慢性丙型肝炎患者血清microRNA-1273g-3p水平预测肝硬化价值分析

目的探讨慢性丙型肝炎(CHC)患者血清microRNA-1273g-3p水平预测发生肝硬化的价值。方法2018年3月~2020年8月我院收治的CHC患者125例,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测外周血microRNA-1273g-3p水平。应用Logistic回归分析CHC患者发生肝硬化的影响因素,绘制受试者工作特征曲线(ROC),计算曲线下面积,评估血清microRNA-1273g-3p水平预测CHC患者发生肝硬化的价值。结果在本组125例CHC患者中,发现肝硬化42例(33.6%);肝硬化组BMI高、有输血史、血脂异常、未抗病毒治疗和血清microRNA-1273g-3p水平与CHC患者比,差异显著(P均<0.05),肝硬化组病程为(12.4±2.7)年,显著长于CHC组[(8.2±2.1)年,P<0.01],肝硬化组血清microRNA-1273g-3p水平为(2.1±0.5),显著高于CHC组[(1.3±0.3),P<0.01];经Logistic回归分析发现,以上因素均为影响CHC患者发生肝硬化的独立危险因素;经ROC分析显示,以血清microRNA-1273g-3p水平1.56为最佳截断点,其AUC值为0.844(95%CI:0.768~0.902),预测CHC患者发生肝硬化的灵敏度为78.6%(33/42,95%CI:73.1%~83.2%),特异度为86.8%(72/83,95%CI:82.5%~90.6%),准确度为90.4%(113/125,95%CI:73.1%~83.2%)。结论检测血清microRNA-1273g-3p水平可能帮助预测CHC患者发生肝硬化,对及时诊治和管理具有一定的临床意义。

miR-1273g-3p调控TGF-β/Smad4信号通路影响结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-1273g-3p调控转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)/mothers against decapentaplegic homolog 4(Smad4)信号通路对结直肠癌细胞生物学功能的影响。方法 采用人结肠上皮细胞株NCM460为对照,对人结直肠癌细胞株HCT116和SW480采用qRT-PCR检测细胞的miR-1273g-3p表达。采用Western blot检测TGF-β和Smad4蛋白的表达。将miR-1273g-3p抑制剂转染至HCT116和SW480细胞中(miR-1273g-3p抑制剂组),并设立转染抑制剂对照剂的空载对照(抑制剂对照组)。采用qRT-PCR验证转染效果。将转染后的HCT116细胞皮下注射至BALB/c裸鼠体内。采用qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞中TGF-β和Smad4 mRNA和蛋白的表达。采用细胞增殖和细胞毒性分析(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、划痕实验和transwell小室侵袭实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。通过BiBiServ及TargetScan网站预测mi R-1273g-3p与TGF-β的相关性,并用双荧光素酶报告基因实验验证miR-1273g-3p与TGF-β的结合情况。结果 与人结肠上皮细胞NCM460比较,人结直肠癌细胞HCT116和SW480中miR-1273g-3p、TGF-β蛋白和Smad4蛋白均高表达(均P<0.01)。瞬时转染48 h后,与抑制剂对照组比较,miR-1273g-3p抑制剂组miR-1273g-3p表达降低(P<0.01),TGF-β和Smad4的mRNA和蛋白表达均减少(均P<0.01),细胞的增殖、迁移和侵袭能力均降低(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果表明,miR-1273g-3p可以靶向结合TGF-β;SW480细胞中,miR-1273g-3p抑制野生型TGF-β-3’ untranslated region(UTR)质粒转染的荧光素酶活性(P<0.01),而对突变型TGF-β-3’UTR质粒转染的荧光素酶活性无影响(P>0.05)。结论 抑制miR-1273g-3p的表达可抑制结直肠癌细胞HCT116和SW480的增殖、迁移和侵袭能力。此作用可能与TGF-β/Smad4信号通路有关。

