MicroRNA-15b与糖尿病视网膜病变患者外周血VEGF及相关炎症因子的关系

目的分析microRNA-15b(miR-15b)与糖尿病视网膜病变(DR)患者外周血血管内皮生长因子(VEGF)及相关炎症因子的关系。方法前瞻性研究。选取2019年6月至2021年3月就诊于本院的140例糖尿病患者,按DR临床分期标准分组,即无DR(NDR)组、单纯型DR(SDR)组、增生型DR(PDR)组,另选30名同期本院健康体检者作为健康对照(NC)组。采用RT-PCR法测定血清miR-15b表达,通过ELISA法测定血清VEGF及炎症因子[细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素(IL)-1β、IL-8、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,采用流式细胞仪测定DR患者外周血微血管内皮功能指标[内皮祖细胞(EPC)、循环祖细胞(CPC)、内皮细胞(CEC)]比例。采用Pearson相关分析DR患者血清miR-15b与VEGF、炎症反应指标、微血管内皮功能指标的相关性;绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析miR-15b对DR的预测价值。结果4组受检者miR-15b、VEGF、炎症因子及微血管内皮功能指标水平相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05),其中血清miR-15b表达、EPC、CPC水平由低至高分别为PDR组、SDR组、NDR组、NC组。血清VEGF、ICAM-1、IL-1β、IL-8、hs-CRP、TNF-α及CEC水平由高至低分别为PDR组、SDR组、NDR组、NC组;血清miR-15b表达与VEGF、ICAM-1、IL-1β、IL-8、hs-CRP、TNF-α、CEC均呈负相关(均为P<0.05),与EPC、CPC均呈正相关(均为P<0.05)。miR-15b预测DR发生的AUC为0.869(95%CI为0.796~0.924),诊断临界值为0.68,灵敏度、特异度分别为82.15%、79.50%,约登指数为0.617。结论DR患者血清miR-15b表达降低,与外周血VEGF及炎症因子水平密切相关,且在微血管损伤及炎症反应中均有重要参与作用。

MicroRNA-15b在子宫内膜癌组织中的表达及其对子宫内膜癌细胞增殖的影响

目的探讨microRNA-15b(miR-15b)在子宫内膜癌组织中的表达及其对子宫内膜癌细胞增殖的影响。方法选取2013年2月至2017年2月新乡市中心医院收治的87例子宫内膜癌患者手术切除的子宫内膜癌组织,另选取45例因子宫肌瘤行子宫全切术患者的正常子宫内膜组织作为对照,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中miR-15b的表达,并分析miR-15b表达与患者临床病理特征的关系。培养人子宫内膜癌HEC-1A细胞,随机分为miR-15b模拟物组、对照序列组和空白对照组,采用实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-15b表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率和细胞周期变化。结果子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中miR-15b相对表达量分别为1.32±0.13、2.49±0.16,子宫内膜癌组织中miR-15b相对表达量低于正常子宫内膜组织(t=46.184,P<0.05);子宫内膜癌组织中miR-15b相对表达量与国际妇产科联合会分期、肌层浸润深度和淋巴结转移有关(P<0.05),与年龄、组织学类型、分化程度、是否累及淋巴管和血管无关(P>0.05)。与空白对照组和对照序列组比较,miR-15b模拟物组人子宫内膜癌细胞中miR-15b相对表达量显著增加(P<0.05),培养24、48、72、96 h时细胞增殖能力均降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),G_0+G_1期细胞比例显著增加(P<0.05),而G_2+M期细胞比例减少(P<0.05)。空白对照组与对照序列组人子宫内膜癌细胞中miR-156相对表达量、培养12、24、48、72、96 h时细胞增殖能力、细胞凋亡率及G_0+G期、S期和G_2+M期细胞比例比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-15b在子宫内膜癌组织中呈低表达,上调子宫内膜癌细胞中miR-15b基因表达可抑制细胞增殖,其机制可能与阻滞细胞周期及促进细胞凋亡有关。

