miR-150-5p靶向ZEB1调控EMT对子宫内膜癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)是否可靶向锌指E盒结合蛋白1(ZEB1)调控子宫内膜癌(EC)细胞上皮间质转化(EMT)进而影响癌细胞的恶性生物学行为。方法RT-qPCR技术检测正常子宫内膜和EC组织中、子宫内膜上皮细胞系hEEC及EC细胞系Ishikawa和HEC-1-A中miR-150-5p相对表达量。过表达miR-150-5p,MTT法、菌落形成实验、伤口愈合实验和Transwell实验分别评估Ishikawa细胞活力、克隆形成、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与ZEB1的靶向关系;RT-qPCR检测miR-150-5p及ZEB1 mRNA相对表达量;Western blot技术检测ZEB1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达量。结果与正常子宫内膜组织比较,EC组织中miR-150-5p相对表达量降低(P<0.05);与hEEC细胞比较,HEC-1-A细胞和Ishikawa细胞中miR-150-5p相对表达量降低(P<0.05),Ishikawa细胞中最低(P<0.05)。与空白组比较,miR-150-5p mimics组细胞490 nm处吸光度值、细胞菌落数、迁移数和侵袭数、ZEB1 mRNA和蛋白相对表达量及N-cadherin、Vimentin和MMP-9蛋白相对表达量显著降低,miR-150-5p相对表达量、E-cadherin蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。经生物信息学分析,ZEB1被预测为miR-150-5p的潜在靶基因。结论miR-150-5p可靶向ZEB1抑制癌细胞的恶性生物学行为,其作用机制可能与调控EC细胞EMT进展有关。

miR-150-5p、miR-135b在糖尿病肾病患者中的表达及意义

目的探讨外周血miR-150-5p、miR-135b水平与糖尿病肾病(DN)患者尿白蛋白排泄率(UAER)、预后的关系。方法采用前瞻性研究方法,选取2019年1月至2021年10月延安大学附属医院收治的85例DN患者作为DN组[男46例,女39例,年龄(46.28±4.41)岁,2型糖尿病(T2DM)病程(7.24±2.31)年],另纳入76例单纯T2DM患者作为T2DM组[男40例,女36例,年龄(44.95±6.13)岁,T2DM病程(6.98±3.28)年],80例健康体检者作为对照组[男43例,女37例,年龄(45.74±5.68)岁]。收集3组患者临床资料及外周血miR-150-5p、miR-135b水平,Spearman分析各指标与UAER相关性,绘制受试者操作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC),分析各指标预后的预测效能,采用相对危险度(RR)及95%置信区间(CI)分析各指标对预后的影响。结果DN组外周血miR-150-5p、miR-135b水平>T2DM组>对照组[(3.36±0.68)比(1.03±0.62)比(0.78±0.21)、(3.96±0.51)比(1.24±0.48)比(0.66±0.12)],差异均有统计学意义(F=560.11、1519.26,均P<0.05);DN组UAER>300 mg/24 h患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平>UAER 30~300 mg/24 h患者>UAER<30 mg/24 h患者[(4.10±0.92)比(3.42±0.64)比(2.73±0.51)、(5.40±0.87)比(3.87±0.61)比(3.02±0.49)],差异均有统计学意义(F=23.53、78.25,均P<0.05);DN患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平与UREA呈正相关(r=0.783、0.835,均P<0.05);随访12个月,15例发生终末期肾病(ESRD),发生ESRD患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平均高于未发生ESRD患者[(4.41±0.55)比(3.14±0.38)、(4.67±0.61)比(3.81±0.42)],差异均有统计学意义(t=10.67、6.53,均P<0.05);外周血miR-150-5p、miR-135b、联合预测DN并发ESRD的AUC分别为0.733、0.829、0.944。外周血miR-150-5p、miR-135b高水平患者并发ESRD的RR分别为低水平的3.619倍、10.889倍,其95%CI分别为1.105~11.856、1.503~78.872。结论外周血miR-150-5p、miR-135b水平与DN患者UAER呈正相关,联合检测可作为预测DN并发ESRD的重要辅助手段,为临床诊治提供可靠数据支持。

