过敏性紫癜(henoch-schonlein purpura,HSP)患儿血清microRNA-6769b-5p、IL-10的表达,并探讨他们的相关性。方法选取2018年1月1日至2018年5月22日HSP患儿45例和27名健康儿童作为对照。研究中,使用荧光定量PCR检测分析microRNA-6769b-5p的水平,并通过ELISA检测血清IL-10的水平。结果MicroRNA-6769b-5p在HSP儿童血清中表达为下调,对腹痛有预测价值。此外,microRNA-6769b-5p与IL-10不具有相关性。结论这项研究表明,microRNA-6769b-5p、IL-10可能与HSP发病机理有关,并可能成为HSP的治疗靶标或诊断生物标志物。

微RNA-30b-5p通过靶向Atg5抑制多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞自噬

目的·探究microRNA-30b-5p(miR-30b-5p)在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠中的表达及miR-30b-5p过表达对卵巢颗粒细胞(granulosa cell,GC)自噬的影响。方法·采用脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)建立PCOS大鼠模型,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)和Western blotting检测正常组和PCOS组大鼠卵巢组织中miR-30b-5p和自噬相关蛋白5同源物(autophagy-associated protein 5 homologue,Atg5)的表达。分离并培养原代PCOS大鼠卵巢GC,分为对照组、miR-NC组、miR-30b-5p过表达组、miR-30b-5p过表达+pcDNA3.1-NC组、miR-30b-5p过表达+pcDNA3.1-Atg5组,另取正常组大鼠卵巢GC为空白组;将miR-30b-5p mimic和pcDNA3.1-Atg5及相应的阴性对照转染到细胞中,转染48 h后,qRT-PCR检测各组细胞中miR-30b-5p和Atg5 mRNA表达,验证转染效果。CCK-8及流式细胞仪分别检测细胞活力和凋亡率;免疫荧光染色检测各组细胞微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)阳性表达;Western blotting检测自噬相关蛋白Atg5、p62、Beclin-1和LC3蛋白表达。结果·PCOS组大鼠卵巢组织中miR-30b-5p表达水平显著低于正常组,Atg5 mRNA和蛋白水平显著高于正常组(均P=0.000)。转染后,与空白组相比,对照组卵巢GC中miR-30b-5p水平、细胞凋亡率、p62蛋白水平显著降低,Atg5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、LC3阳性细胞百分比、Beclin-1蛋白水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高(均P=0.000);与对照组相比,miR-30b-5p过表达组卵巢GC中miR-30b-5p水平、细胞凋亡率、p62蛋白水平显著升高,Atg5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、LC3阳性细胞百分比、Beclin-1蛋白水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著降低(均P=0.000)。上调Atg5可明显减弱miR-30b-5p过表达对卵巢GC增殖和自噬的抑制作用(均P=0.000)。结论·MiR-30b-5p在PCOS中呈低表达;过表达miR-30b-5p可抑制PCOS大鼠卵巢GC增殖和自噬,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Atg5表达有关。

miR-125b-5p靶向STAT3调控免疫因子IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-125b-5p对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法采用荧光定量PCR检测子宫内膜癌组织中miR-125b-5p的表达,免疫组织化学染色法检测子宫内膜癌组织中STAT3、IL-6/10的表达;双荧光素酶报告基因检测和Western blot检测验证miR-125b-5p和STAT3的靶向调控关系;荧光定量PCR和Western blot检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对子宫内膜癌HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达的影响;CCK-8法、Transwell小室分别检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对HEC-1B细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果与癌旁正常组织相比,子宫内膜癌组织中miR-125b-5p表达明显降低,而STAT3、IL-6/10蛋白的表达水平明显升高(P<0.05)。子宫内膜癌中STAT3表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著正相关(P<0.05),而miR-125b-5p表达与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著负相关(P<0.05)。STAT3是miR-125b-5p的潜在靶基因,miR-125b-5p可负向调控STAT3表达。miR-125b-5p过表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达水平以及细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显降低;干扰STAT3表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10表达及细胞增殖、迁移、侵袭能力与miR-125b-5p过表达的结果相一致。结论miR-125b-5p可通过靶向STAT3调控IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎发病过程中对白细胞介素-10和Toll样受体4表达的调控作用

