LncRNA MALAT-1靶向microRNA-370-3p调节Akt通路对肺癌细胞生物学行为影响的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子-1(LncRNA MALAT-1)是否能靶向调节microRNA-370-3p(miR-370-3p)的表达,以及对Akt通路和肺癌细胞生物学行为的影响。方法 选用非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞体外培养,分别抑制LncRNA MALAT-1(转染si-MALAT-1)或过表达miR-370-3p(转染miR-370-3p mimic),抑制LncRNA MALAT-1和干扰miR-370-3p(同时转染si-MALAT-1和antimiR-370-3p),观察A549细胞的生物学行为和Akt通路蛋白的表达。qRT-PCR检测LncRNA MALAT-1、miR-370-3p mRNA的表达;MMT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移与侵袭;Western blotting检测Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K蛋白相对表达量。构建MALAT-1野生型(MALAT-1WT_1uc)与突变型(MALAT-1MUT_1uc)荧光素酶报告基因质粒并分别与miR-370-3p、miR-NC转染至A549细胞,观察荧光结合强度并检测miR-370-3p的表达。结果 抑制LncRNA MALAT-1或过表达miR-370-3p能抑制A549细胞迁移、侵袭,促进细胞凋亡,减少A549细胞活性(P <0.05),并下调p-Akt和p-PI3K蛋白的表达(P <0.05)。与单纯抑制LncRNA MALAT-1比较,抑制LncRNA MALAT-1并干扰miR-370-3p能促进A549细胞迁移、侵袭,抑制细胞凋亡,增加A549细胞活性(P <0.05),并上调p-Akt和p-PI3K蛋白的表达(P <0.05)。TargetScan靶基因预测发现LncRNA MALAT-1与miR-370-3p存在结合位点,荧光素酶报告基因实验验证发现,与MALAT-1WT_1uc+Control组和MALAT-1WT_1uc+miR NC组比较,MALAT-1WT_1uc+miR-370-3p组相对荧光强度下降(P <0.05),MALAT-1MUT_1uc+miR-370-3p荧光强度无变化(P>0.05),进一步qRT-PCR结果发现,与Control组比较,si-MALAT-1组的miR-370-3p mRNA相对表达量升高(P <0.05),与si-MALAT-1组比较,si-MALAT-1+anti-miR-370-3p组的miR-370-3pmRNA相对表达量降低(P <0.05)。结论LncRNA MALAT-1可以靶向负调控miR-370-3p。抑制LncRNA MALAT-1可以上调miR-370-3p的表达,抑制A549细胞的增殖、迁移及侵袭,促进A549细胞的凋亡,并下调Akt通路蛋白的磷酸化。

microRNA-370对缺氧心肌细胞凋亡的影响及其相关机制的研究

目的研究microRNA-370(miR-370)对缺氧诱导的人心肌细胞(Human cardiomyocyte,HCM)凋亡的影响及其相关作用机制。方法建立缺氧损伤的HCM模型。在HCM中转染miR-370-inhibitor并缺氧处理48h,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-370表达,MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western-blot检测PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT等的表达水平;在HCM中转染miR-370-inhibitor并缺氧处理48 h,加入PI3K/AKT通路抑制剂,再进行同样的检测;同时,在HCM中转染miR-370-mimic并缺氧处理48 h,再进行同样的检测。结果缺氧12、24.48 h后HCM的细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显提高(P<0.05)。缺氧处理的HCM中miR-370表达水平显著升高(P<0.05),敲低miR-370表达可显著提高经缺氧处理的HCM的细胞活力(P<0.05),降低其凋亡率(P<0.05),且p-PI3K、p-AKT表达水平明显增高(P<0.05)。PI3K/AKT通路抑制剂可以逆转miR-370低表达对缺氧处理HCM的凋亡抑制作用(P<0.05)。miR-370-mimic可以显著降低经缺氧处理的HCM的细胞活力并促进其凋亡(P<0.05)。结论敲低miR-370可活化PI3K/AKT通路活性,进而抑制经缺氧处理的HCM凋亡。

血清OPN、sPD-L1、miR-370在急性髓系白血病中的表达及与危险分层的关系

目的:分析血清骨桥蛋白(OPN)、可溶性程序性死亡因子配体-1(sPD-L1)、微小RNA-370(miR-370)在急性髓系白血病(AML)中的表达及与危险分层的关系。方法:选取2021年11月—2023年2月本院诊治的79例AML患者作为研究对象,根据相关标准分为低危组(n=26)、中危组(n=39)及高危组(n=14)。比较3组治疗前后血清OPN、sPD-L1、miR-370、白细胞计数(WBC)、血红蛋白(Hb)水平,采用Pearson分析血清OPN、sPD-L1、miR-370水平与WBC、Hb水平相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析治疗前血清OPN、sPD-L1、miR-370水平联合检测对AML患者危险分层情况的诊断价值。结果:3组治疗前后血清OPN、sPD-L1、miR-370、WBC水平比较:低危组<中危组<高危组(P<0.05);血清Hb水平比较:低危组>中危组>高危组(P<0.05);治疗前后血清OPN、sPD-L1、miR-370水平与WBC水平呈正相关(治疗前:r=0.637、0.629、0.661,治疗后:r=0.432、0.422、0.544,P<0.05),与Hb水平呈负相关(治疗前:r=-0.655、-0.648、-0.646,治疗后:r=-0.519、-0.507、-0.438,P<0.05);治疗前血清OPN、sPD-L1、miR-370联合检测诊断AUC为0.942,高于单一检测(P<0.05)。结论:血清OPN、sPD-L1、miR-370水平与AML患者病情程度、分层情况密切相关,可为临床诊疗提供参考。

