胃癌根治性切除患者术前血清外泌体miR-193a和miR-208b水平表达及其对预后预测价值研究

目的探究胃癌(gastric cancer,GC)患者在根治性手术前血清外泌体微小核糖核酸(micro RNA,miR)-193a和微小核糖核酸(microRNA,miR)-208b水平表达及其预后预测价值。方法以新疆医科大学第一附属医院2018年3月~2020年3月收治的132例GC根治性切除术前患者为GC组,同期132例体检健康者为对照组。收集对比患者临床病理资料。血清外泌体miR-193a和miR-208b相对表达水平的检测采用实时荧光定量PCR(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)法,Pearson法分析miR-193a和miR-208b的相关性。GC患者术前血清外泌体miR-193a,miR-208b表达与术后患者预后相关性采用Kaplan-Meier法分析;单因素及多因素COX回归分析患者预后的影响因素。结果GC组外泌体miR-208b表达水平较对照组明显升高(1.77±0.14 vs 1.02±0.01),miR-193a表达水平明显降低(0.52±0.06 vs 1.01±0.01),差异具有统计学意义(t=92.551,61.392,均P<0.05)。GC患者术前miR-193a与miR-208b的表达水平呈负相关(r=-0.409,P<0.05)。患者中TNM分期为I+II期、无淋巴结转移、无远处转移的miR-193a低表达比例和miR-208b高表达比例明显低于TNM分期为III+IV、有淋巴结转移、有远处转移患者,差异具有统计学意义(χ^(2)=5.008,4.397;7.142,4.688;4.407,5.189,均P<0.05)。miR-193a低表达患者三年累积生存率(30.43%)显著低于高表达(60.32%)患者(χ^(2)=17.861,P<0.001),miR-208b高表达患者三年累积生存率(27.14%)低于低表达(64.52%)患者(χ^(2)=16.340,P<0.001)。血清外泌体miR-193a(HR=0.493,95%CI:0.323~0.753)和miR-208b水平(HR=2.697,95%CI:1.382~5.262)是患者预后的独立影响因素(P<0.05)。结论术前血清外泌体miR-193a水平降低,miR-208b水平升高,两者表达水平与GC根治性切除术患者的预后有关。

miR-208b-3p通过抑制线粒体基因表达加重心力衰竭小鼠能量代谢障碍

目的探究miR-208b-3p对主动脉弓缩窄(transverse aortic constriction,TAC)诱导的心力衰竭小鼠能量代谢的作用及机制。方法将24只小鼠按照随机数字表法分为假手术组(Sham组,n=6)和手术组(n=18)。手术组采用TAC建立心力衰竭模型;假手术组采用TAC相同手术方式,但不结扎主动脉弓。于TAC术后第2周再随机分为Antagomir组(n=6)、Antagomir-NC组(n=6)及TAC组(n=6),Antagomir组、Antagomir-NC组尾静脉分别注射miR-208b-3p antagomir(800μg)及miR-208b-3p antagomir阴性对照(800μg)试剂,每周2次,连续4周。术后第6周行超声心动图评估各组小鼠心功能。HE染色及天狼星红染色观察小鼠心肌组织病理学形态。ATP检测试剂盒检测各组小鼠心肌组织ATP水平。RT-qPCR检测小鼠心肌组织miR-208b-3p、线粒体基因(ND1、ND2、ND3、ND4、ND4L、ND5、ND6、CO1、CO2、CO3、CYTB、ATP6、ATP8)及POLRMT、12SrRNA的表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-208b-3p与潜在靶基因POLRMT的相互结合作用。Western blot检测心肌组织POLRMT及ND1、CO2、CYTB、ATP8蛋白表达水平。结果与Sham组相比,TAC组小鼠心肌miR-208b-3p表达显著增加(P<0.05)。超声检测结果显示,Antagomir组小鼠心脏的射血分数、收缩与舒张功能较TAC组明显改善(P<0.05)。组织切片染色提示,Antagomir组小鼠的心肌细胞肥大、排列紊乱、心肌间质炎细胞浸润等有明显改善(P<0.05)。与TAC组相比,Antagomir组ATP水平明显升高(P<0.05);POLRMT及线粒体基因转录产物(12SrRNA和13个线粒体基因编码多肽)表达量均显著升高(P<0.05),但SDHA、SDHB无变化。双荧光素酶报告基因实验显示miR-208b-3p与POLRMT的CDS区有结合作用。Antagomir组小鼠心肌组织POLRMT、ND1、CO2、CYTB、ATP8蛋白水平表达较TAC组显著增加(P<0.05)。结论miR-208b-3p可通过靶向POLRMT抑制线粒体基因的表达,加剧线粒体能量代谢障碍,并加重心力衰竭小鼠心功能不全及心室重塑。