MicroRNA-15b下调Bcl-2促进耐药肺癌细胞凋亡

目的探讨微小RNA-15b(microRNA-15b,miR-15b)对人肺癌耐药细胞A549/DDP凋亡的影响。方法采用体外转染法将MicroRNA-15b瞬时转染到A549/DDP细胞后,应用Real-time PCR检测A549/DDP细胞中MicroRNA-15b的表达情况;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡变化;并用Western印迹法(Western blot)检测细胞中Bcl-2表达。结果转染后miR-15b组的miR-15b表达水平显著增加(P<0.05);miR-15b组细胞凋亡率为:32.4%±5.1%,与Mock组(5.73%±1.2%)和miR-15b-Cont(6.24%±2.4%)比较,差异具有统计学意义(P<0.05);miR-15b组的Bcl-2表达量较对照组明显增加。结论 miR-15b可能通过下调Bcl-2的表达从而诱导A549/DDP细胞的凋亡,这可能为肺癌耐药的治疗提供新靶点。

microRNA-15b通过调节MET-PI3K-Akt通路对肺癌模型鼠免疫功能及高凝状态的影响研究

目的探究微小RNA(microRNA,miR)-15b通过调节MET-PI3K-Akt通路对肺癌模型鼠免疫功能及高凝状态的影响。方法人肺癌细胞A549分为阴性对照(negative control,NC)组、mimic组和inhibitor组,分别转染NC、miR-15b mimic和miR-15b inhibitor,通过皮下注射的方式构建肺癌荷瘤裸鼠模型。TUNEL染色检测凋亡。Western blot检测增殖蛋白CyclinD1、Ki67以及MET-PI3K-Akt通路水平。检测和比较两组的CD4^(+)、CD8^(+)水平与凝血功能。结果与NC组比较,mimic组的miR-15b水平(3.45±0.36)、凋亡指数(17.72±3.57)%、PT、APTT、NO、CD4^(+)(19.83±2.71%)和CD4^(+)/CD8^(+)水平(1.30±0.34)显著升高(P<0.05),CyclinD1和Ki67蛋白水平、全血黏度、ET1、MET、PI3K、Akt水平显著降低(P<0.05)。inhibitor组的miR-15b水平(0.52±0.07)、凋亡指数(1.35±0.41)%、PT、APTT、NO、CD4^(+)(19.83±2.71%)和CD4^(+)/CD8^(+)水平(1.30±0.34)降低(P<0.05),CyclinD1和Ki67蛋白水平、全血黏度、ET1、MET、PI3K、Akt水平升高(P<0.05)。结论在肺癌裸鼠模型中,miR-15b可以诱导肺癌细胞的凋亡和抑制增殖,并促进免疫功能改善高凝状态。

MicroRNA-15b-3p对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移能力的影响

目的 研究MicroRNA-15b-3p对HCC1937三阴性乳腺癌细胞株增殖、迁移、凋亡能力的影响。方法 选用乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、HCC1937及MDA-MB-468作为研究模型,实时荧光定量PCR方法分别检测4种细胞株中hsa-miR-15b-3p的表达情况。体外培养HCC1937细胞,将上调后的MicroRNA-15b-3p转染至HCC1937细胞株中设为实验组,并设置阴性对照组,Brdu实验检测细胞乳腺癌细胞的增殖能力、Transwell小室检测细胞迁移能力、FACS细胞凋亡检测细胞凋亡情况。结果 hsa-miR-15b-3p在不同的乳腺癌细胞株中表达量均较正常乳腺细胞少,实验组细胞增殖能力强于阴性对照组(P<0.05),实验组乳腺癌细胞的迁移能力强于阴性对照组(P<0.05),但实验组与对照组细胞凋亡水平差异无显著性。结论 MicroRNA-15b-3p可增强三阴性乳腺癌细胞的增殖、迁移能力,有可能会促进乳腺癌的发生与发展。

猪微小RNA⁃15b前体突变对其生物学加工过程及前体脂肪细胞分化的影响

基于在猪微小RNA⁃15b(miR⁃15b)前体(pre⁃miR⁃15b)基因位点第58位碱基上发现了1个C>T突变(+58C>T),本试验旨在探究此突变对微小RNA(miRNA)生物学加工过程以及对猪前体脂肪细胞分化的影响。试验通过构建野生型(pmR⁃miR⁃15bW)和突变型(pmR⁃miR⁃15bM)miR⁃15b过表达载体,分别转染猪原代前体脂肪细胞进行miR⁃15b的过表达试验,然后利用实时荧光定量PCR对比2组细胞pre⁃miR⁃15b和miR⁃15b成熟体的表达量,在体外细胞水平明确+58C>T对miR⁃15b生物学加工过程的影响;随后,诱导转染了不同基因型miR⁃15b过表达载体(pmR⁃miR⁃15bW和pmR⁃miR⁃15bM)的猪前体脂肪细胞成脂分化,利用实时荧光定量PCR对比2组细胞miR⁃15b靶基因叉头框蛋白O1(FOXO1)(可抑制脂肪细胞分化)以及成脂分化相关基因的相对表达量,同时结合油红O染色,明确此突变对猪前体脂肪细胞分化的影响。结果表明:2组细胞miR⁃15b初级转录本(pri⁃miR⁃15b)的表达量没有显著差异(P>0.05),而突变组pre⁃miR⁃15b、miR⁃15b和微小RNA⁃16(miR⁃16)表达量极显著低于野生组(P<0.01);突变组分化前FOXO1相对表达量极显著高于野生组(P<0.01),分化后成脂分化相关基因固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP⁃1c)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)相对表达量极显著低于野生组(P<0.01),脂肪细胞蛋白2(aP2)相对表达量低于野生组(P>0.05);油红O染色结果表明突变组细胞脂滴含量明显低于野生组。综上可知,+58C>T阻碍了pri⁃miR⁃15b到pre⁃miR⁃15b的生物学加工过程,导致miR⁃15b成熟体表达量下降,其靶基因FOXO1相对表达量增高,从而抑制猪前体脂肪细胞分化。

