miR-223/Fosl2/NGP调控非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝纤维化作用

目的探讨miR-223/FOS样抗原2(Fosl2)/中性粒细胞颗粒蛋白(NGP)通路调控非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠肝纤维化的作用。方法将60只小鼠随机分成正常组、蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)组、MCD+miR-NC组(MCD模型鼠经尾静脉注射120 nmol/kg miR-NC 100μL)和MCD+miR-223 mimic组(MCD模型鼠经尾静脉注射120 nmol/kg miR-223 mimic 100μL),每组15只。正常组给予普通饲料,其余组给予MCD饲料。酶联免疫吸附法检测4组小鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平;采用放射免疫分析法检测小鼠血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C);实时荧光定量PCR检测miR-223和Fosl2 mRNA水平;观察小鼠肝脏病理变化;Western blot检测肝组织Fosl2、NGP蛋白水平。结果与MCD组和MCD+miR-NC组相比,MCD+miR-223 mimic组中miR-223表达水平升高,Fosl2表达水平下降(P<0.05)。与MCD组和MCD+miR-NC组相比,MCD+miR-223 mimic组肝细胞空泡化现象减少,肝细胞肥大程度降低。与MCD组和MCD+miR-NC组相比,MCD+miR-223 mimic组TC、TG、ALT和AST水平下降(P<0.05)。与MCD组和MCD+miR-NC组相比,MCD+miR-223 mimic组中脂质滴减少(P<0.05)。与MCD组和MCD+miR-NC组相比,MCD+miR-223 mimic组HA、LN和Ⅳ-C水平降低(P<0.05)。与MCD组和MCD+miR-NC组相比,MCD+miR-223 mimic组Fosl2蛋白水平下降,NGP蛋白水平上升(P<0.05)。结论miR-223可能通过调控Fosl2/NGP通路减轻NASH小鼠肝纤维化程度。

microRNA⁃223在动脉粥样硬化发生过程中的网络调控机制

microRNA⁃223(miR⁃223)是参与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)炎性调控、细胞生长等通路的微小非编码RNA。本研究系统地探究miR⁃223及其靶基因的网络调控机制,以便全面理解miR⁃223在AS中的作用。利用miRNA靶基因预测数据库miRDB、miRmap、TargetScan和miRTarBase获取miR⁃223的靶基因集。R语言分析基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)共享平台动脉粥样硬化斑块差异表达基因集(GSE100927),筛选出斑块差异表达基因,并与miR⁃223靶基因集交叉匹配。利用基因本体(gene ontology,GO)及基因组数据库(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析研究差异表达基因功能。结果显示,斑块中下调的1584个差异表达基因与miR⁃223靶基因交叉匹配得到422个交集mRNA。GO及KEGG富集分析发现miR⁃223可能通过细胞生长、炎症反应以及血管平滑肌收缩等信号通路调节动脉粥样硬化斑块的发生发展过程。蛋白相互作用网络(protein⁃protein interaction networks,PPI)分析获得关键节点基因是INADL、JAM3、SMTN、LDB3、YAP1、TJP1、NCKAP1、PDLIM3、MICAL2和MPP5,其中YAP1也与铜死亡相关。我们还发现miR⁃223可能直接靶向GLS、GCSH调控铜死亡,参与动脉粥样硬化的发生发展过程。本研究表明,miR⁃223主要通过调控细胞生长、铜死亡等相关信号通路影响动脉粥样硬化的各个进程。