目的探讨rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎中对白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达的调控作用。方法构建IL-10、TLR4基因的3’端非编码区域(3’UTR)荧光素酶质粒载体以及结合位点突变质粒载体,将rnomiR-30b-5p模拟物(mimic)与构建好的报告基因载体共转染293T细胞,通过报告基因相对荧光值的表达改变检测rno-miR-30b-5p对IL-10、TLR4表达的调控作用;制备实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)模型,通过注射视网膜光感受器间维生素A类结合蛋白乳糜液,在造模后12 d分离EAU大鼠的脾脏和淋巴结,实时荧光定量PCR检测rno-miR-30b-5p和IL-10、TLR4基因的表达情况;ELISA检测IL-10和TLR4蛋白的表达情况。结果双荧光素酶报告基因表达结果表明,经rno-miR-30b-5p mimic干预后IL-10、TLR4野生型的报告荧光有明显的下调作用,对其预测靶位点进行突变后,突变型载体中的报告荧光也存在明显的下调作用,与阴性对照相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。实时荧光定量PCR检测结果发现rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾脏和淋巴结中的表达均较对照组明显降低(均为P<0.01),而IL-10 mRNA、TLR4 mRNA表达明显升高(均为P<0.01);ELISA检测发现IL-10、TLR4蛋白表达升高,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论rno-miR-30b-5p对带有IL-10、TLR4基因片段3’UTR基因表达的调控作用可能不是通过预测到的位点起作用而是通过其他的调控结合位点发挥作用;rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾脏和淋巴结的下调表达导致IL-10和TLR4的表达水平升高,进而调控葡萄膜炎的发展。本研究为进一步探索microRNA在葡萄膜炎发生发展进程中的调控作用、治疗葡萄膜炎奠定了基础。

MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p在大肠癌中的表达及意义

目的研究MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p在大肠癌中的表达和临床意义。方法选取大肠癌组织和癌旁正常组织50例,应用qPCR法,检测MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p表达水平;应用免疫组化法,检测PI3K表达水平。结果 MicroRNA-21-5p、MicroRNA-18b-5p和PI3K在大肠癌组织中的的表达量显著高于癌旁正常组织(P<0.05),且MicroRNA-21-5p、MicroRNA-18b-5p均和PI3K具有明显正相关性(P<0.05)。结论 MicroRNA-21-5p和MicroRNA-18b-5p通过PI3K/AKT信号通路在大肠癌的发生、发展过程中起重要作用。

新肾癌标志物microRNA-130b-5p在肾细胞癌中的表达及临床意义

目的本研究通过检测比较microRNA-130b-5p(miR-130b-5p)在肾癌及癌旁正常组织之间以及肾癌细胞系和正常肾细胞系之间的表达水平,并分析其表达水平与临床病理资料之间的关系,为进一步研究miR-130b-5p在肾癌中深入的功能和机制奠定基础。方法采用qPCR方法检测miR-130b-5p在42对肾癌组织和癌旁正常组织中表达量的差异,并运用秩和检验方法分析肾癌组织中miR-130b-5p表达量与患者临床病理特征之间的相关性。培养肾癌细胞系(786-O和ACHN)和正常肾上皮细胞系(293T)并采用qPCR方法检测细胞中miR-130b-5p的表达量。结果miR-130b-5p在肾癌组织中的表达量明显高于癌旁正常组织(P<0.01),且肾癌组织中miR-130b-5p表达量与患者AJCC临床分期呈正相关(P=0.041),与其他临床病理资料如年龄、性别、T分期、组织类型和Fuhrman分级未发现明显相关关系(P>0.05)。同时,miR-130b-5p表达量在肾癌细胞系中也明显高于正常肾上皮细胞系(P<0.01)。结论 miR-130b-5p在肾癌组织和细胞系中均高表达,且其在肾癌组织中的表达水平与患者AJCC临床分期呈正相关,提示miR-130b-5p与肾癌的发生、发展相关,有望成为新的肾癌肿瘤标志物。

