热带气候对东北地区老年原发性高血压病人血压、外周血microRNA-146a及Hcy的影响

目的 探讨热带气候对东北地区老年原发性高血压病人血压及外周血microRNA-146a、Hcy的影响。方法 选取2018年10月至2022年1月三亚中心医院收治的东北三省来三亚过冬的老年原发性高血压病人252例(研究组),同期选取三亚本地老年原发性高血压病人126例(对照组)。分别在来三亚第1周、第3个月、第6个月时测量病人血压,检测外周血microRNA-146a和Hcy水平,统计2组的血压控制率、不良反应和并发症发生情况。结果 第6个月时,研究组的血压控制率高于对照组(P<0.05),且研究组第6个月时的血压控制率高于第1周时(P<0.05)。研究组的收缩压和舒张压、microRNA-146a和Hcy水平在来三亚第1周、第3个月和第6个月时逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。在第3个月和第6个月时,研究组的收缩压和舒张压、microRNA-146a和Hcy水平均低于对照组(P<0.05)。结论 热带气候可使东北地区老年原发性高血压病人的平滑肌松弛,降低血压,从而减轻炎症反应,降低microRNA-146a及Hcy水平,减少高血压相关并发症及不良事件。

不同疾病活动度炎症性肠病患者血清microRNA-146a-5p、microRNA-145水平的变化及与免疫调节的相关性

目的 探讨不同疾病活动度炎症性肠病(IBD)患者血清microRNA-146a-5p (miR-146a-5p)、microRNA-145(miR-145)水平的变化及与免疫调节的相关性。方法 选取2021年6月—2022年6月在西南医科大学附属中医医院就诊的88例IBD患者作为IBD组,其中溃疡性结肠炎(UC)43例,克罗恩病(CD)45例。另取同期该院86例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清和肠黏膜组织miR-146a-5p、miR-145表达,流式细胞术检测Th1、Th2,酶联免疫吸附试验测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-12(IL-12)水平。Pearson法分析患者miR-146a-5p、miR-145表达与Th1/Th2的相关性。结果 与对照组比较,UC组和CD组miR-145相对表达量降低(P <0.05),Th1、Th1/Th2升高(P <0.05);与UC组比较,CD组miR-145相对表达量降低(P <0.05),Th1、Th1/Th2升高(P <0.05)。对照组、UC组、CD组miR-146a-5p都在固有层中表达。UC组和CD组miR-146a-5p表达水平高于对照组(P <0.05)。UC组和CD组TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-12水平高于对照组(P <0.05)。Pearson相关性分析结果表明,miR-146a-5p、miR-145表达与Th1/Th2均呈负相关(r=-0.424和-0.395,均P=0.000)。miR-146a-5p、miR-145诊断UC的曲线下面积(AUC)分别为0.850和0.794,敏感性分别为79.5%(95%CI:0.718,0.857)和74.4%(95%CI:0.696,0.822),特异性分别为94.3%(95%CI:0.982,0.896)和72.5%(95%CI:0.679,0.773)。miR-146a-5p、miR-145诊断CD的AUC分别为0.927(95%CI:0.875,0.977)和0.846(95%CI:0.803,0.902),敏感性分别为92.3%(95%CI:0.875,0.978)和71.9%(95%CI:0.668,0.773),特异性分别为94.3%(95%CI:0.991,0.892)和90.9%(95%CI:0.945,0.847)。miR-146a-5p、miR-145对CD的诊断效能较高。结论 不同疾病活动度IBD患者血清miR-146a-5p、miR-145表达与免疫调节呈负相关。