结直肠癌患者血清miR-150-5p和miR-200b-3p水平及临床意义

目的结直肠癌患者血清微小RNA(miR)-150-5p和miR-200b-3p水平及临床意义。方法回顾性选择2020年6月至2022年11月在沧州市人民医院就诊的结直肠癌患者116例为结直肠癌组,同时选取同期在本院治疗的结肠息肉患者60例作为结直肠良性肿瘤组,选择同期在本院行健康体检者60名为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测受试者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平;采用Pearson相关性分析对结直肠癌患者血清miR-150-5p与miR-200b-3p表达水平的相关性进行分析;分析结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平与病理特征的关系;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-150-5p、miR-200b-3p表达水平对结直肠癌的诊断价值。结果结直肠癌组、结直肠良性肿瘤组血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平均显著低于对照组,且结直肠癌组血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平均显著低于结直肠良性肿瘤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,结直肠癌患者血清miR-150-5p与miR-200b-3p表达水平呈正相关(r=0.562,P<0.05)。结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平与分化程度、淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关(P<0.05),其中低分化、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、浸润深度T 3~T 4的结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平显著低于中高分化、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、浸润深度T_(1)~T_(2)的患者(P<0.05)。血清miR-150-5p、miR-200b-3p单独及联合诊断结直肠癌的曲线下面积(AUC)分别为0.800、0.828、0.893,联合诊断AUC显著高于单独预测AUC(P<0.05)。结论结直肠癌患者血清miR-150-5p、miR-200b-3p水平降低,二者可作为诊断结直肠癌发生的辅助指标。

乳腺癌患者组织中miR-150-5p表达及临床意义

目的探讨乳腺癌患者组织中微小RNA-150-5p(miR-150-5p)表达及临床意义。方法前瞻性选取河南省洛阳市妇幼保健院2019年12月至2022年5月收治86例乳腺癌患者为对象,收集患者年龄、乳腺癌家族遗传史、肿瘤直径大小、疾病类型等一般资料,并测量所有患者癌组织与癌旁正常组织miR-150-5p水平。结果乳腺癌患者癌组织miR-150-5p水平高于癌旁正常组织(P<0.001)。miR-150-5p高水平组肿瘤直径大小、Ⅲ~Ⅳ期占比高于低水平组(P<0.05)。86例乳腺癌患者中共发生复发转移11例(12.79%),其中miR-150-5p低水平组3例,高水平组8例。logistic回归分析结果显示,miR-150-5p水平与乳腺癌复发转移有关(P<0.05)。结论乳腺癌患者癌组织中miR-150-5p呈异常高表达,可能是患者预后不良的指标之一。miR-150-5p水平与肿瘤直径、分期有关。

miR-150-5p在妇科恶性肿瘤的研究进展

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性的非编码单链RNA分子,其可以与靶基因RNA 的碱基互补配对,从而诱导靶基因RNA降解或抑制蛋白质翻译,参与机体的病理生理过程。其中miR-150-5p在肿瘤中的异常表达提示其与肿瘤的发生发展密切相关。本文对miR-150-5p在妇科三大恶性肿瘤中的作用机制进行综述,为开发新型的癌症筛查及肿瘤诊治标志物提供理论依据。

miR-150-5p对脑小血管病大鼠脑微血管内皮细胞凋亡的影响

目的 分析miR-150-5p对脑小血管病(CSVD)大鼠脑微血管内皮细胞凋亡的影响。方法 56只雄性大鼠14只作为正常组并不做处理,剩余42只建立CSVD模型,建模中途死亡6只。将建模成功的大鼠随机分为模型组、上调组、下调组,每组8只,做miR-150-5p转染,鉴定miR-150-5p转染率、氧化应激指标水平、神经凋亡率和乳酸脱氢酶(LDH)释放率。结果 与正常组、模型组相比,上调组miR-150-5p表达量升高,下调组miR-150-5p表达量降低,具有统计学差异(P<0.05),证明miR-150-5p转染成功。与正常组相比,模型组、下调组细胞凋亡率、LDH释放率、丙二醛(MDA)水平升高,超氧化物歧化酶(SOD)水平降低,上调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平降低,SOD水平升高,具有统计学差异(P<0.05);与模型组相比,下调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平升高,SOD水平降低,上调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平降低,SOD水平升高,具有统计学差异(P<0.05);与上调组相比,下调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平升高,SOD水平降低,具有统计学差异(P<0.05)。结论 miR-150-5p可能作用于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路,影响CSVD大鼠脑微血管内皮细胞凋亡。