急诊冠状动脉介入治疗术后循环microRNA-26b-5p水平与血糖水平变化的观察性研究

目的:评估急诊冠状动脉介入治疗术(PCI)后循环microRNA-26b-5p水平和血糖水平变化的趋势及相关性。方法:根据入选标准和排除标准,共入选接受急诊PCI术的急性前壁心肌梗死患者38例。详细记录临床相关资料,分别于术前、术后24h、术后72h行循环血microRNA-26b-5p和血糖水平检测。Real Time PCR法检测血液样本中microRNA-26b-5p表达量的变化。结果:对于成功行急诊PCI的急性心肌梗死患者,术后microRNA-26b-5p表达水平较术前明显升高(P<0.01),术后血糖水平逐渐下降(P<0.01),两者之间存在负相关(r=-0.332,P<0.01)。结论:急性心肌梗死患者往往存在应激性高血糖,microRNA-26b-5p可能参与血糖水平的相关。

IL-32α通过调控miR-216b-5p/AKR1B10轴抑制食管癌KYSE450细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨IL-32α对食管癌KYSE450细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法IL-32α诱导KYSE450细胞、IL-32α作用于转染miR-216b-5p mimics或si-AKR1B10的KYSE450细胞后,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,qRT-PCR检测miR-216b-5p和AKR1B10 mRNA水平,Western Blot法检测AKR1B10、CyclinD1、p21、MMP-2和MMP-9蛋白水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-216b-5p与AKR1B10靶向关系。结果与对照组比较,IL-32α组KYSE450细胞抑制率、p21蛋白和miR-216b-5p水平显著升高(P<0.05),迁移和侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9的蛋白及AKR1B10的mRNA和蛋白水平均显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。miR-216b-5p过表达或抑制AKR1B10均提高KYSE450细胞抑制率(P<0.05),促进p21蛋白表达(P<0.05),降低迁移和侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达(P<0.05)。miR-216b-5p靶向负调控AKR1B10表达。抑制miR-216b-5p表达逆转了IL-32α对KYSE450细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论IL-32α可抑制食管癌细胞KYSE450增殖、迁移和侵袭,其机制与IL-32α上调miR-216b-5p表达进而靶向负调控AKR1B10表达有关。

Lnc-MEG3调控miR-10b-5p/CD82轴对垂体瘤细胞增殖、侵袭的影响

目的探究lnc-MEG3对垂体瘤细胞增殖、侵袭的调控机制。方法取垂体瘤HP75细胞分为对照组、si-NC组、si-MEG3组、pcDNA3.1-NC组、oe-MEG3组、oe-MEG3+mimic-NC组、oe-MEG3+miR-10b-5p mimic组。转染后,检测细胞中lnc-MEG3、miR-10b-5p和CD82 mRNA的表达水平、细胞增殖、迁移、侵袭能力和细胞中CD82、PCNA、E-cadherin、N-cadherin、MMP-9蛋白表达。结果Lnc-MEG3过表达可降低miR-10b-5p,上调CD82和E-cadherin水平,降低PCNA、N-cadherin、MMP-9水平,抑制垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05);上调miR-10b-5p可抑制CD82,减弱lnc-MEG3过表达对垂体瘤细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染miR-10b-5p mimic后,细胞中MEG3-WT和CD82-WT的荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。结论Lnc-MEG3过表达可能通过靶向下调miR-10b-5p,进而上调CD82的表达,抑制垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭。