LPS对COPD大鼠肺动脉平滑肌细胞microRNA-146a的表达及合成分泌IL-6的诱导作用

目的通过分析microRNA-146a在脂多糖(LPS)诱导慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠远端肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中不同时间点表达的变化及与其合成分泌白细胞介素-6(IL-6)的相关性分析,探讨microRNA-146a对PASMCs炎症反应的调控作用。方法建立经典的COPD大鼠模型,采用酶消化联合组织块贴壁法,培养原代大鼠远端PASMCs,将第4代PASMCs分成对照组及LPS组,对照组不加入任何干预剂,LPS组用终浓度为1μg/m L的LPS诱导细胞;两组细胞分别培养12、24、48、72 h后采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-6的表达水平;用实时荧光定量PCR(Taqman探针法)检测细胞microRNA-146a的表达情况,并将细胞上清液中IL-6的表达量与microRNA-146a表达情况进行相关性分析。结果与对照组相比,LPS诱导组PASMCs中microRNA-146a的表达量在12 h开始升高,并呈递增趋势,72 h达峰(P<0.01);同时,LPS组细胞上清液中IL-6的表达量亦于12 h时升高,并且升高明显,72 h可达到高峰(P<0.01);经相关性分析,两者的表达量呈正相关(r=0.981,P=0.00)。结论 COPD大鼠PASMCs在LPS诱导后合成分泌IL-6,同时PASMCs中microRNA-146a表达升高,两者表达量呈正相关,推测其可能与PASMCs的炎症反应调控有关。

MicroRNA-146a对急性胰腺炎胰腺腺泡细胞增殖及凋亡的影响及其机制研究

目的探讨microRNA-146a(miR-146a)对急性胰腺炎胰腺腺泡细胞增殖及凋亡的影响,并分析相关机制。方法体外诱导并培养急性胰腺炎MPC-83细胞,将急性胰腺炎MPC-83细胞分为阴性对照组(mimics-NC组)、过表达miR-146a组(miR-146a-mimics组),另以未经诱导处理的MPC-83细胞为空白对照组(NG组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组MPC-83细胞miR-146a,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6),Western blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、核转录因子-κB p65(NF-кB p65)蛋白的表达。结果急性胰腺炎细胞模型建立成功,成功转染后,与NG组、mimicsNC组比较,miR-146a-mimics组细胞凋亡率,TNF-α、IL-6、Bax和NF-κB p65蛋白相对表达量降低(P<0.05),细胞存活率、PCNA和Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论过表达miRNA-146a可抑制急性胰腺炎MPC-83细胞凋亡并促进细胞增殖,其作用可能通过抑制NF-кB通路活化来实现。

类风湿性关节炎患者microRNA-146a的表达及与血清学指标的相关性

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是常见的以关节滑膜慢性炎症为主要特征的自身免疫性疾病,其主要病理改变为关节滑膜明显增厚并有大量炎症细胞浸润,血管翳形成以及软骨组织的侵蚀与破坏[1]。microRNA可被分泌释放到细胞外,参与多种炎性和自身免疫性疾病的发病过程[2]。Micro-RNAs（miRNAs）是一类短的（大约20～22个核苷酸）非编码RNA,介导RNA干扰和在翻译水平抑制蛋白表达。miRNAs与自身免疫性疾病进程有关且可能参与RA新的调控机制[2-4]。miRNA-146a与类风湿性关节炎密切相关,TNF-α[5]和IL-17[6]目前被认为是RA的一种重要致炎因子,均与疾病活动程度相关;而C-反应蛋白（C-reactive protein,CRP）[7]是一种急性时相反应蛋白,可以反映患者的疾病活性;一直以来,类风湿因子（rheumatoid factor,RF）是美国风湿病协会RA诊断标准中的血清学指标之一[8-9];因此本研究采用实时荧光定量PCR检测miR-146a在RA患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononu-clear cell,PBMC）表达水平,同时检测血清CRP、RF、IL-I7、TNF-α含量,分析miR-146a在RA外周血中的表达及与CRP、RF、IL-I7、TNF-α的相关性,有助于进一步探讨其在RA发病及疾病进展中的意义。