麝香保心丸联合瑞替普酶治疗急性心肌梗死的效果及对血清miR-208a、miR-208b表达的影响

目的探讨麝香保心丸联合瑞替普酶治疗急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)的效果及对血清miR-208a、miR-208b表达的影响。方法采用前瞻性随机对照研究方法选择2019年8月—2021年5月医院AMI患者108例,以计算机生成的随机数字表将患者分为联合组(54例)、对照组(54例)。常规治疗基础上,对照组给予瑞替普酶,联合组给予麝香保心丸联合瑞替普酶,均治疗2周。对比两组疗效与治疗前、治疗2周后心功能[左室舒张末期容积(Left ventricular end-diastolic volume,LVEDV)、左室收缩末期容积(Left ventricular end-systolic volume,LVESV)、左室射血分数(Left ventricular ejection fraction,LVEF)]、血清氧化应激指标[超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(Malonaldehyde,MDA)]、miR-208a、miR-208b、血液流变学指标(血浆黏度、全血黏度低切、全血黏度高切)水平,统计两组治疗期间主要心血管不良事件(Majoradverse cardiac events,MACE)发生率。结果经治疗,联合组总有效率(92.59%,50/54)高于对照组(75.93%,41/54)(P<0.05);两组治疗2周后LVEDV、LVESV水平较治疗前降低,且联合组低于对照组,LVEF水平较治疗前升高,且联合组高于对照组(P<0.05);两组治疗2周后血清SOD较治疗前增高,且联合组高于对照组,血清MDA、miR-208a、miR-208b与血浆黏度、全血黏度低切、全血黏度高切水平较治疗前降低,且联合组低于对照组(P<0.05);治疗期间,联合组MACE发生率(5.56%,3/54)低于对照组(18.52%,10/54)(P<0.05)。结论应用麝香保心丸联合瑞替普酶治疗AMI可提升心功能,减轻氧化应激反应,改善血液流变学情况,降低miR-208a、miR-208b水平,减少治疗期间MACE发生,疗效显著。

老年慢性心力衰竭患者血清microRNA-208a、CASP3与心室重构和预后的关系

目的探讨老年慢性心力衰竭(CHF)患者血清microRNA-208a(miR-208a)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(CASP3)与心室重构和预后的关系。方法选取2019年1月—2021年9月新余市中医院收治的155例老年CHF患者为CHF组,另选取同期该院体检健康者57例为对照组,CHF组患者根据预后情况分为预后不良组(58例)和预后良好组(97例)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-208a mRNA相对表达量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CASP3、B型脑利钠肽(BNP)水平;采用Pearson/Spearman相关系数分析老年CHF患者血清miR-208a、CASP3与BNP、右心室内径(RVD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左室射血分数(LVEF)、左心室质量指数(LVMI)的相关性;多因素Logistic回归分析老年CHF患者预后不良的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-208a、CASP3对老年CHF患者预后不良的预测价值。结果CHF组血清miR-208a、CASP3、BNP水平,LVMI高于对照组,RVD、LVEDD大于对照组,LVFS、LVEF低于对照组(P<0.05)。Pearson/Spearman相关性分析结果显示,老年CHF患者血清miR-208a、CASP3与BNP、RVD、LVEDD、LVMI呈正相关(r/rs=0.577、0.627、0.535、0.619和0.619、0.721、0.601、0.631,均P<0.05),与LVFS、LVEF呈负相关(r/rs=-0.555、-0.568和-0.655、-0.700,均P<0.05),血清miR-208a与CASP3呈正相关(rs=0.638,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,NYHA≥Ⅲ级[OR=3.383(95%CI:1.358,8.423)]、BNP[OR=1.006(95%CI:1.002,1.009)]、LVMI[OR=1.114(95%CI:1.005,1.233)]、miR-208a[OR=1.203(95%CI:1.096,1.321)]、CASP3[OR=1.196(95%CI:1.088,1.315)]为老年CHF患者预后不良的独立危险因素(P<0.05),LVEF[OR=0.867(95%CI:0.753,0.998)]为独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-208a、CASP3单独及联合预测老年CHF患者预后不良的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.785、0.783和0.867。结论血清miR-208a、CASP3与老年CHF患者心室重构和预后密切相关,可能成为老年CHF患者预后不良的辅助预测指标。

