LINC00894通过miR-205-5p/ZEB1轴对胃癌细胞增殖和转移的影响

目的 探究长链非编码RNA 00894(LINC00894)基因对人胃癌细胞增殖、转移的影响,验证LINC00894、miR-205-5p、ZEB1在胃癌中的调控关系。方法 采用RT-qPCR检测LINC00894在胃癌细胞系、正常胃细胞系、临床胃癌及正常胃组织样本中的表达水平;通过随访,探究LINC00894的表达水平与胃癌患者预后的关系;构建LINC00894敲减细胞系和过表达细胞系,并采用RT-qPCR检测敲减及过表达效率;通过CCK-8、克隆形成和Transwell实验检测细胞增殖与转移能力;采用双荧光素酶报告实验、RT-qPCR实验和Western blot实验检测LINC00894、miR-205-5p和ZEB1的靶向调控关系。结果 LINC00894基因在胃癌组织或细胞中的表达量明显高于胃正常组织或细胞,且LINC00894基因高表达的胃癌患者预后更差;LINC00894基因的敲减抑制了胃癌细胞的活力、克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力,相反,LINC00894基因的过表达得到相反地结果;LINC00894通过靶向miR-205-5p并下调其表达,从而促进ZEB1的表达。结论 LINC00894在胃癌中扮演癌基因的角色,可能通过miR-205-5p/ZEB1轴促进胃癌细胞增殖和转移。

miR-205-5p靶向ERBB3调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制血管生成在痔疮中的分子机制

目的 探讨miR-205-5p靶向ERBB3调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制血管生成在痔疮中的分子机制。方法 收集2021年07月至2022年06月临床12例患者的痔核和正常肛周组织,通过qRT-PCR检测临床病理样本中miR-205-5p和ERBB3的表达情况,双荧光素酶报告基因实验验证miR-205-5p与ERBB3的靶向关系。将miR-205-5p mimic、pcDNA-ERBB3、miR-205-5p inhibitor、sh-ERBB3、oe-ERBB3及阴性对照质粒分别或共同转染至痔疮模型大鼠和HUVEC细胞。HE、TUNEL染色观察组织病理和细胞凋亡情况,免疫组化检测ERBB3、VEGFR2蛋白定位及表达水平,Western blot检测ERBB3、VEGFR2、Cyclin D1、Cleaved-caspase 3、Bax、Bcl-2和PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达水平。MTT、划痕愈合、Transwell实验、流式细胞术、血管形成实验检测各组HUVEC细胞增殖、迁移、侵袭能力、凋亡率和血管生成量。结果 痔疮临床样本中miR-205-5p呈低表达,ERBB3呈高表达(P <0.001),miR-205-5p与ERBB3(WT)的3'UTR靶向结合(P <0.001)。miR-205-5p mimic组痔疮大鼠和HUVEC细胞中ERBB3表达量显著降低(P <0.01,P <0.001),VEGFR2(P <0.001)、Cyclin D1(P <0.01)、Bcl-2(P <0.001)、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR(P <0.001)水平显著下调,Cleaved-caspase 3和Bax水平显著上调(P <0.01),大鼠肛周组织病理状况改善,HUVEC细胞增殖、迁移和侵袭力均降低(P <0.001),凋亡率升高(P <0.001),血管生成数量及分支减少(P <0.001),pcDNAERBB3逆转了这一效应(P <0.001)。结论 miR-205-5p能通过靶向抑制ERBB3表达,下调PI3K/AKT/mTOR通路活性,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,减少血管生成,从而缓解痔疮进展。