血清microRNA-155、microRNA-21、趋化素、瘦素与糖尿病肥胖患者胰岛素抵抗的相关性

目的 探讨糖尿病肥胖患者血清microRNA-155(miR-155)、microRNA-21(miR-21)、趋化素、瘦素水平与胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法 选取2022年1月—2023年4月山东中医药大学第二附属医院收治的138例2型糖尿病(T2DM)患者为研究对象,其中肥胖患者73例(肥胖组),非肥胖患者65例(非肥胖组)。肥胖组中有IR 45例(IR组),无IR 28例(非IR组)。收集患者一般资料,包括性别、体质量指数(BMI)、年龄、颈围(NC)、腰围(WC)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、空腹胰岛素(FINS)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、miR-155、miR-21、趋化素、瘦素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平;通过多因素逐步Logistic回归模型分析T2DM肥胖患者发生IR的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析miR-155、miR-21、趋化素、瘦素诊断T2DM肥胖患者IR的效能;Pearson法分析miR-155、miR-21、趋化素、瘦素与HOMA-IR的相关性。结果 肥胖组miR-155相对表达量低于非肥胖组(P <0.05),miR-21、趋化素、瘦素、HOMA-IR高于非肥胖组(P <0.05)。IR组miR-155相对表达量低于非IR组(P <0.05),NC、WC、miR-21、趋化素、瘦素水平高于非IR组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:NC [O^R=1.416(95%CI:1.038,1.932)]、WC [O^R=1.227(95%CI:1.049,1.435)]、miR-155 [O^R=1.763(95%CI:1.205,2.579)]、miR-21[O^R=1.932(95%CI:1.356,2.753)]、趋化素[O^R=2.074(95%CI:1.492,2.883)]、瘦素[O^R=1.628(95%CI:1.246,2.127)]是T2DM肥胖患者发生IR的危险因素(P <0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-155、miR-21、趋化素、瘦素诊断T2DM肥胖患者IR的曲线下面积分别为0.865、0.909、0.874和0.871;敏感性为77.8%(95%CI:0.614,0.825)、86.7%(95%CI:0.792,0.917)、95.6%(95%CI:0.713,0.965)和80.0%(95%CI:0.692,0.917);特异性为85.7%(95%CI:0.647,0.903)、82.1%(95%CI:0.732,0.914)、75.0%(95%CI:0.675,0.928)和89.3%(95%CI:0.656,0.944)。miR-155与HOMA-IR呈负相关(r=-0.573,P=0.000),miR-21、趋化素、瘦素与HOMA-IR均呈正相关(r=0.531、0.558和0.568,均P=0.000)。结论 T2DM肥胖患者中IR较多,且miR-155、miR-21、趋化素、瘦素是T2DM肥胖患者发生IR的危险因素。

血清microRNA-21、microRNA-193a-3p表达与结直肠癌患者手术预后的关系

目的探究血清microRNA-21(miR-21)、microRNA-193a-3p(miR-193a-3p)水平与结直肠癌患者手术预后的关系。方法回顾性分析2020年1月—2022年1月苏州大学附属第一医院收治112例结直肠癌患者的病历资料。患者均接受结直肠癌根治术,术后随访16个月,记录患者的预后生存结局,多因素逐步Logistic回归分析结直肠癌患者手术预后的影响因素,评估血清miR-21、miR-193a-3p对结直肠癌患者预后的预测效能。结果112例结直肠癌患者死亡22例,病死率为19.64%;生存90例,生存率为80.36%。死亡组术前血清miR-21 mRNA相对表达量、临床分期Ⅲ期占比、淋巴结转移率均高于生存组(P<0.05),血清miR-193a-3p m RNA相对表达量低于生存组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示,临床分期Ⅲ期[OR=3.777(95%CI:1.399,10.194)]、淋巴结转移[OR=5.099(95%CI:1.715,15.156)]、miR-21表达升高[OR=4.889(95%CI:1.645,14.533)]、miR-193a-3p表达降低[OR=4.402(95%CI:1.481,13.084)]均是直肠癌患者预后的影响因素(P<0.05)。受试者工作特性曲线分析结果显示,血清miR-21、miR-193a-3p单一及联合预测结直肠癌预后的敏感性分别为69.04%(95%CI:0.487,0.813)、72.73%(95%CI:0.495,0.884)、86.36%(95%CI:0.640,0.964),特异性分别为62.22%(95%CI:0.513,0.720)、68.89%(95%CI:0.581,0.780)、90.00%(95%CI:0.814,0.950),曲线下面积分别为0.782、0.731和0.901。结论结直肠癌患者术前miR-21、miR-193a-3p表达与术后预后密切相关,且在结直肠癌患者的预后结局中表现出良好的预测效能。

