miR-92b-5p、HMGB1与2型糖尿病肾病患者肾功能的相关性

目的探讨微小核糖核酸-92b-5p(miR-92b-5p)、血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与2型糖尿病肾病患者肾功能的相关性。方法选取2021年1月至2023年12月期间河南省驻马店市中心医院内分泌科收治的212例2型糖尿病肾病患者作为肾病组,另选取同期来本院就诊的单纯2型糖尿病患者95例作为2型糖尿病组。比较二组患者的肾功能相关指标以及miR-92b-5p、HMGB1水平;以Pearson相关性分析评估2型糖尿病肾病患者血清miR-92b-5、HMGB1水平与肾功能的相关性;以单、多因素Logistic回归分析2型糖尿病患者并发肾病的危险因素,并绘制受试者工作特性曲线(ROC)进一步评估miR-92b-5p、HMGB1二者联合检测对2型糖尿病患者并发肾病的预测价值。结果两组糖尿病病程、BUN、Scr、eGFR、miR-92b-5p以及HMGB1水平的比较差异有统计学意义(P<0.05);Pearson分析显示,HMGB1与BUN、Scr呈正相关,与eGFR呈负相关(r=0.570,0.646,-0.485,P<0.05);miR-92b-5与BUN、Scr呈负相关,与e GFR呈正相关(r=-0.526,-0.562,0.442,P<0.05)。多因素回归分析显示,糖尿病病程增加、BUN、Scr、HMGB1水平升高、eGFR、miR-92b-5p水平降低均是2型糖尿病患者并发肾病的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,miR-92b-5p、HMGB1以及二者联合检测曲线下面积为0.898、0.932、以及0.961(P<0.05)。结论2型糖尿病肾病患者肾功能异常可能与血清中miR-92b-5p表达量下降、HMGB1表达量上升有关,二指标可作为2型糖尿病肾病的有效预测指标。

外周血miR-92b-5p与miR-148b-3p在2型糖尿病进展至糖尿病肾病中的表达及交互作用

目的探究2型糖尿病(type 2 diabetes,T2DM)进展至糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)过程中血清微小RNA(microRNA,miR)-92b-5p、miR-148b-3p水平变化和作用。方法选取我院T2DM患者400例开展前瞻性研究,其中200例非DN患者作为T2DM组,200例DN患者作为DN组。比较两组临床资料、血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平,并比较DN组不同分期患者血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平,分析DN组血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平与临床分期的相关性,并分析T2DM进展至DN过程中血清miR-92b-5p与miR-148b-3p的交互作用,及血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平预测DN的价值。结果DN组血肌酐(serum creatinine,SCr)、血清miR-148b-3p水平高于T2DM组,估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)及血清miR-92b-5p水平低于T2DM组(P<0.05);DN组临床期患者血清miR-148b-3p水平高于早期患者,血清miR-92b-5p水平低于早期患者(P<0.05);DN组血清miR-92b-5p水平与临床分期呈负相关,血清miR-148b-3p水平与临床分期呈正相关(P<0.05);在T2DM进展至DN过程中,miR-92b-5p低表达与miR-148b-3p高表达呈次相乘模型的正向交互作用(P<0.05);miR-92b-5p、miR-148b-3p预测T2DM进展至DN的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.840、0.812,二者联合预测的AUC最大,为0.911。结论DN患者血清miR-92b-5p水平明显降低,miR-148b-3p水平明显升高,且与DN临床分期密切相关,miR-92b-5p低表达、miR-148b-3p高表达共同促进T2DM进展至DN过程。