MiR-205-3p靶向PRMT5改善P.g-LPS所致HUVECs炎症反应和凋亡

目的:研究miR-205-3p对P.g-LPS所致HUVECs炎症反应和凋亡的影响及调控机制。方法:利用P.g-LPS刺激HUVECs构建细胞损伤模型,实验分为Con组、LPS组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-205组、LPS+si-NC组、LPS+si-PRMT5组、LPS+miR-205+pc-NC组和LPS+miR-205+pc-PRMT5组,RT-qPCR和Western blot检测miR-205-3p、PRMT5和凋亡蛋白表达;ELISA检测炎症因子表达;Tunel染色和流式细胞术检测HUVECs凋亡;双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-205-3p和PRMT5的靶向关系。结果:P.g-LPS刺激HUVECs后,炎症因子表达和凋亡率显著升高,miR-205-3p下调,PRMT5上调(P <0.05)。miR-205-3p可以抑制PRMT5表达,且过表达miR-205-3p和PRMT5低表达均可以降低炎症因子表达和降低细胞凋亡率(P <0.05)。双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果表明miR-205-3p可靶向抑制PRMT5的表达(P <0.05)。且过表达PRMT5可明显逆转过表达miR-205-3p对炎症反应和凋亡的抑制作用(P <0.05)。结论:P.g-LPS促进HUVECs炎症反应和凋亡;miR-205-3p靶向负调控PRMT5表达来改善P.g-LPS诱导的HUVECs炎症反应和凋亡。

丙型肝炎患者血清miR-155、miR-205-5p水平变化及诊断价值

目的探讨丙型肝炎患者血清miR-155和miR-205-5p表达水平的变化及临床意义。方法收集丙型肝炎患者141例,根据基因分型将其分为丙型肝炎病毒(HCV)-1b组(92例)和非HCV-1b组(49例),另取同期于本院进行体检的健康志愿者141例为对照组。比较3组一般资料、生化指标及血清miR-155、miR-205-5p水平;根据肝炎活动度分级,将丙型肝炎患者分为G0、G1、G2、G3、G4级,比较5组血清miR-155、miR-205-5p水平;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-155、miR-205-5p诊断丙型肝炎患者肝炎活动度为G1—G4级的临床价值。结果HCV-1b组和非HCV-1b组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平均高于对照组,血清白蛋白(ALB)水平低于对照组(P<0.05);对照组、非HCV-1b组和HCV-1b组血清miR-155水平依次升高,血清miR-205-5p水平依次降低(P<0.05);随着肝炎活动度分级的增加,血清miR-155水平依次升高,miR-205-5p水平依次下降(P<0.05);miR-155、miR-205-5p以及两者联合诊断丙型肝炎患者肝炎活动度为G1—G4级的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.855、0.793和0.913,联合优于二者各自单独诊断(P<0.05)。结论丙型肝炎患者血清miR-155水平上升,miR-205-5p水平下降,两者联合对肝炎活动度为G1—G4级的诊断具有较高效能。

非小细胞肺癌患者外周血有核细胞miR-205-5p水平及其临床意义

目的:探讨非小细胞肺癌患者外周血有核细胞miR-205-5p的表达水平是否可作为分子标志物。方法:收集昆明医科大学第三附属医院2011年6月至2012年6月非小细胞肺癌首诊患者60例,其中无远处转移患者30例,有远处转移患者30例。另外收集健康志愿者30例作为对照组。qPCR技术检测人支气管上皮细胞BEAS-2B、云南个旧肺鳞癌细胞YTMLC-90、云南宣威肺腺癌细胞XWLC-05以及人外周血有核细胞的表达水平。分析外周血有核细胞miR-205-5p的表达水平与非小细胞肺癌患者血清标志物水平、TNM分期、淋巴结转移、远处转移等临床病理参数的相关性。结果:miR-205-5p在BEAS-2B细胞中表达水平低(0.820 8±0.255 3),而在YTMLC-90(17.507 2±1.906 3)和XWLC-05(5.725 2±1.012 0)细胞中表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);miR-205-p在健康人外周血中的表达水平显著低于无转移的以及转移的非小细胞肺癌患者(1.073 0 vs3.658 8、19.6324,均P<0.01)。外周血有核细胞miR-205-5p的阳性表达率与非小细胞肺癌患者性别、年龄、淋巴结转移、病理类型和血清肿瘤标志物水平(CEA、CA125、CA242)无关(P>0.05),而与患者远处转移、TNM分期、血清肿瘤标志物CA153水平明显相关(P<0.01)。结论:miR-205-5p表达水平异常升高可能作为非小细胞肺癌患者转移相关的分子标志物。