清肾颗粒对非透析慢性肾脏病湿热证患者血清microRNA-21、Wnt4及β-catenin的影响

目的观察清肾颗粒对非透析慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)湿热证患者血microRNA-21、Wnt4及β-catenin的影响,探讨其保护肾功能、改善临床症状的作用机制。方法选取66例符合纳入标准的CKD湿热证患者,最终完成64例,对照组和观察组各32例。对照组采用CKD常规基础治疗,观察组在对照组治疗基础上加用清肾颗粒口服,疗程均为12周。观察和比较两组患者治疗前后中医症状积分及证候疗效,肾功能指标[血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)、血清肌酐(serum creatinine,SCr)],微炎症、营养指标[超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)、白蛋白(albumin,Alb)、前白蛋白(prealbumin,PAB)],血清microRNA-21、Wnt4及β-catenin水平。结果两组患者治疗后中医症状积分较治疗前均显著降低(P<0.05),且观察组降低程度显著大于对照组(P<0.05);两组患者临床疗效比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组BUN、SCr水平,eGFR较治疗前显著改善(P<0.05),且改善程度显著优于对照组(P<0.05);与治疗前比较,两组患者治疗后血清hs-CRP水平均显著降低(P<0.05),Alb、PAB水平均显著升高(P<0.05),且观察组血清hs-CRP、Alb、PAB水平改善程度优于对照组(P<0.05);治疗前两组患者血清microRNA-21、Wnt4、β-catenin水平均显著高于正常组(P<0.05),观察组患者治疗后血清microRNA-21、Wnt4、β-catenin水平均显著降低(P<0.05),且降低程度显著大于对照组(P<0.05)。结论清肾颗粒能够改善CKD湿热证患者肾功能及微炎症、营养不良状态,减轻临床症状,其机制可能与降低microRNA-21表达水平,靶向抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

血管内超声参数联合microRNA-206评估非ST段抬高型急性心肌梗死患者病变严重程度及预后的价值

目的探讨血管内超声(IVUS)参数联合microRNA-206(miR-206)评估非ST段抬高型急性心肌梗死(NSTEAMI)患者病变严重程度及预后的价值。方法选取2019年3月-2021年4月河北北方学院附属第一医院收治的105例NSTEAMI患者,所有患者行经皮冠状动脉介入术(PCI),根据病变严重程度将患者分为单支病变组(55例)、双支病变组(32例)、多支病变组(18例)。对比不同病变程度患者IVUS参数、血清miR-206,分析IVUS参数、血清miR-206与NSTEAMI患者病变严重程度的相关性。随访2年,根据是否发生MACE分为发生组与非发生组。对比发生组与非发生组的临床资料,采用多因素逐步Logistic回归模型分析NSTEAMI患者发生主要不良心脏事件(MACE)的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评估IVUS参数、血清miR-206预测NSTEAMI患者发生MACE的效能。结果多支病变组斑块负荷、斑块面积、重构指数、偏心指数、血清miR-206相对表达量均高于单支、双支组(P<0.05),且双支病变组均高于单支病变组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血管外弹力膜面积与NSTEAMI患者病变严重程度无相关性(r=0.271,P=0.325);斑块负荷、斑块面积、重构指数、偏心指数、血清miR-206与NSTEAMI患者病变严重程度呈正相关(r=0.416、0.382、0.423、0.507和0.394,均P=0.000)。随访2年,失访2例,剩余103例患者中32例(31.07%)发生MACE,71例(68.93%)未发生MACE。发生组多支病变、血运未重建占比、斑块负荷、斑块面积、重构指数、偏心指数、血清miR-206相对表达量均高于非发生组(P<0.05),淋巴细胞计数、血红蛋白水平均低于非发生组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:多支病变[OR=3.466(95%CI:1.523,7.884)]、血运未重建[OR=2.776(95%CI:1.220,6.315)]、斑块负荷[OR=3.155(95%CI:1.387,7.177)]、重构指数[OR=3.842(95%CI:1.689,8.740)]、偏心指数[OR=4.166(95%CI:1.831,9.477)]、血清miR-206[OR=4.500(95%CI:1.978,10.236)]为NSTEAMI患者发生MACE的危险因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,斑块负荷、重构指数、偏心指数、血清miR-206四者联合预测NSTEAMI患者发生MACE的敏感性为88.52%(95%CI:0.674,0.957),特异性为92.86%(95%CI:0.713,0.968),曲线下面积为0.900(95%CI:0.812,0.953)。结论IVUS参数(斑块负荷、重构指数、偏心指数)、血清miR-206在评估NSTEAMI患者病变严重程度与预后中具有重要价值,且四者联合具有更高的预测价值。

化瘀杀胚汤联合甲氨蝶呤治疗异位妊娠的疗效及对TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p表达量的影响