基于miRNA155-5p介导的MAPK/NF-κB通路探讨尿石素A的抗炎机制

目的以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW264.7炎症细胞模型为研究对象,基于miRNA155-5p调控的TLR4/MAPK/NF-κB通路探讨尿石素A(urolithin A,Uro A)的抗炎机制。方法通过转染过表达miR-155-5p-mimics及miR-NC至LPS诱导的RAW264.7细胞中,RT-qPCR法检测各组细胞miR-15-5p、p38 MAPK、JNK和ERK的mRNA表达。MTT法检测Uro A对细胞活力的影响;Griess法检测细胞上清液NO的含量;ELISA法检测细胞上清液PGE 2、IL-6、IL-1β和TNF-α的表达水平;Western blot法检测iNOS、COX-2、TLR4以及MAPK/NF-κB通路相关蛋白的表达水平。结果与miR-NC组比较,miRNA155-5p过表达组p38 MAPK、JNK和ERK mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,Uro A能明显抑制LPS诱导的miRNA155-5p、NO、PGE 2和TNF-α、IL-1β、IL-6(P<0.01),降低iNOS、COX-2蛋白表达水平(P<0.01),且呈浓度依赖性;此外,Uro A明显抑制TLR4蛋白的表达水平以及p38 MAPK、JNK、NF-κB p65、IκBα蛋白的磷酸化水平(P<0.05),并呈浓度依赖性;但对ERK1/2蛋白磷酸化没有显示出明显的抑制作用。结论Uro A能够明显抑制LPS诱导的炎症反应,机制与miRNA155-5p介导的TLR4/MAPK/NF-κB信号通路有关。

2型糖尿病肾病患者血清miR-92b-5p和HMGB1水平变化及临床意义

目的观察miR-92b-5p及高迁移率族蛋白Box1(HMGB1)在2型糖尿病肾病患者血清中的水平变化,并探讨其临床意义。方法选取2型糖尿病患者203例,依据是否合并肾病将患者分为单纯糖尿病组(n=98)和糖尿病肾病组(n=105),并纳入80例同期体检健康者为对照组。采用酶联免疫吸附法检测各组血清HMGB1,采用实时荧光定量PCR法检测各组血清miR-92b-5p,采用多因素Logistic回归分析2型糖尿病肾病的危险因素,采用Pearson检验进行相关性分析,采用ROC曲线评估miR-92b-5p和HMGB1对2型糖尿病肾病的预测价值。结果单纯糖尿病组和糖尿病肾病组血清HMGB1水平高于对照组,且糖尿病肾病组高于单纯糖尿病组(P均<0.05)。单纯糖尿病组和糖尿病肾病组血清miR-92b-5p水平低于对照组,且糖尿病肾病组低于单纯糖尿病组(P均<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清HMGB1水平升高与miR-92b-5p水平降低均是2型糖尿病进展为2型糖尿病肾病的独立危险因素(P均<0.05)。2型糖尿病患者血清miR-92b-5p水平与HMGB1和24 h尿蛋白(24 hpro)水平均呈负相关,与估算肾小球滤过率(eGFR)水平呈正相关(P均<0.05);HMGB1和24 hpro水平呈正相关,与eGFR水平呈负相关(P均<0.05)。血清HMGB1联合miR-92b-5p预测2型糖尿病肾病的ROC曲线下面积(AUC)为0.858(95%CI:0.800~0.908),高于miR-92b-5p(AUC=0.754,95%CI:0.688~0.821)、HMGB1(AUC=0.802,95%CI:0.737~0.860)单一检查(P均<0.05)。结论血清HMGB1水平升高和miR-92b-5p水平降低是2型糖尿病患者进展为糖尿病肾病的危险因素,早期联合检测两指标可作为临床预测及诊断2型糖尿病肾病的重要生化标志物。