广西壮族人群microRNA-146a基因多态性与肝癌遗传易感性的相关性研究

目的探讨广西壮族人群microRNA-146a基因rs2910164位点多态性与肝癌遗传易感性的关系。方法应用病例-对照研究方法,分别选择广西肝癌高发区壮族肝癌患者110例以及健康对照者110名,采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)对microRNA-146a基因rs2910164位点进行SNP分型,以χ2检验比较microRNA-146a基因rs2910164位点基因型在病例组与对照组之间的分布差异,采用非条件Logistic回归分析其多态基因型与肝癌发生危险性的关系。结果病例组中microRNA-146a基因rs2910164位点的CG基因型分布频率高于对照组,差异有统计学意义(P=0.026)。Logistic回归分析结果显示,携带CG基因型者患肝癌风险增高(OR=3.473,95%CI:1.116～10.802,P=0.032),GG基因型在两组间分布频率的差异无统计学意义(P>0.05)。其等位基因C和G在病例组中的分布频率分别为62.7%和37.3%,在对照组中的分布频率分别为67.7%和32.3%,等位基因C或G在两组间分布频率的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 microRNA-146a基因rs2910164位点的CG基因型携带者的肝癌发病风险显著增加,其CG基因型可能是广西壮族人群肝癌发病的遗传易感因素之一。

人microRNA-146a慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的构建针对has-miR-146a的慢病毒表达载体,并鉴定成熟has-miR-146a在细胞内表达水平。方法PCR扩增pri-miR-146a,克隆于慢病毒载体plenti-GFP中,转染293FT细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染Jurkat细胞。结果成功构建了has-miR-146a的慢病毒表达载体,建立了高效转染系统。结论建立了高效稳定表达has-miR-146a的慢病毒转染系统。

复发性流产绒毛组织中MicroRNA-146a-5p、MicroRNA-515-5p表达水平及与血管新生的相关性

目的:分析复发性流产(RSA)患者绒毛组织MicroRNA-146a-5p、MicroRNA-515-5p表达水平及与新生血管关系。方法:将本院2018年1月-2020年12月收治的RSA患者84例(RSA组)、正常妊娠自愿行人工流产手术60例(对照组),采用实时荧光定量法(PCR)技术检测两组绒毛组织内MicroRNA-146a-5p、MicroRNA-515-5p以及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平,蛋白免疫印迹法检测其蛋白表达水平,分析RSA组绒毛组织MicroRNA-146a-5p、MicroRNA-515-5p与VEGF关系。结果:RSA组MicroRNA-146a-5p(0.48±0.16)及VEGF mRNA(0.31±0.08)表达量均低于对照组MicroRNA-146a-5p(1.03±0.17)和VEGF mRNA(1.03±0.18),MicroRNA-515-5p mRNA表达量(1.29±0.26)高于对照组(0.47±0.15)(均P<0.05)。且随着RSA组流产次数增加,MicroRNA-146a-5p及VEGF mRNA及蛋白表达量呈下降趋势,MicroRNA-515-5p mRNA及蛋白表达量呈上升趋势(均P<0.05)。RSA组MicroRNA-146a-5p表达量与VEGF呈正相关(r=0.53,P<0.05),MicroRNA-515-5p与VEGF呈负相关(r=-0.49,P<0.05)。结论:RSA患者绒毛组织Micr-146a-5p表达下降,MicroRNA-515-5p表达上升,且与VEGF存在相关性,推测Micr-146a-5p、MicroRNA-515-5p可能通过影响患者血管生成而引起流产,但具体作用机制有待深入研究。

microRNA-122和microRNA-146a联合检测有望用于布病诊断

目的:研究布病患者血浆microRNA-122(miR-122)和microRNA-146a(miR-146a)作为布病新型诊断标记的可行性。方法:采用实时定量PCR方法,测定验证样本(56例未经治疗的布病患者、32例经过治疗的布病患者和40例健康志愿者)血浆中microRNAs的表达水平。结果:miR-122和miR-146a在布病患者和健康志愿者之间的表达水平差异有统计学意义(P<0. 001),并且表达水平与布病患者血清抗体有关,但与患者是否经过抗生素治疗以及患者是否具有明显临床表现均无相关性。miR-122和miR-146a组合诊断的AUC值为0. 935,高于两者任何一个单独检测。结论:miR-122和miR-146a组合在布病诊断中具有潜在应用价值。

