miR-514在肾癌中的异常表达及其临床意义

目的探讨miR-514在肾细胞癌中的表达变化及其临床意义。方法提取45例肾癌及其癌旁正常组织中的总RNA,逆转录后用实时荧光定量PCR的方法检测miR-514在肾癌组织和癌旁正常组织中的表达情况,并分析其与肾癌患者临床病理特征的关系。结果与相应癌旁组织相比,miR-514在肾癌组织中表达量显著下调,下调率为86.67%。miR-514表达水平与患者年龄、性别、病理分型、TNM分期没有关系,但其表达水平与Fuhrman分级有关。结论 miR-514可能与肾癌的发生发展有密切关系,进行miR-514表达水平的研究可能对肾癌的早期诊断及治疗具有潜在的临床意义。

长链非编码RNA CASC2通过靶基因miR-514b-5p调控结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移的作用机制

目的探讨肿瘤易感候选基因(CASC)2对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞SW480中CASC2和miR-514b-5p的表达水平;将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-CASC2组(转染pcDNA-CASC2 mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-CASC2组(转染si-CASC2)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-514b-5p组(转染anti-miR-514b-5p)、pcDNA-CASC2+miR-NC组(共转染pcDNA-CASC2 mimics和miR-NC)、pcDNA-CASC2+miR-514b-5p组(共转染pcDNA-CASC2 mimics和miR-514b-5p)、WT-CASC2+miR-NC组(共转染WT-CASC2和miR-NC)、WT-CASC2+miR-514b-5p组(共转染WT-CASC2和miR-514b-5p mimics)、MUT-CASC2+miR-NC组(共转染MUT-UCA1和miR-NC)、MUT-CASC2+miR-514b-5p组(共转染MUT-CASC2和miR-514b-5p mimics)均用脂质体法转染至SW480细胞;采用细胞计数试剂盒(CCK)-8法检测各组细胞增殖;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测荧光活性。结果结直肠癌SW480细胞于正常结肠黏膜上皮细胞NCM460、CASC2的表达水平显著降低,miR-514b-5p的表达水平显著升高(P<0.05);过表达CASC2、抑制表达miR-514b-5p均可抑制SW480细胞增殖、迁移和侵袭;CASC2可靶向调控miR-514b-5p的表达。miR-514b-5p过表达可部分逆转CASC2过表达对结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论长链非编码RNA CASC2可抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向miR-514b-5p基因有关,将可为结直肠癌的预防和治疗提供新靶点。

MiR-514与胃癌细胞凋亡的关系及机制

目的探讨微小RNA-514(microRNA-514,miR-514)与胃癌细胞凋亡的关系及机制。方法实时定量PCR检测80例胃癌组织及癌旁正常胃黏膜组织中miR-514的表达情况,分析miR-514与患者各病理参数之间的关系。应用miR-514模拟物转染人胃癌细胞株MGC803,检测转染前后细胞凋亡率及凋亡相关基因的情况。结果胃癌组织中miR-514水平(0. 3619±0. 2103)明显低于癌旁正常胃黏膜(0. 6943±0. 3032)(t=-8. 0573; P<0. 001); miR-514表达与肿瘤的淋巴结转移有关(t=-2. 5620,P=0. 012 3); miR-514模拟物转染人胃癌细胞株MGC803后细胞的活性明显降低而凋亡率明显增高(P<0. 05);转染后凋亡相关基因Bcl-2、x IAP的mRNA和蛋白表达明显降低,而Bax的mRNA和蛋白表达明显增高(P <0. 05)。结论胃癌组织中miR-514的表达减弱,miR-514可能通过调节一些凋亡基因表达而参与肿瘤的凋亡过程。