miR-92b-5p通过靶向HMGB1减轻糖尿病肾病大鼠肾损伤和炎症反应

目的:探讨微小RNA-92b-5p(miR-92b-5p)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤和炎症反应的作用及机制。方法:将大鼠分为对照组、DN组、慢病毒阴性对照(LV-NC)组、LV-miR-92b组、LV-高迁移率族蛋白B1(HMGB1)组和miR-92b+HMGB1组,每组15只。禁食12 h后,模型大鼠腹膜内注射60 mg/kg链脲佐菌素,对照大鼠腹膜内注射等体积柠檬酸盐缓冲液。3 d后,各处理组大鼠分别或联合静脉注射100μL LV-NC、LV-miR-92b和LVHMGB1(1×10^11 U/L),每周2次,连续8周。全自动生化分析仪检测尿蛋白、血糖、血尿素氮和血清肌酐;RT-qPCR检测miR-92b-5p和HMGB1 mRNA的表达;双萤光素酶报告基因实验验证miR-92b-5p和HMGB1的靶向关系;West⁃ern blot法检测肾组织中HMGB1蛋白表达;HE染色观察肾损伤;流式细胞术检测肾细胞凋亡;ELISA检测肾组织中白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。结果:DN模型大鼠中miR-92b-5p低表达,HMGB1高表达;miR-92b-5p与HMGB1的3'端非翻译区存在结合位点,miR-92b-5p高表达显著抑制了含有野生型HMGB1质粒的萤光素酶活性(P<0.01),但对突变型HMGB1质粒的萤光素酶活性无影响。与DN组相比,LV-miR-92b组大鼠24 h尿蛋白、血糖、血尿素氮和血清肌酐水平均显著降低(P<0.01),肾小球系膜和基底膜小管增生、肿胀及炎性细胞浸润程度显著减轻,肾组织细胞凋亡率显著降低(P<0.01),肾组织中IL-6、IL-1β和TNF-α含量均显著减少(P<0.01)。共转染LV-HMGB1可逆转miR-92b-5p对DN大鼠的上述作用。结论:miR-92b-5p通过靶向下调HMGB1来减轻DN大鼠肾损伤和炎症反应。

mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药的关系

目的探讨mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药关系。方法以人非小细胞肺癌细胞系A549及其耐药株A549/DDP为研究对象,采用RT-PCR法检测mir-17-5p、mir-92a及let-7b在细胞中的表达水平,采用cck8检测其细胞存活情况,采用细胞克隆平台方法,检测转染前后细胞的增殖情况,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡情况。结果(1)A549/DDP细胞mir-17-5p的表达水平是A549细胞的2.11±0.25倍(P<0.05);A549/DDP细胞mir-92a的表达水平是A549细胞的7.40±1.05倍(P<0.05);而A549/DDP细胞let-7b的表达水平是A549细胞的(26.54±2.90)%(P<0.05);(2)A549转染mir-17-5pmimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor后对顺铂的敏感性下降(P<0.05);A549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后对顺铂的敏感性增加(P<0.05);(3)A549转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor后,细胞形成克隆集落数量数量多于对照组(P<0.05);而A549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后,细胞形成克隆集落数量数量少于对照组(P<0.05);(4)A549转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor后,细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05);而a549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后,细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。结论 Mir-17-5p、mir-92a表达水平升高,let-7b表达水平下降,可以促进肺癌细胞增殖,抑制其凋亡以及使肺癌细胞对顺铂敏感性下降。

circRNA002144在PM_(2.5)诱导人正常支气管上皮细胞炎性反应中的机制研究

目的研究circRNA002144在PM_(2.5)暴露人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的表达及其下游靶基因的差异表达情况,并探讨circRNA002144在PM_(2.5)诱导BEAS-2B细胞发生炎性反应中可能的调控机制。方法分别以0、30、60、90、120、150μg/ml的PM_(2.5)暴露BEAS-2B细胞48 h,收集细胞上清液用酶联免疫(ELISA)实验检测白细胞介素-6(IL-6)的分泌量;收集细胞,以Trizol试剂裂解细胞后提取总RNA,以实时定量PCR(q RT-PCR)检测不同浓度PM_(2.5)染毒BEAS-2B细胞中circRNA002144表达水平的变化;然后利用RegRNA和Target Scan预测与circRNA002144相互作用的miRNAs以及靶向的下游mRNA,选择炎症相关的mRNA进一步检测。结果与对照组相比,不同浓度的PM_(2.5)染毒组BEAS-2B细胞炎性细胞因子IL-6的表达均升高,且有剂量依赖关系;circRNA002144的表达水平均升高,且随着PM_(2.5)染毒浓度的增加呈高表达,在120μg/ml染毒组,相对表达量增高4.79倍,差异均有统计学意义(P<0.01);结合生物信息学预测分析和q RT-PCR检测发现,相比于对照组,与circRNA002144相互作用的hsa-mi R-608和hsa-mi R-92a-2-5p在PM_(2.5)染毒组细胞呈现低表达的趋势,这两个miRNAs共同靶向的STAT3则呈现高表达,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 circRNA002144在PM_(2.5)诱导BEAS-2B细胞发生炎性反应中可能发挥促炎的作用,可能通过下调hsa-mi R-608和hsa-mi R-92a-2-5p促进IL-6分泌,进而激活STAT3炎症通路。