MicroRNA-20b-5p对早期膝骨关节炎模型大鼠软骨和软骨下骨血管新生的影响

背景:血管新生是早期膝骨关节炎膝关节微环境的重要病理特征,通过膝关节腔注射microRNA的方式抑制血管新生可能为早期膝关节的治疗提供新的作用靶点。目的:观察miR-20b-5p激动剂对早期膝骨关节炎大鼠关节软骨、软骨下骨血管生成的影响,探讨miR-20b-5p对早期膝骨关节炎大鼠软骨及软骨下骨可能的保护机制。方法:从12只SD雄性大鼠中随机抽取3只作为空白组,余下9只制备早期膝骨关节炎模型后随机分组,即模型组、miR-20b agomir组及miR-20b agomir NC组,每组3只大鼠。造模后1周,空白组不予处理,模型组、miR-20b agomir组、miR-20b agomir NC组分别于双后膝注射0.2 mL生理盐水、miR-20b-5p agomir溶液、miR-20b-5p agomir NC溶液1次。4周后处死各组大鼠取膝关节进行番红O-固绿、免疫组织化学染色及国际骨关节炎研究学会“软骨病理评价系统”评分,实时荧光定量PCR及Western blot检测软骨及软骨下骨中缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子的mRNA和蛋白表达水平。结果与结论:①miR-20b agomir组国际骨关节炎研究学会“软骨病理评价系统”评分明显低于模型组和miR-20b agomir NC组(P<0.05);模型组与miR-20b agomir NC组的国际骨关节炎研究学会“软骨病理评价系统”评分相比差异无显著性意义(P>0.05);②膝关节病理切片显示,相比空白组,其他各组均有软骨基质流失和软骨、软骨下骨的缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子蛋白表达水平增加,其中miR-20b agomir组的软骨基质流失程度以及软骨、软骨下骨的缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子蛋白表达水平低于模型组和miR-20b agomir NC组(P<0.05);③miR-20b agomir组软骨、软骨下骨的缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子的mRNA及蛋白表达水平均低于模型组和miR-20b agomir NC组(P<0.05);④提示过表达miR-20b-5p可下调早期膝骨关节炎软骨及软骨下骨缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子表达,抑制膝骨关节炎软骨及软骨下骨的血管新生,达到保护关节软骨的作用。

鸡miR-10b-5p生物信息学及组织表达分析

【目的】通过对苏禽3号肉鸡的miR-10b-5p进行靶基因预测、生物信息学分析及其在鸡不同生长时期组织表达变化规律研究,探索其在鸡肌肉生长发育中作用。【方法】通过文献和miRBase检索脊椎动物的miR-10b-5p序列,利用Ensembl数据库查询并确定miR-10b-5p在基因组中的位置,根据前体序列构建系统进化树;使用miRDB、microT和TargetScan网站预测miR-10b-5p靶基因,并对靶基因进行GO功能和KEGG通路分析,进而揭示miR-10b-5p的基因功能。采用实时荧光定量PCR技术检测不同生长时期鸡miR-10b-5p组织表达量,探索其在大脑、小脑、垂体、下丘脑、胸肌、腿肌、卵巢、心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏组织中表达变化。【结果】miRBase检索共获得59种动物59条miR-10b-5p序列,即每一种动物都只有一种miR-10b-5p形式。基因定位分析发现,鸡miR-10b-5p位于2号染色体上的HOX基因家族中。常见物种miR-10b-5p成熟序列比对分析结果表明,miR-10b-5p的成熟序列相似性较高,物种间较为保守。系统进化树分析发现,miR-10b在哺乳类中的灵长目、啮齿目、鸟类、鱼类中各自先聚为一支,然后再共同聚为一类,这表明miR-10b在进化过程中是保守的。靶基因预测发现,miR-10b-5p共有300个靶基因。GO功能分析发现,靶基因主要富集到染色质组装和基因表达的转录后调控、组蛋白甲基转移酶复合物、转录因子复合物等功能。KEGG通路分析表明,靶基因主要富集到Wnt和p53信号通路上。组织表达分析显示,miR-10b-5p在检测的各个组织中均有表达;3日龄时大脑、小脑、垂体、胸肌和腿肌中miR-10b-5p表达量显著高于心脏、下丘脑、肾脏和肺脏等组织(P<0.05);90日龄时,垂体、胸肌、腿肌和大脑中miR-10b-5p表达量显著高于其他组织(P<0.05)。与3日龄雏鸡相比,90日龄时垂体、胸肌和腿肌中miR-10b-5p表达量均显著上升(P<0.05)。【结论】鸡miR-10b-5p是组织广泛表达的miRNA,miR-10b在进化过程中是保守的,其可能通过Wnt及p53信号通路调控肌肉细胞增殖分化,进而调控鸡肌肉生长发育。

