热带气候对东北地区老年原发性高血压病人血压、外周血microRNA-146a及Hcy的影响

目的 探讨热带气候对东北地区老年原发性高血压病人血压及外周血microRNA-146a、Hcy的影响。方法 选取2018年10月至2022年1月三亚中心医院收治的东北三省来三亚过冬的老年原发性高血压病人252例(研究组),同期选取三亚本地老年原发性高血压病人126例(对照组)。分别在来三亚第1周、第3个月、第6个月时测量病人血压,检测外周血microRNA-146a和Hcy水平,统计2组的血压控制率、不良反应和并发症发生情况。结果 第6个月时,研究组的血压控制率高于对照组(P<0.05),且研究组第6个月时的血压控制率高于第1周时(P<0.05)。研究组的收缩压和舒张压、microRNA-146a和Hcy水平在来三亚第1周、第3个月和第6个月时逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。在第3个月和第6个月时,研究组的收缩压和舒张压、microRNA-146a和Hcy水平均低于对照组(P<0.05)。结论 热带气候可使东北地区老年原发性高血压病人的平滑肌松弛,降低血压,从而减轻炎症反应,降低microRNA-146a及Hcy水平,减少高血压相关并发症及不良事件。

不同疾病活动度炎症性肠病患者血清microRNA-146a-5p、microRNA-145水平的变化及与免疫调节的相关性

目的 探讨不同疾病活动度炎症性肠病(IBD)患者血清microRNA-146a-5p (miR-146a-5p)、microRNA-145(miR-145)水平的变化及与免疫调节的相关性。方法 选取2021年6月—2022年6月在西南医科大学附属中医医院就诊的88例IBD患者作为IBD组,其中溃疡性结肠炎(UC)43例,克罗恩病(CD)45例。另取同期该院86例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清和肠黏膜组织miR-146a-5p、miR-145表达,流式细胞术检测Th1、Th2,酶联免疫吸附试验测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-12(IL-12)水平。Pearson法分析患者miR-146a-5p、miR-145表达与Th1/Th2的相关性。结果 与对照组比较,UC组和CD组miR-145相对表达量降低(P <0.05),Th1、Th1/Th2升高(P <0.05);与UC组比较,CD组miR-145相对表达量降低(P <0.05),Th1、Th1/Th2升高(P <0.05)。对照组、UC组、CD组miR-146a-5p都在固有层中表达。UC组和CD组miR-146a-5p表达水平高于对照组(P <0.05)。UC组和CD组TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-12水平高于对照组(P <0.05)。Pearson相关性分析结果表明,miR-146a-5p、miR-145表达与Th1/Th2均呈负相关(r=-0.424和-0.395,均P=0.000)。miR-146a-5p、miR-145诊断UC的曲线下面积(AUC)分别为0.850和0.794,敏感性分别为79.5%(95%CI:0.718,0.857)和74.4%(95%CI:0.696,0.822),特异性分别为94.3%(95%CI:0.982,0.896)和72.5%(95%CI:0.679,0.773)。miR-146a-5p、miR-145诊断CD的AUC分别为0.927(95%CI:0.875,0.977)和0.846(95%CI:0.803,0.902),敏感性分别为92.3%(95%CI:0.875,0.978)和71.9%(95%CI:0.668,0.773),特异性分别为94.3%(95%CI:0.991,0.892)和90.9%(95%CI:0.945,0.847)。miR-146a-5p、miR-145对CD的诊断效能较高。结论 不同疾病活动度IBD患者血清miR-146a-5p、miR-145表达与免疫调节呈负相关。