布病患者血清microRNA-146a表达及其与抗体滴度的关系研究

目的:研究microRNA-146a在布病患者血清中表达规律及其与血清滴度的关系。方法:采用定量PCR方法,测定布病患者和健康人血清中miR-146a的表达,并分析表达水平与血清抗体水平、就诊时间等彼此的相关性。结果:利用阳性参考品建立了miR-146a定量检测工作曲线,对20例布病阳性病例和20例正常人血清miR-146a进行了检测,布病患者血清中miR-146a显著低于正常人(P<0.001),miR-146a的水平与血清抗体滴度呈负相关(P<0.05)。结论:布鲁氏菌感染后患者血清中miR-146a表达被抑制,并且患者血清抗体滴度越高,抑制程度越高。

microRNA-146a重组慢病毒载体局部应用治疗免疫介导性内耳病的实验研究

目的自身免疫性内耳病(autoimmune inner ear disease,AIED)是目前临床上一部分可以有效治疗的内耳疾病,对其的研究工作具有重要的临床实际意义和实用价值,文中探讨microRNA-146a对免疫介导性内耳病(immune-mediated inner ear disease,IMIED)的免疫调节作用、及其治疗效果。方法采用钥孔戚血蓝蛋白抗原在已致敏的豚鼠圆窗龛局部免疫,制成IMIED动物模型30只,按配对设计分为microRNA-146a重组慢病毒组、空载慢病毒对照组、模拟手术对照组3组。microRNA-146a重组慢病毒组:鼓阶内注射microRNA-146a重组慢病毒;空载慢病毒对照组:鼓阶内注射慢病毒空载体;模拟手术对照组:鼓阶内注射PBS溶液。分别于免疫前、免疫后和鼓阶注射1周后,测试听觉功能和血清抗KLH特异性抗体水平变化。鼓阶内注射后1周(ABR试验后),每组3只动物行HE染色和光镜观察;另3只动物行荧光观察(慢病毒载体转染情况);,4只动物并测试内耳局部组织microRNA-146a的含量及其变化。结果 3组动物免疫后血清中特异性抗KLH抗体水平较免疫前升高,重组慢病毒载体组[(1.90±0.74)vs(0.09±0.01),P<0.05],空载体对照组[(2.20±0.75)vs(0.11±0.02),P<0.05],模拟手术组[(2.10±0.64)vs(0.11±0.03),P<0.05]。与免疫前对应耳比较,免疫后、鼓阶注射后ABRⅢ波平均阈值均增加(P<0.05);与免疫后对应耳比较,重组慢病毒载体鼓阶内注射后ABRⅢ波平均阈值降低(P<0.05)。重组慢病毒载体组内耳microRNA-146a含量(1290.0±660.0)较空载体对照组(369.5±73.9)和模拟手术组(476.6±148.0)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光观察显示:micro-RNA146a重组慢病毒载体在内耳中分布在骨螺旋唇、螺旋神经节传入纤维、螺旋韧带基底细胞、Corti器、血管纹等,内耳光镜观察显示内耳免疫炎性反应较空载慢病毒对照组和模拟手术对照组明显减轻。结论 micro-RNA146a重组慢病毒载体经鼓阶注射到内耳后,可在内耳广泛分布和转染,内耳组织中microRNA-146a的含量明显升高。重组micro-RNA146a慢病毒载体内耳导入可显著减轻内耳免疫炎性病理损伤和听觉功能障碍。

microRNA-146a对牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激下淋巴细胞分泌细胞因子的调节作用

