2型糖尿病患者血清hsa-miR-30c-5p水平表达对微血管并发症的预测价值研究

目的探讨2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者血清人微小核糖核酸(homo sapiensmicroRNA,hsa-miR)-30c-5p表达对微血管并发症的预测价值。方法选取2021年5月~2022年9月巴中市中心医院收治的T2DM患者205例为糖尿病组,并根据患者微血管并发症情况将糖尿病组进一步分为并发组(n=124)和未并发组(n=81),另选取同期健康体检者205例为对照组,均采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerasechain reaction,RT-PCR)检测受试者血清hsa-miR-30c-5p表达并进行比较。采用多因素Logistic回归分析影响微血管并发症的因素,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线预测血清hsa-miR-30c-5p表达对T2DM患者发生微血管并发症的价值。结果并发组、未并发组的血清hsa-miR-30c-5p表达分别为0.58±0.06,0.72±0.08,均低于对照组(0.89±0.21),差异具有统计学意义(t=16.038,7.079,均P=0.001);并发组低于未并发组,差异具有统计学意义(t=14.289,P=0.001)。糖尿病病程[OR(95%CI):3.873(2.976~4.770)]、尿酸[OR(95%CI):2.125(1.211~3.040)]、糖化血红蛋白[OR(95%CI):2.680(1.745~3.616)]均为T2DM患者发生微血管并发症的独立危险因素(均P<0.05),葡萄糖目标范围内时间[OR(95%CI):0.491(0.135~0.846)]、血清hsa-miR-30c-5p[OR(95%CI):0.532(0.146~0.817)]均为T2DM患者发生微血管并发症的保护因素(均P<0.05)。血清hsa-miR-30c-5p表达预测T2DM患者发生微血管并发症的敏感度、特异度、曲线下面积(95%置信区间)分别为81.45%,85.19%,0.802(0.741~0.854)。结论T2DM患者血清hsa-miR-30c-5p表达异常降低,且血清hsa-miR-30c-5p为T2DM患者发生微血管并发症的保护因素,对T2DM患者发生微血管并发症具有一定的预测价值。

长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因2/微小RNA-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1轴在食管癌细胞紫杉醇耐药中的作用机制实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)/微小RNA(miR)-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)轴在食管癌细胞紫杉醇(PTX)耐药中的作用机制。方法:构建EC109/PTX细胞,检测食管癌组织和癌旁正常组织,以及食管癌细胞EC109和KYSE150细胞、食管上皮细胞SHEE和EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达。取生长良好的EC109/PTX细胞,分为沉默(siRNA)DLEU2组、阴性对照(siRNA NC)组、siRNA DLEU2+miR-30c-5p抑制剂(inhibitor)组、siRNA DLEU2+inhibitor NC组、siRNA DLEU2+过表达(pcDNA)MAPK1组、siRNA DLEU2+pcDNA NC组和空白组。验证miR-30c-5p与DLEU2、MAPK1的靶向关系。检测各组EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达水平。检测EC109/PTX细胞活性、凋亡情况及对PTX的耐药性。检测谷胱甘肽S-转移酶π(GST-π)、MAPK1、P-蛋白(P-gp)蛋白表达水平。结果:食管癌组织和EC109/PTX细胞miR-30c-5p表达降低,DLEU2、MAPK1 mRNA表达增加(均P<0.05)。DLEU2靶向调控miR-30c-5p,miR-30c-5p靶向调控MAPK1。siRNA DLEU2组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA NC组、空白组增加,DLEU2和MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、药物半数抑制浓度(IC 50)以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达降低(均P<0.05)。siRNA DLEU2+miR-30c-5p inhibitor组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA DLEU2+inhibitor NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。siRNA DLEU2+pcDNA MAPK1组细胞凋亡率较siRNA DLEU2+pcDNA NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。结论:干扰lncRNA DLEU2可减弱EC109/PTX细胞对PTX的耐药性,可能与调控miR-30c-5p/MAPK1轴有关。