miR-205-5p抑制体外胃癌细胞系增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-205-5p靶向RAS致癌家族基因2B(RAP2B)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法RT-qPCR和Western blot检测胃癌细胞AGS、MGC803、MKN-28、SGC-7901和正常胃黏膜细胞GES-1中miR-205-5p和RAS致癌家族基因2B的表达。分别构建过表达miR-205-5p和抑制RAP2B表达的AGS细胞株,采用MTT法检测细胞活力;Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力;Western blot检测RAP2B、cyclin D1、MMP-2、MMP-9、GSK-3β和β-catenin蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-205-5p对RAP2B的靶向作用。结果与正常胃黏膜细胞相比,4种胃癌细胞中miR-205-5p的表达显著降低,RAP2B的表达显著升高(P<0.05)。过表达miR-205-5p或抑制RAP2B表达均可显著抑制AGS细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达(P<0.05)。miR-205-5p可负性调控RAP2B的表达。结论miR-205-5p通过靶向RAP2B抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

血清微小RNA-205-5p、CC趋化因子受体3对非小细胞肺癌患者复发转移的预测能效

目的探讨血清微小RNA(microRNA,miR)-205-5p、CC趋化因子受体3(CC chemokine receptor 3,CCR3)的表达水平与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者复发转移的关系及预测能效。方法选取江苏省盐城市第三人民医院2016年1月至2017年12月收治的156例接受胸腔镜下肺癌根治术治疗的NSCLC患者为观察组,另选取同期62例来院体检的健康者为对照组。比较分析观察组和对照组的血清miR-205-5p、CCR3表达水平。分析NSCLC患者血清miR-205-5p与CCR3的相关性以及血清miR-205-5p、CCR3表达水平与NSCLC患者临床病理特征的关系。根据miR-205-5p和CCR3表达水平的高低将观察组患者分为miR-205-5p高表达组(≥1.18ng/L,79例)、miR-205-5p低表达组(<1.18ng/L,77例)和CCR3高表达组(≥311.60ng/L,82例)、CCR3低表达组(<311.60ng/L,74例),比较分析各组间患者的3年复发转移率。分析NSCLC患者3年复发转移的影响因素以及血清miR-205-5p、CCR3表达水平对NSCLC患者3年复发转移的预测价值。结果观察组血清miR-205-5p和CCR3的表达水平均显著高于对照组(t=7.947,P<0.05;t=15.059,P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,NSCLC患者血清miR-205-5p与CCR3呈正相关(r=0.310,P<0.001)。血清miR-205-5p、CCR3的表达水平与NSCLC患者的性别、年龄、吸烟史、肿瘤直径无关(P>0.05),与NSCLC患者的分化程度、TNM分期显著相关(P<0.05)。Kaplan-Meier曲线分析结果显示,miR-205-5p高表达组、CCR3高表达组的3年复发转移率显著高于miR-205-5p低表达组、CCR3低表达组(χ^(2)=11.330,P<0.05;χ^(2)=14.825,P<0.05)。单因素分析结果显示,TNM分期、miR-205-5p、CCR3与NSCLC患者3年复发转移显著相关(P<0.05)。Cox回归分析结果显示,TNM分期Ⅲa期、miR-205-5p、CCR3为NSCLC患者3年复发转移的独立危险因素(P<0.05)。miR-205-5p联合CCR3预测NSCLC患者3年复发转移的效能优于单一指标预测(P<0.05)。结论NSCLC患者血清miR-205-5p、CCR3的表达水平显著升高,为3年复发转移的独立危险因素,且二者呈正相关,联合预测NSCLC患者术后3年复发转移的效能较高,值得临床应用。

miR-205-5p靶向HMGB1/TLR4途径对变应性鼻炎免疫功能的作用研究

目的研究微小RNA-205-5p(miR-205-5p)靶向高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4(HMGB1/TLR4)途径改善变应性鼻炎(AR)免疫功能的作用。方法选取60只雄性大鼠,分为正常对照组(A组)、变应性鼻炎组(B组)、变应性鼻炎+miR-205-5p agomir组(C组)、变应性鼻炎+miR-205-5p antagomir组(D组)共4组,每组各15只,A组不做任何处理,B、C、D组均采用卵清白蛋白鼻腔强化致敏建立AR模型。模型建立完成后,C组尾部注射300μg miR-205-5p agomir,D组尾部注射miR-205-5p antagomir,A、B组均注射生理盐水。1周后评价各组行为学、免疫相关指标[干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)、免疫球蛋白E(Ig E)]、鼻黏膜炎性反应、上皮细胞间紧密连接、内质网形态及紧密连接蛋白、HMGB1/TLR4途径蛋白表达量。miR-205-5p与TLR4的靶向关系使用双荧光素酶报告实验分析。结果4组行为学评分、IL-4、Ig E、HMGB1、TLR4、NF-κB表达量、紧密连接宽度从低到高分别为A组<B组<C组<D组;IFN-γ、IL-2、IL-10、紧密连接蛋白表达量从低到高分别为D组<C组<B组<A组,且各组之间比较,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。双荧光素酶报告结果表明miR-205-5p可与TLR4靶向结合。结论miR-205-5p可靶向HMGB1/TLR4途径抑制Th1/Th2失衡所引起的AR免疫障碍,加强鼻黏膜屏障功能,从而减少变应原的入侵,缓解AR相关症状,对AR的治疗产生积极作用。