肾病综合征患者尿液外泌体microRNA-146a、microRNA-200p表达与肾损伤的关系

目的探讨肾病综合征(NS)患者尿液外泌体microRNA-146a(miR-146a)、microRNA-200p(miR-200p)表达与肾损伤的关系。方法选取2019年8月—2022年8月成都大学附属医院收治的106例NS患者为观察组,另选取120例同期来医院体检的健康者为对照组。根据NS患者是否发生肾损伤分为非损伤组74例和损伤组32例。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测研究对象的尿液外泌体miR-146a、miR-200p表达。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-146a、miR-200p对NS患者肾损伤的诊断效能;采用Pearson法分析尿液外泌体miR-146a、miR-200p与肾功能指标的相关性;采用多因素Logistic逐步回归模型分析影响NS患者肾损伤的相关因素。结果观察组尿液外泌体miR-146a表达高于对照组(P<0.05),miR-200p表达低于对照组(P<0.05)。非损伤组尿液外泌体miR-146a表达低于损伤组(P<0.05),miR-200p表达高于损伤组(P<0.05)。miR-146a、miR-200p诊断NS患者肾损伤的曲线下面积(AUC)分别为0.873(95%CI:0.822,0.924)、0.844(95%CI:0.793,0.895),最佳截断值分别为4.08和1.99,特异性分别为67.57%和60.81%,敏感性分别为93.75%和93.75%,两者联合诊断的AUC为0.927(95%CI:0.896,0.958),特异性为85.14%,敏感性为87.50%。非损伤组与损伤组的尿蛋白量、白蛋白、肾小球滤过率、尿素氮、血肌酐、血尿酸比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,尿液外泌体miR-146a表达与尿蛋白量、尿素氮、血肌酐呈正相关(r=0.402、0.447和0.613,均P=0.000),与白蛋白、肾小球滤过率呈负相关(r=-0.369和-0.415,均P=0.000);尿液外泌体miR-200p表达与尿蛋白量、尿素氮、血肌酐呈负相关(r=-0.357、-0.405和-0.534,均P=0.000),与白蛋白、肾小球滤过率呈正相关(r=0.428和0.513,P=0.000)。多因素Logistic逐步回归分析结果显示,肾小球滤过率降低[OR=2.591(95%CI:1.687,3.980)]、血肌酐升高[OR=2.342(95%CI:1.576,3.480)]、miR-146a≥4.08[OR=3.050(95%CI:1.913,4.862)]、miR-200p≤1.99[OR=3.347(95%CI:2.083,5.378)]是NS患者肾损伤的危险因素(P<0.05)。结论尿液外泌体miR-146a、miR-200p异常表达与NS患者肾损伤有关,可作为诊断NS患者肾损伤的生物学指标,且两者联合的诊断效能更好,具有临床推广价值。

MicroRNA-146a Promotes Embryonic Stem Cell Differentiation towards Vascular Smooth Muscle Cells through Regulation of Kruppel-like Factor 4

Objective Vascular smooth muscle cell(VSMC)differentiation from stem cells is one source of the increasing number of VSMCs that are involved in vascular remodeling-related diseases such as hypertension,atherosclerosis,and restenosis.MicroRNA-146a(miR-146a)has been proven to be involved in cell proliferation,migration,and tumor metabolism.However,little is known about the functional role of miR-146a in VSMC differentiation from embryonic stem cells(ESCs).This study aimed to determine the role of miR-146a in VSMC differentiation from ESCs.Methods Mouse ESCs were differentiated into VSMCs,and the cell extracts were analyzed by Western blotting and RT-qPCR.In addition,luciferase reporter assays using ESCs transfected with miR-146a/mimic and plasmids were performed.Finally,C57BL/6J female mice were injected with mimic or miR-146a-overexpressing ESCs,and immunohistochemistry,Western blotting,and RT-qPCR assays were carried out on tissue samples from these mice.Results miR-146a was significantly upregulated during VSMC differentiation,accompanied with the VSMC-specific marker genes smooth muscle-alpha-actin(SMαA),smooth muscle 22(SM22),smooth muscle myosin heavy chain(SMMHC),and h1-calponin.Furthermore,overexpression of miR-146a enhanced the differentiation process in vitro and in vivo.Concurrently,the expression of Kruppel-like factor 4(KLF4),predicted as one of the top targets of miR-146a,was sharply decreased in miR-146a-overexpressing ESCs.Importantly,inhibiting KLF4 expression enhanced the VSMC-specific gene expression induced by miR-146a overexpression in differentiating ESCs.In addition,miR-146a upregulated the mRNA expression levels and transcriptional activity of VSMC differentiation-related transcription factors,including serum response factor(SRF)and myocyte enhancer factor 2c(MEF-2c).Conclusion Our data support that miR-146a promotes ESC-VSMC differentiation through regulating KLF4 and modulating the transcription factor activity of VSMCs.