MicroRNA-208b在急性心肌梗死患者的早期诊断价值

目的评估MicroRNA-208b(MiR-208b)在急性心肌梗死(AMI)患者的早期诊断价值。方法采用前瞻性队列研究方法,选择2017年1～12月泰州市人民医院就诊的AMI患者60例、不稳定型心绞痛(UA)组40例、冠脉正常对照组40例,取患者发病3 h内静脉血,通过实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测血浆MiR-208b含量;采用电化学发光法检测心肌肌钙蛋白(c Tn) I、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平。结果与对照组比较,c Tn I、CK-MB、MiR-208b在AMI组表达均明显升高(P<0. 05);MiR-208b、c Tn I、CK-MB受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分别为0. 952、0. 843、0. 769,95%可信区间(CI)分别为0. 90～0. 99、0. 73～0. 93、0. 67～0. 86。结论 AMI患者MiR-208b水平明显升高,其早期诊断效能优于c Tn I及CK-MB,通过检测MiR-208b水平可能有助于AMI的早期诊断及治疗。

慢性心力衰竭患者血清miR-208a和miR-302b表达与心室重构及预后的关系

目的分析慢性心力衰竭(CHF)患者血清微小RNA(miR)-208a,miR-302b表达与心室重构及预后的关系。方法选取2019年6月至2020年12月于华西医院健康管理中心收治CHF患者153例为CHF组,另选取同期体检健康者72例为对照组。使用qPCR检测血清miR-208a、miR-302b水平,Pearson相关性分析血清miR-208a、miR-302b水平与心室重构相关指标的相关性。多因素Logistics回归分析血清miR-208a、miR-302b水平与CHF患者预后不良的关系,ROC曲线分析血清miR-208a、miR-302b水平对CHF患者预后不良的预测价值。结果与对照组比较,CHF组血清miR-208a、miR-302b,N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平和左心室质量指数(LVMI)、右心室内径(RVD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)升高,左心室短轴缩短率(LVFS)、左室射血分数(LVEF)降低(t=25.646、35.611、28.040、36.482、38.098、26.651、-24.933、-45.351,P均<0.001)。CHF患者血清miR-208a、miR-302b水平与NT-proBNP,LVMI、RVD、LVEDD呈正相关(r=0.604、0.544、0.488、0.517,0.586、0.594、0.546、0.572;P均<0.001),与LVFS、LVEF呈负相关(r=-0.483、-0.536,-0.487、-0.550;P均<0.001)。血清miR-208a(OR=1.600,95%CI:1.188~2.154)、miR-302b(OR=1.428,95%CI:1.044~1.952)水平是CHF患者预后不良的独立危险因素。miR-208a+miR-302b预测CHF患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.876大于miR-208a(AUC=0.801)、miR-302b(AUC=0.792)单独预测(Z/P=2.577/0.010、2.712/0.007)。结论CHF患者血清miR-208a,miR-302b水平升高,与心室重构和预后不良密切相关,两者联合能提升预后不良预测价值。