目的探讨microRNA-146a(miR-146a)对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)脂多糖(LPS)刺激下淋巴细胞分泌细胞因子的作用。方法从小鼠脾脏收集淋巴细胞。实时定量聚合酶链反应和酶联免疫反应用于检测淋巴细胞在P.gingivalis LPS、miR-146a模拟物或抑制剂处理后细胞因子的表达。结果与P.gingivalis LPS未刺激组相比,P.gingivalis LPS能促进白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和IL-10表达(P<0.05),虽抑制骨保护素(OPG)mRNA水平(P<0.05),但分泌水平差异无统计学意义(P>0.05)。与阴性对照组相比,P.gingivalis LPS处理的淋巴细胞中miR-146a模拟物抑制IL-1β、IL-6和RANKL表达(P<0.05),促进IL-10和OPG表达(P<0.05),miR-146a抑制剂对这些细胞因子产生相反的效果(P<0.05)。结论miR-146a可通过抑制淋巴细胞IL-1β、IL-6和RANKL表达,促进IL-10和OPG表达,从而抑制P.gingivalis LPS的炎性作用,为骨改建提供良好的成骨环境。

阿尔茨海默病患者外周血microRNA-146a、Aβ1-42蛋白、tau蛋白的表达及临床意义

目的:探讨阿尔茨海默病患者外周血清中microRNA-146a、Aβ1-42蛋白、tau蛋白的表达及临床意义。方法:选取我院收治的阿尔茨海默病患者98例作为试验组,另选取50例健康者作为对照组。采用RT-PCR技术检测两组患者外周血清中microRNA-146a相对表达水平,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组患者外周血清中Aβ1-42蛋白及tau蛋白浓度。结果:试验组外周血清中microRNA-146a相对表达量、Aβ1-42蛋白、tau蛋白浓度分别为(2.45±0.43)pg/ml、(37.43±6.75)pg/ml、(22.87±4.51)pg/ml,对照组外周血清中microRNA-146a相对表达量、Aβ1-42蛋白、tau蛋白浓度(0.98±0.12)pg/ml、(51.26±9.24)pg/ml、(13.64±2.91)pg/ml,差异均有统计学意义(P<0.05);试验组患者microRNA-146a与Aβ1-42蛋白呈负相关性(r=-0.882,P<0.05),与tau蛋白无相关性(P>0.05)。结论:阿尔茨海默病患者外周血清中存在microRNA-146a、Aβ1-42蛋白、tau蛋白的差异表达,且microRNA-146a可能是通过调控Aβ1-42蛋白而不是tau蛋白进而参与阿尔茨海默病的发病。

肾病综合征患者尿液外泌体microRNA-146a、microRNA-200p表达与肾损伤的关系

目的探讨肾病综合征(NS)患者尿液外泌体microRNA-146a(miR-146a)、microRNA-200p(miR-200p)表达与肾损伤的关系。方法选取2019年8月—2022年8月成都大学附属医院收治的106例NS患者为观察组,另选取120例同期来医院体检的健康者为对照组。根据NS患者是否发生肾损伤分为非损伤组74例和损伤组32例。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测研究对象的尿液外泌体miR-146a、miR-200p表达。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-146a、miR-200p对NS患者肾损伤的诊断效能;采用Pearson法分析尿液外泌体miR-146a、miR-200p与肾功能指标的相关性;采用多因素Logistic逐步回归模型分析影响NS患者肾损伤的相关因素。结果观察组尿液外泌体miR-146a表达高于对照组(P<0.05),miR-200p表达低于对照组(P<0.05)。非损伤组尿液外泌体miR-146a表达低于损伤组(P<0.05),miR-200p表达高于损伤组(P<0.05)。miR-146a、miR-200p诊断NS患者肾损伤的曲线下面积(AUC)分别为0.873(95%CI:0.822,0.924)、0.844(95%CI:0.793,0.895),最佳截断值分别为4.08和1.99,特异性分别为67.57%和60.81%,敏感性分别为93.75%和93.75%,两者联合诊断的AUC为0.927(95%CI:0.896,0.958),特异性为85.14%,敏感性为87.50%。非损伤组与损伤组的尿蛋白量、白蛋白、肾小球滤过率、尿素氮、血肌酐、血尿酸比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,尿液外泌体miR-146a表达与尿蛋白量、尿素氮、血肌酐呈正相关(r=0.402、0.447和0.613,均P=0.000),与白蛋白、肾小球滤过率呈负相关(r=-0.369和-0.415,均P=0.000);尿液外泌体miR-200p表达与尿蛋白量、尿素氮、血肌酐呈负相关(r=-0.357、-0.405和-0.534,均P=0.000),与白蛋白、肾小球滤过率呈正相关(r=0.428和0.513,P=0.000)。多因素Logistic逐步回归分析结果显示,肾小球滤过率降低[OR=2.591(95%CI:1.687,3.980)]、血肌酐升高[OR=2.342(95%CI:1.576,3.480)]、miR-146a≥4.08[OR=3.050(95%CI:1.913,4.862)]、miR-200p≤1.99[OR=3.347(95%CI:2.083,5.378)]是NS患者肾损伤的危险因素(P<0.05)。结论尿液外泌体miR-146a、miR-200p异常表达与NS患者肾损伤有关,可作为诊断NS患者肾损伤的生物学指标,且两者联合的诊断效能更好,具有临床推广价值。