大疱性类天疱疮患者血清及疱液外泌体microRNA-146b-5p的表达及其临床意义

目的探讨大疱性类天疱疮(BP)患者血清及疱液外泌体microRNA-146b-5p表达的意义。方法选取2019年6月—2021年12月青岛市中医医院收治的79例BP患者作为研究组。另选取同期该院体检的61例健康群众作为对照组。收集两组基本资料、生化指标,采用实时荧光定量聚合酶链反应测定microRNA-146b-5p表达情况。采用多因素Logistic逐步回归分析影响BP诊断的因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清外泌体microRNA-146b-5p对早期BP的诊断效能,采用Pearson分析BP患者血清及疱液外泌体microRNA-146b-5p表达与病情严重程度的相关性。结果两组性别、年龄、体质量指数≥25 kg/m^(2)、合并高血压、合并糖尿病、合并高脂血症、合并冠心病、吸烟史、饮酒史,血肌酐、血尿酸、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、血红蛋白、白蛋白、白细胞计数、血小板计数、降钙素原、肿瘤坏死因子α、CD14^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞、白细胞介素6、白细胞介素4、白细胞介素21、血清25-羟维生素D比较,差异无统计学意义(P>0.05)。研究组C反应蛋白、OX40、OX40L、巨噬细胞游走抑制因子、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白、血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量均高于对照组,研究组CD4^(+)T淋巴细胞水平低于对照组。多因素Logistic逐步回归分析结果显示:血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量[O^R=5.191(95%CI:2.136,12.617)]、CD4^(+)T淋巴细胞水平[O^R=4.894(95%CI:2.014,11.894)]、ECP[O^R=4.076(95%CI:1.677,9.905)]是BP诊断的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量诊断BP的最佳截断值为1.11,敏感性为73.42%(95%CI:0.621,0.824),特异性为80.33%(95%CI:0.678,0.890),曲线下面积为0.766(95%CI:0.671,0.861)。Pearson相关性分析显示,BP患者疱液外泌体microRNA-146b-5p与BPDAI评分呈正相关(r=0.741,P<0.05),血清microRNA-146b-5p相对表达量与BPDAI评分呈正相关(r=0.736,P<0.05)。结论外泌体microRNA-146b-5p不仅与BP发生有关,也可能与其病情进展有关,且血清外泌体microRNA-146b-5p相对表达量诊断BP发生效能良好。

血清microRNA-506、microRNA-146a对急性淋巴细胞白血病患儿预后不良的预测价值研究

目的 探讨血清microRNA-506(miR-506)联合microRNA-146a(miR-146a)对急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿预后不良的预测价值。方法 随机选取江南大学附属儿童医院2020年4月—2022年4月收治的76例ALL患儿为研究组,同时选取同期在本院体检的健康儿童80例为对照组。检测并比较所有儿童血清miR-506、miR-146a表达。对研究组患儿进行规范化治疗,并进行为期1年的随访,记录患儿的预后情况,比较不同预后患儿血清miR-506、miR-146a表达。采用多因素逐步Logistic回归模型分析影响患儿预后的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-506联合miR-146a对患儿预后的预测价值。结果 研究组miR-506、miR-146a mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05)。ALL患儿预后不良发生率为27.63%(21/76)。预后不良患儿miR-506、miR-146a mRNA相对表达量高于预后良好患儿(P<0.05)。预后不良与预后良好患儿的性别、年龄、体质量指数、免疫分型比较,差异均无统计学意义(P>0.05);预后不良患儿危险程度为高危占比、初诊白细胞计数在100×10~9/L以上占比高于预后良好患儿(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示,miR-506■是ALL患儿预后不良的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-506预测ALL患儿预后的敏感性为76.20%(95%CI:0.143,0.952),特异性为63.60%(95%CI:0.036,0.964);miR-146a预测ALL患儿预后的敏感性为76.20%(95%CI:0.095,0.952),特异性为56.40%(95%CI:0.018,0.945);两者联合预测ALL患儿预后的敏感性为90.50%(95%CI:0.048,0.962),特异性为89.10%(95%CI:0.018,0.982)。结论 miR-506与miR-146a在ALL患儿血清中异常高表达,是影响患儿预后的独立危险因素,且miR-506联合miR-146a可有效预测ALL患儿预后不良。