急性冠脉综合征患者血浆miR-208b和miR-145的表达水平及临床意义

miRNA是一类长度为18～25nt的小分子非编码单链RNA，广泛存在于真核细胞中，能通过降解靶mRNA或者抑制其翻译，调节细胞增殖、分化与凋亡，参与个体发育、机体代谢以及肿瘤发生、发展等过程^[1]。最新研究表明，

microRNA-208在急性心肌梗死病人血清中的变化

目的探讨血清中microRNA-208(miRNA-208)成为急性心肌梗死(AMI)心肌损伤标志物的可能性和意义。方法收集因急性胸痛发作入院的AMI患者60例和非AMI患者60例,分别在入院即刻和入院后2、4、8、12、24h,2、3、5和7天10个时间点采集血液,利用实时荧光定量PCR法和酶联荧光分析法等方法对血清中miRNA-208、肌红蛋白(Mb)和肌钙蛋白I(cTnI)进行测定,对结果进行统计分析;并对miRNA-208、Mb和cTnI在不同时点的敏感度和特异性进行比较。结果 AMI患者入院即刻血清中miRNA-208表达显著高于对照组(P<0.05),入院后miRNA-208逐渐升高,在入院后12h左右达到高峰;和Mb和cTnI相比,miRNA-208既具有Mb的高度敏感度,又具有cTnI的高度特异性。结论 miRNA-208表达升高可以反映AMI心肌损伤,可能是AMI早期诊断和治疗评估的一种新的检测标志物。

微小RNA-208b在糖尿病性心肌纤维化中的作用研究

目的microRNA（miRNA）是内源性的小非编码RNA，在生命体的生理和病理过程中对基因表达进行负调拄。然向，miRNA在心肌纤维化中的相关机制并没有得到很好的阐述。本研究将着重探讨miRNA-208b在糖尿病心肌纤维化中的可能机制。方法B超检测16周db／db小鼠和db／m对照小鼠的心功能。芯片检测心肌组织样本的miRNA表达谱。定量PCR检测纤维化相关基因和miRNA成熟体表达。Westernblot检测纤维化相关蛋白和Smad3通路蛋白的表达。流式细胞术检测心肌成纤维细胞的增殖情况。双荧光报告系统检测miRNA．208b和候选靶基因Mtf2、Pgrmcl的3’UTR的结合能力。结果B超结果显示，16周db／db小鼠左心室收缩和舒张功能受损，射血分数明显改变。糖尿病心肌组织中纤维化相关基因和磷酸化的Smad3表达明显上调，miRNA表达谱发生紊乱。miRNA．208b在db／db小鼠心肌组织中表达异常高，并且在心肌和心肌成纤维细胞中miRNA-208b能够被AnglI、TGF一131和高糖／葡萄糖氧化酶（G／GO）激活Smad3信号通路并特异上调其表达，同时能够特异上调心肌细胞中Collal、d—SMA和CTGF的表达，并呈现剂量依赖性。抑制Smad3信号通路能够降低miRNA．208b表达，抑制miRNA-208b后Coilal、α-SMA和CTGF的表达也被抑制。miRNA．208b能够在转录后水平抑制Mt也和Pgrmcl的表达。而且抑制Mff2和Pgrmcl表达能够上调心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达。结论糖尿病心肌组织中miRNA-208b表达增高，miRNA-208b对纤维化相关基因Coilal、d—SMA和CTGF表达的促进作用受到Mff2和Pgrmcl的介导，Smad3信号通路参与了这一过程，共同促进了糖尿病心肌纤维化的发生。