LncRNA DSCAM-AS1调节miR-150-5p/BRAF轴对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨lncRNA DSCAM-AS1调节miR-150-5p/BRAF轴对甲状腺癌(TC)细胞恶性生物学行为的影响。方法qRT-PCR检测TC细胞中DSCAM-AS1表达;FISH、pull down实验、双荧光素酶报告基因实验验证DSCAM-AS1、BRAF与miR-150-5p靶向调控关系;检测SW579细胞增殖、迁移和侵袭,Western blot检测BRAF、E-cadherin、vimentin蛋白表达;小鼠体内肿瘤形成实验验证DSCAM-AS1对TC肿瘤生长的影响。结果DSCAM-AS1在TC细胞中高表达(P<0.05);DSCAM-AS1、BRAF与miR-150-5p存在靶向调控关系;抑制DSCAM-AS1表达或过表达miR-150-5p可显著抑制SW579细胞增殖、迁移、侵袭及EMT(P<0.05);抑制miR-150-5p表达或过表达BRAF可逆转抑制DSCAM-AS1表达或过表达miR-150-5p对SW579细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05);体内实验显示,抑制DSCAM-AS1表达可显著抑制小鼠移植瘤的生长(P<0.05)。结论DSCAM-AS1在TC细胞中上调表达,抑制DSCAM-AS1表达可通过调节miR-150-5p/BRAF信号轴,抑制TC恶性进展。

阿替普酶联合抗血小板聚集治疗可影响急性缺血性脑卒中患者miR-150-5p及miR-199a表达水平

目的:观察阿替普酶联合抗血小板聚集治疗对急性缺血性脑卒中(AIS)患者miR-150-5p及miR-199a表达的影响。方法:选取150例AIS患者,随机分为对照组和观察组,每组75例。对照组予阿替普酶溶栓治疗,观察组在对照组的基础上联合抗血小板聚集治疗。比较2组美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)、改良Rankin评分量表(mRS)、Barthel指数、miR-150-5p及miR-199a表达变化情况。比较2组患者早期神经功能恶化的发生率。结果:2组患者治疗14 d后Barthel指数较治疗前升高,NIHSS、mRS评分较治疗前降低(P均<0.05)。与对照组比较,观察组治疗14 d后的临床总有效率、Barthel指数、血清miR-150-5p及miR-199a表达更高,而NIHSS、mRS评分更低(P均<0.05)。2组患者早期(1周内)神经功能恶化总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:阿替普酶联合抗血小板聚集治疗AIS患者,可减轻神经功能损害,提高患者生活自理能力,还可上调miR-150-5p及miR-199a表达。

尿沉渣miR-150-5p在IgA肾病无创诊断中的价值

背景IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是一种发病率高且呈进展性的疾病,现主要确诊手段为肾穿刺活检,临床诊疗中需要研究无创且具有特异性的IgAN诊断标志物。目的检测IgAN患者尿沉渣miR-150-5p表达水平并评估其诊断IgAN的价值。方法根据已经发表的3项有关IgAN尿沉渣miRNA芯片的研究数据,筛选IgAN患者与正常人群之间差异性表达的miRNA,最终确定miR-150-5p在IgAN患者与正常人群中表达差异显著且趋势一致,是正常人群的(30.22~598.34)倍。为了验证芯片筛选的准确性,选取解放军总医院第一医学中心2018年10月-2019年2月的30例IgAN患者和30例正常人进行了小样本RT-PCR验证。为进一步明确其是否具有疾病特异性,选取解放军总医院第一医学中心2019年3月-2022年5月的144例IgAN患者、84例其他肾病患者[60例膜性肾病(membranous nephropathy,MN)、8例微小病变型肾病(minimal change disease,MCD)、16例局灶性节段性肾小球硬化(focal segmental glomerular sclerosis,FSGS)]、67例正常人进行了较大样本的验证,比较miR-150-5p在IgAN组与不同疾病对照组之间的差异表达。绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估差异性表达miRNA在无创诊断IgAN中的价值。结果在小样本验证研究中,RTPCR实验显示IgAN患者尿沉渣miR-150-5p与正常对照组相比显著升高[Md(IQR):25.632(5.868~61.523)vs 0.557(0.218~1.258),P<0.0001],与文献中芯片测量结果基本一致。在加入疾病对照组的较大样本研究中,IgAN组miR-150-5p表达水平显著高于疾病对照组[Md(IQR):12.606(3.939~34.431)vs 2.808(1.420~9.616),P<0.0001]。miR-150-5p在IgAN组中表达水平较MN组和FSGS组高(P<0.001),与MCD组之间差异无统计学意义(P=0.613)。miR-150-5p诊断IgAN的ROC曲线下面积(area under curve,AUC)为0.844,95%CI为0.804~0.885,最佳截断值为2.505,敏感度71.51%,特异度84.48%。结论miR-150-5p或可作为无创诊断IgAN的潜在标志物。