血清miR-30c-5p和NLGN1联合检测对腹腔镜结直肠癌根治术患者术后复发转移的预测价值

目的:探讨血清微小核糖核酸-30c-5p(miR-30c-5p)和神经角质蛋白1(NLGN1)联合检测对腹腔镜结直肠癌根治术后复发转移的预测价值。方法:选取2021年8月—2022年8月进行腹腔镜结直肠癌根治术的结直肠癌患者112例为病例组,并根据患者术后12个月内是否复发转移分为复发组(n=28)和未复发组(n=84);另选同期进行体检的正常志愿者92例为对照组。qRT-PCR检测血清miR-30c-5p、NLGN1 mRNA水平,多因素Logistic回归分析患者术后复发转移的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-30c-5p、NLGN1 mRNA对患者术后复发转移的预测价值,Pearson法分析miR-30c-5p与NLGN1 mRNA相关性。结果:病例组miR-30c-5p水平显著低于对照组(P<0.05),NLGN1 mRNA水平显著高于对照组(P<0.05);与未复发组相比,复发组miR-30c-5p水平显著降低(P<0.05),NLGN1 mRNA水平显著升高(P<0.05),且未复发组与复发组的组织分化程度之间差异有统计学意义(P<0.05);组织低分化、NLGN1 mRNA水平升高为术后复发转移的危险因素(P<0.05),miR-30c-5p水平升高为术后复发转移的保护因素(P<0.05);血清miR-30c-5p、NLGN1 mRNA及联合预测患者术后发生复发转移的AUC为0.823、0.823、0.902,联合预测显著优于miR-30c-5p(Z=2.031,P=0.042)、NLGN1 mRNA(Z=2.239,P=0.025)单独预测;miR-30c-5p与NLGN1 mRNA水平具有负相关性(r=-0.436,P<0.05)。结论:在腹腔镜结直肠癌根治术后复发转移患者中,miR-30c-5p水平降低,NLGN1 mRNA水平升高,对患者术后复发转移具有一定的辅助预测价值。

miR-30c-5p对人绒毛滋养层细胞线粒体自噬、间充质转化及PEG10水平影响

目的探讨miR-30c-5p对人绒毛滋养层细胞线粒体自噬、间充质转化及PEG10水平影响。方法人绒毛滋养层细胞HTR-8/SVneo分为空白组(HTR-8/SVneo细胞正常培养)、低氧组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养)、miR-30c-5p mimics组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染miR-30c-5p mimics)、NC-mimics组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染NC-mimics)、miR-30c-5p inhibitor组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染miR-30c-5p inhibitor)、NC-inhibitor组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染NC-inhibitor)。qRT-PCR检测各组细胞miR-30c-5p表达;Transwell小室检测细胞侵袭数目;划痕试剂盒检测细胞划痕愈合率;相关试剂盒检测ROS水平;免疫印记检测PEG10、Parkin、PINK1蛋白水平。结果空白组、低氧组、miR-30c-5p mimics组、NC-mimics组、miR-30c-5p inhibitor组及NC-inhibitor组的miR-30c-5p表达分别为1.00±0.00、1.00±0.00、1.61±0.15、1.03±0.13、0.75±0.08及0.96±0.10,差异有统计学意义(F=45.750,P<0.05);与空白组相比,低氧组HTR-8/SVneo细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1降低,ROS升高,差异均有统计学意义(P<0.05);低氧组与NC-mimics组、NC-inhibitor组比较上述指标,差异均无统计学意义(P>0.05);与低氧组相比,miR-30c-5p mimics组细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1降低,ROS升高,差异均有统计学意义(P<0.05),miR-30c-5p inhibitor组细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1升高,ROS降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制miR-30c-5p可加快低氧状态下的人绒毛滋养层细胞侵袭及迁移,并通过促进线粒体自噬降低ROS表达,机制与抑制PEG10水平相关。