LPS对COPD大鼠肺动脉平滑肌细胞microRNA-146a的表达及合成分泌IL-6的诱导作用

目的通过分析microRNA-146a在脂多糖(LPS)诱导慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠远端肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中不同时间点表达的变化及与其合成分泌白细胞介素-6(IL-6)的相关性分析,探讨microRNA-146a对PASMCs炎症反应的调控作用。方法建立经典的COPD大鼠模型,采用酶消化联合组织块贴壁法,培养原代大鼠远端PASMCs,将第4代PASMCs分成对照组及LPS组,对照组不加入任何干预剂,LPS组用终浓度为1μg/m L的LPS诱导细胞;两组细胞分别培养12、24、48、72 h后采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-6的表达水平;用实时荧光定量PCR(Taqman探针法)检测细胞microRNA-146a的表达情况,并将细胞上清液中IL-6的表达量与microRNA-146a表达情况进行相关性分析。结果与对照组相比,LPS诱导组PASMCs中microRNA-146a的表达量在12 h开始升高,并呈递增趋势,72 h达峰(P<0.01);同时,LPS组细胞上清液中IL-6的表达量亦于12 h时升高,并且升高明显,72 h可达到高峰(P<0.01);经相关性分析,两者的表达量呈正相关(r=0.981,P=0.00)。结论 COPD大鼠PASMCs在LPS诱导后合成分泌IL-6,同时PASMCs中microRNA-146a表达升高,两者表达量呈正相关,推测其可能与PASMCs的炎症反应调控有关。

类风湿性关节炎患者microRNA-146a的表达及与血清学指标的相关性

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是常见的以关节滑膜慢性炎症为主要特征的自身免疫性疾病,其主要病理改变为关节滑膜明显增厚并有大量炎症细胞浸润,血管翳形成以及软骨组织的侵蚀与破坏[1]。microRNA可被分泌释放到细胞外,参与多种炎性和自身免疫性疾病的发病过程[2]。Micro-RNAs（miRNAs）是一类短的（大约20～22个核苷酸）非编码RNA,介导RNA干扰和在翻译水平抑制蛋白表达。miRNAs与自身免疫性疾病进程有关且可能参与RA新的调控机制[2-4]。miRNA-146a与类风湿性关节炎密切相关,TNF-α[5]和IL-17[6]目前被认为是RA的一种重要致炎因子,均与疾病活动程度相关;而C-反应蛋白（C-reactive protein,CRP）[7]是一种急性时相反应蛋白,可以反映患者的疾病活性;一直以来,类风湿因子（rheumatoid factor,RF）是美国风湿病协会RA诊断标准中的血清学指标之一[8-9];因此本研究采用实时荧光定量PCR检测miR-146a在RA患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononu-clear cell,PBMC）表达水平,同时检测血清CRP、RF、IL-I7、TNF-α含量,分析miR-146a在RA外周血中的表达及与CRP、RF、IL-I7、TNF-α的相关性,有助于进一步探讨其在RA发病及疾病进展中的意义。

MicroRNA-146a对急性胰腺炎胰腺腺泡细胞增殖及凋亡的影响及其机制研究

目的探讨microRNA-146a(miR-146a)对急性胰腺炎胰腺腺泡细胞增殖及凋亡的影响,并分析相关机制。方法体外诱导并培养急性胰腺炎MPC-83细胞,将急性胰腺炎MPC-83细胞分为阴性对照组(mimics-NC组)、过表达miR-146a组(miR-146a-mimics组),另以未经诱导处理的MPC-83细胞为空白对照组(NG组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组MPC-83细胞miR-146a,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6),Western blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、核转录因子-κB p65(NF-кB p65)蛋白的表达。结果急性胰腺炎细胞模型建立成功,成功转染后,与NG组、mimicsNC组比较,miR-146a-mimics组细胞凋亡率,TNF-α、IL-6、Bax和NF-κB p65蛋白相对表达量降低(P<0.05),细胞存活率、PCNA和Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论过表达miRNA-146a可抑制急性胰腺炎MPC-83细胞凋亡并促进细胞增殖,其作用可能通过抑制NF-кB通路活化来实现。

