miR-301a靶向雌激素受体信号通路对乳腺癌细胞侵袭及上皮-间质转化的影响

目的通过检测乳腺癌细胞中微小RNA-301a(miR-301a)、雌激素受体α(ERα)表达情况,探讨miR-301a调控乳腺癌细胞侵袭作用机制及对上皮-间质转化(EMT)的影响。方法体外培养人乳腺癌细系MCF7,将细胞分为control组(不做任何处理,正常培养)、miR-301a mimics组[转染miR-301a激动剂(miR-301a mimics)]、miR-301a inhibitiors组[转染miR-301a抑制剂(miR-301a inhibitiors)]、miR-301a MNC组[转染miR-301a激动剂阴性对照试剂(miR-301a MNC)]、miR-301a INC组[转染miR-301a抑制剂阴性对照试剂(miR-301a INC)]。用Transwell小室检测细胞侵袭情况;双荧光素酶报告实验验证miR-301a与ERα的靶向关系;荧光实时定量PCR(qRT-PCR)法检测各组miR-301a mRNA、ERαmRNA表达水平;免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞ERα、孕酮受体(PR)、乳腺癌雌激素调控蛋白(GREB1)及EMT标志蛋白N-粘钙蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平。结果与control组相比,miR-301a mimics组侵袭细胞数、miR-301a、N-cadherin和Vimentin蛋白表达均升高(P<0.05),ERαmiRNA及蛋白、PR、GREB1表达均降低(P<0.05);miR-301a inhibitiors组侵袭细胞数、miR-301a、N-cadherin和Vimentin蛋白表达均降低(P<0.05),ERαmiRNA及蛋白、PR、GREB1表达水平均升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示,与miR-301a NC+ERα-3’UTR-WT组比较,miR-301a mimics+ERα-3’UTR-WT组荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论miR-301a过表达可抑制ERα及相关通路蛋白表达,促进癌细胞侵袭和EMT,抑制miR-301a表达,可上调ERα及相关通路表达,抑制癌细胞侵袭和EMT。