环状RNA-胞裂蛋白2/miR-150-5p/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1分子轴在重症急性胰腺炎中的作用及机制研究

目的探讨环状RNA(circRNA)-胞裂蛋白2(SEPT2)/miR-150-5p/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)分子轴在重症急性胰腺炎(SAP)中的作用及机制。方法选取2019年12月至2021年12月赣南医学院第一附属医院收治的46例SAP患者作为重症组;并选取本院同期收治的41例轻症急性胰腺炎(MAP)患者作为轻症组;另选取本院同期35名健康体检者作为对照组。3组均采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定血清circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量,采用急性生理和慢性健康评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评估病情严重程度;采用重组慢病毒包装合成有效感染序列sh-SEPT2(干扰组)与过表达序列oe-SEPT2(过表达组)建立动物模型,采用酶联免疫吸附试验测定大鼠生化指标[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、D乳酸及二胺氧化酶(DAO)],采用RT-PCR及Western blot法检测大鼠circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1及细胞凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9 mRNA表达。比较3组circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量及APACHEⅡ评分,采用Pearson相关性分析SAP患者PARP-1与circRNA-SEPT2、miR-150-5p及APACHEⅡ评分的相关性;比较干扰组与过表达组大鼠苏木精-伊红染色法(HE)结果、肠黏膜损伤评分、炎症因子水平及cir-cRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1和Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达量。结果重症组circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量及APACHEⅡ评分均高于轻症组和对照组,且轻症组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性结果显示,SAP患者PARP-1与circRNA-SEPT2、miR-150-5p及APACHEⅡ评分均呈正相关(r>0,P<0.05)。干扰组HE染色下胰岛细胞界限清晰,胰岛丰富,胞浆丰富,形态完整;过表达组大鼠胰岛细胞界限不清,胰岛数量较少,细胞形态不规则,细胞体积较大,边缘不齐;干扰组胰腺损伤评分为(2.58±0.16)分,低于过表达组的(3.95±0.53)分,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组IL-1β、IL-18、TNF-α、D乳酸及DAO水平均低于过表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组大鼠circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1 mRNA表达及细胞凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达量均低于过表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PARP-1通过靶向作用于circRNA-SEPT2/miR-150-5p参与SAP的发生与发展,抑制circRNA-SEPT2表达,可减轻SAP肠黏膜屏障损伤,能为SAP治疗提供新的靶点。

急性冠脉综合征病人血清LCN-2、hs-CRP水平及miR-150-5p表达与危险分层的关系

目的:分析急性冠脉综合征(ACS)病人血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(LCN2)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平和miR-150-5p表达与危险分层的关系。方法:选取2018年7月—2019年10月我院收治的经冠状动脉造影检查满足ACS相关诊断标准的病人163例作为ACS组,根据全球急性冠状动脉事件注册(GRACE)评分系统将163例ACS病人分为低危组(≤108分,76例)、中危组(109~140分,54例)、高危组(>140分,33例)。选取同期于我院体检的200名健康人群作为对照组。检测各组病人血清LCN2、hs-CRP水平和miR-150-5p表达,采用Spearman秩相关分析各指标与ACS危险分层的相关性,采用Logistic回归分析ACS的危险因素。结果:ACS组病人血清LCN2、hs-CRP水平高于对照组,miR-150-5p表达低于对照组(P<0.05)。与低危组比较,中危组、高危组LCN2、hs-CRP表达升高,miR-150-5p表达降低(P<0.05);与中危组比较,高危组LCN2、hs-CRP水平升高,miR-150-5p表达降低(P<0.05)。血清LCN2、hs-CRP表达与ACS危险分层呈正相关(P<0.05),miR-150-5p表达与ACS危险分层呈负相关(r s=-0.58,P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,血清LCN2每增加1 mg/mL,ACS发病的风险增加2.921倍;血清hs-CRP每上升1 mg/mL,ACS发病的风险增加2.733倍;miR-150-5p每上升1个相对值,ACS发病的风险增加3.672倍;血脂异常相对于血脂正常,ACS发病的风险增加2.623倍;有吸烟史相对于无吸烟史,ACS发病的风险增加1.081倍。结论:ACS病人血清高LCN2、高hs-CRP水平和低miR-150-5P表达与ACS病人危险分层相关,对预测ACS危险分层有较高的临床价值。