miR-205-5p通过下调HINT1表达促进非小细胞肺癌细胞增殖及转移的分子机制研究

目的探讨miR-205-5p通过下调组氨酸三核苷酸结合蛋白1(HINT1)表达促进非小细胞肺癌细胞(NSCLC)增殖及转移的分子机制。方法采用Kaplan-Meier分析NSCLC患者生存曲线,实时定量PCR(RT-qPCR)检测NSCLC癌组织及癌旁正常组织、人正常肺上皮细胞及肺癌细胞系中miR-205-5p的表达,免疫印迹(Western blotting)检测HINT1、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平。在A549及NCI-H1975细胞分别转染NC、Scramble、miR-205-5p模拟物(mimics)、Anti-miR-205-5p(miR-205-5p抑制剂)及miR-205-5p mimics+pc-HINT1,通过Western blotting检测转染后细胞HINT1、E-cadherin、Vimentin蛋白表达情况,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞增殖情况,Transwell小室检测细胞迁移及侵袭情况。结果与癌旁正常组织相比,miR-205-5p在NSCLC癌组织中高表达(P<0.001),且miR-205-5p高表达,患者生存期越短;与人正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,miR-205-5p在NSCLC细胞系中高表达(P<0.05);与NC组相比,转染miR-205-5p mimics组A549及NCI-H1975细胞中HINT1、Vimentin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高(P<0.01),细胞增殖、迁移及侵袭能力增加(P<0.01);与Scramble组相比,转染Anti-miR-205-5p后,A549和NCI-H1975细胞中HINT1、Vimentin蛋白表达升高,E-cadherin而表达减少(P<0.01),细胞增殖、迁移及侵袭能力受到抑制(P<0.01),而同时转染miR-205-5p mimics及pc-HINT1,则抑制了miR-205-5p mimics对细胞的作用。结论miR-205-5p能够促进NSCLC细胞增殖及转移,其分子机制可能与下调HINT1基因表达有关。

肝癌患者血清miR-122-5p miR-205-5p miR-486-5p的表达及临床意义

目的探讨肝癌患者血清miR-122-5p、miR-205-5p和miR-486-5p的表达及其临床意义.方法对51例肝癌患者(肝癌组)、51例慢性肝病患者(肝病组)以及51名健康体检者(对照组)采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测miR-122-5p、miR-205-5p和miR-486-5p表达量,并分析其与临床病理参数的关系及对肝癌诊断的评估价值.结果肝癌组miR-122-5p、miR-205-5p、miR-486-5p表达显著低于肝病组和对照组(P<0.05),肝病组显著低于对照组(P<0.05).肝癌组血清miR-122-5p、miR-205-5p、miR-486-5p的表达在临床肿瘤大小、肿瘤分期以及分化程度方面存在明显差异(P<0.05),在性别、年龄、病理类型方面无明显差异(P>0.05),临床肿瘤大小≤4 cm、肿瘤分期为Ⅰ/Ⅱ期、分化程度低的肝癌患者血清miR-122-5p、miR-205-5p、miR-486-5p的表达显著高于肿瘤大小>4 cm、肿瘤分期为Ⅲ/Ⅳ期、分化程度为中高的患者(P<0.05).受试者工作特征曲线分析结果显示,血清miR-122-5p、miR-205-5p、miR-486-5p及三者联合对肝癌诊断的曲线下面积分别为0.952、0.779、0.734、0.975;各指标评估肝癌的价值为:三者联合>miR-122-5p>miR-205-5p>miR-486-5p.结论肝癌患者血清miR-122-5p、miR-205-5p和miR-486-5p的表达较高,且与肝癌肿瘤大小、分期、分化程度等病理特征关系密切,对临床肝癌早期诊断具有指导意义.