【目的】探讨化瘀杀胚汤(由丹参、赤芍、桃仁、蜈蚣、紫草、天花粉、三七等中药组成)联合甲氨蝶呤治疗异位妊娠疗效及对患者TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p表达量的影响。【方法】将104例异位妊娠患者随机分为观察组和对照组,每组各52例。对照组给予甲氨蝶呤联合米非司酮治疗,观察组在对照组的基础上加用化瘀杀胚汤治疗,连续用药3 d并随访观察1个月。比较2组患者保守治疗成功率、血β人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)水平恢复正常时间以及异位妊娠包块吸收时间、治疗后输卵管完全通畅率与不通畅率,观察2组保守治疗成功患者治疗前后血清TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p相对表达量的变化情况。【结果】(1)观察组的保守治疗成功率为94.23%(49/52),明显高于对照组的71.15%(37/52),差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组比较,观察组的血β-HCG恢复正常时间及包块吸收时间均明显缩短,差异均有统计学意义(P<0.01)。(3)观察组治疗后的输卵管完全通畅率为55.77%(29/52),明显高于对照组的21.15%(11/52);不通畅率为19.23%(10/52),明显低于对照组的59.62%(31/52),差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(4)与治疗前比较,2组保守治疗成功患者治疗结束1个月后的TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p相对表达量均明显降低(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,观察组治疗结束1个月后的TGF-β/Smad2/3蛋白水平和microRNA-30d-5p相对表达量均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。(5)2组患者的不良反应均以胃肠道不适为主,观察组的不良反应发生率为25.00%(13/52),明显低于对照组的46.15%(24/52),组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】化瘀杀胚汤联合甲氨蝶呤治疗异位妊娠,可有效提高药物保守治疗的成功率,有助于包块的吸收以及输卵管通畅,能有效降低患者的TGF-β/Smad2/3蛋白水平及microRNA-30d-5p的相对表达量,且药物安全性较高。

血清miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370在急性髓系白血病患者中的水平及意义

目的分析微小核糖核酸-21(miR-21)、微小核糖核酸-148b(miR-148b)、微小核糖核酸-203(miR-203)、微小核糖核酸-370(miR-370)在急性髓系白血病患者中的水平及意义。方法选择2020年5月至2022年11月该院收治的急性髓系白血病患者202例作为急性髓系白血病组,选择同期体检健康者242例作为健康对照组。检测并比较两组血清miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370水平,比较治疗后不同疗效(完全缓解和非完全缓解)及不同临床特征急性髓系白血病患者血清miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370单独及联合检测对急性髓系白血病的诊断价值。结果急性髓系白血病组血清miR-21水平高于健康对照组(P<0.05),血清miR-148b、miR-203、miR-370水平低于健康对照组(P<0.05)。治疗后,202例急性髓系白血病患者非完全缓解117例,完全缓解85例;非完全缓解急性髓系白血病患者血清miR-21水平高于完全缓解患者(P<0.05),血清miR-148b、miR-203、miR-370水平低于完全缓解患者(P<0.05)。不同性别、年龄、骨髓原始细胞比例的急性髓系白血病患者血清miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);白细胞计数>10×10^(9)/L的急性髓系白血病患者血清miR-21水平高于白细胞计数≤10×10^(9)/L的患者(P<0.05),血清miR-148b、miR-203、miR-370水平低于白细胞计数≤10×10^(9)/L的患者(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370联合检测诊断急性髓系白血病的曲线下面积(AUC)为0.810(95%CI:0.770~0.845),高于miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370单项检测诊断的AUC[0.797(95%CI:0.757~0.834)、0.803(95%CI:0.763~0.839)、0.775(95%CI:0.733~0.813)、0.735(95%CI:0.691~0.775)],差异均有统计学意义(Z=2.426,P=0.015;Z=2.152,P=0.033;Z=2.780,P=0.010;Z=3.423,P=0.001)。结论急性髓系白血病患者血清miR-21水平升高,miR-148b、miR-203、miR-370水平降低,且不同白细胞计数及治疗后不同疗效患者血清miR-21、miR-148b、miR-203、miR-370水平也有差异,该4项指标联合检测对急性髓系白血病的诊断准确性更高,也许可作为急性髓系白血病患者诊治的新靶点。

MicroRNA-196b、IGFBP-3在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后关系

目的 探究microRNA-196b(miR-196b)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与预后的关系。方法 选取2020年4月—2022年4月在无锡市第二人民医院手术治疗的NSCLC患者78例。收集患者的病历资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织中miR-196b、IGFBP-3的表达。所有患者随访12个月,根据预后结局分为进展组、稳定组。筛查NSCLC患者预后的影响因素,评估组织中miR-196b、IGFBP-3表达对NSCLC患者预后的预测效能。分析癌组织中miR-196b、IGFBP-3不同表达患者生存曲线的差异。结果 进展组临床分期Ⅲ期占比、术前淋巴结转移率均高于稳定组(P <0.05)。进展组癌组织miR-196b相对表达量高于稳定组(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于稳定组(P <0.05)。癌组织miR-196b相对表达量高于癌旁组织(P <0.05),IGFBP-3阳性表达率低于癌旁组织(P <0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:临床分期[O^R=3.684(95%CI:1.259,10.778)]、术前淋巴结转移[O^R=3.557(95%CI:1.216,10.408)]、癌组织miR-196b表达[O^R=3.979(95%CI:1.359,11.641)]是NSCLC患者预后的危险因素(P <0.05),癌组织IGFBP-3表达阳性[O^R=0.220(95%CI:0.075,0.642)]是NSCLC患者预后的保护因素(P <0.05)。癌组织miR-196b、IGFBP-3及联合预测NSCLC患者预后的敏感性分别为66.25%(95%CI:0.512,0.797)、60.00%(95%CI:0.496,0.781)、87.50%(95%CI:0.725,0.963),特异性分别为69.74%(95%CI:0.534,0.825)、76.32%(95%CI:0.603,0.892)、72.37%(95%CI:0.576,0.861),曲线下面积分别为0.703、0.680、0.805。miR-196b低表达组生存情况优于高表达组(P <0.05)。IGFBP-3阳性表达组生存情况优于阴性表达组(P <0.05)。结论 NSCLC患者癌组织miR-196b、IGFBP-3表达与预后相关,且联合预测NSCLC患者预后效能良好。