MicroRNA-146a单核苷酸多态性的研究进展

microRNAs（miRNAs）是发现于真核细胞中的一类长约22个核苷酸的内源性非编码单链小分子RNA。细胞内成熟的miRNAs与AGO（Argonaute）蛋白结合参与形成RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing complex,RISC）,通过部分碱基互补配对的方式识别靶mRNA的3′非编码区（3′untranslated region,3′UTR）,并根据互补程度的不同决定RISC降解靶mRNA或者抑制mRNA的翻译，从而抑制对应蛋白的合成，达到调控基因表达的目的。

MicroRNA-146a生物学作用的研究进展

MicroRNA是一种内源性单链非编码小分子RNA,通过与靶mRNA的特异性结合,以降解mRNA或阻碍其翻译从而在转录后水平调节靶mRNA的表达.MicroRNA-146a参与机体的多种生物学过程,具有多种生物学功能.本文将从其控制炎症反应,调节免疫,介导髓样细胞增殖以及肿瘤发生发展等几个方面进行综述.

MicroRNA-146a通过靶向TAK1诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的:观察微小RNA-146a(miR-146a)对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:将miR-146a mimic(上调miR-146a表达)和miR-146a inhibitor(下调miR-146a表达)分别转染至人胃癌SGC-7901细胞中,同时设置miRNA无义序列转染为阴性对照组(NC组)。RT-q PCR检测转染后胃癌细胞miR-146a的表达水平;CCK-8法和流式细胞术检测miR-146a对SGC-7901胃癌细胞生长活力和凋亡的影响;RT-q PCR和Western blot法检测miR-146a上调或下调对转化生长因子β激活激酶1(TAK1)/核因子κB(NF-κB)通路的影响。结果:在SGC-7901细胞中,上调miR-146a表达显著促进细胞凋亡,而下调miR-146a表达则显著抑制细胞凋亡。与NC组相比,miR-146a mimics转染SGC-7901细胞后,TAK1的mRNA和蛋白表达均明显下降,差异均有统计学显著性(P<0.05),而miR-146a inhibitors转染组TAK1的mRNA和蛋白质表达则显著增加(P<0.05),提示miR-146a负调控TAK1表达。敲低TAK1促进SGC-7901细胞凋亡(P<0.01),而TAK1过表达TAKI则抑制SGC-7901细胞凋亡(P<0.01)。此外,过表达miR-146a和敲低TAK1均能显著上调NF-κB抑制蛋白α(IκBα)和下调B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达。结论:本研究结果表明miR-146a通过靶向TAK1抑制NF-κB途径,从而诱导胃癌细胞凋亡。