LINC00707靶向miR-30c-5p对ox-LDL诱导的人血管平滑肌细胞增殖、迁移及炎症因子的影响

目的探讨LINC00707对氧化型低密度脂蛋白(oixidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人血管平滑肌细胞功能障碍的影响及其作用机制。方法采用ox-LDL诱导人血管平滑肌细胞HVSMCs建立动脉粥样硬化细胞模型,si-NC、si-LINC00707、miR-NC、miR-30c-5p mimic分别转染至HVSMCs后,加入100 mg·L-1 ox-LDL处理细胞,si-LINC00707和anti-miR-NC、si-LINC00707和miR-30c-5p Inhibitor分别共转染至HVSMCs后,加入100 mg·L-1 ox-LDL处理细胞;qRT-PCR法检测LINC00707、miR-30c-5p的表达量;CCK-8法、Transwell实验分别检测细胞增殖及迁移;ELISA法检测IL-6、TNF-α、IL-10的水平;双荧光素酶报告实验检测LINC00707与miR-30c-5p的靶向关系;Western blot检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量。结果ox-LDL诱导的HVSMCs中LINC00707的表达量升高(P<0.05),miR-30c-5p的表达量降低(P<0.05);转染si-LINC00707或miR-30c-5p mimic后,细胞存活率、N-cadherin蛋白水平和IL-6、TNF-α的水平降低(P<0.05),迁移细胞数减少(P<0.05),E-cadherin蛋白水平和IL-10的水平升高(P<0.05);LINC00707可靶向结合miR-30c-5p;共转染si-LINC00707和miR-30c-5p Inhibitor后,细胞存活率、N-cadherin蛋白水平和IL-6、TNF-α的水平升高(P<0.05),迁移细胞数增多(P<0.05),E-cadherin蛋白水平和IL-10的水平降低(P<0.05)。结论下调LINC00707导致miR-30c-5p表达升高从而抑制ox-LDL诱导的HVSMCs增殖、迁移及炎症反应。

miR-30c-5p通过调节Notch1的表达抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成

目的:探讨miR-30c-5p通过调节Notch1表达对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭和管状形成调控的机制,确定其在子痫前期发病中的潜在作用。方法:在体外对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo进行培养,慢病毒系统构建miR-30c-5p过表达及敲低稳转HTR-8/SVneo细胞系。分为对照组、导入miR-30c-5p过表达质粒组和导入miR-30c-5p敲低质粒组。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-30c-5p和Notch1基因的表达量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中Notch1蛋白的表达量,划痕愈合实验、Transwell侵袭实验和管状形成实验分别检测各组细胞的迁移、侵袭和管状形成能力。结果:与对照组比较,miR-30c-5p过表达质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平升高(P<0.0001),细胞Notch1蛋白表达水平下降(P<0.01),细胞迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.001)和管状形成能力(P<0.05)均受到抑制。反之,miR-30c-5p敲低质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平下降(P<0.01),细胞Notch1蛋白表达升高(P<0.001),细胞的迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.05)以及细胞的管状形成能力(P<0.01)增强。结论:miR-30c-5p能够通过抑制Notch1的表达降低人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成能力,参与子痫前期的发病。

circ_POLA2靶向miR-30c-5p对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨circ_POLA2对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能作用机制。方法:qRT-PCR法检测胃癌组织与癌旁组织中circ_POLA2、miR-30c-5p的表达量;Pearson法分析circ_POLA2与miR-30c-5p在胃癌组织中表达量的相关性;体外培养人胃癌细胞HGC-27,根据转染物不同进行分组:si-NC组、si-circ_POLA2组、miR-NC组、miR-30c-5p组、si-circ_POLA2+NC-inhibitor组、si-circ_POLA2+miR-30c-5p-inhibitor组;CCK-8法、Transwell实验依次检测细胞增殖及迁移、侵袭;双荧光素酶实验检测miR-30c-5p与circ_POLA2的靶向关系;免疫印迹法检测蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、MMP-2、MMP-9表达。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织中circ_POLA2的表达量升高,miR-30c-5p的表达量降低;circ_POLA2与miR-30c-5p的表达呈负相关;与si-NC组比较,si-circ_POLA2组miR-30c-5p的表达量升高,细胞存活率、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9水平和p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值以及迁移、侵袭细胞数均降低;miR-30c-5p过表达可抑制野生型circ_POLA2的荧光素酶活性;与miR-NC组比较,miR-30c-5p组的细胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平和p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值以及迁移、侵袭细胞数均降低;与si-circ_POLA2+NC-inhibitor组比较,si-circ_POLA2+miR-30c-5p-inhibitor组的细胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平和p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值以及迁移、侵袭细胞数均升高。结论:干扰circ_POLA2可通过靶向上调miR-30c-5p表达,抑制PI3K/AKT通路的激活,进而抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭。

miR-30 c-5p在肿瘤中表达和功能的研究进展

miR-30 c-5p是miR-30家族的重要成员,研究表明其在肺癌、乳腺癌、前列腺癌、子宫内膜癌等多种肿瘤组织以及患者血浆、血清中表达异常,并且其作用于肿瘤的增殖、侵袭和迁移以及多种肿瘤相关基因和通路等,暗示其在肿瘤诊断、治疗、监测和预后预测等方面有一定的应用价值。本文就miR-30 c-5p在肿瘤中表达和功能的研究进展进行简要综述。