miR-205-5p对RBM47的调控作用及对食管鳞癌细胞侵袭迁移的影响

目的探讨微小RNA-205-5p(miR-205-5p)对RNA结合蛋白47(RBM47)的调控作用,及对食管鳞癌细胞侵袭迁移的影响。方法取人食管鳞状细胞癌细胞系(TE14和KYSE70)和人食管上皮细胞(HET-1A),实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组细胞miR-205-5p、RBM47 mRNA表达水平。取KYSE70细胞,分为空白对照组、miR-205-5p抑制剂(miR-205-5p-inhibitor)组、miR-205-5p抑制剂阴性对照(miR-205-5p-NC)组、RBM47过表达腺病毒(Ad-RBM47)组、Ad-RBM47阴性对照(Ad-eGFP)组。RT-qPCR检测各组细胞miR-205-5p、RBM47 mRNA表达水平;用CCK-8法检测各组细胞增殖活性;Transwell小室法检测细胞迁移侵袭能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测各组细胞RBM47、侵袭迁移相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)及锌指E-盒结合同源异形盒1(ZEB1)。双荧光素酶活性实验验证miR-205-5p与RBM47的靶向关系。将miR-205-5p-inhibitor与RBM47干扰载体(si-RBM47)及空载体(si-RNA-NC)共转染,分为miR-205-5p-inhibitor+si-RBM47组、miR-205-5p-inhibitor+si-RNA-NC组、miR-205-5p-NC+si-RBM47组、miR-205-5p-NC+si-RNA-NC组、未转染组(空白对照组),并检测各组细胞转染后侵袭迁移能力。结果与HET-1A细胞系相比,ESCC细胞系(TE14和KYSE70)中miR-205-5p表达升高(P<0.05),RBM47 mRNA表达降低(P<0.05),在KYSE70细胞系中,miR-205-5p表达最高,RBM47 mRNA表达最低,选用KYSE70细胞系进行后续试验。抑制miR-205-5p或激活RBM47表达后,与空白对照组比较,miR-205-5p-inhibitor组及Ad-RBM47组细胞增殖活性、侵袭迁移能力、ZEB1蛋白表达降低(P<0.05),RBM47、E-cadherin表达升高(P<0.05);miR-205-5p-NC组及Ad-eGFP组上述指标与空白组对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-205-5p-inhibitor与si-RBM47共转染后,与空白组对照组比较,miR-125b-NC+si-RBM47组细胞侵袭迁移能力升高(P<0.05);miR-205-5p-inhibitor+si-RNA-NC组细胞侵袭迁移能力降低(P<0.05)。与miR-205-5p-inhibitor+si-RNA-NC组相比,miR-205-5p-inhibitor+si-RBM47组细胞侵袭迁移能力升高(P<0.05);miR-125b-NC+si-RNA-NC组与空白对照组相比,上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶活性试验显示,与miR-205-5p-NC+RBM47-3′UTR-WT组比较,miR-205-5p-mimics+RBM47-3′UTR-WT组荧光素酶活性降低(P<0.05),miR-205-5p-NC+RBM47-3′UTR-MUT组、miR-205-5p-mimics+RBM47-3′UTR-MUT组荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05),miR-205-5p与RBM47有结合位点,且呈靶向负调控作用。结论Escc细胞中miR-205-5p表达升高,RBM47表达降低,下调miR-205-5p表达可抑制Escc细胞侵袭迁移能力,可能与上调RBM47表达有关。

