微小RNA-3677靶向调控SOX6表达及对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-3677(miR-3677)对SRY盒转录因子6(SOX6)表达的靶向调控作用及其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用癌症多组学和临床数据库LinkedOmics分析TCGA数据库中has-miR-3677表达与肝癌临床病理特征和预后的关系。脂质体法向肝癌细胞SMMC7721转染miR-3677抑制剂(Inhibitor组)和阴性对照(NC组),并以未转染的细胞为空白对照,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测miR-3677水平,MTT法和AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术分别检测增殖和凋亡情况,双荧光素酶报告基因实验验证miR-3677对SOX6的靶向调控作用,QPCR和Western blotting检测SOX6、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)水平。结果miR-3677表达与临床分期和T分期有关,其中miR-3677表达随分期的升高而呈上升趋势(P<0.05);预后方面,miR-3677低表达者的总生存期较高表达者延长(P<0.05)。Inhibitor组的miR-3677水平为0.374±0.038,低于空白对照组的1.039±0.042和NC组的1.107±0.316(P<0.05);与空白对照组和NC组相比,Inhibitor组转染24~48 h后的细胞增殖活力降低(P<0.05);Inhibitor组的凋亡率为(11.241±1.235)%,高于空白对照组的(3.578±0.598)%和NC组的(4.216±0.823)%,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-3677模拟物可降低SOX6野生型3’端非翻译区的荧光素酶活性,而对突变型的荧光素酶活性无影响。与空白对照组和NC组比较,Inhibitor组SOX6、caspase-3的mRNA和蛋白水平均升高,而Bcl-2的mRNA和蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);空白对照组和NC组上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论下调miR-3677可抑制SMMC7721细胞的增殖能力并诱导凋亡,可能通过靶向SOX6来发挥促癌作用,有望成为肝癌防治的潜在靶点。

miR-3677-3p在胃癌组织和癌细胞中表达及靶向抑制RAP1GAP对癌细胞增殖和侵袭影响

目的旨在揭示miR-3677-3p在胃癌组织中的表达情况,及其是否通过靶向RAP1 GTPase激活蛋白(RAP1GAP)影响胃癌细胞的增殖、凋亡和侵袭功能。方法收集2016-10-10-2018-06-08陕西省人民医院手术治疗的40例胃癌患者癌和癌旁组织(距离癌组织边缘>5 cm),qRT-PCR检测miR-3677-3p在临床组织标本及正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(SNU-1、AGS、HGC-27、SGC-7901)的表达情况。选取AGS细胞进行转染,分为NC inhibitor组、miR-3677-3p inhibitor组、NC mimics组、miR-3677-3p mimics组、si-NC组、si-RAP1GAP组和si-RAP1GAP+miR-3677-3p inhibitor组。采用qRT-PCR检测转染效率,CCK-8法、流式细胞仪和Transwell分别检测转染NC inhibitor、miR-3677-3p inhibitor、si-RAP1GAP+miR-3677-3p inhibitor对AGS细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。各组数据经Shapiro-Wilk检验符合正态分布,2组比较采用t检验,多组比较采用单因素方差分析,组间的多重比较采用LSD-t检验。结果 miR-3677-3p在胃癌组织的相对表达量(2.443±1.006)显著高于癌旁对照组织(1.000±0.265),差异有统计学意义,t=8.941,P<0.001。miR-3677-3p在胃癌细胞株SNU-1(1.975±0.310)、AGS(2.439±0.635)、HGC-27(2.223±0.462)和SGC-7901(1.604±0.405)相对表达水平显著高于GES-1细胞(1.000±0.173),差异有统计学意义,F=8.846,P<0.001。miR-3677-3p inhibitor组细胞增殖水平(0.873±0.132)与NC inhibitor组(1.323±0.122)相比显著下降,差异有统计学意义,t=5.598,P<0.001。miR-3677-3p inhibitor组细胞凋亡比例(33.11±5.36)与NC inhibitor组(9.17±2.12)相比显著增高,差异有统计学意义,t=9.287,P<0.001。穿过Transwell小室的细胞数量miR-3677-3p inhibitor组(78.52±21.25)与NC inhibitor组(232.30±33.65)相比显著下降,差异有统计学意义,t=8.642,P<0.001。双荧光素酶报告基因结果显示miR-3677-3p能够结合RAP1GAP的3′UTR。RAP1GAP的mRNA相对表达水平miR-3677-3p inhibitor组(3.210±0.540)显著高于NC inhibitor组(1.000±0.242),差异有统计学意义,t=8.351,P<0.001,蛋白质印迹法也得出了类似结果。功能回复实验显示,si-RAP1GAP部分逆转了miR-3677-3p inhibitor对AGS细胞的增殖、凋亡和侵袭的影响。结论 miR-3677-3p在胃癌组织和细胞中高表达,其可能通过靶向抑制RAP1GAP的表达,进而调控了胃癌细胞的增殖、凋亡和侵袭。