miR-370-3p和LRP6对胎儿生长受限孕妇的临床诊断价值

目的探讨微小RNA-370-3p(miR-370-3p)和低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)对胎儿生长受限(FGR)孕妇的临床诊断价值。方法选取2020年6月—2022年6月期间产检并确诊为FGR的孕妇96例为观察组,另选取同期产检的健康孕妇96例作为对照组,记录两组分娩孕周、1 min Apgar评分、5 min Apgar评分、新生儿体重、胎盘质量,依据美国妇产科学院(ACOG)标准将观察组划分为FGR组、严重FGR组。qRT-PCR法检测血清miR-370-3p和LRP6 mRNA表达水平;血清miR-370-3p和LRP6 mRNA水平与分娩孕周、1 min Apgar评分、5 min Apgar评分、新生儿体重、胎盘质量的相关性采用Pearson法分析;miR-370-3p和LRP6 mRNA对FGR的诊断价值采用ROC曲线评估。结果两组孕妇年龄、分娩孕周、是否初产的比例差异有统计学意义(P<0.05);观察组miR-370-3p显著高于对照组,LRP6显著低于对照组(P<0.05);严重FGR组miR-370-3p显著高于FGR组,LRP6显著低于FGR组(P<0.05);对照组与观察组新生儿体重、1 min Apgar评分、5 min Apgar评分及胎盘质量之间差异有统计学意义(P<0.05);miR-370-3p与LRP6之间呈负相关(r=-0.692,P<0.05),miR-370-3p与分娩孕周、新生儿体重、1 min Apgar评分、5 min Apgar评分、胎盘质量均呈负相关(r=-0.401、-0.382、-0.425、-0.484、-0.504,均P<0.05),LRP6与分娩孕周、新生儿体重、1 min Apgar评分、5 min Apgar评分、胎盘质量均呈正相关(r=0.306、0.412、0.512、0.612、0.419,均P<0.05);ROC曲线显示,miR-370-3p对FGR诊断的AUC为0.877(95%CI:0.821~0.919),截断值为1.40,其敏感度、特异性分别为67.71%、93.75%;LRP6对FGR诊断的AUC为0.838(95%CI:0.778~0.887),截断值为0.83,其敏感度、特异性分别为84.37%、71.87%;二者联合对FGR诊断的AUC为0.923(95%CI:0.875~0.956),明显高于二者单独诊断(Z联合vs miR-370-3P=2.811、P=0.005;Z联合vs LRP6=3.372、P=0.001),其敏感度、特异性分别为85.42%、87.50%。结论FGR患者血清miR-370-3p高表达、LRP6低表达,二者联合对FGR具有一定诊断价值。

GAS6-AS1调节miR-370-3p/SPATA2轴对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和EMT的影响

目的:探讨长链非编码RNA GAS6反义RNA1(long non-coding RNA GAS6 antisense RNA1, lncRNA GAS6-AS1)调节miR-370-3p/精子发生相关蛋白2 (spermatogenesis-associated protein 2, SPATA2)轴对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)的影响。方法:qRT-PCR、Western blot分别检测癌旁组织、卵巢癌组织、人正常卵巢上皮细胞IOSE80及卵巢癌细胞系HO-8910、SKOV3、A2780中GAS6-AS1、miR-370-3p及SPATA2蛋白表达。将SKOV3细胞分为:对照组(NC组)、 si-NC组、si-GAS6-AS1组、mimic NC组、miR-370-3p mimic组、si-GAS6-AS1+inhibitor NC组、si-GAS6-AS1+miR-370-3p inhibitor组,qRT-PCR检测细胞中GAS6-AS1、miR-370-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;Western blot检测SPATA2、细胞周期素D1(CyclinD1)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)表达;双荧光素酶报告基因实验检测GAS6-AS1与miR-370-3p、 miR-370-3p与SPATA2的关系。结果:在卵巢癌组织和细胞中GAS6-AS1、SPATA2蛋白高表达,miR-370-3p低表达,且在SKOV3细胞中GAS6-AS1、SPATA2蛋白表达量最高,miR-370-3p表达水平最低,因此,选择SKOV3细胞为后续研究对象。与NC组、si-NC组比较,si-GAS6-AS1组GAS6-AS1、OD450值(24 h、48 h、72 h)、划痕愈合率、侵袭细胞数、SPATA2、CyclinD1、Vimentin、N-cadherin蛋白表达降低,miR-370-3p表达、细胞凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与NC组、mimic NC组比较,miR-370-3p mimic组OD450值(24 h、48 h、72 h)、划痕愈合率、侵袭细胞数、SPATA2、CyclinD1、Vimentin、N-cadherin蛋白表达降低,miR-370-3p表达、细胞凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);miR-370-3p inhibitor减弱了沉默GAS6-AS1对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的抑制及对细胞凋亡的促进作用。GAS6-AS1与miR-370-3p、miR-370-3p与SPATA2存在靶向调控关系。结论:沉默GAS6-AS1通过上调miR-370-3p来抑制SPATA2表达,从而抑制SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT,并促进细胞凋亡。