SIK1和miR-1273g-3p在结直肠癌细胞SW480中的表达及临床意义

目的:探讨SIK1与miR-1273g-3p在结直肠癌细胞SW480中表达的相关性,分析其与临床预后的关系。方法:分别通过qRT-PCR和Western blot方法检测miR-1273g-3p和SIK1在人结肠上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞SW480中的表达情况,将miR-1273g-3p抑制剂转染SW480(抑制剂组),并设立空载对照(抑制剂对照组)。采用免疫印迹实验验证SIK1与miR-1273g-3p的相关性。采用免疫组化法检测SIK1在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达水平,分析SIK1与结直肠癌(CRC)患者临床病理特征间的关系,采用Kaplan-Meier曲线分析生存预后,采用Cox比例风险回归模型进行单因素及多因素分析。结果:与NCM460细胞相比,SW480细胞中miR-1273g-3p呈高表达(P<0.01),SIK1呈低表达(P<0.0001)。与抑制剂对照组相比,抑制剂组中miR-1273g-3p的表达降低(P<0.01);抑制miR-1273g-3p的表达后,SIK1的表达升高,差异有统计学意义(P<0.0001)。免疫组化结果显示,SIK1在结直肠癌组织中的表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.026)。SIK1的表达与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期密切相关(P<0.05);SIK1阳性和阴性表达患者5年生存率分别为53.7%和33.1%,差异有统计学意义(P=0.021)。SIK1表达情况(P=0.027)、肿瘤大小(P=0.019)、淋巴结转移(P<0.001)、TNM分期(P<0.001)与CRC患者的OS存在相关性;SIK1的低表达(P=0.030)和TNM的高分期(P<0.001)是影响OS的独立危险因素。结论:miR-1273g-3p可能通过调控SIK1的表达来促进结直肠癌的发生发展,可为CRC的诊治提供参考。

慢性丙型肝炎外周血miR-1273g-3p水平变化及其诊断肝纤维化分期的效能分析

目的探讨检测血清miR-1273g-3p水平诊断慢性丙型肝炎(CHC)患者肝纤维化分期的效能。方法我院诊治的57例CHC患者和同期入选的21例经体检显示为正常的健康人,采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-1273g-3p水平。CHC患者接受长效干扰素α2b联合利巴韦林标准疗法治疗12 m,并接受肝穿刺活检行组织病理学检查。结果 13例肝组织呈F0期患者血清miR-1273g-3p相对水平为(1.02±0.3),20例F1-2期患者为(1.68±0.26),24例F3-4期患者为(4.21±0.42),存在肝纤维化的CHC患者血清miR-1273g-3p相对水平显著高于健康人【(1.03±0.2),P<0.05】;在抗病毒治疗12 m末,CHC F0期、F1-2期和F3-4期患者血清miR-1273g-3p相对水平依次变化为(1.03±0.4)、(1.43±0.22)和(3.97±0.2),均显著低于治疗前(P<0.05);在治疗前,分别以血清miR-1273g-3p水平>1.68和血清miR-1273g-3p水平>4.20为截断点诊断存在肝纤维化和显著肝纤维化,其ROC曲线下面积(AUC)分别为0.830,95%CI为0.714～0.973,诊断的灵敏度为72.2%,特异度为86.4%,和0.864,95%CI为0.701～0.976,诊断的灵敏度为83.6%,特异度为78.4%;在治疗后,经肝组织病理学检查发现CHC患者F0期、F1期、F2期、F3、F4期依次为15例、9例、14例、11例、8例,血清miR-1273g-3p水平诊断存在肝纤维化和显著肝纤维化的效能仍然较好。结论血清miR-1273g-3p水平随着CHC患者肝纤维化进展而逐渐升高,在抗病毒治疗后,随着肝纤维化的缓解而降低,因而具有一定的判断肝纤维化程度的效能,值得进一步研究。