右美托咪定调控miR-150-5p/P2X7受体轴减轻脑出血大鼠小胶质细胞活化

目的:探讨右美托咪定(DEX)对脑出血(ICH)大鼠小胶质细胞(MG)活化的影响以及对miR-150-5p/P2X7受体(P2X7R)轴的调控作用。方法:将大鼠分为假手术组(n=12)、模型组(n=63),建立ICH大鼠模型,DEX低(25μg/kg)和高剂量(50μg/kg)组、DEX(50μg/kg)+NC antagomir(20nmoL/L,5μL)组以及DEX(50μg/kg)+miR-150-5p antagomir(20nmoL/L,5μL)组,每组12只。腹腔注射,每日1次,每次0.2mL,连续给药7d。给药结束后24h,进行神经功能评分;分离血清,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中TNF-α、IL-1β含量;分离出血区(海马CA2区)脑组织,检测脑组织含水量,HE染色观察组织病理变化,免疫荧光观察MG形态,qRT-PCR法检测miR-150-5p、P2X7R mRNA表达,Western blot法检测离子钙接头蛋白分子-1(Iba-1)、P2X7受体(P2X7R)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与P2X7R靶向关系。结果:与模型组比较,DEX低、高剂量组脑组织病理变化逐渐减轻,红细胞与炎性细胞浸润减轻,核固缩现象减少;MG数量明显减少,胞体变小;神经功能评分、脑组织中miR-150-5p表达明显升高(P<0.05);血清中TNF-α、IL-1β含量,脑组织含水量,脑组织中P2X7R mRNA和蛋白表达以及Iba-1蛋白表达显著降低(P<0.05)。与DEX高剂量组、DEX+NC antagomir组比较,DEX+miR-150-5p antagomir组可见大量红细胞和炎性细胞浸润,脑组织结构紊乱,细胞排列无序;MG数量显著增多,胞体变大;神经功能评分、脑组织中miR-150-5p表达均明显降低(P<0.05);血清中TNF-α、IL-1β含量,脑组织含水量,脑组织中P2X7R mRNA和蛋白表达以及Iba-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果表明P2X7R是miR-150-5p的下游靶基因。结论:DEX能够通过上调miR-150-5p、下调P2X7R表达抑制MG活化,在ICH中发挥保护作用。

微小RNA-150-5p抑制鼻咽癌细胞恶性增殖及增强放疗敏感性的作用研究

目的 探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在鼻咽癌组织中的表达水平及其对癌细胞增殖和放疗敏感性的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞中miR-150-5p的表达水平。常规培养鼻咽癌细胞CNE2进行miR-150-5p mimic转染,分为对照组(NC组)和miR-150-5p过表达组(miR-150-5p mimic组)。采用MTT实验检测各组CNE2细胞的增殖能力;采用流式细胞仪检测各组CNE2细胞的凋亡情况;采用Western blot检测各组细胞中磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(pPI3K)、磷酸化蛋白激酶B(pAKT)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(pmTOR)的表达。结果 miR-150-5p在鼻咽癌组织中的表达水平为(0.74±0.39),低于癌旁组织中的(1.44±0.54),差异有统计学意义(t=8.140,P<0.001)。转染48 h后,miR-150-5p mimic组CNE2细胞中miR-150-5p的表达水平为(6.31±1.20),高于NC组中的(1.00±0.08),差异有统计学意义(t=7.647,P<0.001)。MTT实验结果显示,在24、48、72 h时,miR-150-5p mimic组CNE2细胞增殖能力均低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。经0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 Gy放射线辐射后,miR-150-5p mimic组细胞增殖率低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。采用2 Gy射线剂量照射CNE2细胞后,与NC组相比,miR-150-5p mimic组细胞凋亡率增加,CNE2细胞中pPI3K、pAKT和pmTOR蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 鼻咽癌细胞中miR-150-5p表达下调。过表达miR-150-5p抑制鼻咽癌细胞增殖,促进细胞凋亡,同时可有效增强鼻咽癌细胞的放疗敏感性;其可能是通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路发挥作用,miR-150-5p可能是增强鼻咽癌放疗敏感性药物的作用靶点。