miR-370-3p在绵羊中的表达、生物信息学分析与靶基因预测

本研究以新吉细毛羊和小尾寒羊为实验动物,用实时荧光定量PCR检测miR-370-3p在绵羊不同组织中的表达变化;利用Mega11.0对miR-370-3p进行序列分析,并构建进化树;利用miRBase对脊椎动物的miR-370-3p序列进行检索,使用Ensembl数据库对miR-370-3p进行定位;利用在线网站预测miR-370-3p的靶基因,并进行GO、KEGG分析。组织表达结果显示,miR-370-3p在2种绵羊1月份和10月份的皮肤组织中均存在显著差异;在2种绵羊同组织间均存在显著差异。miR-370-3p序列主要存在于哺乳动物,且在不同物种间高度保守;miR-370-3p共有315个靶基因;GO分析结果显示靶基因主要富集在蛋白质的自磷酸化、细胞核与细胞质的运输、神经元凋亡过程等方面;KEGG通路分析表明靶基因主要富集到MAPK信号通路、寿命调节通路和细胞内吞作用等,其中多个与毛囊生长发育相关的基因富集到相关通路之上。绵羊miR-370-3p在皮肤组织存在时空表达差异,在各组织间广泛表达,可能通过靶向MAPK信号通路及寿命调节等通路参与调控毛囊的生长发育。

miR-10a-5p、miR-217-5p、miR-370-3p水平联合检测对急性髓系白血病患者复发的预测价值

目的探讨微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)、微小RNA-217-5p(miR-217-5p)、微小RNA-370-3p(miR-370-3p)水平联合检测对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者复发的预测价值。方法 回顾性选取2021年6月至2022年12月西安国际医学中心医院收治的AML患者78例,纳入观察组,根据1∶1选例原则,另选取同期单纯贫血患者78例,纳入对照组。比较两组、不同疗效及不同复发情况患者骨髓细胞miR-10a-5p、miR-217-5p、miR-370-3p水平,分析各指标水平与疗效及复发的关系。结果 观察组miR-10a-5p水平高于对照组,miR-217-5p、miR-370-3p水平低于对照组(P<0.05);不同疗效患者miR-10a-5p水平比较:未缓解>部分缓解>完全缓解,miR-217-5p、miR-370-3p水平比较:未缓解<部分缓解<完全缓解(P<0.05);复发患者miR-10a-5p水平高于未复发患者,miR-217-5p、miR-370-3p水平低于未复发患者(P<0.05);AML患者miR-10a-5p水平与疗效及复发情况均呈正相关,miR-217-5p、miR-370-3p水平与疗效及复发情况均呈负相关,且联合预测AML患者复发AUC为0.913,约登指数为12.32,最佳诊断敏感度为84.21%,特异度为88.14%。结论 miR-10a-5p、miR-217-5p、miR-370-3p水平与AML患者疗效及复发均具有一定相关性,联合检测对复发具有一定预测价值,可作为临床评估疗效及复发情况的辅助指标。

miR-370-3p对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探究miR-370-3p对口腔鳞癌细胞(SCC-9)增殖、迁移和侵袭的影响,并分析其可能的作用机制。方法:比较人正常口腔鳞状上皮细胞(NOK)与SCC-9细胞miR-370-3p和NPC1表达。将SCC-9细胞分为miR-370-3p mimic组、miR-370-3p阴性对照(NC)组、miR-370-3p inhibitor组、miR-370-3p inhibitor-NC组。采用克隆形成实验检测细胞集落形成能力,CCK-8法、划痕实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测细胞miR-370-3p表达,双荧光素酶实验检测miR-370-3p与NPC1的靶向关系,western blotting法检测NPC1蛋白表达。结果:与NOK细胞比较,SCC-9细胞miR-370-3p表达上调,NPC1表达下调(均P<0.05)。与mimic NC组比较,miR-370-3p mimic组miR-370-3p表达水平升高,NPC1蛋白表达水平降低,细胞活力增强,划痕迁移率降低,穿膜细胞数增加(均P<0.05)。miR-370-3p inhibitor组上述指标变化趋势与miR-370-3p mimic组相反(均P<0.05)。荧光素酶实验结果显示,miR-370-3p能够靶向结合NPC1的3’-UTR,并抑制NPC1蛋白表达(P<0.05)。结论:miR-370-3p可促进口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移和侵袭,其机制可能与调控其下游靶基因NPC1的表达有关。