miR-514a-3p靶向Syk对胃癌细胞活力、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miR-514a-3p对胃癌细胞活力、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。方法qRT-PCR检测正常胃上皮细胞GES-1、胃癌细胞MGc-803和SGC-7901中miR-514a-3p表达水平。采用siRNA干扰技术抑制SGC-7901细胞中miR-514a-3p表达,MTT和Transwell分别检测抑制miR-514a-3p表达对SGC-7901细胞活力、迁移和侵袭的影响,Westernblot检测相关蛋白CyclinD1、P21、E-cadherin和MMP-2蛋白表达变化。双荧光素酶报告基因实验验证miR-514a-3p与Syk之间关系。结果与GES-1细胞比较,胃癌细胞MGc-803和SGC-7901中miR-514a-3p表达水平均显著升高(P<0.05)。选择SGC-7901细胞作为后续实验研究对象。抑制miR-514a-3p表达可抑制SGC-7901细胞活力、迁移和侵袭能力,抑制SGC-7901细胞CyclinD1和MMP-2蛋白表达,促进P21与E-cadherin蛋白表达。miR-514a-3p靶向负调控Syk表达,下调Syk表达可部分逆转miR-514a-3p对SGC-7901细胞活力、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-514a-3p可能通过上调Syk表达抑制胃癌细胞的活力、迁移和侵袭能力,是胃癌潜在的治疗靶点。

LINC00205靶向miR-514a-3p/NF-κB对血管平滑肌细胞生物学功能的作用

目的LINC00205是否通过调控miR-514a-3p/NF-κB通路而参与动脉粥样硬化发生过程尚未清楚。文章旨在探讨LINC00205对血管紧张素II(AngII)诱导的血管平滑肌细胞(HA-VSMC)增殖、凋亡、迁移的影响及其对miR-514a-3p/NF-κB通路的调控作用。方法采用AngII诱导的HA-VSMC细胞建立动脉粥样硬化模型为AngII组。将正常培养的细胞作为正常组,将si-con、si-LINC00205、miR-con、miR-514a-3p mimics、anti-miR-con、anti-miR-514a-3p及si-LINC00205与anti-miR-con、si-LINC00205、anti-miR-514a-3p转染至AngII诱导的HA-VSMC细胞,分别为si-con组、si-LINC00205组、miR-con组、miR-514a-3p组、anti-miR-con组、anti-miR-514a-3p组、si-LINC00205+anti-miR-con组、si-LINC00205+anti-miR-514a-3p组。采用qRT-PCR法检测LINC00205、miR-514a-3p的表达量;采用MTT实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测LINC00205与miR-514a-3p的靶向关系;Western blot法检测CyclinD1、MMP2、MMP9、Cleaved-caspase-3、p-p65、p-IкBα、p65、IкBα蛋白表达量。将20只大鼠随机分为对照组(普通喂养)及AS组(蛋氨酸喂养,建立AS模型),检测颈动脉LINC00205、miR-514a-3p、p-p65、p-IкBα、p65、IкBα各蛋白表达。结果与正常组凋亡率比较,AngII组明显降低(P<0.05);与si-con组凋亡率比较,si-LINC00205组明显升高(P<0.05)。AngII组HA-VSMC细胞迁移数较正常组明显升高[(153±14)vs(67±6),P<0.05],si-LINC00205组较si-con组明显降低[(72±7)vs(158±15),P<0.05]。与正常组比较,AngII组CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平明显升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平明显降低(P<0.05);与si-con组比较,si-LINC00205组CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平明显降低(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平明显升高(P<0.05)。miR-514a-3p组A值、迁移数、CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平较miR-con组明显降低(P<0.05),凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白水平明显升高(P<0.05);anti-miR-514a-3p组CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平较anti-miR-con组升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平降低(P<0.05)。与si-LINC00205+anti-miR-con组比较,si-LINC00205+anti-miR-514a-3p组CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平降低(P<0.05)。与对照组比较,AS组LINC00205、p-p65、p-IкBα蛋白水平明显升高(P<0.05),miR-514a-3p蛋白水平降低(P<0.05)。结论LINC00205表达降低能够有效调控miR-514a-3p/NF-κB通路,从而能够有效抑制因AngII介导的HA-VSMC细胞迁移及繁殖,并可诱导细胞凋亡。