支气管哮喘患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平与气道炎症、肺功能的关系

目的:分析支气管哮喘患儿外周血microRNA-30a(miR-30a)、microRNA-15b-5p(miR-15b-5p)水平与气道炎症、肺功能的关系。方法:选择2020年3月—2022年3月我院收治的123例支气管哮喘患儿作为研究组,另外选择同期在我院体检的100例健康儿童作为对照组。入院后均检测外周血miR-30a、miR-15b-5p水平,利用肺功能仪检测第1秒用力呼气量(FEV_(1))、用力肺活量(FVC)及FEV_(1)/FVC等肺功能指标水平,同时检测气道炎症指标水平。比较各组血清miR-30a、miR-15b-5p水平及肺功能、气道炎症指标,采用Pearson相关分析探讨血清miR-30a、miR-15b-5p水平与气道炎症、肺功能的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)评估外周血miR-30a、miR-15b-5p水平对支气管哮喘发生的预测价值。结果:研究组患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平均高于对照组(P<0.05)。研究组患儿诱导痰中的细胞总数、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、淋巴细胞的数目均高于对照组,巨噬细胞的数目低于对照组(P<0.05)。研究组患儿FEV_(1)、FVC、FEV_(1)/FVC肺功能指标均低于对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,支气管哮喘患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平均与肺功能指标(FEV_(1)、FVC、FEV_(1)/FVC)及巨噬细胞呈负相关(P<0.05),与细胞总数、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、淋巴细胞数目呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,外周血miR-30a、miR-15b-5p预测小儿支气管哮喘发生的曲线下面积为0.841(95%CI:0.792~0.890)、0.862(95%CI:0.817~0.917),二者联合预测小儿支气管哮喘发生的曲线下面积为0.911(95%CI:0.874~0.958)。结论:支气管哮喘患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平均呈高表达,且二者水平变化与气道炎症、肺功能密切相关,另外可作为预测支气管哮喘患儿发病的有效指标。

LncRNA MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA/B介导结直肠癌细胞免疫逃逸

目的:探究长链非编码RNA母系表达基因8(LncRNA MEG8)通过靶向miR-15a-5p调控MHCⅠ类相关蛋白A/B(MICA/B)介导的结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸机制。方法:RT-qPCR、Western blot检测CRC组织和细胞系MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平;双荧光素酶实验验证MEG8对miR-15a-5p的调控关系;采用脂质体转染法将NC、MEG8、miR-NC、miR-15a-5p分别或共转染至SW480、SW620细胞,记为NC组、MEG8组、MEG8+miR-NC组、MEG8+miR-15a-5p组;将NK细胞分别与SW480、SW620细胞共培养;ELISA检测共培养液中TNF-α、IFN-γ水平;CCK-8、EdU染色、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot检测细胞MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平。结果:与癌旁组织或正常结肠上皮细胞相比,CRC组织和细胞系中MEG8、MICA、MICB、NKG2D mRNA和蛋白水平降低,miR-15a-5p水平升高(P<0.05)。MEG8靶向调控miR-15a-5p。共培养体系中,与NC组相比,MEG8组细胞MICA、MICB、NKG2D蛋白水平、共培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平明显升高,培养1 d、2 d、3 d后,OD值、EdU阳性率、迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05);过表达miR-15a-5p能部分逆转过表达MEG8对细胞MICA、MICB、NKG2D、TNF-α、IFN-γ水平和增殖、侵袭转移能力的影响(P<0.05)。结论:MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA、MICB表达,促进NK细胞活性,抑制CRC细胞免疫逃逸。