MicroRNA-195/497对香烟烟雾提取物诱导的人支气管上皮细胞中TGF-β表达的影响

目的探讨microRNA-195/497(miR-195/497)在香烟烟雾提取物(CSE)诱导的人支气管上皮细胞中影响转化生长因子-β(TGF-β)表达的作用机制。方法用3%CSE诱导BEAS-2B细胞模拟慢性阻塞性肺疾病(COPD)的发病机制,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-195、miR-497、SMAD7及TGF-β基因表达。双荧光素酶报告实验验证miR-195、miR-497与SMAD7的靶向关系,将miR-195mimic和miR-497 mimic转染至3%CSE处理的细胞中,qRT-PCR检测SMAD7的表达。将miR-195 mimic、miR-497 mimic和si-SMAD7转染至3%CSE处理的细胞中,qRT-PCR检测miR-195、miR-497、SMAD7、TGF-β的基因表达,Western blotting检测SMAD7、TGF-β的蛋白表达。结果3%CSE组miR-195、miR-497 mRNA相对表达量低于正常细胞组(P<0.05),SMAD7、TGF-βmRNA相对表达量高于正常细胞组(P<0.05)。miR-195 mimic组Wt-SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。miR-195 mimic组与mimic NC组Wt-SMAD7 mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-497 mimic组WtSMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。miR-497 mimic组与mimic NC组Mut-SMAD7mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-195 mimic组SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。miR-497 mimic组SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。3%CSE组细胞miR-195和miR-497相对表达量较Control组下降(P<0.05),SMAD7及TGF-β蛋白相对表达量升高(P<0.05);miR-195 mimic+3%CSE组细胞miR-195相对表达量较3%CSE组升高(P<0.05),SMAD7、TGF-β下降(P<0.05),而miR-497相对表达量无明显差异(P>0.05);miR-497 mimic+3%CSE组细胞miR-497相对表达量较3%CSE组升高(P<0.05),SMAD7、TGF-β下降(P<0.05),而miR-195相对表达量无明显差异(P>0.05);si-SMAD7+3%CSE组SMAD7、TGF-β蛋白相对表达量较3%CSE组下降(P<0.05),而miR-195、miR-497无明显差异(P>0.05)。3%CSE组SMAD7、TGF-β蛋白相对表达量较Control组升高(P<0.05),miR-195 mimic+3%CSE组、miR-497 mimic+3%CSE组、si-SMAD7+3%CSE组较3%CSE组下降(P<0.05)。结论miR-195/497可通过调控SMAD7的表达影响CSE诱导的人支气管上皮细胞中TGF-β表达。

血浆microRNA-206联合床旁超声膈肌功能预测老年机械通气患者撤机结果的价值

目的观察血浆microRNA-206(miRNA-206)与床旁超声膈肌功能联合预测老年机械通气患者撤机结果的价值。方法选取2020年6月—2023年6月在南京医科大学附属淮安第一医院急诊重症监护室住院的老年机械通气患者102例,根据撤机结果分为成功组、失败组。比较两组患者血浆miRNA-206、膈肌功能指标及一般资料;采用多因素逐步Logistic回归模型分析老年机械通气患者撤机结果的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆miRNA-206、床旁超声膈肌功能单独及联合对老年机械通气患者撤机结果的预测价值。结果102例患者撤机失败率为33.33%。与成功组比较,失败组膈肌增厚率(DTF)、膈肌活动度(DE)、血浆miRNA-206、白蛋白(Alb)水平降低(P<0.05),膈肌收缩速度(DCV)加快(P<0.05),膈肌浅快呼吸指数(DRSBI)、急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)评分、早期气管切开百分率升高(P<0.05),年龄增大(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:年龄[OR=1.089(95%CI:1.041,1.139)]、APACHEⅡ评分[OR=1.079(95%CI:1.029,1.131)]、miRNA-206[OR=0.663(95%CI:0.502,0.876)]、DTF[OR=0.587(95%CI:0.389,0.887)]、DE[OR=0.744(95%CI:0.584,0.947)]、DCV[OR=1.213(95%CI:1.059,1.389)]和DRSBI[OR=1.931(95%CI:1.029,3.622)]是老年机械通气患者撤机结果的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miRNA-206、DTF、DE、DCV、DRSBI预测老年机械通气患者撤机结果的最佳截断值分别为0.50、34.36%、9.60mm、1.50 cm/s、1.90次/(min·mm),敏感性分别为73.53%(95%CI:0.556,0.871)、67.65%(95%CI:0.495,0.826)、61.76%(95%CI:0.436,0.778)、70.59%(95%CI:0.525,0.849)、64.71%(95%CI:0.465,0.803),特异性分别为70.59%(95%CI:0.583,0.810)、73.53%(95%CI:0.614,0.835)、75.00%(95%CI:0.630,0.847)、72.06%(95%CI:0.599,0.823)、79.41%(95%CI:0.679,0.883),曲线下面积(AUC)分别为0.709、0.715、0.645、0.742、0.719;联合预测的敏感性为97.06%(95%CI:0.847,0.999),特异性为69.12%(95%CI:0.567,0.798),AUC为0.851。结论血浆miRNA-206联合床旁超声膈肌功能对老年机械通气患者撤机结果具有较高的预测价值。