AMI患者血清miR-208、VEGF-B与左室重构及炎症反应的关系

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者血清微小RNA-208(miR-208)、血管内皮生长因子-B(VEGF-B)的变化与患者左室重构及炎症反应的关系。方法选取遂宁市中心医院2017年1月至2018年8月收治的90例AMI患者(AMI组)、健康对象90例作为对照组,检测对比两组的血清miR-208、VEGF-B、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性细胞间黏附分子(sICAM-1)水平,采用超声心动图检测左室舒张末期容积(LVEDV)、左室舒张末期内经(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)。结果 AMI组患者的血清miR-208水平显著的高于对照组,差异具有统计学意义(t=16.445,P <0.05),AMI组患者的血清VEGF-B水平显著的低于对照组,差异具有统计学意义(t=-11.625,P <0.05);AMI组患者的血清IL-10、TNF-α、sICAM-1水平显著的高于对照组,差异具有统计学意义(t=19.236、17.910、36.624,P <0.05);治疗12个月后,AMI组患者的LVEDV、LVEDD均显著的高于入院时(t=-7.697、-9.602,P <0.05),治疗12个月后的LVEF与入院时比较差异无统计学意义(t=1.911,P> 0.05);AMI患者的血清miR-208水平与LVEDV、LVEDD均呈显著的正相关关系(r=0.594、0.621,P <0.05),AMI患者的血清VEGF-B水平与LVEDV、LVEDD均呈显著的负相关关系(r=-0.552、-0.497,P <0.05);AMI患者的血清miR-208水平与血清IL-10、TNF-α、sICAM-1水平均呈显著的正相关关系(r=0.591、0.642、0.618,P <0.05),AMI患者的血清VEGF-B水平与血清IL-10、TNF-α、sICAM-1水平无明显的相关关系(r=-0.095、-0.117、0.153,P> 0.05)。结论 AMI患者早期出现血清miR-208表达升高、VEGF-B水平降低,可能与AMI患者炎症反应程度、远期心室重构形成有关。

microRNA-208在急性心肌梗死患者外周血中的表达及意义

目的：通过分析micro RNA-208在急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）患者外周血中含量的变化,探讨micro RNA-208在AMI疾病进展中的作用。方法：连续性收集2013年1月~2013年12月滁州市第一人民医院心血管内科和急诊科收治的急性心肌梗死（AMI）患者42例,不稳定心绞痛（unstable angina,UA）患者22例,健康体检志愿者20名,荧光定量PCR测定外周血micro RNA-208的含量,电化学发光法检测血浆c Tn I和CK-MB的水平。AMI组患者根据不同冠脉病变支数和接受急诊经皮冠状动脉介入（percutaneous coronary intervention,PCI）治疗进行分组,对比各组患者外周血micro RNA-208水平的差异。结果：AMI患者外周血micro RNA-208的水平显著高于UA组和健康对照组,差异具有统计学意义（P〈0.01）,AMI患者外周血micro RNA-208的水平与血清CTn I含量呈正相关（r=0.700,P=0.000）。24例行冠状动脉造影术的AMI组患者中,micro RNA-208的表达在两支及三支病变中高于单支病变（P〈0.01）,17例成功接受急诊PCI治疗的AMI患者,其症状发作后的24h血浆micro RNA-208水平较入院即刻时明显降低（P〈0.01）。结论：心肌细胞特异性的micro RNA-208在心肌梗死后外周血含量明显升高,随着血管狭窄严重程度的升高其浓度也显著变化,可以作为辅助监测急性心肌梗死的敏感的生物学指标。

心房颤动患者血清FGF-23、miR-208b的表达水平及临床意义

目的探讨血清成纤维细胞生长因子23(FGF23)、miR-208b在心房颤动患者中的表达水平及临床意义。方法选取2018年5月至2019年10月在西安市第三医院治疗的心房颤动患者240例(观察组),其中阵发性房颤患者134例,持续性房颤患者106例;同时选取同期窦性心律健康体检者150例作为对照组。检测并比较两组受检者以及阵发性房颤患者和持续性房颤患者的血清FGF-23、miR-208b水平;采用超声心动图检查观察组患者的心脏参数,分析FGF-23、miR-208b与LAD的相关性。结果观察组患者的血清FGF-23、miR-208b相对表达量分别为(210.20±89.60)ng/mL和5.30±1.22,明显高于对照组的(110.04±32.29)ng/mL和2.90±0.88,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组中的持续性房颤患者的血清FGF-23、miR-208b相对表达量分别为(234.22±70.05)ng/mL和5.83±1.00,明显高于阵发性房颤患者的(191.20±65.59)ng/mL和4.88±1.02,差异均有统计学意义(P<0.05);持续性房颤患者的左房直径(LAD)为(38.81±5.11)mm,明显长于阵发性房颤患者的(34.03±4.02)mm,差异有统计学意义(P<0.05);血清FGF-23、miR-208b相对表达量与LAD呈正相关(r=0.411,0.382,P<0.05);观察组患者中主要心血管事件(MACE)患者的血清FGF-23和miR-208b分别为(243.30±72.29)ng/mL和6.12±1.12,明显高于非MACE患者的(199.65±71.43)ng/mL和5.04±1.07,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论心房颤动患者血清FGF-23,miR-208b明显升高,且与疾病类型、心脏参数及预后有一定相关性。