MicroRNA-196b、IGFBP-3在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后关系

目的 探究microRNA-196b(miR-196b)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与预后的关系。方法 选取2020年4月—2022年4月在无锡市第二人民医院手术治疗的NSCLC患者78例。收集患者的病历资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织中miR-196b、IGFBP-3的表达。所有患者随访12个月,根据预后结局分为进展组、稳定组。筛查NSCLC患者预后的影响因素,评估组织中miR-196b、IGFBP-3表达对NSCLC患者预后的预测效能。分析癌组织中miR-196b、IGFBP-3不同表达患者生存曲线的差异。结果 进展组临床分期Ⅲ期占比、术前淋巴结转移率均高于稳定组(P <0.05)。进展组癌组织miR-196b相对表达量高于稳定组(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于稳定组(P <0.05)。癌组织miR-196b相对表达量高于癌旁组织(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于癌旁组织(P <0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:临床分期[O^R=3.684(95%CI:1.259,10.778)]、术前淋巴结转移[O^R=3.557(95%CI:1.216,10.408)]、癌组织miR-196b表达[O^R=3.979(95%CI:1.359,11.641)]是NSCLC患者预后的危险因素(P <0.05),癌组织IGFBP-3表达阳性[O^R=0.220(95%CI:0.075,0.642)]是NSCLC患者预后的保护因素(P <0.05)。癌组织miR-196b、IGFBP-3及联合预测NSCLC患者预后的敏感性分别为66.25%(95%CI:0.512,0.797)、60.00%(95%CI:0.496,0.781)、87.50%(95%CI:0.725,0.963),特异性分别为69.74%(95%CI:0.534,0.825)、76.32%(95%CI:0.603,0.892)、72.37%(95%CI:0.576,0.861),曲线下面积分别为0.703、0.680、0.805。miR-196b低表达组生存情况优于高表达组(P <0.05)。IGFBP-3阳性表达组生存情况优于阴性表达组(P <0.05)。结论 NSCLC患者癌组织miR-196b、IGFBP-3表达与预后相关,且联合预测NSCLC患者预后效能良好。

血清mi R939-和mi R15b-表达与糖尿病视网膜病变患者微血管损伤的相关性分析

目的 分析血清miR-939和miR-15b表达与糖尿病视网膜病变(DR)患者微血管损伤的相关性。方法 选取2021年1月至2022年10月在保定市第二医院进行诊治的2型糖尿病患者176例作为研究对象。根据研究对象根据是否发生DR及病变程度分为无DR患者74例(NDR组)、非增殖型DR患者62例(NPDR组)、增殖型DR(PDR)患者40例(PDR组)。采用实时荧光定量PCR检测各组血清miR-939、miR-15b相对表达水平,酶联免疫吸附试验法检测各组血管内皮生长因子(VEGF)水平,流式细胞术检测内皮细胞(ECs)、内皮祖细胞(EPCs)和循环祖细胞(CPCs)计数百分比。比较3组患者血清miR-939、miR-15b、VEGF水平和ECs、EPCs、CPCs。采用Pearson相关性分析血清miR-939、miR-15b与VEGF、ECs、EPCs、CPCs的相关性。采用多因素Logistic回归分析2型糖尿病患者发生DR的影响因素。结果 PDR组、NPDR组血清miR-939、miR-15b相对表达水平低于NDR组,而血清VEGF水平高于NDR组,差异有统计学意义(P<0.05)。PDR组、NPDR组ECs高于NDR组,而EPCs和CPCs低于NDR组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-939与VEGF、ECs呈负相关(r=-0.407、-0.613,P<0.05),与EPCs、CPCs呈正相关(r=0.481、0.486,P<0.05),血清miR-15b与VEGF、ECs呈负相关(r=-0.539、-0.625,P<0.05),与EPCs、CPCs呈正相关(r=0.451、0.483,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,2型糖尿病病程、糖化血红蛋白、餐后2 h血糖、VEGF、miR-939和miR-15b为2型糖尿病患者发生DR的影响因素(P<0.05)。结论 DR患者血清miR-939、miR-15b表达与VEGF、ECs、EPCs和CPCs密切相关,DR患者血清miR-939、miR-15b表达能够为其微血管损伤程度的早期判断与评估提供一定参考。