广西壮族人群microRNA-146a基因多态性与肝癌遗传易感性的相关性研究

目的探讨广西壮族人群microRNA-146a基因rs2910164位点多态性与肝癌遗传易感性的关系。方法应用病例-对照研究方法,分别选择广西肝癌高发区壮族肝癌患者110例以及健康对照者110名,采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)对microRNA-146a基因rs2910164位点进行SNP分型,以χ2检验比较microRNA-146a基因rs2910164位点基因型在病例组与对照组之间的分布差异,采用非条件Logistic回归分析其多态基因型与肝癌发生危险性的关系。结果病例组中microRNA-146a基因rs2910164位点的CG基因型分布频率高于对照组,差异有统计学意义(P=0.026)。Logistic回归分析结果显示,携带CG基因型者患肝癌风险增高(OR=3.473,95%CI:1.116～10.802,P=0.032),GG基因型在两组间分布频率的差异无统计学意义(P>0.05)。其等位基因C和G在病例组中的分布频率分别为62.7%和37.3%,在对照组中的分布频率分别为67.7%和32.3%,等位基因C或G在两组间分布频率的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 microRNA-146a基因rs2910164位点的CG基因型携带者的肝癌发病风险显著增加,其CG基因型可能是广西壮族人群肝癌发病的遗传易感因素之一。

人microRNA-146a慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的构建针对has-miR-146a的慢病毒表达载体,并鉴定成熟has-miR-146a在细胞内表达水平。方法PCR扩增pri-miR-146a,克隆于慢病毒载体plenti-GFP中,转染293FT细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染Jurkat细胞。结果成功构建了has-miR-146a的慢病毒表达载体,建立了高效转染系统。结论建立了高效稳定表达has-miR-146a的慢病毒转染系统。

复发性流产绒毛组织中MicroRNA-146a-5p、MicroRNA-515-5p表达水平及与血管新生的相关性

目的:分析复发性流产(RSA)患者绒毛组织MicroRNA-146a-5p、MicroRNA-515-5p表达水平及与新生血管关系。方法:将本院2018年1月-2020年12月收治的RSA患者84例(RSA组)、正常妊娠自愿行人工流产手术60例(对照组),采用实时荧光定量法(PCR)技术检测两组绒毛组织内MicroRNA-146a-5p、MicroRNA-515-5p以及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平,蛋白免疫印迹法检测其蛋白表达水平,分析RSA组绒毛组织MicroRNA-146a-5p、MicroRNA-515-5p与VEGF关系。结果:RSA组MicroRNA-146a-5p(0.48±0.16)及VEGF mRNA(0.31±0.08)表达量均低于对照组MicroRNA-146a-5p(1.03±0.17)和VEGF mRNA(1.03±0.18),MicroRNA-515-5p mRNA表达量(1.29±0.26)高于对照组(0.47±0.15)(均P<0.05)。且随着RSA组流产次数增加,MicroRNA-146a-5p及VEGF mRNA及蛋白表达量呈下降趋势,MicroRNA-515-5p mRNA及蛋白表达量呈上升趋势(均P<0.05)。RSA组MicroRNA-146a-5p表达量与VEGF呈正相关(r=0.53,P<0.05),MicroRNA-515-5p与VEGF呈负相关(r=-0.49,P<0.05)。结论:RSA患者绒毛组织Micr-146a-5p表达下降,MicroRNA-515-5p表达上升,且与VEGF存在相关性,推测Micr-146a-5p、MicroRNA-515-5p可能通过影响患者血管生成而引起流产,但具体作用机制有待深入研究。

MicroRNA-1469低表达与食管鳞状细胞癌临床病理特征及预后的关系

目的探讨micro RNA-1469(mi R-1469)低表达与食管鳞状细胞癌临床病理特征及预后的关系。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测食管鳞癌术后肿瘤组织中mi R-1469的表达情况,χ2检验分析不同临床病理特征患者mi R-1469的表达水平,Kaplan-Meier方法绘制生存曲线,Log-rank检验比较不同组别生存曲线的差异。结果 mi R-1469的表达水平与浸润深度、淋巴结转移及病理分期差异有统计学意义(P<0.05)。生存分析提示mi R-1469低表达的患者其无瘤生存率(17.9%vs 42.8%,P=0.004)及术后5年总生存率(29.3%vs 47.1%,P=0.027)均降低。在N1-3的患者中,低表达mi R-1469组的5年无瘤生存率低于高表达组(7.3%vs 31.5%,P=0.043)。结论通过检测mi R-1469的表达情况,可以预测食管癌患者疾病进程及术后临床预后。