miR-514b-3p靶向MDM2对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的探讨miR-514b-3p在肺癌组织中的表达水平,研究miR-514b-3p对肺癌细胞增殖、迁移侵袭的影响和分子机制。方法qRT-PCR检测52例肺癌组织和与其对应的癌旁组织中miR-514b-3p的表达水平。构过表达miR-514b-3p的A549细胞株,MTT法检测细胞活力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测增殖、迁移侵袭相关蛋白的表达。通过生物信息学预测,miR-514b-3p可能靶向调控鼠双微体2(MDM2)基因。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-514b-3p和MDM2的靶向调控关系。构建抑制MDM2表达的A549细胞株,观察抑制MDM2表达对A549细胞增殖迁移和侵袭能力的影响。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中miR-514b-3p的表达水平显著降低(P<0.05)。过表达miR-514b-3p可显著抑制Cyclin D1和MMP-2蛋白表达,促进P21和E-cadherin蛋白表达,降低A549细胞的增殖和迁移侵袭能力。MDM2是miR-514b-3p的靶基因,miR-514b-3p靶向负性调控MDM2表达。抑制MDM2表达可显著降低A549细胞的增殖和迁移侵袭能力。过表达MDM2能够部分逆转miR-514b-3p对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论miR-514b-3p通过靶向负性调控MDM2表达进而抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

益肾通络方对MN大鼠miR-514a-5p/TNFSF15信号通路的影响及机制

目的:基于miR-514a-5p/肿瘤坏死因子超家族成员15(TNFSF15)信号通路探讨益肾通络方抑制膜性肾病(MN)大鼠肾小球足细胞凋亡的分子机制。方法:80只SD大鼠采用预免疫和尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法建立MN大鼠模型,并使造模成功的MN大鼠随机分为模型组,益肾通络方高、中、低剂量组(26.44,13.22,6.61 g·kg^(-1))和贝那普利组(10 mg·kg^(-1)),每组各10只,取健康大鼠20只作为正常组,各组分别予对应药物灌胃,每日1次,连续干预4周。给药结束后,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠肾组织中miR-514a-5p及TNFSF15 mRNA表达水平;免疫组化(IHC)检测大鼠肾组织中足细胞标志蛋白足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin),膜蛋白(Podocin),足萼蛋白(Podocalyxin),突触足蛋白(Synaptopodin),TNFSF15及足细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2关联死亡启动子重组蛋白(BAD),大分子B细胞淋巴瘤(Bcl-XL)的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织中TNFSF15,Bax,BAD,Bcl-2,Bcl-XL的表达水平;原位末端标记法(TUNNEL)检测大鼠肾组织细胞凋亡率。结果:与正常组比较,模型组大鼠肾组织中miR-514a-5p水平明显降低(P<0.05),TNFSF15 mRNA水平明显升高(P<0.05);足细胞标志蛋白Nephrin,Podocin,Podocalyxin,Synaptopodin表达明显降低(P<0.05);TNFSF15,Bax,BAD蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2,Bcl-XL蛋白表达水平明显降低(P<0.05);凋亡细胞明显增多(P<0.05)。与模型组比较,益肾通络方各剂量组和贝那普利大鼠肾组织中miR-514a-5p水平明显升高(P<0.05),TNFSF15 mRNA水平明显降低(P<0.05);足细胞标志蛋白Nephrin,Podocin,Podocalyxin,Synaptopodin表达明显升高(P<0.05);TNFSF15,Bax,BAD蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Bcl-2,Bcl-XL蛋白表达水平明显升高(P<0.05);凋亡细胞明显减少(P<0.05)。结论:益肾通络方可能通过miR-514a-5p/TNFSF15信号通路,减轻大鼠肾组织足细胞凋亡,缓解MN大鼠肾损伤。