miR-10b-5p通过靶向SUFU介导乳腺癌细胞对放疗的敏感性

目的探讨miR-10b-5p在乳腺癌细胞放疗敏感性中的作用及相关机制。方法采用qPCR和West‐ern blotting检测正常乳腺细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231中miR-10b-5p mRNA、SUFU mRNA和蛋白的表达。在MDA-MB-231细胞中转染miR-10b-5p inhibitor对miR-10b-5p进行敲减,6 Gy^(60)Coγ-射线照射2 h,分别采用克隆形成实验和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡水平;双荧光素酶报告实验验证靶基因SUFU,回补实验验证miR-10b-5p是否通过靶向SUFU介导乳腺癌细胞对放疗的敏感性。结果3种乳腺癌细胞系中miR-10b-5p的表达均显著高于正常乳腺细胞MCF-10A(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-10b-5p inhibitor组细胞增殖水平明显下降(P<0.05),凋亡水平显著上升(P<0.05)。敲减miR-10b-5p可增加野生型SUFU 3'UTR的荧光强度(P<0.05),而对突变型SUFU 3'UTR的荧光强度无明显影响(P>0.05)。此外,miR-10b-5p inhibitor组SUFU蛋白表达水平显著高于miR-NC组(P<0.05)。与miR-NC+si-NC组相比,miR-10b-5p inhibitor+si-NC组细胞增殖水平显著降低(P<0.05),miR-10b-5p inhibitor+si-SUFU#2组细胞增殖水平明显回升,且高于miR-10b-5p inhibitor+si-NC组(P<0.05)。结论乳腺癌细胞中miR-10b-5p呈高表达,敲减miR-10b-5p可增强乳腺癌细胞对放疗的敏感性,其机制可能与靶向抑制SUFU相关。

miR-10b-5p作用于胰腺癌潜在靶基因及分子机制的探讨

目的探讨miR-10b-5p在胰腺癌发生发展中潜在的靶基因和分子机制。方法通过高通量基因表达(gene expression omnibus,GEO)数据库和在线预测数据库对潜在靶基因进行初步探讨,再利用生物信息学计算,对miR-10b-5p与靶基因间的相互作用关系进行分析。结果本研究共得到586个miR-10b-5p潜在靶基因。基因富集分析(gene ontology,GO)表明,靶基因主要在蛋白转运途径中富集。京都基因与基因组百科全书通路分析(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)显示miR-10b-5p靶基因主要存在于两个重要途径:癌症相关通路和胰腺癌相关通路。蛋白-蛋白网络互作分析(protein-protein interaction,PPI)重点展示了胰腺癌相关通路上7个突变基因(EGFR、RAC3、SMAD4、PIK3CA、CDK6、Bcl2L1和STAT3)之间的相互作用关系。结论 miR-10b-5p可能通过靶向潜在的基因和途径在胰腺癌的发生发展中发挥作用。

MicroRNA-199b-5p在贝那普利改善自发性高血压大鼠心脏重构中的作用

目的探讨microRNA-199b-5p(miR-199b-5p)在贝那普利改善自发性高血压大鼠(SHR)心脏重构中的作用。方法取10周龄雄性SHR16只,随机分为两组:即SHR干预组和SHR对照组各8只;另取Wistar大鼠8只作为正常对照组即:NC组。SHR干预组:给予10mg/(kg.d)贝那普利灌胃8周;SHR对照组和NC组给予同等剂量蒸馏水灌胃8周。干预前后测量鼠尾动脉血压,测量后麻醉取心脏样本。HE染色、检测miR-199b-5p及TGF-β1、Smad3的表达水平。结果 SHR干预组心肌细胞形态学与NC组无明显差异;两组SHR心脏组织中的miR-199b-5p、TGF-β1、Smad3表达量高于NC组(P<0.01);但SHR干预组较SHR对照组低(P<0.01)。结论贝那普利可能通过抑制miR-199b-5p表达,下调TGF-β1、Smad3蛋白的表达从而改善SHR心脏重构。