反相高效液相色谱法测定硫酸小诺霉素的含量

采用国产高效液相色谱仪测定硫酸小诺霉素含量,可在8分钟内完成色谱分析.本法以内标法定量,样品加邻苯二甲醛试液,发生胺缩醛反应,生成具有紫外吸收的衍生产物,用醋酸乙酯定量提取,进样10μl进行色谱分析。该法采用国产YWG-C_(18)H_(37)10μm键合相为填料的反相色谱柱,乙腈∶无水甲醇∶0.1％三羟基甲基氨基甲烷(1∶5∶1)混合溶媒作流动相;流速1.5ml/min,用紫外检测器254nm检测。在灵敏度0.05时,检测限为4μg/ml,在10～140μg/ml范围内呈线性,变异系数为1.65％,回收率为102.2±1.8％。本法操作简便、灵敏、测定结果准确。

流动注射化学发光测定硫酸小诺霉素及其机理探讨

在碱性介质中,硫酸小诺霉素能被N 溴代琥珀酰亚胺(NBS)氧化,在荧光素的增敏作用下,产生化学发光。基于此,建立了测定痕量硫酸小诺霉素的流动注射化学发光分析法。硫酸小诺霉素在0.5～100μg·mL-1的浓度范围内与化学发光强度呈良好的线性关系,检出限(3σ)为0.08μg·mL-1,对5μg·mL-1的硫酸小诺霉素连续测定11次,相对标准偏差为1.8%。将本方法用于制剂中硫酸小诺霉素的分析,结果满意。

小诺霉素产生菌棘孢小单孢菌突变菌株原生质体形成、再生及融合的研究

甘氨酸（Ｇｌｙ）的加入将会影响棘孢小单孢突变型菌株孢子发芽和菌丝生长，其影响程度与甘氨酸浓度及菌丝培养基成份有关，在Ⅱ号培养基中，０．３％Ｇｌｙ对菌丝形态的改变十分明显，而０．５％Ｇｌｙ能抑制孢子发芽。消色肽酶（ａｃｈｒｏｍｏｐｅｐｉｔｉｄａｓｅ）与溶菌酶（ｌｙｓｏｚｙｍｅ）联合作用比单一溶菌酶制备的原生质体形成率和再生率有明显提高。再生培养基以原分离培养基补充０．２ｍｏｌ／Ｌ蔗糖为宜，其再生频率可达到１５％。采用ＰＥＧ４０００，４２％（ｗ／ｖ）为助融剂，直接法检出融合重组体，其重组频率可达０．５％～１．０％，重组体中大部分苗株的次级代谢特性与亲株有较大差异，在再生菌落筛选中获得一些优良菌株，其小诺霉素产率较原亲株有显著提高。

高效液相色谱法测定小诺霉素的血药浓度

用CLC-ODS.C18柱作高效液相色谱测定小诺霉素血药浓度并做兔静注后的药代动力学研究。这一方法检测限0.2ng,最小检测血药浓度达0.1μg/ml,线性范围1～20μg/ml。小诺霉素和内标氯氮平的保留时间分别为6.8min和8.3min。方法准确、灵敏、快速,适用于小诺霉素药代动力学研究和血药浓度监测。3只新西兰兔单次静注小诺霉素10mg后,药时曲线经计算机自动拟合,符合二室开放模型。主要药动学参数为t1/2α=0.536±0.01h,t1/2β=2.59±0.98h,Vc=0.204±0.051L/kg,CL=0.18±0.026L/kg。

利用抗自身代谢物特性进行小诺霉素高产菌种选育

经过紫外诱变处理小诺霉素产生菌,利用菌株抗自身代谢物特征,在添加3 000 u.mL-1小诺霉素的分离培养基上选育获得小诺霉素生产突变株201-9#-76,其摇瓶发酵单位比出发菌株提高了34.39%,小诺霉素的组分比由出发菌株的C2b∶C1 a=5∶5提高到C2b∶C1 a=7∶3.