CRP cTnT TSLP miR-30c-5p水平与稳定型心绞痛患者冠状动脉病变严重程度关系

目的:探讨C反应蛋白(CRP)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、miR-30c-5p水平与稳定型心绞痛(SAP)患者冠状动脉病变严重程度的关系。方法:回顾性分析2016年5月至2019年5月间医院收治的经冠状动脉造影(CAG)证实的90例SAP患者的临床资料,根据SYNTAX评分分为轻度组(0~22分,41例)、中度组(23~32分,32例)、重度组(≥33分,17例)。收集三组患者的临床资料,采血检测三组患者的CRP、cTnT、TSLP、miR-30c-5p水平,三组患者的冠状动脉病变严重程度用SYNTAX评分评估,用Pearson相关性分析CRP、cTnT、TSLP、miR-30c-5p水平与SYNTAX评分的关系。结果:三组患者的CRP、cTnT、TSLP、miR-30c-5p水平及SYNTAX评分比较,差异均具有统计学意义(P均<0.05),两两对比LSD-t检验,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示,CRP、cTnT、TSLP与SYNTAX评分均呈显著正相关(P<0.01),而miR-30c-5p与SYNTAX评分呈显著负相关(P<0.01)。结论:CRP、cTnT、TSLP、miR-30c-5p水平与稳定型心绞痛患者冠状动脉病变严重程度存在相关性,早期检测以上生物学标志物有助于判断稳定性心绞痛患者的冠状动脉病变严重程度。

TPT1-AS1靶向调控微小RNA-30c-5p及对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA肿瘤蛋白翻译调节因子1反义RNA 1(TPT1-AS1)对微小RNA-30c-5p(miR-30c-5p)的靶向调控作用及对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测结直肠癌组织相较于癌旁组织及结直肠癌细胞(DLD-1、HCT116、SW480和LoVo)相较于人正常结肠上皮细胞HCoEpiC的TPT1-AS1水平。脂质体法向LoVo细胞转染TPT1-AS1特异性siRNA(si-TPT1-AS1组)并设转染si-NC的阴性对照组和未转染的空白对照组,qPCR检测TPT1-AS1和miR-30c-5p水平,MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞活性、划痕愈合率和穿膜细胞数,qPCR和Western blotting检测基质金属蛋白酶3(MMP-3)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)及其磷酸化形式p-STAT3的水平,在线预测并结合双荧光素酶报告实验验证miR-30c-5p与TPT1-AS1的相互作用关系。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织的TPT1-AS1水平升高至2.020±0.080,而miR-30c-5p水平降低至0.597±0.044(P<0.05),且结直肠癌组织的TPT1-AS1水平与miR-30c-5p水平呈负相关(r=-0.801,P<0.001)。4株结直肠癌细胞的TPT1-AS1水平均表现为异常高表达(P<0.05),功能验证实验选择TPT1-AS1表达最高的LoVo细胞。与空白对照组和阴性对照组相比,si-TPT1-AS1组LoVo细胞活力减弱,TPT1-AS1水平降低而miR-30c-5p水平升高(P<0.05)。si-TPT1-AS1组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(18.650±3.346)%和(108.326±17.383)个,均低于空白对照组的(90.963±4.328)%和(275.675±21.078)个及阴性对照组的(93.165±4.317)%和(281.431±23.880)个(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,si-TPT1-AS1组的STAT3水平无显著变化,而p-STAT3和MMP-3水平降低(P<0.05)。MiR-30c-5p模拟物降低了野生型TPT1-AS1的荧光素酶活性(P<0.05),而不影响突变型TPT1-AS1的荧光素酶活性。空白对照组和阴性对照组上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论结直肠癌中TPT1-AS1高表达,且增强了结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,TPT1-AS1可能通过靶向miR-30c-5p来发挥促癌作用。TPT1-AS1的发现为结直肠癌的诊治和预后评估及下一步的转化研究提供了新的思路。