MicroRNA-146b在大鼠肾间质纤维化模型中的表达及意义

目的观察MicroRNA-146b在大鼠单侧输尿管梗阻肾间质纤维化模型中的表达,探讨其在肾间质纤维化发生、发展中的意义。方法选择20只SD成年雄性大鼠,分为Sham组和UUO组。Sham组大鼠仅游离左侧输尿管,但不结扎,而UUO组大鼠结扎左侧输尿管。并分别于建模后第7天、第14天采集各组5只大鼠的左侧肾脏组织,HE染色和Masson染色评估肾间质损伤及纤维化程度,免疫组织化学检测肾组织中TGF-β1表达水平。qRTPCR检测肾组织中microRNA-146b的相对表达量。结果与相同时点Sham组相比,UUO组大鼠肾间质损伤评分、肾间质纤维化评分、肾组织microRNA-146b和TGF-β1表达水平均升高(P<0.05)。与7dUUO组大鼠相比,14dUUO组大鼠肾间质损伤评分、肾间质纤维化评分、肾组织microRNA-146b和TGF-β1表达水平升高(P<0.05)。UUO组大鼠肾组织MicroRNA-146b表达水平与肾间质损伤评分、肾间质纤维化评分、TGF-β1表达水平呈正相关(r=0.858、0.765、0.647,P<0.05)。结论UUO组大鼠肾组织microRNA-146b表达明显上调,且随着间质纤维化程度加重,表达越高。microRNA-146b可能通过参与对TGF-β1/smad信号通路的调控介导肾间质纤维化发生、发展。

肝细胞癌中microRNA-1469表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨microRNA-1469(miR-1469)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法选取2010年1月至2012年12月于西安交通大学第一附属医院手术切除的HCC组织和对应的癌旁组织(距肿瘤边缘>2 cm)标本各76例,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HCC组织及癌旁组织中miR-1469的表达水平,分析miR-1469表达与HCC临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存曲线分析miR-1469表达与HCC患者3 a总体生存率的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HCC细胞系HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402及正常肝细胞系LO2中miR-1469的表达水平;培养Hep3B和SMMC-7721细胞,当细胞融合度达到70%时,分别应用miR-1469 mimics和相应的阴性对照脂质体转染Hep3B细胞,应用miR-1469 inhibitors和相应的阴性对照脂质体转染SMMC-7721细胞。转染48 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中miR-1469的表达水平,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和平板克隆形成实验观察miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞增殖及克隆形成能力的影响,流式细胞术检测miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞周期的影响,Transwell实验观察miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞侵袭及迁移能力的影响,Western blot法检测Hep3B和SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白表达。结果miR-1469在HCC组织和癌旁组织中的相对表达量分别为0.71±0.03、5.49±0.04,HCC组织中miR-1469相对表达量显著低于癌旁组织( P <0.05)。miR-1469表达与肿瘤直径、肿瘤数目、TNM分期、组织分化程度及微血管侵犯相关( P <0.05),而与患者的年龄、性别、血清甲胎蛋白水平、静脉侵犯、Edmondson病理分级、肿瘤部位无相关性( P >0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,miR-1469高表达HCC患者的3 a总体生存率显著高于低表达者( P <0.05)。miR-1469在LO2、HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402细胞中的相对表达量分别为1.01±0.02、0.45±0.01、0.05±0.01、0.61±0.02、0.14±0.01、0.29±0.02;miR-1469在HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402细胞中的相对表达量显著低于LO2细胞( P <0.05);其中Hep3B细胞中miR-1469表达量最低,SMMC-7721细胞中miR-1469表达量最高。miR-1469 mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞中miR-1469相对表达量分别为4.47±0.15、0.05±0.01,miR-1469 mimics组Hep3B细胞中miR-1469相对表达量显著高于miR-1469 control mimics组( P <0.05)。miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞中miR-1469相对表达量分别为0.20±0.11、1.00±0.00,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞中miR-1469相对表达量显著低于miR-1469 control inhibitors组( P <0.05)。MTT结果显示,培养24、48、72 h时,miR-1469 mimics组Hep3B细胞增殖能力显著低于miR-1469 control mimics组,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞增殖能力显著高于miR-1469 control inhibitors组( P <0.05)。平板克隆实验结果显示,miR-1469 mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞的克隆数分别为17.00±1.73、65.67±2.33,miR-1469 mimics组Hep3B细胞的克隆形成能力显著低于miR-1469 control mimics组( P <0.05);miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞的克隆数分别为93.00±2.08、27.67±1.45,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞的克隆形成能力显著高于miR-1469 control inhibitors组( P <0.05)。流式细胞术结果显示,与miR-1469 control mimics组比较,miR-1469 mimics组G 1期Hep3B细胞显著增多,S期Hep3B细胞显著减少( P <0.05),但2组G 2期细胞比例比较差异无统计学意义( P >0.05)。与miR-1469 control inhibitors组比较,miR-1469 inhibitors组G 1期SMMC-7721细胞显著减少,S期SMMC-7721细胞显著增多( P <0.05);但2组G 2期SMMC-7721细胞比例比较差异无统计学意义( P >0.05)。Transwell实验结果显示,miR-1469 mimics组Hep3B细胞迁移数和侵袭数分别为59.00±2.08、29.00±2.08,miR-1469 control mimics组Hep3B细胞迁移数和侵袭数分别为35.00±1.53、20.33±1.45;miR-1469 mimics组Hep3B细胞的迁移和侵袭能力显著高于miR-1469 control mimics组( P <0.05)。miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞迁移数和侵袭数分别为26.00±1.16、17.33±0.88,miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞迁移数和侵袭数分别为56.33±3.18、44.67±1.45;miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞的迁移和侵袭能力显著低于miR-1469 control inhibitors组( P <0.05)。Western blot结果显示,miR-1469 mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞中NDRG1蛋白相对表达量分别为0.23±0.04、1.00±0.00,miR-1469 mimics组Hep3B细胞中NDRG1蛋白相对表达量显著低于miR-1469 control mimics组( P <0.05);miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白相对表达量分别为3.90±0.17、1.00±0.00,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白相对表达量显著高于miR-1469 control inhibitors组( P <0.05)。结论 MiR-1469在HCC中表达下调,且其表达与肿瘤数目、肿瘤直径、TNM分期、组织分化程度、微血管侵犯及患者预后密切相关;miR-1469可能通过靶向结合NDRG1并抑制其表达而抑制HCC细胞的增殖、周期、侵袭和迁移。

