血清miR-184、miR-513c-5p表达与复发性流产相关性研究及临床意义

目的研究血清微小RNA-184(miR-184)、微小RNA-513c-5p(miR-513c-5p)表达与复发性流产(RSA)相关性及临床意义。方法选取2019年3月至2022年7月我院收治的67例RSA患者(RSA组)及67例正常早孕期女性(对照组),比较两组、RSA组血清miR-184、miR-513c-5p表达,将RSA组根据妊娠结局分为再次流产与未再次流产亚组,比较两亚组血清miR-184、miR-513c-5p表达。依次运用Pearson、受试者工作特征(ROC)曲线、临床决策分析曲线(DCA)、比值比(OR)进行相关性、预测效能、临床效用、危险度分析。结果RSA组妊娠前、后血清miR-184、miR-513c-5p均高于对照组,且RSA组妊娠后高于妊娠前(P<0.05);RSA组再次流产患者妊娠后血清miR-184、miR-513c-5p高于未再次流产患者(P<0.05)。RSA组妊娠前、后血清miR-184均与miR-513c-5p呈显著正相关(r=0.800、0.750,P<0.001);血清miR-184+miR-513c-5p表达预测RSA再发流产的ROC曲线下面积(AUC)为0.901,高于单独的血清miR-184、miR-513c-5p(Z=3.892、3.411,P<0.05)。采用该预测方案进行预测和干预,具有良好的临床效用。妊娠后血清miR-184高表达RSA患者再发流产的风险是低表达患者的7.407倍,血清miR-513c-5p高表达RSA患者再发流产的风险是低表达患者的18.125倍(P<0.05)。结论血清miR-184、miR-513c-5p的高表达与RSA及其再妊娠结局有关,联合检测两者可为再妊娠结局的预测提供一定参考,从而指导做出进一步的决策与治疗。

微小RNA-513c-5p在宫颈癌中的表达及靶向组蛋白去乙酰化酶1调节宫颈癌细胞迁移和侵袭的机制

目的探讨微小RNA(miR)-513c-5p在宫颈癌中的表达及靶向组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)调节宫颈癌细胞迁移和侵袭的机制。方法临床收集宫颈癌患者86例,通过Real-time PCR检测肿瘤组织和癌旁组织中miR-513c-5p水平,分析其与宫颈癌病理特征的关系。通过双荧光素酶报告验证miR-513c-5p靶向HDAC1。将宫颈癌HeLa细胞系分为4组:对照组、类似物(mimic)组、mimic+HDAC1组和HDAC1组。通过质粒转染技术过表达miR-513c-5p和(或)HDAC1。Real-time PCR和Western blotting分别用于检测RNA或蛋白的表达水平。分别通过CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell实验检测各组的细胞生长、迁移和侵袭能力。结果宫颈癌组织中miR-513c-5p水平显著低于癌旁组织。低水平的miR-513c-5p与更高的局部侵袭、淋巴转移和远端转移有关(P<0.05)。miR-513-5p靶向抑制HDAC1表达。过表达miR-513c-5p显著抑制宫颈癌细胞生长、迁移和侵袭(P<0.05)。过表达HDAC1促进细胞生长、迁移和侵袭(P<0.05),并且可以逆转miR-513c-5p的抑制作用(P<0.05)。结论低水平的miR-513c-5p可能与宫颈癌转移有关,并且miR-513c-5p可通过靶向抑制HDAC1蛋白的表达抑制宫颈癌HeLa细胞生长、迁移和侵袭。

原因不明复发性自然流产患者血清IL-10水平变化及其与miR-513c-5p的调控关系

目的观察并检测原因不明复发性自然流产(URSA)患者外周血细胞因子白细胞介素10(IL-10)、miR-513c-5p水平变化,探讨二者在URSA发病中的作用。方法选取30例正常早孕妇女(正常妊娠组)和30例URSA患者(URSA组),抽取空腹外周静脉血,ELISA法检测血清IL-10蛋白,qPCR法检测单个核细胞(PBMC)中的miR-513c-5p。采用Target Scan7.1生物信息软件,预测miR-513c-5p与IL-10 mRNA的3´非翻译区(3´UTR)是否可能存在互补结合;双荧光素酶报告基因系统检测miR-513c-5p对IL-10 mRNA 3´UTR荧光素酶报告基因活性的影响。分别构建包含结合位点的野生型及突变型IL-10 mRNA 3´UTR质粒,将293T细胞分为过表达组、抑表达组、对照组,分别转染miR-513c-5p mimics、inhibitor及阴性对照;qPCR法检测各组293T细胞中的IL-10 mRNA,ELISA法检测细胞培养上清液中的IL-10蛋白。结果URSA组血清IL-10蛋白低于正常妊娠组,而miR-513c-5p水平高于正常妊娠组(P均<0.05)。IL-10 mRNA的3´UTR与miR-513c-5p之间具有潜在互补结合位点,且两者间存在碱基互补结合。细胞中IL-10 mRNA表达及细胞上清中IL-10蛋白水平抑表达组>对照组>过表达组,P均<0.05。结论URSA患者血清IL-10蛋白水平降低,而PBMC中miR-513c-5p表达升高;miR-513c-5p可能通过碱基互补结合直接抑制靶基因IL-10 mRNA转录及蛋白表达,打破母胎免疫耐受状态导致流产;靶向调控miR-513c-5p/IL-10信号通路可能成为临床治疗URSA的有效途径。