miR-150-5p与NCAPG的靶向关系及其对肝细胞肝癌Huh7细胞的抑制作用

目的:探究miR-150-5p与非SMC凝聚体Ⅰ复合物亚基G(NCAPG)的靶向关系及其对肝细胞肝癌(HCC)细胞生物学功能的影响,为HCC的临床诊断和治疗提供潜在靶点。方法:通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与NCAPG的靶向关系。将HCC Huh7细胞根据转染质粒不同分为模拟物阴性对照(mimic NC)组、miR-150-5p模拟物(miR-150-5p mimic)组、miR-150-5p模拟物+过表达阴性对照(miR-150-5p mimic+ovNC)组和miR-150-5p模拟物+过表达NCAPG(miR-150-5p mimic+ovNCAPG)组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中NCAPG mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中NCAPG蛋白表达水平,5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测各组细胞EdU阳性率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell实验检测各组细胞中迁移和侵袭细胞数。将裸鼠分为agomiR-NC组、agomiR-150-5p组、agomiR-150-5p+过表达阴性对照(agomiR-150-5p+ovNC)组和agomiR-150-5p+过表达NCAPG(agomiR-150-5p+ovNCAPG)组,Huh7细胞皮下成瘤,检测各组裸鼠肿瘤体积和质量。结果:双荧光素酶报告基因实验证实NCAPG是miR-150-5p的靶基因。与mimic NC组比较,miR-150-5p mimic组Huh7细胞中NCAPG mRNA和蛋白表达水平及EdU阳性率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.05);与miR-150-5p mimic+ovNC组比较,miR-150-5p mimic+ovNCAPG组Huh7细胞中NCAPG mRNA和蛋白表达水平及EdU阳性率明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.05)。与agomiR-NC比较,agomiR-150-5p组裸鼠Huh7细胞移植瘤体积和质量明显减少(P<0.05);与agomiR-150-5p+ovNC组比较,agomiR-150-5p+ovNCAPG组裸鼠Huh7细胞移植瘤体积和质量明显增加(P<0.05)。结论:miR-150-5p通过靶向结合抑制NCAPG表达进而抑制HCC细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长,促进细胞凋亡。

外泌体miR-150-5p通过靶向调控p53促进肝细胞癌的增殖、侵袭和迁移

目的 探讨外泌体miR-150-5p通过靶向调控p53对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制。方法 选取吉安市中心人民医院2019年1月至2022年12月收治的39例肝癌(HCC)患者癌组织及癌旁组织,采用差速离心法提取外泌体并鉴定,qRT-PCR检测肿瘤组织及外泌体中miR-150-5p和p53表达;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与p53的互作;培养人肝癌细胞株(HCCLM3),给予癌组织及癌旁组织分离提取的外泌体处理(ExoNor和ExoHCC),同时给予GW 4869抑制细胞本身分泌外泌体,激光共聚焦显微镜对外泌体与受体细胞结合内化进行追踪;同时采用脂质体3000向HCCLM3细胞转染miR-150-5p mimics和miR-150-5p inhibitor;Transwell检测肝癌细胞迁移及侵袭能力,CCK-8检测细胞增殖,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR检测各组细胞miR-150-5p和p53表达,Western blot检测E-cadherin、N-cadherin和p53蛋白表达。结果 HCC组织中提取的外泌体miR-150-5p相对表达量明显高于邻近正常癌旁组织;与癌旁组织提取的外泌体相比,HCC细胞系HCCLM3能摄取肿瘤组织提取的外泌体miR-150-5p,从而增加细胞的增殖和迁移能力。外泌体能携带miR-150-5p并靶向负调控p53蛋白;共孵育ExoHCC或转染miR-150-5p mimics组HCCLM3细胞中N-cadherin表达较对照组明显降低,E-cadherin表达较对照组明显升高,而miR-150-5p inhibitor抑制了肿瘤的迁移和增殖能力,促进肿瘤细胞凋亡。结论 HCC细胞分泌的外泌体可被周围肿瘤细胞内吞;肝癌细胞分泌的外泌体及过表达肝癌细胞中的miR-150-5p可以靶向抑制周围细胞p53表达,增加细胞迁移及侵袭。

