17β-雌二醇和富含半胱氨酸蛋白61对JEG-3细胞增殖作用的机制研究

目的探讨17β-雌二醇(E2)和富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)影响人绒毛膜癌细胞系JEG-3细胞增殖的机制。方法定量PCR检测Cyr61和microRNA 195(miR-195)的表达,羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色法检测细胞增殖。结果 E2能够提高Cyr61 mRNA的表达;Cyr61能够降低miR-195的表达和促进JEG-3的细胞增殖。结论 E2通过增强Cyr61和降低miR-195的表达影响JEG-3细胞的增殖,可能为探讨子痫前期的发病机制提供线索。

MicroRNA-195与Smad7靶向关系的研究

目的:构建含有Smad7基因3'-UTR区的荧光素酶报告基因载体,利用双荧光素酶报告基因验证MicroRNA195与其潜在靶基因Smad7的靶向关系。方法:PCR扩增出Smad7基因3'-UTR区片段,以此构建含3'-UTR的荧光素酶报告基因载体(wild type,WT);将miRNA-195与荧光素酶报告重组子共转染至293T细胞中,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性;构建含Smad7基因3'-UTR突变体(mutant,Mut)的荧光素酶报告基因质粒,检测荧光素酶活性变化。结果:测序结果表明,含有Smad7基因3'-UTR区的荧光素酶报告基因载体构建正确;荧光素酶活性实验表明,与对照组相比,miRNA-195可使含Smad7基因3'-UTR区的荧光素酶报告重组子的荧光素酶活性降低40%左右;而定点突变Smad7基因3'-UTR的荧光素酶报告重组子荧光活性未有明显变化。结论:成功构建了Smad7基因3'-UTR区的荧光素酶报告基因载体,而miRNA-195可以直接作用于Smad7基因3'-UTR区,抑制其荧光素酶活性。

血清miR195、DKK-1水平与胃癌发生发展关系的研究

目的 探讨血清微小RNA195(miR195)、血清Dickkopf-1(DKK-1)与胃癌发生发展的影响。方法 收集2016年1月至2017年12月确诊的胃癌患者90例(胃癌组)、慢性胃炎患者90例(对照组),检测2组患者血清miR195、DKK-1水平并进行比较,并按照肿瘤病灶直径、组织学分化程度、淋巴结转移、TNM分期对胃癌患者进行分层分析,对比血清miR195、DKK-1水平。结果 胃癌组患者血清DKK-1的水平显著高于对照组(P<0.05),胃癌组患者血清miR195的水平显著低于对照组(P<0.05);TNM分期(Ⅲ期+Ⅳ期)、发生淋巴结转移、低分化程度的胃癌患者的血清miR195水平显著低于TNM分期(Ⅰ期+Ⅱ期)、未发生淋巴结转移、高中分化程度的患者(P<0.05);TNM分期(Ⅲ期+Ⅳ期)、发生淋巴结转移、病灶直径≥4 cm的胃癌患者的血清DKK-1水平显著高于TNM分期(Ⅰ期+Ⅱ期)、未发生淋巴结转移、病灶直径<4 cm的患者(P<0.05)。结论 与慢性胃炎患者比较,胃癌患者血清miR195水平降低、DKK-1水平升高,并且与患者肿瘤的发生与演进关系密切。