CircRNA EZH2通过调控miR-30c-5p促进前列腺癌细胞增殖和迁移

目的探究circRNA EZH2通过调控miR-30c-5p对前列腺癌细胞的增殖和迁移的影响及其相关作用机制。方法通过TCGA数据库分析circRNA EZH2在前列腺癌组织中的表达差异及生存曲线;转染siRNA敲降前列腺癌LNCaP细胞中的circRNA EZH2表达后,CCK-8实验和划痕实验观察LNCaP细胞增殖和迁移,RT-qPCR和Western blot法测定miR-30c-5p、JAK1和PI3K蛋白的表达。结果在前列腺癌组织中circRNA EZH2的表达显著上调(P<0.0001),且高表达circRNA EZH2的患者生存率降低;沉默circRNA EZH2的LNCaP细胞较正常LNCaP细胞的增殖和迁移能力下降(P<0.0001),miR-30c-5p表达增高(P<0.0001),JAK1表达降低(P<0.0001),PI3K信号受抑制。结论EZH2在前列腺癌中高表达,通过调控miR-30c-5p激活PI3K信号通路促进前列腺癌LNCaP细胞的增殖和迁移。

子痫前期miR-30c-5p和Notch1的表达及相关性

目的探讨miR-30c-5p和Notch1在子痫前期(PE)患者胎盘中的表达及其相关性。方法选取中国人民解放军联勤保障部队第九六〇医院产科2021年1月至12月行剖宫产分娩的产妇60例,正常妊娠组20例,中度PE组20例,重度PE组20例。采用荧光定量PCR和免疫组织化学分别检测胎盘组织中miR-30c-5p和Notch1的表达水平;采用SPSS 25.0统计学软件分析数据;采用Pearson相关性分析检测miR-30c-5p与Notch1的相关性;采用ROC曲线分析miR-30c-5p与Notch1对疾病诊断的特异性。结果与正常妊娠组比较,中度PE组和重度PE组miR-30c-5p表达水平均显著升高(P<0.05),重度PE组miR-30c-5p表达水平较中度PE组有升高趋势。与正常妊娠组比较,中度PE组和重度PE组胎盘组织中Notch1表达水平均显著降低(P<0.05);且PE越重,胎盘组织中Notch1表达水平越低。miR-30c-5p与Notch1的表达呈明显负相关(r=-0.484,P<0.001)。miR-30c-5p诊断PE的AUC为0.625,诊断性能较好,但差异无统计学意义;Notch1诊断PE的AUC为0.914,诊断效能为优,其表达值对PE的诊断有意义。结论胎盘滋养细胞中miR-30c-5p负向调控靶基因Notch1,从而抑制滋养细胞的增殖、浸润,导致胎盘灌注不足,从而参与并加重PE的发生。

miRNA-30c-5p与急性冠脉综合征PCI术后发生对比剂肾病的相关性

目的分析miRNA-30c-5p与急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention,PCI)后发生对比剂肾病(contrast-induced nephropathy,CIN)的相关性。方法选择2020年10月—2021年12月济南市第八人民医院心内科、CCU及ICU住院的急性冠脉综合征并行PCI患者553例。根据PCI术后对比剂肾病发生情况将患者分为非CIN组(499例)和CIN组(54例)。比较两组患者miRNA-30c-5p表达差异。采用Pearson相关分析miRNA-30c-5p与sCr、eGFR的关系。绘制ROC曲线评价miRNA-30c-5p对PCI术后CIN的预测价值。结果术前两组患者miRNA-30c-5p血清表达水平差异无统计学意义(t=0.171,P=0.864)。术后非CIN组患者miRNA-30c-5p血清表达水平(1.15±0.46)pg/mL明显低于CIN组患者(3.19±0.71)pg/mL,差异有统计学意义(t=29.084,P<0.01)。miRNA-30c-5p与sCr呈正相关(r=0.657,P<0.01),与eGFR呈负相关(r=-0.812,P<0.01)。miRNA-30c-5p预测ACS患者行PCI术后发生CIN的ROC曲线下面积为0.883。结论miRNA-30c-5p与急性冠脉综合征PCI术后发生CIN具有相关性,可以预测CIN的发生。