粪便microRNA-296-3p联合癌胚抗原在结直肠癌筛查中的应用价值

目的探讨粪便microRNA-296-3p(miR-296-3p)联合癌胚抗原(CEA)在结直肠癌筛查中的临床价值。方法选取2021年6月—2023年2月承德医学院附属医院收治并经病理检查确诊的104例结直肠癌患者为结直肠癌组,另选取同期在该院进行体检的61例健康人群作为健康对照组。比较两组的临床资料;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组人群粪便中miR-296-3p表达情况;多因素逐步Logistic回归分析结直肠癌发生的独立危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-296-3p、CEA单独及联合对结直肠癌的预测价值。结果RT-PCR结果显示,与健康对照组比较,结直肠癌组粪便中miR-296-3p mRNA相对表达量下降(P<0.05)。单因素分析结果显示,结直肠癌组与健康对照组miR-296-3p、CEA的表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示,miR-296-3p表达[OR=0.70(95%CI:0.55,0.90)]和CEA表达[OR=1.78(95%CI:1.32,2.40)]为影响结直肠癌发生的独立危险因素(P<0.05)。个体预测概率方程为=1/e^(-(-0.399-0.351X_(1)+0.577X_(2)))。miR-296-3p预测模型诊断结直肠癌的敏感性和特异性分别为79.8%和42.6%,曲线下面积(AUC)为0.687,CEA预测模型诊断结直肠癌的敏感性和特异性分别为81.4%和59.6%,AUC为0.800,miR-296-3p联合CEA预测模型诊断结直肠癌的敏感性和特异性为86.3%和63.5%,AUC为0.847。结论miR-296-3p联合CEA的预测模型对结直肠癌有较好的预测价值。

五味子苷B调控miR-370-3p/CCL3轴对幼年肺炎小鼠免疫炎症因子水平的影响

目的:探讨五味子苷B(Sch B)在幼年肺炎小鼠的作用机制。方法:将90只幼年雄性小鼠随机分为对照组、模型组、Sch B低剂量组(Sch BL组)、Sch B高剂量组(Sch BH组)、Sch BH+antagomir-NC组、Sch BH+miR-370-3p antagomir组各15只。Sch BL组和Sch BH组小鼠分别灌胃20、60 mg/kg的Sch B;Sch BH+antagomir-NC组和Sch BH+miR-370-3p antagomir组,先将1 nmol的miR-370-3p antagomir、antagomir-NC用20μL的磷酸盐缓冲液(PBS)溶解,在Sch B灌胃后将miR-370-3p antagomir、antagomir-NC质粒分别经尾静脉注射到小鼠体内;对照组和模型组给予等量生理盐水。每天1次,持续给药7 d。测定各组小鼠肺组织的湿干质量比;采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肺组织的病理形态;检测各组小鼠肺组织中炎症因子水平;流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群;实时定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肺组织中miR-370-3p和CCL3的mRNA水平;双荧光素酶实验验证miR-370-3p与CCL3的靶向关系。结果:与对照组相比,模型组幼鼠肺组织结构紊乱,肺泡壁变厚,出现大量炎性细胞浸润,组织受损严重,肺组织湿干质量比、CD8^(+)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、CCL3 mRNA水平均升高,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、miR-370-3p水平均降低(P均<0.05)。与模型组相比,Sch BL组和Sch BH组幼鼠肺组织中肺泡壁变薄,炎性细胞浸润明显减少,损伤减轻,肺组织湿干质量比、CD8^(+)、TNF-α、IL-6、CCL3 mRNA水平均降低,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、miR-370-3p水平均升高(P均<0.05)。加入miR-370-3p antagomir进行回补实验,结果显示Sch B对肺炎幼鼠免疫功能和炎症保护作用被逆转,且CCL3 mRNA水平升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验验证了miR-370-3p与CCL3存在靶向关系。结论:Sch B能够通过靶向调节miR-370-3p/CCL3轴来增强幼年肺炎小鼠免疫功能,并抑制炎症反应。

MicroRNA-21/PARP-1作为生物标志物在AR和CARAS中的诊断价值分析

目的:评估外周血microRNA(miR)-21、血浆聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]在过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)和过敏性鼻炎-哮喘综合征(combined allergic rhinitis and asthma syndrome,CARAS)中的诊断价值。方法:收集44例CARAS患者、31例AR患者和42例健康对照的外周血,采用RT-qPCR法检测外周血中miR-21的表达水平,采用ELISA法检测血浆中PARP-1蛋白水平。应用Pearson进行相关性分析。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线判断miR-21和PARP-1的诊断灵敏度与特异度。结果:CARAS组患者外周血miR-21的表达较健康对照组升高。AR组患者血浆PARP-1的水平较CARAS组和健康对照组升高。Pearson相关性分析结果显示,外周血miR-21的表达水平在AR患者中与嗜酸性粒细胞计数相关,在CARAS患者中与鼻呼出气一氧化氮(fractional nasal nitric oxide,FnNO)水平相关;血浆PARP-1在AR患者中与1秒钟用力呼气量占预计值百分比(forced expiratory volume in onesecond percent predicted,FEV_(1)%_(pred))相关,在CARAS患者中与FEV_(1)%_(pred)及1秒钟用力呼气量(forced expiratory volume in one second,FEV_(1))/用力肺活量(forced vital capacity,FVC)(FEV_(1)/FVC)相关。ROC曲线分析显示,外周血miR-21作为CARAS的诊断标志物时,灵敏度为51.35%,特异度为80.95%。血浆PARP-1作为AR的诊断标志物时,灵敏度为90.32%,特异度为54.76%。血浆PARP-1作为AR进展为CARAS的诊断标志物时,灵敏度为45.45%,特异度为90.32%。结论:AR和CARAS患者外周血miR-21、PARP-1存在差异表达,外周血miR-21可作为CARAS的诊断标志物,PARP-1可作为AR的诊断标志物及AR进展为CARAS的生物标志物。这对寻求AR和CARAS的诊治靶点有十分重要的价值。