微小RNA-1273g-3p对人结直肠癌HCT116和SW480细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨微小RNA(MicroRNA,miR)-1273g-3p对结直肠癌细胞增殖和迁移的调控作用.方法:将miR-1273g-3p模拟物分别转染人结肠癌细胞(Human colon cancer cell,HCT116)和人结肠腺癌细胞(Human colon adenocarcinoma,SW480)细胞株,通过聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)测定miR1273g-3p的表达情况;四唑盐(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测miR-1273g-3p对细胞增殖的作用;Transwell实验检测细胞的迁移能力.结果:转染miR-1273g-3p模拟物后,结直肠癌HCT116和SW480细胞miR-1273g-3p相对表达量明显上调;MTT和Transell实验结果显示,过表达miR-1273g-3p能明显促进HCT116和SW480细胞的增殖和迁移(P<0.01).结论:miR-1273g-3p具有促进结直肠癌HCT116和SW480细胞株增殖和迁移的作用.

血清miR-1273g-3p在慢性丙型肝炎肝纤维化诊疗中的作用研究

目的探讨血清微小RNA(miR)-1273g-3p在慢性丙型肝炎(CHC)肝纤维化诊疗中的作用。方法选取2018年1月至2020年1月就诊于河北省石家庄市人民医院消化内科的CHC患者60例作为研究组,另选取同期健康体检人员60例作为健康对照组,其中研究组患者予利巴韦林片联合强肝胶囊治疗,共治疗24周。研究组患者治疗前首先通过肝穿刺活检术进行肝组织病理学检查,对肝纤维化分期情况进行判断,分析CHC肝纤维化与血清miR-1273g-3p的相关性,并比较2组治疗前后血清miR-1273g-3p相对表达量变化情况。结果研究组CHC肝纤维分期F 0期14例,F 1~2期21例,F 3~4期25例。与健康对照组比较,研究组CHC肝纤维化F 1~2期及F 3~4期患者miR-1273g-3p相对表达量均升高(P<0.05),F 0期患者与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),其中研究组患者血清miR-1273g-3p相对表达量随着肝纤维化分期严重程度的增加而明显升高(P<0.05),经Spearman秩相关性分析显示两者呈正相关(r=0.656,P<0.05)。与本组治疗前比较,研究组CHC肝纤维化F 1~2期及F 3~4期患者治疗后血清miR-1273g-3p相对表达量均降低(P<0.05),研究组CHC肝纤维化F 1~2期及F 3~4期患者治疗后血清miR-1273g-3p相对表达量均高于健康对照组(P<0.05);研究组CHC肝纤维化F 0期患者和健康对照组治疗前后血清miR-1273g-3p相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05),且2组组间比较差异也无统计学意义(P>0.05)。结论血清miR-1273g-3p可作为评估CHC肝纤维化程度的重要指标,对CHC肝纤维化的分期诊断及预后评估均有指导意义。

miR-1273g-3p通过靶向CNR1调节A549细胞迁移能力

目的寻找hsa-miR-1273g-3p在人肺腺癌细胞A549中的特异性靶标并探索其生物学功能。方法定量PCR（qPCR）检测miR-1273g-3p在人肺癌细胞A549、H460和H1299中表达情况，利用生物信息学方法预测miR-1273g-3p靶基因，qPCR、免疫印迹（Western Blot）和荧光素酶实验确证靶标，划痕实验和MTS实验验证miR-1273g-3p的生物学功能。结果miR-1273g-3p在非小细胞肺癌细胞系A549、I-1460和H1299中高表达：qPCR、Western印迹和荧光素酶实验证实miR-1273g-3p能够靶向CNR1，可以在mRNA与蛋白水平上调控CNR1的表达；miR-1273g-3p能够通过改变CNR1的表达水平影响A549的细胞迁移能力，对细胞增殖影响不明显。结论研究证明CNR1是miR-1273g-3p的靶基因，揭示miR-1273g-3p通过靶向CNR1影响A549细胞迁移的新功能。