早发型子痫前期患者血清microRNA-26b表达及其与胎盘早剥发生的关系

目的分析早发型子痫前期患者血清microRNA-26b(miR-26b)表达及其与胎盘早剥发生的关系。方法选取2019年8月至2022年8月荆州市中心医院收治的102例早发型子痫前期患者作为研究对象。检测所有患者miR-26b相对表达量,随访至患者分娩,根据胎盘早剥发生情况分成胎盘早剥组与非胎盘早剥组,分析早发型子痫前期患者血清miR-26b表达及其与胎盘早剥发生的关系。结果随访至产妇分娩,102例早发型子痫前期患者胎盘早剥发生率为17.65%(18/102)。胎盘早剥组血清miR-26b相对表达量高于非胎盘早剥组(P<0.05)。根据确诊疾病时血清miR-26b四分位数将患者分为Q1组(n=25)、Q2组(n=27)、Q3组(n=24)及Q4组(n=26),Q4组胎盘早剥发生率高于Q1组、Q2组及Q3组(P<0.05)。经点二列相关性分析检验,血清miR-26b与早发型子痫前期患者胎盘早剥发生率呈正相关(r=0.458,P<0.05)。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,血清miR-26b对早发型子痫前期患者胎盘早剥具有中等预测价值,且当血清miR-26b相对表达量为2.465时,可获得最佳预测价值。结论早发型子痫前期患者血清miR-26b与胎盘早剥发生有关,检测血清miR-26b相对表达量能为预测胎盘早剥发生提供重要价值。

MicroRNA-26b下调MALAT-1抑制乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的机制研究

目的 探索microRNA-26b(miR-26b)通过MALAT-1抑制乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的分子机制。方法 以乳腺癌细胞系MCF-7作为研究对象,采用慢病毒LV-miR-26b-ctrl和LV-miR-26b转染肿瘤细胞,逆转录聚合酶链反应检测MALAT-1、miR-26a和miR-26b的mRNA表达,平板克隆形成实验、CCK-8细胞增殖实验、软琼脂成瘤实验、细胞划痕实验、Transwell细胞侵袭实验分别检测肿瘤细胞的增殖、体外成瘤、迁移和侵袭能力。结果 E2组与Mock组MCF-7细胞24、48、72和96 h时吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05);(2)两组吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05),与Mock组比较,E2组72和96 h时细胞增殖能力较Mock组提高(P <0.05);(3)两组吸光度值变化趋势比较,差异有统计学意义(P <0.05)。与Mock组相比,E2组MALAT-1相对表达量升高(P <0.05),miR-26a、miR-26b mRNA相对表达量下降(P <0.05)。高表达miR-26b的乳腺癌患者的生存情况优于低表达miR-26b组,死亡风险更低(P <0.05),低表达miR-26a组患者的生存情况优于高表达miR-26a组(P <0.05),用Cox比例风险回归模型,将miR-26a作为一个独立的预后因素来比较,两组患者的死亡风险比较无差异(P>0.05)。与LV-miR-26b-ctrl组比较,LV-miR-26b-ctrl/E2组乳腺癌细胞的MALAT-1相对表达量升高(P <0.05),与LV-miR-26b-ctrl/E2组比较,LV-miR-26b/E2组乳腺癌细胞的MALAT-1相对表达量降低(P <0.05)。LV-miR-26b-ctrl组、LV-miR-26b-ctrl/E2组、LV-miR-26b/E2组细胞在24、48、72和96 h时吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05);(2)各组吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05),LV-miR-26b-ctrl/E2组72和96 h时细胞增殖能力明显较LV-miR-26b-ctrl组增强(P <0.05),LV-miR-26b/E2组72和96 h时细胞增殖能力较LV-miR-26b-ctrl/E2组降低(P <0.05);(3)各组吸光度值变化趋势比较,差异有统计学意义(P <0.05)。E2处理后的LV-miR-26b-ctrl肿瘤细胞增殖和体外成瘤能力增强。与LV-miR-26bctrl/E2组比较,LV-miR-26b/E2组肿瘤细胞的增殖和体外成瘤能力降低。在24 h时,LV-miR-26b-ctrl/E2组细胞划痕间隙较LV-miR-26b-ctrl组变窄,LV-miR-26b/E2组24 h时细胞的划痕间隙较LV-miR-26bctrl/E2组明显增宽。LV-miR-26b-ctrl/E2组Transwell小室下方的乳腺癌细胞数量较LV-miR-26b-ctrl组增多,LV-miR-26b/E2组的肿瘤细胞数量较LV-miR-26b-ctrl/E2组减少。结论 下调MALAT-1可能是miR-26b抑制乳腺癌恶性生物学行为的分子机制之一,miR-26b有望成为乳腺癌治疗的调控靶点。

GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ联合评估在HBV感染肝硬化患者肝细胞癌发生风险中的预测价值