结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p的表达及与病理特征、预后的关系

目的探讨结肠癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)肿瘤蛋白翻译调节因子1(TPT1)-反义RNA1(AS1)、微小RNA(miR)-30c-5p的表达及与病理特征、预后的关系。方法选取2015年1月至2017年12月深圳大学附属第一医院收治的117例接受根治性或姑息性手术切除结肠癌患者,均行手术切除结肠癌组织及癌旁组织。采用qRT-PCR检测lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p表达水平,分析lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p表达水平与结肠癌病理特征的关系,采用Pearson相关性检验分析结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1与miR-30c-5p表达水平的相关性,Kaplan-Meier曲线绘制不同lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p表达水平结肠癌患者3年累积生存率,Cox回归分析结肠癌患者预后影响因素。结果结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1表达水平明显高于癌旁组织(3.405±0.555 vs 1.766±0.096),miR-30c-5p表达水平(0.306±0.146 vs 0.872±0.267)明显低于癌旁组织(P<0.05)。结肠癌lncRNA TPT1-AS1表达水平TNM分期Ⅲ~Ⅳ期明显高于Ⅰ~Ⅱ期(3.651±0.579 vs 3.257±0.486),浸润深度T_(3)~T_(4)明显高于T_(1)~T_(2)(3.523±0.601 vs 3.301±0.491),有淋巴结转移明显高于无淋巴结转移(3.614±0.585 vs 3.220±0.456),差异均有统计学意义(P<0.05);miR-30c-5p表达水平TNM分期Ⅲ~Ⅳ期明显低于Ⅰ~Ⅱ期(0.251±0.126 vs 0.346±0.145),浸润深度T_(3)~T_(4)明显低于T_(1)~T_(2)(0.270±0.119 vs 0.338±0.162),有淋巴结转移明显低于无淋巴结转移(0.255±0.125 vs 0.351±0.151),差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1与miR-30c-5p表达水平呈负相关(r=-0.572,P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,lncRNA TPT1-AS1高表达水平组3年累积生存率明显低于低表达水平组(59.32%vs 87.93%),miR-30c-5p高表达水平组3年累积生存率明显高于低表达水平组(85.00%vs 61.40%)(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期(HR=2.387,95%CI:1.004~5.671)、淋巴结转移(HR=2.667,95%CI:1.021~6.969)、lncRNA TPT1-AS1≥3.405(HR=2.023,95%CI:1.076~3.803)为结肠癌患者预后独立风险因素,miR-30c-5p≥0.306(HR=0.175,95%CI:0.012~0.423)为独立保护因素(P<0.05)。结论结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1表达显著上调,miR-30c-5p表达显著下调,两者与TNM分期、浸润深度、淋巴结转移相关,为患者预后独立影响因素,可能成为结肠癌预后评估的标志物。