microRNA-122和microRNA-146a联合检测有望用于布病诊断

目的:研究布病患者血浆microRNA-122(miR-122)和microRNA-146a(miR-146a)作为布病新型诊断标记的可行性。方法:采用实时定量PCR方法,测定验证样本(56例未经治疗的布病患者、32例经过治疗的布病患者和40例健康志愿者)血浆中microRNAs的表达水平。结果:miR-122和miR-146a在布病患者和健康志愿者之间的表达水平差异有统计学意义(P<0. 001),并且表达水平与布病患者血清抗体有关,但与患者是否经过抗生素治疗以及患者是否具有明显临床表现均无相关性。miR-122和miR-146a组合诊断的AUC值为0. 935,高于两者任何一个单独检测。结论:miR-122和miR-146a组合在布病诊断中具有潜在应用价值。

布病患者血清microRNA-146a表达及其与抗体滴度的关系研究

目的:研究microRNA-146a在布病患者血清中表达规律及其与血清滴度的关系。方法:采用定量PCR方法,测定布病患者和健康人血清中miR-146a的表达,并分析表达水平与血清抗体水平、就诊时间等彼此的相关性。结果:利用阳性参考品建立了miR-146a定量检测工作曲线,对20例布病阳性病例和20例正常人血清miR-146a进行了检测,布病患者血清中miR-146a显著低于正常人(P<0.001),miR-146a的水平与血清抗体滴度呈负相关(P<0.05)。结论:布鲁氏菌感染后患者血清中miR-146a表达被抑制,并且患者血清抗体滴度越高,抑制程度越高。