microRNA-513b-5p通过抑制αB-crystallin促进晶状体细胞氧化应激和凋亡

目的研究microRNA(miR)-513b-5p对晶状体稳定性调节蛋白αB-crystallin的调节关系,及miR-513b-5p对晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)氧化应激和凋亡调节的下游机制。方法实时定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法分别检测白内障患者和健康志愿者晶状体组织中miR-513b-5p及αB-crystallin的水平。miR-513b-5p拟似物mimic单独转染LEC细胞SRA01/04,或抑制剂和H 2O 2共处理SRA01/04;另外,mimic与αB-crystallin过表达质粒cDNA3.1-αB-crystallin(c-CRYAB)联合转染SRA01/04,试剂盒检测的细胞凋亡率,RT-qPCR法和Western blot法分别检测miR-513b-5p的水平及αB-crystallin、活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达变化,生物信息学分析和荧光素酶报告基因实验研究miR-513b-5p和αB-crystallin的靶向关系。结果白内障患者晶状体组织中miR-513b-5p的水平显著上调(P<0.05)和αB-crystallin的表达水平下调(P<0.05);过表达miR-513b-5p促进SRA01/04凋亡和活性氧ROS分子水平,下调抗氧化分子SOD;抑制miR-513b-5p降低H 2O 2所诱导的活性氧ROS(P<0.05);αB-crystallin的表达被miR-513b-5p过表达显著性下调(P<0.05),miR-513b-5p过表达对细胞凋亡和ROS与SOD水平的调控作用被αB-crystallin过表达显著削弱(P<0.05)。结论miR-513b-5p通过对αB-crystallin蛋白的负调节从而促进LEC的氧化应激和凋亡。

MicroRNA-513b-5p调控mGluR5表达对紫杉醇诱导神经病理性疼痛大鼠的影响

目的:研究MicroRNA(miR)-513b-5p对代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)的调节关系及其对紫杉醇诱导神经病理性疼痛大鼠的影响。方法:RT-qPCR和Western blot法检测紫杉醇诱导神经病理性疼痛大鼠DRG中miR-513b-5p和mGluR5的表达变化。根据生物信息学分析、双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down实验验证miR-513b-5p和mGluR5相互作用。大鼠紫杉醇造模同时行髓鞘内置管,然后按不同分组进行慢病毒髓鞘内注射:⑴对照组(Lv-NC组);⑵miRNA非特异性对照组(Lv-miRNA-NC组);⑶过表达miR513b-5p组(Lv-miR513b-5p组);⑷过表达mGluR5组(Lv-mGluR5组);⑸过表达miR513b-5p混合mGluR5组(Lv-mGluR5+Lv-miR513b-5p组),1周后使用Western blot法检测各组DRG中mGluR5水平,并后续进行热痛觉阈值检测及机械痛觉敏感性检测。结果:miR-513b-5p在紫杉醇疼痛模型大鼠DRG中表达水平明显降低,而mGluR5的水平明显升高(P<0.05),并且mGluR5的蛋白水平在造模后明显上调(P<0.05)。StarBase在线分析数据库(http://starbase.sysu.edu.cn/)显示mGluR5与miR-513b-5p存在互补位点,双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down实验均证实miR-513b-5p能特异结合mGluR5(P<0.05);鞘内注射慢病毒Lv-miR513b-5p在降低mGluR5蛋白表达水平同时,行为学结果显示大鼠TWL及MWT明显升高(P<0.05)。结论:miR-513b-5p可以通过靶向负调控大鼠DRG中mGluR5的表达水平,从而缓解紫杉醇诱导的神经病理性疼痛。

HDAC11调节垂体瘤中细胞凋亡的作用机制研究

目的探究组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase-1,HDAC1)调节垂体瘤中细胞凋亡的作用机制。方法人垂体瘤细胞系RC-4B/C分为4组,即control组、mimic组、mimic+HDAC1组和HDAC1组。所有细胞按照分组分别通过质粒转染技术上调miR-513c-5p或/和HDAC1的水平;对照组转染等量的NC质粒。通过Starbase预测和双荧光酶素报告验证HDAC1受到miR-513c-5p的靶向调节。检测和比较各组的细胞的细胞生长和调往率,并比较各组细胞miR-513c-5p、HDAC1和PI3K/AKT通路的水平。结果与对照组比较,mimic组的细胞活力降低(P<0.05)。HDAC1组的细胞活力高于对照组(P<0.05),并且mimic+HDAC1组的细胞活力高于mimic组(P<0.05)。mimic组的细胞凋亡率高于对照组(P<0.05)。HDAC1组的细胞凋亡率低于对照组(P<0.05),并且mimic+HDAC1组的细胞凋亡率低于mimic组(P<0.05)。Mimic组的HDAC1的mRNA和蛋白水平低于对照组(P<0.05),并且Mimic+HDAC1组的HDAC1的mRNA和蛋白水平显著高于Mimic组(P<0.05)。MiR-513c-5p直接靶向HDAC1。Mimic组的PI3K、AKT1蛋白表达水平下调(P<0.05),HDAC1组的PI3K、AKT1蛋白蛋白表达水平高于对照组(P<0.05),并且mimic+HDAC1组的PI3K、AKT1蛋白表达水平高于mimic组(P<0.05)。结论HDAC1具有通过调节PI3K/AKT通路促进垂体瘤细胞在增殖和促进凋亡的作用,并且HDAC1对垂体瘤细胞的促癌作用受到miR-513c-5p的靶向调控。