外周血miR-208b与cTnT早期诊断急性心肌梗死的比较分析

目的:对比研究外周血miR-208b与心肌肌钙蛋白T(cTnT)在早期诊断急性心肌梗死(AMI)中的价值。方法:采集67名AMI患者和32名非AMI对照者的外周血浆,通过定量逆转录聚合酶链反应(qRTPCR)测定miR-208b的浓度,通过电化学发光法检测cTnT的相应波动。结果:AMI患者外周血miR-208b的浓度较非AMI对照者明显升高(P<0.01),AMI患者痊愈出院时miR-208b的血浆浓度已回落至基线,miR-208b浓度的变化与研究病例的自身特征无明显相关性(P>0.05)。另外,受试者工作特征曲线(ROC)显示,miR-208b在早期诊断AMI方面具有高度的心肌特异性和敏感性,但并不优于cTnT。结论:外周血miR-208b可作为AMI早期诊断的标志物,但在诊断价值上不优于cInT。

循环microRNA-208诊断AMI的Meta分析

目的评价循环microRNA-208（miR-208）对急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）的诊断价值。方法检索万方、中国知识网、NCBI、Pubm Med、EMBSASE数据库2015年5月以前发表的关于miR-208诊断AMI的文献。以QUADAS工具对文献进行质量评价,采用meta-disc1.4软件进行统计分析miR-208诊断AMI的总体敏感度、特异度、阳/阴性似然比和诊断优势比。以SROC曲线分析miR-208诊断AMI的总体性能。结果本次meta分析共纳入7项研究,其中国人研究4项,SCI文献6项。miR-208诊断AMI总体诊断敏感度为0.77（95%CI为0.75~0.80）;总体诊断特异度为0.85（95%CI为0.82~0.88）;总体诊断阳性似然比为8.93（95%CI为3.44~23.18）;总体诊断阴性似然比为0.25（95%CI为0.20~0.31）;总体诊断优势比为36.63（95%CI为13.76~97.52）;综合SROC曲线下面积（AUC）为0.84,Q值为0.77。结论miR-208对AMI具有一定的诊断价值。

^(99)Tc^m标记反义miR208b寡核苷酸及其转染离体肥大心肌细胞的实验研究

目的探索用放射性核素99Tcm标记反义mi R208b寡核苷酸,并转染离体早期肥大心肌细胞的实验过程及方法。方法合成针对mi R208b的反义mi R寡核苷酸(AMO),LNA(带锁核酸)修饰AMO,将双功能螯合剂NHS-MAG3(N-羟基琥珀酰亚胺-巯基乙酰基三甘氨酸)与LNA-AMO偶联后,用99Tcm标记,然后用Sep-Pak C18反相层析法对NHS-MAG3-LNA-AMO及其标记物进行洗脱纯化,前者同时经Gene Quant DNA/RNA calculator测定在260 nm波长处的吸光度;不同检测方法测定纯化后标记物的标记率、放化纯度、稳定性以及与靶基因杂交的活性;建立由血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的离体心肌肥大细胞模型,检验早期肥大心肌细胞内mi RNA208b的相对表达量以及经脂质体包裹的99Tcm-NHS-MAG3-LNA-AMO在早期肥大心肌细胞内的滞留率。结果纯化后的标记物标记率>84%,放化纯度>86%,标记物分别在新鲜人血清、生理盐水中孵育12 h后,放化纯度均大于80%,并具有与靶向基因杂合的能力。离体心肌肥大模型成功建立,测得早期心肌肥大细胞内mi RNA208b表达升高,且最终标记物转染细胞后6 h滞留率大于20%。结论在双功能螯合剂NHS-MAG3以及LNA的介导下,成功将放射性核素99Tcm标记于NHSMAG3-LNA-AMO,最后将反义探针顺利转染早期离体肥大心肌细胞,这为后续的在体心肌肥大核素显像提供重要实验基础。