肿瘤蛋白翻译控制反义RNA1靶向调控miR-30c-5p对肝癌细胞放射敏感性和增殖迁移及侵袭的影响

目的探讨肿瘤蛋白翻译控制反义RNA1(TPT1-AS1)靶向miR-30c-5p对肝癌细胞放射敏感性、细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法34例肝癌组织及癌旁正常组织来源于2016年3月至2018年3月就诊于山西省人民医院的肝癌患者。将肝癌HepG2细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-TPT1-AS1组(转染si-TPT1-AS1)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-TPT1-AS1组(转染pcDNA3.1-TPT1-AS1)、si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组(转染si-TPT1-AS1和anti-miR-NC)、si-TPT1-AS1+anti-miR-30c-5p组(转染si-TPT1-AS1+anti-miR-30c-5p)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌旁正常组织和肝癌组织中TPT1-AS1和miR-30c-5p的基因表达,克隆形成实验检测细胞放射敏感性,MTT实验检测细胞增殖活力,流式细胞数检测细胞周期分布,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证TPT1-AS1和miR-30c-5p的靶向关系,Western blot检测增殖、迁移和侵袭相关蛋白的表达。结果肝癌组织中TPT1-AS1和miR-30c-5p的表达水平为0.84±0.08和0.13±0.01,与癌旁正常组织(分别为0.31±0.03和0.50±0.05)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。采用2、4、6、8 Gy照射细胞时,si-TPT1-AS1组细胞存活分数分别为0.280±0.040、0.069±0.011、0.020±0.003和0.005±0.001,均低于si-NC组(分别为0.648±0.070、0.348±0.080、0.130±0.020和0.060±0.009,均P<0.05),si-TPT1-AS1组细胞放射增敏比为1.672。si-TPT1-AS1组细胞迁移数、侵袭数分别为(50.00±4.36)个和(44.00±4.03)个,低于si-NC组[分别为(109.00±8.68)个和(94.00±7.49)个,均P<0.05]。培养24、48和72 h,si-TPT1-AS1组细胞吸光度(A)值分别为0.28±0.03、0.43±0.04和0.68±0.07,低于si-NC组(分别为0.46±0.04、0.87±0.08和1.35±0.13,均P<0.05)。si-TPT1-AS1组细胞周期素D1(Cyclin D1)、p21、E-cadherin和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达水平分别为0.25±0.02、0.65±0.06、0.68±0.07和0.27±0.03,与si-NC组(分别为0.88±0.08、0.17±0.02、0.14±0.01和0.89±0.09)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。si-TPT1-AS1组细胞S期和G2期细胞比例分别为(17.82±1.03)%和(34.15±2.29)%,与si-NC组[(35.14±2.61)%和(16.84±1.21)%]比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。WT-TPT1-AS1+miR-30c-5p组细胞荧光素酶活性为0.26±0.02,低于WT-TPT1-AS1+miR-NC组(0.92±0.09,P<0.05)。照射2、4、6、8 Gy,si-TPT1-AS1+anti-miR-30c-5p组细胞存活分数分别为0.450±0.081、0.200+0.045、0.070±0.010、0.026±0.004,高于si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组(分别为0.285±0.043、0.075±0.014、0.028±0.004、0.006±0.001,均P<0.05)。si-TPT1-AS1+anti-miR-30c-5p组细胞放射增敏比为0.694。si-TPT1-AS1+anti-miR-30c-5p组细胞迁移数、侵袭数分别为(79.00±6.65)个和(68.00±6.33)个,高于si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组[分别为(52.00±4.41)个和(46.00±4.06)个,均P<0.05]。培养24、48和72 h,si-TPT1-AS1+anti-miR-30c-5p组细胞A值分别为0.37±0.03、0.64±0.06和0.96±0.09,高于si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组[分别为0.26±0.03、0.41±0.04和0.65±0.06,均P<0.05]。si-TPT1-AS1+anti-miR-30c-5p组Cyclin D1、p21、E-cadherin和MMP-2蛋白的表达水平分别为0.57±0.06、0.43±0.04、0.43±0.04和0.64±0.06,与si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组(分别为0.24±0.02、0.66±0.06、0.65±0.06和0.28±0.03)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论TPT1-AS1在肝癌组织中表达上调,TPT1-AS1可能通过靶向下调miR-30c-5p的表达,降低肝癌细胞的放射敏感性,促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

miR-30c-5p及Toll样受体4在结肠癌中的表达及意义

目的观察结肠癌组织及细胞中miR-30c-5p及Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)蛋白表达,探讨其与临床病理特征的关系及意义。方法采用前瞻性研究,选取2016年5月至2017年5月于中国医科大学肿瘤医院手术切除的结肠癌手术标本及配对癌旁正常组织标本30例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miR-30c-5 mRNA的表达,采用蛋白质印迹(western blot,WC)法检测TLR4蛋白的表达,观察miR-30c-5p mRNA及TLR4蛋白在肿瘤不同TNM分期、分化程度及直径中的表达差异,Pearson Rank法进行miR-30c-5p及TLR4蛋白表达的相关性分析。结果在结肠癌组织中,miR-30c-5p表达(0.311±0.147)低于癌旁正常组织(0.881±0.266)(t=10.613,P<0.001)。TLR4蛋白在结肠癌组织(0.729±0.274)中表达高于癌旁正常组织(0.361±0.168)(t=6.310,P<0.001)。miR-30c-5p mRNA在结肠癌细胞株中表达(0.394±0.045、0.435±0.098、0.533±0.092、0.272±0.069)低于正常结肠上皮细胞(1.371±0.101)(t值分别为6.744、6.423、6.865、6.201,P均<0.001)。TLR4蛋白在结肠癌细胞株中表达(1.108±0.169、1.035±0.177、1.114±0.253、1.116±0.157)高于正常结肠上皮细胞(0.358±0.094)(t值分别为5.789、4.799、5.311、5.291,P均<0.001)。Pearson rank相关分析显示,在结肠癌组织中miR-30c-5p及TLR4蛋白表达量呈负相关(r=-0.487,95%CI:-0.721~-0.154,P<0.01)。miR-30c-5p随着TNM分期升高呈现下降趋势(F=31.406,P<0.001),随着肿瘤分化程度下降呈现下降趋势(F=9.960,P<0.001),随着肿瘤直径增大呈现下降趋势(F=10.267,P<0.001)。TLR4随着TNM分期升高呈现上升趋势(F=37.634,P<0.001)。TLR4随着肿瘤分化程度下降呈现上升趋势(F=38.027,P<0.001)。TLR4随着肿瘤直径增大呈现上升趋势(F=20.717,P<0.001)。结论miR-30c-5p在结肠癌中低表达,TLR4在结肠癌中高表达,二者与结肠癌TNM分期及肿瘤体积等恶性临床病理特征具有相关性。