Hsa-miR-205-5p对食管鳞癌细胞系耐药的影响

目的研究hsa-miR-205-5p对食管鳞癌铂类化疗耐药的影响。方法首先用RT-PCR法检测hsa-miR-205-5p在食管鳞癌耐药细胞系EcA109和敏感细胞系KYSE150中的表达。然后在EcA109和KYSE150中分别转染hsa-miR-205-5p mimics,mimics NC和hsa-miR-205-5p inhibitor,inhibitor NC,用MTT和CCK8法检测奥沙利铂浓度为60,120,240,480,960μmol/L对细胞增殖的影响。结果 hsa-miR-205-5p在食管癌耐药细胞系EcA109比在敏感细胞系KYSE150中低表达(P<0.05)。MTT和CCK8实验结果表明,与转染NC组相比,随着奥沙利铂浓度的增加,转染hsa-miR-205-5p mimics组的EcA109细胞抑制率上升(P<0.05),转染hsa-miR-205-5p inhibitor组的KYSE150细胞抑制率下降(P<0.05)。结论转染hsa-miR-205-5p mimics后Ec A109细胞对奥沙利铂敏感性提高,转染hsa-miR-205-5p inhibitor后KYSE150细胞对奥沙利铂耐药性增加。说明hsa-miR-205-5p过表达可抑制食管鳞癌细胞产生耐药性。

lncRNA CTBP1-AS2靶向miR-205-5p影响髓核细胞凋亡及炎症反应的分子机制研究

目的:探讨lncRNA CTBP1-AS2对IL-1β诱导的大鼠髓核细胞凋亡及炎症反应的影响及可能作用机制。方法:采用IL-1β诱导大鼠髓核细胞建立细胞损伤模型,随机分为:对照组、模型组、si-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组、miR-NC+模型组、miR-205-5p+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组;qRT-PCR检测lncRNA CTBP1-AS2、miR-205-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;双荧光素酶报告实验检测lncRNA CTBP1-AS2与miR-205-5p的靶向关系;Western blot检测Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组lncRNA CTBP1-AS2表达、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平及细胞凋亡率均明显升高,miR-205-5p表达降低(P<0.05);与si-NC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05);与miR-NC+模型组比较,miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleavedcaspase-3、Bax蛋白水平明显降低(P<0.05);lncRNA CTBP1-AS2可负调控miR-205-5p表达;与si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miRNC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白水平均明显升高(P<0.05)。结论:干扰lncRNA CTBP1-AS2表达可通过促进miR-205-5p表达抑制细胞凋亡及炎症反应,从而减轻IL-1β诱导的大鼠髓核细胞损伤。

lncRNA LINC01410通过miR-205-5p调控胶质瘤A172细胞的增殖、凋亡和替莫唑胺敏感性

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01410对胶质瘤A172细胞增殖、凋亡和替莫唑胺(temozolomide,TMZ)敏感性的影响及其机制。方法:用qPCR法检测胶质瘤细胞系H4、SHG-44、A172和正常星形胶质细胞HA1800中LINC01410表达水平。将LINC01410 shRNA、shRNA control和miR-205-5p抑制剂(inhibitor)、inhibitor control转染至A172细胞,MTT法、流式细胞术分别检测400μmol/L TMZ处理后,转染细胞的增殖活性和凋亡水平,WB法检测细胞中Bax、Bcl-2、cyclin D1、p27的表达。在线生物信息学软件LncBase分析LINC01410的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证LINC01410与miR-205-5p的靶向关系。结果:LINC01410在3种胶质瘤细胞中的表达水平均显著高于正常星形胶质细胞HA1800(均P<0.01),以在A172细胞中的表达水平最高(P<0.01)。转染LINC01410 shRNA和TMZ处理后,A172细胞的增殖能力下降、G1期细胞比例和凋亡率均升高(均P<0.01),细胞中Bax、p27表达水平升高而Bcl-2、cyclin D1表达水平下降(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实LINC01410靶向结合miR-205-5p,下调LINC01410促进miR-205-5p表达。转染miR-205-5p抑制剂可逆转下调LINC01410和TMZ处理对A172细胞增殖、周期和凋亡的影响。结论:下调lncRNA LINC01410可抑制胶质瘤A172细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡且提高对TMZ敏感性,其发生机制似与LINC01410对miR-205-5p的靶向作用有关。