miR-208b对小鼠HL-1房颤细胞钙超载的影响及其机制分析

目的探讨miR-208b对小鼠HL-1房颤细胞钙超载的影响,并分析其作用机制。方法将小鼠HL-1心房肌细胞随机分为3组:对照组、起搏组和miR-208b组。后两组建立快速起搏HL-1房颤细胞模型,然后将miR-208b模拟物转染至miR-208b组细胞,将模拟物阴性对照转染至起搏组细胞,对照组不处理。全细胞膜片钳技术检测动作电位时程(APD)及L型钙电流(I Ca,L)的电流密度,实时荧光定量PCR及Western Blot检测钙通道蛋白mRNA及蛋白的表达。结果与对照组相比,起搏组和miR-208b组细胞中miR-208b表达显著增加(P<0.05),且miR-208b组高于起搏组(P<0.05)。与对照组相比,起搏组和miR-208b组APD50、APD90、I Ca,L的电流密度、CACNA1C mRNA、CACNB2 mRNA、CaV1.2蛋白、SERCA2 mRNA及SERCA2蛋白的表达均显著降低(P<0.05),且miR-208b组低于起搏组(P<0.05)。结论miR-208b在小鼠HL-1房颤细胞中高表达,其可通过抑制L型钙通道蛋白的表达和功能以及抑制肌浆网Ca 2+摄入,导致胞内Ca 2+超载,诱发AF。

肢体远隔缺血适应对急性ST段抬高型心肌梗死直接经皮冠状动脉介入治疗患者循环血微小核糖核酸-208b水平及术后心功能影响

目的:探讨肢体远隔缺血适应(RIC)对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)直接经皮冠状动脉介入治疗(PCI)成功患者循环血微小核糖核酸-208b(miR-208b)表达量的影响。方法:入选2016-01至2017-07在大连大学附属中山医院循环四科连续入院接受直接PCI术的STEMI患者75例,每组患者根据不同梗死部位按入院顺序2:1比例分为肢体RIC组50例(前壁20例、非前壁30例)及对照组25例(前壁10例、非前壁15例)。术前、术后即刻、术后24 h和术后48 h血清以实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测血清miR-208b的表达量。结果:(1)对照组患者循环血miR-208b表达量术后即刻较术前明显升高(84.1±9.0 vs77.8±9.4;P=0.032)。(2)肢体RIC组循环血miR-208b表达量术后即刻较术前明显降低(71.0±9.3 vs77.4±8.8;P=0.028)。(3)肢体RIC组术前循环血miR-208b表达量与对照组比较无明显差异(77.8±9.4 vs 77.4±8.8;P=0.874),术后即刻肢体RIC组低于对照组(71.0±9.3 vs 84.1±9.0;P=0.021)。(4)肢体RIC组肌酸激酶同工酶(CK-MB)峰值低于对照组[(135.2±18.6)U/L vs(167.7±17.2)U/L;P=0.038]。肢体RIC组CK-MB曲线下面积(AUC)小于对照组[(3 060.7±17.1)U/L vs(3 635.9±15.1) U/L;P=0.047]。(5)住院期间肢体RIC组左心室射血分数(LVEF)高于对照组[(57.8±7.8)%vs (51.9±7.9)%;P=0.003]。(6)肢体RIC组患者术后血清miR-208b的表达量与CK-MB AUC呈正相关(r=0.498,P<0.001)。结论:肢体RIC降低STEMI直接PCI术患者循环血miR-208b水平,并可以改善术后心功能。