通过获得链霉素抗性基因突变株筛选小诺霉素高产菌株

通过链霉素对小诺霉素产生菌 (Micromonospora purpura) 49 1 2 #菌株孢子致死浓度的测定 ,采用诱变剂EMS 3种不同诱变剂量对菌株的孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含链霉素致死浓度的改良高氏平板上 ,获得大量的链霉素抗性基因突变株 ,然后从链霉素抗性基因突变株进一步筛选小诺霉素高产菌株 ,获得小诺霉素菌株 49 1 2 3菌株。在摇瓶条件下 ,其产小诺霉素生物活性单位比出发菌株 49 1 2 #的摇瓶发酵单位提高了 40 %以上。小诺霉素的组分比由出发菌株的C2b∶C1a的 5∶5提高到 8∶2。C2b有效组分提高了 30 %;链霉素抗性基因突变与小诺霉素发酵单位突变之间 ,小诺霉素正突变率达到 40 %,负突变率达 2 6%。

丽春红S共振瑞利散射法测定硫酸小诺霉素

在弱酸性条件下，硫酸小诺霉素和丽春红S各自的共振瑞利散射十分微弱，两者相互作用后形成缔合物，导致体系的共振瑞利散射急剧增强，在597nm产生最大散射峰．研究了硫酸小诺霉素与丽春红S体系的共振瑞利散射光谱和吸收光谱特征、反应的适宜条件和共存物质的影响．实验结果表明，硫酸小诺霉素的浓度在0～7．2μg／mL范围内与散射强度（AIRRs）呈良好的线性关系，其回归方程为△I=2．038＋9．766C，相关系数0．9992，检出限为2．66ng／mL．本法简便、准确、灵敏、选择性和重现性好，已用于硫酸小诺霉素注射液和动物血清中硫酸小诺霉素的测定，结果满意．

HPLC-ESI-IT-MS^n法快速推定硫酸小诺霉素中有关物质的结构

目的:建立测定硫酸小诺霉素中有关物质的HPLC-ESI-IT-MSn方法,并对检出的有关物质结构进行鉴定。方法:用宽pH范围的Gemini NX C18(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱,以[水-氨水-冰醋酸(96∶3.6∶0.4)]-甲醇(80∶20)为流动相,分离样品,并用ESI-IT-MSn检测,质谱条件:ESI离子源,离子源温度350℃,雾化室压力40psi,干燥气流速10L·min-1,正离子检测方式;结构鉴定方法根据有无杂质对照品而异:有对照品的有关物质,采用比对有关物质与对照品的色谱保留时间、一级质谱、二级质谱的方法进行鉴定;对无对照品的有关物质,则采用被称为"诊断碎片离子推断策略"的结构推定方法,即通过解析庆大霉素C1a、小诺霉素、依替米星的二级质谱,对该类化合物的二级质谱裂解规律进行归纳,找出同类物质的特征碎片离子,用于推定检出的有关物质结构。结果:从硫酸小诺霉素原料中检出15个有关物质,对其中14个的结构进行了归属,结果显示,硫酸小诺霉素原料中有关物质分别为庆大霉素A、B、C组分及它们同分异构体或同系物、西索米星及其同系物、小诺霉素的部分降解产物及部分新化合物。结论:建立的HPLC-ESI-IT-MSn方法可用于硫酸小诺霉素中有关物质的结构快速推定,该法为小诺霉素的工艺优化和质量标准提高提供了快速、可靠的分析手段。

近10年应用氨基糖苷类抗生素致聋文献综述

目的探讨氨基糖苷类抗生素致聋的原因。方法检索1994年以来医药刊中庆大霉素、阿米卡星、小诺霉素致聋报道,按用药指征、剂量、用法等指标分析其用药合理性。结果检得13篇文献25例致聋报道,不合理用药占76%。结论合理用药是避免该类药物致聋的关键。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定硫酸庆大霉素注射剂中有关物质

目的建立硫酸庆大霉素注射剂中有关物质的高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)方法。方法色谱柱采用耐酸Apollo C18柱(250mm×4.6mm,5μm),以0.2mol/L三氟醋酸溶液-甲醇(94∶6)为流动相,蒸发光检测器的漂移管温度为110℃,载气流量为2.0L/min。结果硫酸庆大霉素与有关物质分离完全,可用外标法测定硫酸小诺霉素和硫酸西索米星的含量。结论所用方法准确、灵敏度高,可有效地控制药品质量。