目的评估血清生长分化因子15(GDF15)、microRNA-122(miR-122)、甲胎蛋白(AFP)和异常凝血酶原(PIVKA-Ⅱ)联合检测在监测乙肝病毒(HBV)感染肝硬化患者中肝细胞癌(HCC)的风险预测价值。方法将2017年12月至2022年1月在首都医科大学附属北京友谊医院就诊的45例HBV相关肝硬化患者、50例HCC患者纳入横断面研究,设为肝硬化组和HCC组;另选22例监测期间新确诊HCC的HBV肝硬化患者纳入纵向研究队列,分别对肝硬化组和HCC组患者以及监测期间新确诊HCC的HBV肝硬化患者的系列血清标本[新确诊HCC前12~18个月(T_(1))、新确诊HCC前6~12个月(T_(2))以及HCC诊断时(T_(3))]进行检测,测定GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ水平。比较各组患者每项标志物的检测水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ单独或联合检测对HCC患者的诊断价值,评估标志物的组合预测HBV感染肝硬化患者的HCC风险。结果横断面研究中,HCC组患者血清GDF15、AFP和PIVKA-Ⅱ水平分别为1760.64 pg/mL、40.24 ng/mL、106.37 mAU/mL,均显著高于肝硬化组患者(1357.63 pg/mL、9.07 ng/mL、22.59 mAU/mL),miR-122水平为38.72,则显著低于肝硬化组患者(75.70),差异均有统计学意义(P<0.05)。GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ单独诊断HCC时,曲线下面积(AUC)分别为0.734、0.644、0.776、0.823;AFP和GDF15两项联合,AUC为0.835;GDF15、AFP和PIVKA-Ⅱ三项联合,AUC为0.860;GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ四项联合,AUC最佳为0.876。区分肝硬化和HCC时,PIVKA-Ⅱ具有较高的敏感度(72.5%);GDF15具有较高的特异度(83.2%);AFP和PIVKA-Ⅱ联合,特异度最高(92.0%);四项联合,敏感度增加(82.2%),约登指数最高(0.622)。纵向研究结果未观察到每种单一生物标志物随时间的变化,而GDF15、AFP和PIVKA-Ⅱ三项联合以及GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ四项联合,在三个时间点的检测值差异有统计学意义(P<0.01)。肝硬化患者横截面和纵向(T_(1))之间观察到四项组合的差异有统计学意义(P<0.05),提示标志物的联合应用可有效区分即将发生HCC和不会发生HCC的肝硬化患者。结论GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ联合检测可以提高对HBV相关肝硬化和HCC患者的分辨力,且在HBV相关的肝硬化中,GDF15、miR-122、AFP和PIVKA-Ⅱ的组合能够识别HCC发展风险较高的患者,具有临床价值。

白介素⁃15基因多态性与中西医结合治疗HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者疗效的关联性分析

目的分析白介素-15(IL-15)基因多态性与中西医结合治疗乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阴性慢性乙型肝炎(CHB)患者疗效的关联性。方法将312例HBeAg阴性CHB患者随机分为治疗组、对照组,每组156例,两组均给予西医抗病毒治疗,在此基础上,治疗组加用补肾健脾利湿颗粒,对照组加用补肾健脾利湿颗粒安慰剂,疗程为1年。比较两组的治疗应答率,观察血清IL-15水平的变化情况;挑选IL-15基因的标签单核苷酸多态性(SNPs),并进行基因分型,分析IL-15基因多态性与治疗应答的关联性。结果①最终完成试验者306例,其中治疗组155例、对照组151例。②两组治疗应答率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。③治疗前后组内比较,治疗组血清HBsAg水平降低、IL-15水平升高(P<0.05),对照组血清HBsAg水平降低(P<0.05);组间治疗后比较,血清HBsAg、IL-15水平差异有统计学意义(P<0.05)。④治疗后,两组治疗应答患者血清IL-15水平升高、无应答患者血清IL-15水平降低(P<0.05),治疗组应答患者血清IL-15水平高于治疗组无应答患者(P<0.05)。⑤关联分析结果显示,有5个SNPs与治疗应答有显著性关联证据,分别为rs6819823、rs2857261、rs10519612、rs10519613、rs1057972(P<0.05)。⑥治疗前,治疗组应答患者rs6819823 TT基因型血清IL-15水平低于GG基因型、rs2857261 AA基因型血清IL-15水平低于GG基因型、rs1057972 AA基因型患者血清IL-15水平低于TT基因型(P<0.05);治疗后,携带rs6819823、rs2857261、rs10519612、rs10519613、rs1057972最小等位基因的纯合子和杂合子患者血清中IL-15水平上升(P<0.05)。结论IL-15基因遗传变异及IL-15表达水平变化与中西医结合治疗HBeAg阴性CHB的临床疗效存在关联。