血浆微小RNA-30c-5p水平与稳定型心绞痛患者冠状动脉病变严重程度的相关性

目的 探讨血浆微小RNA(miR)-30c-5p水平与稳定型心绞痛(SAP)患者冠状动脉病变严重程度的相关性.方法 根据SYNTAX评分结果,将114例SAP患者分为轻度组42例、中度组40例及重度组32例,选择42例经冠状动脉造影证实无冠状动脉疾病的住院患者作为对照组.采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测4组患者血浆miR-30c-5p表达水平并进行比较.采用Spearman相关性分析评估血浆miR-30c-5p表达水平与SYNTAX评分的关系.采用多元线性回归分析和多元logistic回归分析评估SYNTAX评分的影响因素.结果 4组间有高脂血症病史、入院后使用氯吡格雷、β-受体阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)/血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)、他汀类药物患者比例及SYNTAX评分比较,差异均有统计学意义(P<0.05).对照组、轻度组、中度组、重度组miR-30c-5p表达水平分别为1.02±0.22、0.95±0.23、0.72±0.21、0.65±0.18,中度组和重度组均低于轻度组和对照组(P<0.05),余两组间比较差异均无统计学意义(P>0.05).Spearman相关性分析结果显示,SAP患者血浆miR-30c-5p表达水平与SYNTAX评分呈正相关(r=0.48,P=0.01).多元线性回归分析结果显示,年龄、糖尿病病史、血浆miR-30c-5p水平与SYNTAX评分独立相关(P<0.05).多元logistic回归分析结果显示,血浆miR-30c-5p水平是SYNTAX评分的独立预测因素(P<0.05).结论 血浆miR-30c-5p水平与SYNTAX评分相关,有望成为评估SAP患者冠脉病变严重程度的生物标志物.

血浆microRNAs:HCV阳性肝硬化新的生物标记物

目的探讨血清micro RNA(mi RNA)在丙型肝炎病毒阳性的肝硬化中的表达情况。方法采用实时定量PCR(Real-time PCR)的方法检测mi R-30c-5p和mi R-302c-3p在丙型肝炎病毒及丙型肝炎病毒阳性的肝硬化患者血清中的表达。结果 mi R-30c-5p和mi R-302c-3p在丙型肝炎病毒及丙型肝炎病毒阳性的肝硬化患者中表达均增高。结论丙型肝炎病毒阳性的肝硬化患者血清中的mi R-30c-5p和mi R-302c-3p表达增高,可能作为监测和诊断丙型肝炎病毒阳性的肝硬化的生物标志物。

lncRNA SNHG14对急性冠状动脉综合征患者短期预后的价值及作用机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)SNHG14的表达在急性冠状动脉综合征(ACS)患者中的价值和潜在机制。方法选取2019年11月至2021年8月该院收治的84例ACS患者为研究对象,包括28例STEMI患者、31例NSTEMI患者和25例UA患者,选取同期经冠状动脉造影证实冠状动脉正常的75例患者作为对照组。使用实时荧光定量PCR技术检测SNHG14表达水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价SNHG14的诊断价值。所有患者随访6个月,对影响预后不良的因素进行Cox回归分析,评估SNHG14的预后价值。通过CCK-8、流式细胞术和ELISA检测SNHG14对HUVEC细胞模型的调控作用,荧光素酶报告实验用于验证SNHG14的靶向基因。结果ACS患者的SNHG14表达水平增加。低表达水平SNHG14可以缓解H/R对细胞活力、凋亡和炎症的不良影响。miR-30c-5p是SNHG14的1个靶基因,在ACS患者中表达水平降低。在ACS患者中,SNHG14和miR-30c-5p的表达水平成负相关。miR-30c-5p介导SNHG14对HUVEC细胞模型的调控。结论SNHG14表达水平对预测ACS的发生和短期预后有很高的价值,SNHG14/miR-30c-5p轴可以通过调控HUVEC细胞的生物功能。