miR-150-5p靶向IGF2BP2抑制口腔鳞癌恶化的研究

目的探讨miR-150-5p调控口腔鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用及作用机制。方法收集口腔鳞癌组织和癌旁正常组织,体外培养人口腔上皮胶质细胞系HOK和口腔鳞癌细胞系HN6、SCC-25和CAL-27,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time pCR,qRT-PCR)和western blot检测组织样本和细胞中miR-150-5p和胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(insulin-like growth factor 2 mRNA binding protein 2,IGF2BP2)的表达。构建过表达miR-150-5p或沉默表达IGF2BP2的CAL-27细胞,采用Cell Counting Kit-8(CCK8)实验和EdU染色检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。双荧光素酶实验验证miR-150-5p与IGF2BP2之间的靶向关系。功能拯救实验分析miR-150-5p/IGF2BP2轴在口腔鳞癌细胞生物学行为中的调控作用。结果口腔鳞癌组织和细胞中miR-150-5p低表达,而IGF2BP2 mRNA和蛋白高表达。与对照组比较,过表达miR-150-5p组和沉默IGF2BP2组细胞的增殖活性均降低,细胞凋亡率升高,细胞划痕愈合率降低,细胞迁移和侵袭数目减少。在CAL-27细胞中miR-150-5p能够与IGF2BP2的3’UTR靶向结合。功能拯救实验显示,与miR-150-5p+pcDNA组比较,miR-150-5p+pcDNA-IGF2BP2组细胞增殖活性增强,细胞凋亡率降低,细胞划痕愈合率升高,细胞迁移和侵袭数目增多。结论miR-150-5p在口腔鳞癌中低表达,过表达miR-150-5p可能通过靶向抑制IGF2BP2基因表达,抑制癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

miR-150-5p缓解肾小管上皮细胞-间质转化及纤维化的作用机制探讨

目的探究miR-150-5p对转化生长因子-β(TGF-β)诱导肾小管上皮细胞间质纤维化的作用及机制。方法利用TGF-β1诱导HK-2细胞构建肾间质纤维化HK-2细胞模型,通过RT-qPCR检测HK-2细胞中miR-150-5p的表达水平;构建的肾间质纤维化HK-2细胞模型转染miR-150-5p mimic和inhabitor后,通过RT-qPCR和Western blot检测各组HK-2细胞中E-cadherin、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Vimentin和Snail的表达;通过RT-qPCR和ElISA分别检测各组细胞及培养液中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN的表达;使用targetscan预测miR-150-5p靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验验证;构建的肾间质纤维化HK-2细胞模型转染miR-150-5p mimic和pcDNA/β-catenin后,通过Western blot和ElISA检测各组细胞中I型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Col-Ⅲ)和细胞纤连蛋白(FN)的表达。结果在TGF-β1诱导的HK-2细胞中miR-150-5p的表达显著降低(P<0.05);间质纤维化HK-2细胞模型转染miR-150-5p mimic后,miR-150-5p的表达显著升高(P<0.05),E-cadherin mRNA和蛋白表达也显著升高(P<0.05),α-SMA,Vimentin和Snail的mRNA与蛋白表达显著降低(P<0.05);间质纤维化HK-2细胞模型转染miR-150-5p inhabitor后,结果与mimic相反。间质纤维化HK-2细胞转染miR-150-5p mimic后,Col-I、Col-Ⅲ和FN的表达水平显著降低(P<0.05);转染miR-150-5p inhabitor后,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN的表达升高(P<0.05)。经双荧光素酶报告验证β-catenin是miR-150-5p的靶基因;间质纤维化HK-2细胞模型共同转染miR-150-5p和pcDNA/β-catenin后,细胞中Col-I,Col-Ⅲ和FN的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论miR-150-5p通过靶向β-catenin基因,调控TGF-β1诱导的HK-2细胞的上皮间质转化(EMT)过程和细胞外基质(ECM)的积累。