循环microRNA208a和208b在急性心肌梗死早期诊断中的价值

目的 探讨心肌特异性miR208a、miR208b作为早期急性心肌梗死（AMI）诊断指标的作用。方法 纳入天津医科大学第二医院住院的急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）患者30例,不稳定型心绞痛（UAP）患者20例及无心血管疾病（CVD）、心电图正常的健康人21例。所有入选者,以hs-nRNA U6为内参,利用SYBR实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCRs）检测血浆中miR208a和miR208b的表达量,采集AMI发病后12 h内外周静脉血,第一份血液样本采集于患者刚入住冠心病监护病房（CCU）时,另一份则采集于次日早上6点（PCI术结束的数小时后）,分别测定miR208a、miR208b表达水平及cTnI的变化。结果 STEMI患者血浆中miR208a、miR208b表达水平显著高于健康对照组,分别为健康对照组的9.45倍（P〈0.001）和10.43倍（P〈0.001）。这些miRNA的表达水平在UAP患者血浆中均略有上升。19例急性STEMI患者胸痛发作3 h内,miR208a表达水平的升高率达100%（19例）,miR208b表达水平的升高率达89.5%（17例）,而患者同期cTnI呈阳性的比率仅有47.4%（9例）。STEMI患者与健康对照组的miR208a和miR208b的ROC曲线有明显差异,曲线下面积（AUC）分别为0.97（95%CI：0.937-1.011,P〈0.001）和0.938（95%CI：0.867-1.010,P〈0.001）,但miR208a、miR208b在急性STEMI和UAP组之间比较,AUC分别为0.739和0.750,而cTnI的AUC为0.900。结论 血浆miR208a和miR208b可能是潜在的早期、快速、准确诊断AMI的生物标志物,但对STEMI和UAP进行鉴别诊断的价值有限,不及cTnI。

急性心肌梗死病人血清miR-208a、miR-208b、miR-1水平变化及其临床意义

目的探讨急性心肌梗死(AMI)病人外周血血清miR-208a、miR-208b及miR-1的水平变化,并分析其对病人早期诊断临床意义。方法选取宜城市中医医院诊治的103例AMI病人(AMI组)和80名健康查体者(对照组)的临床资料。采取AMI组病人胸痛后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h和7 d时的血液标本,采用实时定量PCR法(qT-PCR)检测各组血清中miR-208a、miR-208b及miR-1水平,应用酶联免疫吸附测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)表达。结果 AMI组与对照组在年龄、性别、血糖、收缩压、舒张压、饮酒史及吸烟史方面比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,AMI组病人血清miR-208a、miR-208b及miR-1明显升高(P<0.05);血清miR-1及miR-208b在胸痛发作1 h明显升高,12 h达到峰值;miR-208a在胸痛发作1 h明显升高,3 h达到峰值;血清miR-208a、miR-1及miR-208b与cTnⅠ、CK-MB呈正相关(P<0.05)。结论血清miR-208a、miR-208b及miR-1可作为新的AMI生物标志物,对AMI早期诊断具有重要临床意义。

微小RNA-208a/208b在急性心肌梗死患者外周血中的变化趋势研究

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者循环血清中微小RNA-208a/208b(miR-208a/208b)在发病后7 d内的变化趋势,以及早期诊断价值。方法选择2017年7月至2018年6月期间并于发病后4 h内在河南科技大学第三附属医院(洛阳东方医院)心内科就诊的AMI患者69例,另外选取同时期在我院进行冠状动脉(冠脉)造影检查、排除冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)诊断的30例志愿者为对照组。分别于发病后4 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h、7 d时采集肘静脉血,采用qR T-PCR法检测血清miR-208a/208b表达水平,并检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线确定不同时间点miR-208a/208b对AMI的诊断价值。结果 AMI患者发病后4 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h、7 d时血清miR-208a/208b以及cTnI的水平均较对照组受试者明显升高(P<0.05),且miR-208a/208b随时间变化曲线与cTnI基本一致,具有先升高后下降的变化趋势;miR 208a/208b在发病后8h时达到高峰,而cTnI在发病后12 h时达到峰值。经ROC曲线分析,在发病后8h时,miR 208a/208b联合诊断AMI的ROC曲线下面积为0.892(95%CI:0.802~0.978),约登指数为0.65,其诊断效能高于其他时间点。结论 AMI患者血清miR-208a和miR-208b水平明显高于非冠心病对照组受试者,且在发病后8 h时达到峰值,可作为AMI的早期诊断指标。