microRNA-146a重组慢病毒载体局部应用治疗免疫介导性内耳病的实验研究

目的自身免疫性内耳病(autoimmune inner ear disease,AIED)是目前临床上一部分可以有效治疗的内耳疾病,对其的研究工作具有重要的临床实际意义和实用价值,文中探讨microRNA-146a对免疫介导性内耳病(immune-mediated inner ear disease,IMIED)的免疫调节作用、及其治疗效果。方法采用钥孔戚血蓝蛋白抗原在已致敏的豚鼠圆窗龛局部免疫,制成IMIED动物模型30只,按配对设计分为microRNA-146a重组慢病毒组、空载慢病毒对照组、模拟手术对照组3组。microRNA-146a重组慢病毒组:鼓阶内注射microRNA-146a重组慢病毒;空载慢病毒对照组:鼓阶内注射慢病毒空载体;模拟手术对照组:鼓阶内注射PBS溶液。分别于免疫前、免疫后和鼓阶注射1周后,测试听觉功能和血清抗KLH特异性抗体水平变化。鼓阶内注射后1周(ABR试验后),每组3只动物行HE染色和光镜观察;另3只动物行荧光观察(慢病毒载体转染情况);,4只动物并测试内耳局部组织microRNA-146a的含量及其变化。结果 3组动物免疫后血清中特异性抗KLH抗体水平较免疫前升高,重组慢病毒载体组[(1.90±0.74)vs(0.09±0.01),P<0.05],空载体对照组[(2.20±0.75)vs(0.11±0.02),P<0.05],模拟手术组[(2.10±0.64)vs(0.11±0.03),P<0.05]。与免疫前对应耳比较,免疫后、鼓阶注射后ABRⅢ波平均阈值均增加(P<0.05);与免疫后对应耳比较,重组慢病毒载体鼓阶内注射后ABRⅢ波平均阈值降低(P<0.05)。重组慢病毒载体组内耳microRNA-146a含量(1290.0±660.0)较空载体对照组(369.5±73.9)和模拟手术组(476.6±148.0)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光观察显示:micro-RNA146a重组慢病毒载体在内耳中分布在骨螺旋唇、螺旋神经节传入纤维、螺旋韧带基底细胞、Corti器、血管纹等,内耳光镜观察显示内耳免疫炎性反应较空载慢病毒对照组和模拟手术对照组明显减轻。结论 micro-RNA146a重组慢病毒载体经鼓阶注射到内耳后,可在内耳广泛分布和转染,内耳组织中microRNA-146a的含量明显升高。重组micro-RNA146a慢病毒载体内耳导入可显著减轻内耳免疫炎性病理损伤和听觉功能障碍。

microRNA-146a对牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激下淋巴细胞分泌细胞因子的调节作用

目的探讨microRNA-146a(miR-146a)对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)脂多糖(LPS)刺激下淋巴细胞分泌细胞因子的作用。方法从小鼠脾脏收集淋巴细胞。实时定量聚合酶链反应和酶联免疫反应用于检测淋巴细胞在P.gingivalis LPS、miR-146a模拟物或抑制剂处理后细胞因子的表达。结果与P.gingivalis LPS未刺激组相比,P.gingivalis LPS能促进白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和IL-10表达(P<0.05),虽抑制骨保护素(OPG)mRNA水平(P<0.05),但分泌水平差异无统计学意义(P>0.05)。与阴性对照组相比,P.gingivalis LPS处理的淋巴细胞中miR-146a模拟物抑制IL-1β、IL-6和RANKL表达(P<0.05),促进IL-10和OPG表达(P<0.05),miR-146a抑制剂对这些细胞因子产生相反的效果(P<0.05)。结论miR-146a可通过抑制淋巴细胞IL-1β、IL-6和RANKL表达,促进IL-10和OPG表达,从而抑制P.gingivalis LPS的炎性作用,为骨改建提供良好的成骨环境。

阿尔茨海默病患者外周血microRNA-146a、Aβ1-42蛋白、tau蛋白的表达及临床意义

目的:探讨阿尔茨海默病患者外周血清中microRNA-146a、Aβ1-42蛋白、tau蛋白的表达及临床意义。方法:选取我院收治的阿尔茨海默病患者98例作为试验组,另选取50例健康者作为对照组。采用RT-PCR技术检测两组患者外周血清中microRNA-146a相对表达水平,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组患者外周血清中Aβ1-42蛋白及tau蛋白浓度。结果:试验组外周血清中microRNA-146a相对表达量、Aβ1-42蛋白、tau蛋白浓度分别为(2.45±0.43)pg/ml、(37.43±6.75)pg/ml、(22.87±4.51)pg/ml,对照组外周血清中microRNA-146a相对表达量、Aβ1-42蛋白、tau蛋白浓度(0.98±0.12)pg/ml、(51.26±9.24)pg/ml、(13.64±2.91)pg/ml,差异均有统计学意义(P<0.05);试验组患者microRNA-146a与Aβ1-42蛋白呈负相关性(r=-0.882,P<0.05),与tau蛋白无相关性(P>0.05)。结论:阿尔茨海默病患者外周血清中存在microRNA-146a、Aβ1-42蛋白、tau蛋白的差异表达,且microRNA-146a可能是通过调控Aβ1-42蛋白而不是tau蛋白进而参与阿尔茨海默病的发病。