miR-150-5p在枸杞多糖缓解小鼠肾脏纤维化中的作用研究

目的探讨miR-150-5p在枸杞多糖(LBP)抑制小鼠肾脏纤维化过程中的作用。方法21只雌性的Balb/c小鼠随机分成假手术组(只暴露左侧输尿管,不结扎)、模型组(结扎左侧输尿管)和LBP干预组(在模型组的基础上灌胃0.1 mg/g LBP)。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胶原蛋白Ⅰ(Col-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅲ(Col-Ⅲ)、纤连蛋白(FN)和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化;通过RT-qPCR检测肾脏组织中miR-150-5p的表达;通过生物信息学数据库预测miR-150-5p的靶基因并用RT-qPCR进行验证。结果与假手术组相比,模型组小鼠肾脏湿重以及肾脏指数均显著减小,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN及α-SMA的mRNA表达水平显著升高,miR-150-5p的表达水平显著降低;LBP干预后,小鼠肾脏指数和肾脏湿重均有明显增加,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN及α-SMA的mRNA表达水平显著降低,miR-150-5p的表达水平显著上升。通过Targetscan数据库预测miR-150-5p的靶基因,筛选出与肝脏纤维化相关的靶基因总共有2个,分别是Mtmr1和Prickle。验证靶基因Mtmr1和Prickle mRNA的表达情况,结果表明在模型组小鼠肝脏组织中Mtmr1和Prickle的表达显著增加;在LBP干预组小鼠肝脏组织中Mtmr1的表达水平明显降低,Prickle没有显著改变。结论LBP能够调节miR-150-5p的表达并改善肾脏纤维化的作用,其机制可能是通过靶向Mtmr1实现的。

血清miR-150-5p和LTBP-2检测在急性脑梗死患者病情评估中的价值

目的探讨血清miR-150-5p和潜伏转化生长因子结合蛋白(LTBP)-2相对表达量在急性脑梗死(ACI)患者病情评估中的价值。方法选取2018年5月—2021年2月义乌復元私立医院ACI患者121例(ACI组)。根据发病48~72 h内脑梗死体积分为小梗死组、中梗死组、大梗死组;根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将ACI患者分为轻度组、中度组、重度组。以体检健康者128名作为正常对照组。检测所有研究对象血清miR-150-5p和LTBP-2 mRNA的表达情况。采用Pearson相关分析评估ACI患者miR-150-5p与LTBP-2 mRNA的相关性。采用Logistic回归分析评估发生ACI的危险因素。结果与正常对照组比较,ACI组血清miR-150-5p相对表达量显著降低(P<0.001),而LTBP-2 mRNA相对表达量显著升高(P<0.001)。小梗死组、中梗死组和大梗死组血清miR-150-5p相对表达量依次降低(P<0.001),LTBP-2 mRNA相对表达量依次升高(P<0.001)。轻度组、中度组和重度组血清miR-150-5p相对表达量依次降低(P<0.001),LTBP-2 mRNA相对表达量依次升高(P<0.001)。Targetscan网站预测结果显示,LTBP-2是miR-150-5p潜在的靶基因。Pearson相关分析结果显示,ACI组血清miR-150-5p表达与LTBP-2 mRNA表达呈负相关(r=-0.346,P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-150-5p相对表达量降低、LTBP-2 mRNA相对表达量升高是ACI发生的危险因素[比值比(OR)值分别为0.563、1.698,95%可信区间(CI)分别为0.445~0.712、1.342~2.148]。结论ACI患者血清miR-150-5p和LTBP-2表达与疾病严重程度有关,或可作为ACI病情评估的指标。

miRNA150-5p在甲状腺乳头状癌中的表达及诊断价值

目的探讨miRNA150-5p在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达及其在鉴别PTC与良性甲状腺结节(benign thyroid nodule,BTN)中的作用。方法纳入2021年10月至2022年1月在郑州大学附属洛阳中心医院确诊的43例PTC患者和19例BTN患者,对两组患者的临床资料进行统计学分析。采用定量实时聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测PTC组织、癌旁组织及BTN组织中miRNA150-5p的表达水平,并在癌症基因组图谱(TCGA)RNA-Seq数据库中进行验证。使用单因素和多因素logistic回归模型分析PTC的影响因素。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析miRNA150-5p对于甲状腺结节性质的鉴别诊断价值。结果PTC组织中miRNA150-5p的表达量低于配对癌旁组织和BTN组织(均P<0.05)。PTC组患者年龄低于BTN组(P<0.05);PTC组促甲状腺激素(TSH)水平明显高于BTN组(P<0.05)。单因素和多因素logistic回归分析表明,miRNA150-5p表达量越高,发生PTC的风险越小(OR=0.980,P<0.05)。ROC分析显示,曲线下面积(AUC)为0.797,灵敏度为67.44%,特异度为89.47%,准确度为74.19%。结论miRNA150-5p在PTC组织中显著低表达,对良性和恶性甲状腺结节具有良好的诊断效能,可作为诊断PTC的潜在生物标志物。