基于mTOR/P70S6K通路研究上调miR-205-5p对肝癌细胞增殖、侵袭的影响

目的基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体S6蛋白激酶(P70S6K)通路研究上调微小核糖核酸(miR)-205-5p对肝癌细胞增殖、侵袭的影响。方法肝癌HepG2细胞株经过细胞培养、转染后,分为上调miR-205-5p组、肝癌组和阴性对照组。实时荧光定量(RT)-聚合酶链反应(PCR)检测miR-205-5p表达,观察肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭能力,Western印迹检测p-mTOR、p-P70S6K、mTOR、P70S6K蛋白表达。结果上调miR-205-5p组miR-205-5p表达显著高于肝癌组和阴性对照组,阴性对照组显著高于肝癌组(均P<0.05)。在24、48、72 h,上调miR-205-5p组细胞光密度值均显著低于阴性对照组和肝癌组,阴性对照组光密度值均显著低于肝癌组,在72 h差异表现最为明显(P<0.05),阴性对照组和肝癌组随着时间延长,光密度值逐渐显著升高,上调miR-205-5p组光密度值逐渐显著降低(均P<0.05)。上调miR-205-5p组72 h细胞增殖数、细胞侵袭数显著低于肝癌组和阴性对照组,细胞凋亡数显著高于肝癌组和阴性对照组(均P<0.05)。上调miR-205-5p组mTOR、P70S6K、p-mTOR、p-P70S6K蛋白表达显著低于肝癌组和阴性对照组(均P<0.05)。结论上调miR-205-5p可以影响mTOR/P70S6K信号通路的活性,参与肝癌细胞侵袭、增殖、凋亡的过程。

长链非编码RNA RP11-572P18.1对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)RP11-572P18.1对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法:采用国际癌症基因组联盟(ICGC)数据库分析卵巢癌组织中RP11-572P18.1表达水平。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌细胞系OC3、A2780、Caov-3、SK-OV-3、HO-8910中RP11-572P18.1表达水平,选取表达水平最低的细胞进行后续实验。将Caov-3细胞分为RP11-572P18.1组和NC组,分别转染RP11-572P18.1过表达质粒和对照质粒。MTT实验检测Caov-3细胞增殖能力,Transwell实验检测Caov-3细胞侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验验证RP11-572P18.1和miR-205-5p的靶向关系。采用RT-qPCR检测Caov-3细胞miR-205-5p表达。采用免疫印迹法(Western blot)检测Caov-3细胞增殖蛋白[细胞周期蛋白B(Cyclin B)、细胞周期蛋白E(Cyclin E)]和侵袭蛋白[锌指E盒同源结合蛋白1(Zeb1)、转录因子(Twist)、β-连环蛋白(β-catenin)]表达。结果:与正常组织比较,卵巢癌组织中RP11-572P18.1表达降低(P<0.01)。与正常卵巢上皮细胞IOSE80比较,卵巢癌细胞系中RP11-572P18.1表达水平降低,且Caov-3细胞降低最显著(均P<0.05)。与NC组比较,RP11-572P18.1组Caov-3细胞增殖能力及侵袭数目降低(均P<0.05)。RP11-572P18.1与miR-205-5p存在靶向关系。与NC组比较,上调RP11-572P18.1可抑制Caov-3细胞miR-205-5p以及Cyclin B、Cyclin E、Zeb1、Twist和β-catenin蛋白表达(均P<0.05)。结论:RP11-572P18.1在卵巢癌组织和细胞系中表达降低,RP11-572P18.1通过下调miR-205-5p抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭。

胶质瘤组织中miR-205-5p的表达及其对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨miR-205-5p在胶质瘤中的表达以及对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的调控及可能的作用机制。方法收集2018年6月至2019年12月于郴州市第一人民医院诊治的58例新发神经胶质瘤患者的胶质瘤组织和癌旁组织标本。将miR-205-5p mimic转染至U251和T98G细胞,构建过表达细胞模型。采用RT-qPCR检测胶质瘤组织及细胞模型中miR-205-5p的表达水平并分析其表达水平与患者临床病理特征的关系,CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕实验和Transwell小室实验分别检测胶质瘤细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭情况,Western blot检测过表达miR-205-5p对Runt相关因子2(runt-related gene 2,Runx2)蛋白表达水平的影响;用双荧光素酶报告基因实验检测miR-205-5p与Runx2的靶向关系。结果miR-205-5p在胶质瘤组织和胶质瘤细胞U251和T98G中低表达(均P<0.01),其表达水平与肿瘤大小和病理分级有关(均P<0.05)。过表达miR-205-5p可以显著抑制胶质瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力(均P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实Runx2基因是miR-205-5p的潜在靶基因。过表达miR-205-5p可明显下调胶质瘤细胞中Runx2蛋白的表达水平(P<0.001)。结论miR-205-5p在胶质瘤中低表达,过表达miR-205-5p可抑制胶质瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭,作用机制可能与靶向调控Runx2有关。