MicroRNA通用探针法的建立及布鲁氏菌病患者血浆microRNA-146a的检测

目的建立一种通用、敏感、特异的microRNA检测方法,用于检测布鲁氏菌病患者血浆microRNA-146a的表达,探讨其作为诊断标识的可能性。方法以microRNA-146a模拟物为待检物,通过正交实验设计,对退火温度、探针浓度、试剂盒选择进行优化,建立特异敏感的通用检测方法;从布病患者和正常健康人血浆样本提取RNA,应用通用探针法进行检测,比较布病患者血浆microRNA-146a的表达变化。结果建立了优化的通用探针法,与染料法相比特异性更强、扩增范围更大,具有通用检测能力。应用通用探针法检测布鲁氏菌病患者血浆microRNA-146a,发现布病患者血浆中microRNA-146a的表达被抑制(P<0.01),表明其可能作为布病诊断的分子标识。结论经优化的通用探针法是一种通用、敏感、特异的检测方法,可用于microRNA的检测,microRNA-146a可能作为布病诊断的标识分子。

microRNA-146a基因多态性与胃癌的相关性分析

目的分析microRNA-146a基因多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)及miR-146a表达水平与胃癌的关系。方法纳入胃癌患者86例设为胃癌组,取胃癌及自身正常胃癌旁组织,另取正常胃黏膜42例作对照设为对照组。使用基因测序方法确定单核苷酸多态性的等位基因,分析不同基因型与胃癌发生及转移的关系。使用RT-PCR方法检测并比较不同基因型胃黏膜组织中miR-146a表达量;对比癌组织与自身正常组织中miR-146表达量;同时比较转移患者以及未转移患者癌组织miR-146表达量。结果胃癌组与对照组miR-146a基因型分布不同,Logistic回归显示GG及GC是胃癌发病危险因素;对照组中GG及GC基因型携带者miR-146a表达量较胃癌基因型携带者低;胃癌患者中癌组织miR-146a水平较其自身正常组织低。转移患者及未转移患者基因型分布亦有所不同,前者GG基因型比例较高,miR-146a表达量则降低,显示GG是胃癌转移的危险因素之一。结论 miR-146a多态性中的G等位基因是胃癌发病和转移的危险因素之一,可能与其导致的较低miR-146a表达量有关。

急性格林巴利综合征患者外周血microRNA-146a、microRNA-125b表达及其与免疫球蛋白、炎症因子的相关性研究

目的探讨急性格林巴利综合征患者外周血清中microRNA-146a、microRNA-125b的表达水平与免疫球蛋白、炎症细胞因子的相关性。方法选取我院神经内科收治的84例急性格林巴利综合征患者作为试验组(GBS组),另选取50例正常体检者作为对照组。采用RT-PCR技术检测所有纳入者外周血清中microRNA-146a、microRNA-125b的表达水平,采用免疫比浊法检测所有纳入者外周血清中免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(Ig A)、免疫球蛋白M(Ig M)的水平,采用酶联免疫吸附法检测所有纳入者外周血清中IL-6、CRP、TNF-α的水平。比较2组患者外周血清中microRNA-146a、microRNA-125b的表达水平,采用Spearman相关性分析方法分析microRNA-146a、microRNA-125b分别与免疫球蛋白、炎症因子的相关性。结果试验组外周血清中microRNA-146a表达水平高于正常组,而microRNA-125b的表达水平低于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);试验组外周血清中IL-6、CRP、TNF-α、IgG表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析表明microRNA-146a与IL-6、CRP、TNF-α、IgG具有正相关性,而microRNA-125b与IL-6、CRP、TNF-α、IgG具有负相关性,差异均有统计学意义(P<0.05);而microRNA-146a及microRNA-125b与Ig A、Ig M无明显相关性。结论急性格林巴利综合征患者外周血清中microRNA-146a、microRNA-125b存在差异表达谱,并且二者可能是通过调控免疫及炎症反应进而参与急性格林巴利综合征的发病。