妊娠期高血压miR-26b、miR-15b、miR-204-5p、miR-200a表达水平及临床意义

目的 探讨妊娠期高血压miR-26b、miR-15b、miR-204-5p、miR-200a表达水平及临床意义。方法 回顾性选取83例2022年1月至2023年1月承德市妇幼保健院收治的妊娠期高血压患者的临床资料作为病例组,其中28例妊娠期高血压作为妊娠期高血压组、28例轻度子痫前期作为轻度子痫前期组、27例重度子痫前期作为重度子痫前期组;另随机选择同期于本院产科门诊规律围产期保健并入院待产的94名正常足月单胎妊娠孕妇为对照组。结果 收缩压、舒张压:重度子痫前期组>轻度子痫前期组>妊娠期高血压组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-26b、miR-15b、miR-204-5p、miR-200a表达水平:重度子痫前期组>轻度子痫前期组>妊娠期高血压组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-26b、miR-15b、miR-204-5p、miR-200a水平联合检测诊断妊娠期高血压的AUC值为0.940,高于各指标单独检测(0.768、0.809、0.744、0.795,P<0.05)。病例组不良妊娠结局总发生率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 妊娠期高血压患者不良妊娠结局的几率更大,血清miR-26b、miR-15b、miR-204-5p、miR-200a在妊娠期高血压患者中呈高表达,其表达水平与患者病情严重程度具有一定关系,且四者联合检测对妊娠期高血压的诊断价值更高。

联合microRNA测序及体外实验探究miR-15b介导PINK1/Parkin线粒体自噬通道在心力衰竭过程中的作用机制

目的:探究miR-15b介导PINK1/Parkin线粒体自噬通道在心力衰竭过程中的作用机制,寻找防治心衰的新靶点。方法:通过高通量测序检测心衰患者与健康志愿者体内表达差异microRNA;体外实验培养HL-1心肌细胞,通过AngII诱导心肌细胞损伤模型,采用细胞转染技术过表达和抑制miR-15b水平,利用qRT-PCR检测miR-15b转染效能及在各组的表达水平;使用双荧光素酶报告基因实验验证miR-15b与PINK1靶标关系;运用WesternBlot检测自噬蛋白Beclin-1、LC3B及线粒体自噬通道蛋白PINK1、Parkin等表达水平;运用免疫荧光法检测心肌细胞PINK1、Parkin蛋白表达情况。结果:心衰患者和健康志愿者外周血中microRNA表达存在明显差异,其中心衰患者外周血清miR-15b水平上调明显[log2(Fold_change)>1;P<0.01],通过对miR-15b靶基因进行预测,发现PINK1是其靶标,并通过双荧光素酶报告基因实验进一步确定miR-15b与PINK1之间的靶向关系。细胞实验中,与空白组相比,模型组miR-15b的表达增多(P<0.05),自噬蛋白LC3B、Beclin-1水平下降(P<0.01),线粒体自噬通道蛋白PINK1、Parkin水平下降(P<0.01);与模型组相比,转染miR-15b mimics后上述趋势显著增强(P<0.05);转染miR-15b inhibitor后可逆转上述趋势(P<0.01)。结论:miR-15b可通过介导PINK1/Parkin线粒体自噬水平信号通道调控自噬水平,可能成为心力衰竭潜在的治疗靶点。

Long Non-coding RNA PCED1B Antisense RNA 1 Promotes Cell Proliferation and Invasion in Hepatocellular Carcinoma by Regulating the MicroRNA-34a/CD44 Axis

Objective This study aimed to examine the role of long non-coding RNA PCED1B antisense RNA 1(PCED1B-AS1)in the development of hepatocellular carcinoma(HCC).Methods A total of 62 pairs of HCC tissues and adjacent non-tumor tissues were obtained from 62 HCC patients.The interactions of PCED1B-AS1 and microRNA-34a(miR-34a)were detected by dual luciferase activity assay and RNA pull-down assay.The RNA expression levels of PCED1B-AS1,miR-34a and CD44 were detected by RT-qPCR,and the protein expression level of CD44 was determined by Western blotting.The cell proliferation was detected by cell proliferation assay,and the cell invasion and migration by transwell invasion assay.The HCC tumor growth after PCED1B-AS1 was downregulated was determined by in vivo animal study.Results PCED1B-AS1 was highly expressed in HCC tissues,which was associated with poor survival of HCC patients.Furthermore,PCED1B-AS1 interacted with miR-34a in HCC cells,but they did not regulate the expression of each other.Additionally,PCED1B-AS1 increased the expression level of CD44,which was targeted by miR-34a.The cell proliferation and invasion assay revealed that miR-34a inhibited the proliferation and invasion of HCC in vitro,while CD44 exhibited the opposite effects.Furthermore,PCED1B-AS1 suppressed the role of miR-34a.Moreover,the knockdown of PCED1B-AS1 repressed the HCC tumor growth in nude mice in vivo.Conclusion PCED1B-AS1 may play an oncogenic role by regulating the miR-34a/CD44 axis in HCC.