miR-205-5p在卵巢癌患者血清中的表达及其预后价值

目的探讨miR-205-5p在卵巢癌患者血清中的表达水平及其与预后的关系。方法选取卵巢癌患者98例为卵巢癌组,健康体检女性98例为健康组。采用实时定量聚合酶链反应检测血清miR-205-5p表达水平。ROC曲线分析miR-205-5p对卵巢癌的诊断价值,多因素Cox回归分析卵巢癌患者预后的相关影响因素。结果术前卵巢癌组miR-205-5p表达水平高于健康组,卵巢癌组术后miR-205-5p低于术前(P<0.05)。ROC曲线结果显示,miR-205-5p诊断卵巢癌的曲线下面积为0.810,最佳截断值为6.28,灵敏度为89.79%,特异度为86.73%。与miR-205-5p低表达者比较,高表达者的肿瘤分化程度和淋巴结转移率均增高,生存时间降低(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,低肿瘤分化、有淋巴结转移和miR-205-5p高表达均为卵巢癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论血清miR-205-5p高表达与卵巢癌患者的预后密切相关,miR-205-5p高表达可提示其预后不良,有望成为临床诊断及预后评价的生物学标志物。

miR-205-5p/PRKCA/p38信号通路在淫羊藿苷抑制动脉粥样硬化中的介导作用

目的探讨miR-205-5p/蛋白激酶Cα(PRKCA)/p38信号通路在淫羊藿苷(ICA)抑制动脉粥样硬化(AS)中的介导作用。方法首先通过整体动物实验研究ICA对载脂蛋白(Apo)E^-/-小鼠的抗AS作用;然后取小鼠胸主动脉组织进行基因芯片检测,再通过生物信息分析找到有意义的miRNA及其作用的靶基因,级联通路;最后应用定量聚合酶链反应(qPCR)及Western印迹方法对所构建的通路在体内外实验标本中进行验证。结果在整体动物实验中,血脂水平和HE染色结果表明,ICA具有抗AS作用;通过对基因芯片检测结果分析找到目标miR-205-5p,通过生物信息分析预测其靶基因为PRKCA,并级联p38信号通路分子,构建miR-205-5p/PRKCA/p38信号通路;qPCR及Western印迹结果显示,在ApoE^-/-小鼠胸主动脉及氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激血管平滑肌细胞(VSMCs)中,模型组miR-205-5p表达显著下降(P<0.001),PRKCA mRNA及蛋白表达显著升高,p38蛋白磷酸化显著增加(P<0.001);ICA干预后,miR-205-5p表达显著升高(P<0.001),PRKCA mRNA及蛋白表达显著下降(P<0.001),p38蛋白磷酸化显著减少(P<0.001),且具有量效关系;ICA对ox-LDL刺激VSMCs的增殖和迁移具有显著抑制作用(P<0.001或P<0.05)。结论ICA具有抗AS作用,其机制可能是通过提高miR-205-5p表达,下调PRKCA mRNA及蛋白表达,进而减少p38蛋白磷酸化,并抑制VSMCs增殖与迁移,从而发挥其抗AS作用。

MiR-205-5p对HepG2.2.15细胞增殖及乙肝病毒X基因表达的影响

目的:探讨miR-205-5p对Hep G2.2.15细胞增殖及HBx基因表达的影响。方法:将miR-205-5p mimics用LipofectamineTM 2000转染HepG2.2.15细胞,荧光定量PCR检测转染后细胞中miR-205-5p与HBx、E2F1 mRNA相对表达量,ELISA法检测HBxAg蛋白表达量,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot检测E2F1蛋白表达。结果:miR-205-5p mimics转染Hep G2.2.15细胞后,细胞增殖能力被抑制(P<0.05),G0/G1期细胞增加、S期细胞减少(P<0.05),细胞中HBx mRNA及上清液中HBx Ag含量下降,E2F1mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。结论:miR-205-5p可能通过下调E2F1的表达来抑制HepG2.2.15细胞增殖,并可抑制HBx基因表达。