荧光分光光度法测定小诺霉素

小诺霉素具有微弱荧光，被高碘酸钠在沸水中氧化后水解形成醛基，可与乙酰丙酮及氨基在一定条件下生成一种具有强荧光的衍生物。此衍生物在常温下可稳定40min以上，其荧光强度较小诺霉素显著增强，且最大激发波长和发射波长分别红移33nm和68nm。在1．0×10^-8～1．0×10^-7mol／L浓度范围内，小诺霉素的荧光强度与其浓度呈良好的线性关系，相关系数r为0．9925。方法用于实际样品的测定，结果较为满意。

血清、尿液中小诺霉素的单扫描示波极谱测定

研究了在硼砂－氢氧化钠介质（ｐＨ值为１２．０）中小诺霉素甲醛衍生物的极谱行为，并讨论了其电极过程。在最适条件下，小诺霉素浓度在２．０×１０－７～４．０×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１范围内与峰电流值呈线性关系，相关系数为０．９９９４。本法无需前处理即可用于血清、血浆、尿液、胃炎合剂、口腔溃疡液等实样中痕量小诺霉素测定。回收率均在９０～１１０％之间，相对标准偏差小于４．２％。

曲利本蓝光度法测定西索米星及小诺霉素的含量

建立了测定小诺霉素及西索米星的曲利本蓝分光光度法.在酸性介质中,曲利本蓝(TRB)与西索米星(SISO)、小诺霉素(MIC)反应生成蓝色离子缔合物.最大正吸收波长位于680(SISO)和682 nm(MIC),表观摩尔吸光系数(ε)为1.12×104(SISO)和7.10×103(MIC)L.mol-1.cm-1,线性范围为0.1-9.0(SI-SO)和0.2-8.4 mg/L(MIC);最大负吸收波长均位于588 nm,表观摩尔吸光系数(ε)为7.80×103(SISO)和1.40×104(MIC)L.mol-1.cm-1,线性范围为0.1-9.0(SISO)和0.1-9.3 mg/L(MIC);当用双波长叠加测定时,灵敏度会更高.探讨了适宜的反应条件、主要分析化学性质、络合比及应用.

氨基糖苷类药物衍生荧光性质的研究及应用

氨基糖苷类药物庆大霉素、卡那霉素及小诺霉素本身有微弱荧光，当它们在碱性条件下加入L-精氨酸、硼酸并加热水解后，可产生较强荧光，这是因为氨基糖苷类药物水解后成为糖，糖在精氨酸，硼酸存在下可产生强的荧光。由此可建立庆大霉素、卡那霉素及小诺霉素这类氨基糖苷类抗生素衍生荧光法。庆大霉素、卡那霉素均在1．0×10^-6～1．5×10^-5mol／L范围内与荧光强度呈良好线性关系（r=0．9996，r=0．9994），小诺霉素在4．0×10^-7～8．0×10^-6mol／L范围内与荧光强度呈良好线性关系（r=0．9986），三者检出限分别为5．8×10^-7，6．1×10^-7和3．0×10^-8mol／L。

儿童小诺米星药物动力学研究及其临床意义

用反相高效液相色谱柱前化学衍生法，测定儿童体内小诺米星（ＭＣＲ）血药浓度，并对其代谢动力学进行了研究。结果表明：药一时曲线符合二室开放式模型。主要药动学参数：消除半衰期（Ｔ_（１／２β））为８±５．２ｈ，清除率（Ｃｌ）为０．１２±０．０３（μｇ／ｍｌ），曲线下面积（ＡＵＣ）为１８．９２±５．０８（ｈ·μｇ／ｍｌ，平均血药峰浓度（Ｃ_（ｍａｘ））为３．３２±１．６０μｇ／ｍｌ。与成人肌注ＭＣＲ后药动学参数比较发现，儿童Ｃ_（ｍａｘ）和Ｃｌ较成人低，Ｔ_（１／２β）较成人长。并且８例儿童动力学参数个体间差异显著，这种对药物代谢能力的差异可能是导致少数患儿发生药物中毒的原因。