早产儿BPD的危险因素及血浆BMP-7 miR-15b 25-(OH)D_(3)对其诊断价值分析

目的 探讨早产儿支气管肺发育不良(BPD)的危险因素及血浆骨形成蛋白-7(BMP-7)、微小核糖核酸-15b(miR-15b)、25羟基维生素D_(3)[25-(OH)D_(3)]对其诊断价值。方法 回顾性分析2022年1月至2023年3月河北省沧州中西医结合医院收治的136例早产儿的临床资料,根据其是否伴有BPD,将其分为BPD组(n=45)和非BPD组(n=91)。分析早产儿BPD的单因素,采用多因素logistic回归分析早产儿BPD的危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆BMP-7、miR-15b、25-(OH)D_(3)对早产儿BPD的诊断价值。结果 两组患儿机械通气时间、吸氧时间、有无脓毒血症及血浆BMP-7、miR-15b、25-(OH)D_(3)水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,机械通气时间长、血浆BMP-7、miR-15b水平偏高、血浆25-(OH)D_(3)水平偏低是早产儿BPD的独立危险因素(OR=2.625、2.208、2.280、2.517,P<0.05)。血浆BMP-7、miR-15b、25-(OH)D_(3)联合诊断早产儿BPD的曲线下面积为0.947,高于血浆BMP-7、miR-15b、25-(OH)D_(3)单独检测(0.822、0.849、0.824,P<0.05)。结论 早产儿BPD的危险因素与机械通气时间长、血浆BMP-7、miR-15b水平偏高、血浆25-(OH)D_(3)水平偏低有关,且血浆BMP-7、miR-15b、25-(OH)D_(3)联合检测对早产儿BPD的诊断价值更高。

TSG15B型受电弓裂纹故障振动特性研究

受电弓作为我国电气化铁路的主要受载部件,其工况稳定性直接关系到列车的安全运行,在日常检修中,发现碳滑板极易出现裂纹、掉块、破损等情况,其主要影响因素有弓网滑动摩擦损失大、接触压力不稳定、风阻变化等。文章通过对TSG15B型受电弓建模,将裂纹以时变刚度函数的形式引入模型,探究了列车在120km/h的时速下,碳滑板裂纹故障对受电弓造成的动力学响应。结果表明:碳滑板裂纹对于受电弓产生的周期性冲击信号以及速度冲击特性的影响较为明显,在周期性冲击信号影响下,裂纹缺陷会对机车受电弓主要部件造成周期性的低幅高频振动。

MicroRNA-218、microRNA-193b在宫颈癌组织中的表达及与化疗耐药性的关系

目的 探讨microRNA-218(miR-218)、microRNA-193b(miR-193b)在宫颈癌组织中的表达及其与化疗耐药性的关系。方法 选取2018年1月-2023年1月成都医学院第一附属医院收治的101例行手术治疗的宫颈癌患者。患者均行紫杉醇、顺铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶、卡铂药物敏感性试验,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-218、miR-193b表达情况。比较癌组织、癌旁组织中miR-218、miR-193b表达情况,统计化疗药物耐药情况,分析宫颈癌组织中miR-218、miR-193b的表达与化疗耐药性的关系。结果 癌组织中miR-218相对表达量低于癌旁组织(P <0.05),miR-193b相对表达量高于癌旁组织(P <0.05)。宫颈癌患者行体外化疗药物紫杉醇、顺铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶、卡铂的耐药率分别为38.61%、46.53%、48.51%、26.73%和40.59%。宫颈鳞癌与宫颈腺癌患者对体外化疗药物紫杉醇、顺铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶、卡铂耐药率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。耐药患者癌组织中miR-218相对表达量均低于敏感患者,miR-193b相对表达量均高于敏感患者(P <0.05)。受试者工作特征曲线分析结果显示,miR-218、miR-193b及两者联合预测宫颈癌患者化疗耐药性的敏感性分别为74.51%(95%CI:0.601,0.852)、70.59%(95%CI:0.560,0.821)、82.35%(95%CI:0.686,0.911),特异性分别为74.00%(95%CI:0.594,0.849)、78.00%(95%CI:0.637,0.880)、90.00%(95%CI:0.774,0.963),曲线下面积分别为0.754(95%CI:0.661,0.847)、0.743(95%CI:0.643,0.843)、0.890(95%CI:0.824,0.956)。结论 宫颈癌组织中miR-218表达低于癌旁组织、miR-193b表达高于癌旁组织,miR-218、miR-193b的表达水平与宫颈癌患者化疗耐药性有关,两者联合预测宫颈癌患者化疗耐药性效能良好。