HPLC-ELSD法测定硫酸庆大霉素中的有关物质

目的:本文建立了硫酸庆大霉素有关物质的HPLC-ELSD测定方法。方法:使用耐酸C18柱,0.2mol/L三氟醋酸溶液∶甲醇(94∶6)为流动相;采用蒸发光检测器:漂移管温度为110℃,载气流量为2.0L/min。结果:硫酸庆大霉素与有关物质分离完全,并利用外标法定量测定硫酸小诺霉素和硫酸西索米星。结论:方法准确、灵敏度高,本方法可有效地控制药品质量。

刚果红褪色光度法测定硫酸小诺霉素含量的研究

目的建立一种简便、灵敏的测定注射液中硫酸小诺霉素含量的分光光度法。方法在pH5.33的Britton-Robinson缓冲溶液中,硫酸小诺霉素与刚果红染料反应,溶液颜色发生明显褪色变化。在最大褪色波长处,研究了吸光度与硫酸小诺霉素浓度的关系,考察了最适宜的反应条件和共存物质的影响。结果硫酸小诺霉素在0.024～3.24μg/mL范围内吸光度的降低值与硫酸小诺霉素浓度呈良好的线性关系,回归方程为A=0.1521c+0.0076(R=0.9991),检测限为21.8ng/mL。结论该法灵敏、简便,选择性好,可以直接进行硫酸小诺霉素注射液的分析,人尿样中的平均回收率为103.6%。

柱前衍生化反相高效液相色谱法测定硫酸小诺霉素的含量

目的:建立测定硫酸小诺霉素含量的柱前衍生化反相高效液相色谱法。方法:色谱柱:KromasilC18柱（4.6mm×150mm,5μ）;流动相:水-冰醋酸-甲醇（30:5:65）配制的0.02mol/L的庚烷磺酸钠溶液;检测波长:330nm。结果:线性范围为0.0976-0.9760mg/ml（r=0.9999）,重复性试验的相对标准偏差RSD为1.0％（n=6）。结论:本法专属性强、准确、灵敏,可以作为硫酸小诺霉素含量测定的首选方法。

几种酸性染料与小诺霉素的显色反应及应用

目的：建立测定小诺霉素（MIVC）含量的方法。方法：利用几种酸性染料与MINC的显色反应，建立分光光度法测定其含量。结果：在酸性条件下，刚果红（COR）、依文恩蓝（EVB）及滂胺天蓝（POB）与MINC反应生成红色或蓝色缔合物，最大显色波长为678nm（EVB）和692nm（POB），线性范围分别为0．2～8．4，0．2～7．5mg·L^-1，表观摩尔吸光系数分别为8．3×10^3，5．2×10^3L·mol^-1·cm^-1；最大褪色波长为502-620nm，线性范围分别为0．1～7．5，0．1～9．3，0．1～8．4mg·L^-1，表观摩尔吸光系数（ε）分别为2．34×10^4，4．05×10^4，2．06×10^4L·mol^-1·cm^-1；当EVB和PDB体系用双波长叠加测定时，ε值分别为4．90×10^4，2．56×10^4L·mol^-1·cm^-1。结论：CUR褪色法，EVB、PDB显色法和褪色法以及双波长叠加法均可用于市售药物中小诺霉素含量的测定。

小诺霉素产生菌棘孢小单孢菌的原生质体诱变育种

通过对菌株产量分布参数的统计学分析，棘抱小单孢菌７４＃被选作原生质体诱变育种的出发菌株．获得小诺霉素含量为８０％的高产突变株的概率以紫外线对原生质体悬液３０秒诱变处理为最高（２２．８％），５株高产突变株的小诺霉素组份与效价平均分别比出发菌株提高３３．３％与５１．２％．初步探讨了甘氨酸对原生质体化的作用机理以及原生质体诱变与再生处理提高小诺霉素产生菌生产能力的机理．