重楼皂苷Ⅰ对胃癌SGC-7901细胞线粒体自噬的作用及对LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Caspase-3表达的影响

目的:探究重楼皂苷Ⅰ对胃癌SGC-7901细胞线粒体自噬的作用及对微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达的影响。方法:将对数生长期的胃癌SGC-7901细胞分为对照组和重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组。重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组分别以1.5、3.0、6.0 mg/mL重楼皂苷Ⅰ培养胃癌细胞,对照组用含10%胎牛血清的1640-RPMI培养基培养胃癌细胞。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率;透射电镜观察SGC-7901细胞超微结构的改变;Lyso-Tracker Red染色观察SGC-7901细胞自噬情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting法检测胃癌细胞Beclin-1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白相对表达量。结果:与对照组比较,重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组24、48、72 h增殖抑制率升高,重楼皂苷Ⅰ低剂量组<重楼皂苷Ⅰ中剂量组<重楼皂苷Ⅰ高剂量组(P<0.05);与对照组比较,重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组细胞椭圆形的双层膜包绕囊泡状结构增多,自噬小体增多。重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组细胞溶酶体红色荧光小体增加,酸性自噬溶酶体囊泡过度累积。与对照组比较,重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组细胞凋亡率及Beclin-1、Caspase-3蛋白相对表达量升高,重楼皂苷Ⅰ低剂量组<重楼皂苷Ⅰ中剂量组<重楼皂苷Ⅰ高剂量组;Bcl-2/Bax、LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值降低,重楼皂苷Ⅰ高剂量组<重楼皂苷Ⅰ中剂量组<重楼皂苷Ⅰ低剂量组(P<0.05)。结论:重楼皂苷Ⅰ可通过诱导胃癌SGC-7901细胞线粒体自噬,抑制细胞增殖,促进凋亡。

卵巢癌组织中LC3-Ⅱ蛋白、p53蛋白的表达及其与肿瘤发生发展的关系

目的探讨卵巢癌组织中微管轻链Ⅰ蛋白3-Ⅱ型(LC3-Ⅱ)蛋白、p53蛋白的表达与卵巢癌发生发展的关系。方法选取2015年8月至2018年7月焦作市第五人民医院病理科收集的84例上皮性卵巢癌患者的病理标本作为卵巢癌组,80例良性卵巢肿瘤患者的组织标本作为良性组,采用Western-blot法、免疫组织化学染色技术检测LC3-Ⅱ蛋白、p53蛋白的表达情况。结果卵巢癌组中的LC3-Ⅱ蛋白、p53蛋白阳性表达率分别为66.67%(56/84)、61.90%(52/84),均高于良性组的26.25%(21/80)、18.75%(15/80),差异有统计学意义(P<0.05)。发生淋巴结转移的卵巢癌组织中LC3-Ⅱ蛋白阳性表达率为77.08%(37/56),高于未发生淋巴结转移的卵巢癌组织的52.78%(19/28),P<0.05;发生淋巴结转移、低分化的卵巢癌组织中的p53蛋白阳性表达率分别为75.00%(36/52)、80.65%(25/52),高于未发生淋巴结转移、高-中分化卵巢癌组织中的阳性表达率(44.44%,16/52;50.94%,27/52),P<0.05。结论LC3-Ⅱ蛋白、p53蛋白在卵巢癌组织中表达上调,可能与卵巢癌的发生及恶性程度增加有关。

岩藻黄素对脑胶质瘤细胞U87增殖及自噬的影响

目的观察岩藻黄素对脑胶质瘤细胞U87增殖及自噬的影响。方法未经处理的U87细胞作为对照组,不同浓度岩藻黄素处理的U87细胞作为实验组,比较各组细胞生存率、细胞凋亡率及自噬体、自噬溶酶体数目和分布,另比较细胞亚显微结构、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型/微管相关蛋白1轻链3Ⅰ型(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)、酵母自噬基因6同系物(Beclin1)。结果 12.5、25、50、75μmol/L岩藻黄素处理组细胞生存率分别为93.19%±5.88%、73.05%±2.33%、49.95%±1.59%、25.95%±1.40%,对照组为100.00%±1.35%,25、50、75μmol/L岩藻黄素处理组分别与对照组比较,P均<0.05。25、50μmol/L岩藻黄素处理组细胞凋亡率分别为12.00%±0.56%、31.97%±1.83%,对照组为2.97%±0.21%,各岩藻黄素处理组分别与对照组比较,P均<0.05。25、50μmol/L岩藻黄素处理组细胞LC3-GFP融合蛋白转移至自噬体膜并呈斑点状分布于细胞质内,且斑点数目随药物浓度的升高而增加;对照组LC3-GFP融合蛋白弥散分布在胞质中。镜下可见对照组正常的细胞器结构;50μmol/L岩藻黄素处理组可见大量的自噬小泡、自噬体及自噬溶酶体,其中可见尚未完全降解线粒体结构。25、50μmol/L岩藻黄素处理组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ分别为0.86±0.05、0.89±0.04,对照组为0.65±0.01,各岩藻黄素处理组分别与对照组比较,P均<0.05;25、50μmol/L岩藻黄素处理组Beclin1相对表达量分别为0.39±0.02、0.59±0.04,对照组为0.23±0.01,各岩藻黄素处理组分别与对照组比较,P均<0.05。结论岩藻黄素可有效抑制U87细胞增殖,并诱导自噬的发生。

当归黄芪胶囊对心力衰竭大鼠心肌自噬的影响

目的探讨当归黄芪胶囊是否通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/西罗莫司靶蛋白(mTOR)信号通路调控心力衰竭大鼠心肌的自噬。方法用2.5 mg·kg^(-1)阿霉素腹腔注射构建心力衰竭大鼠模型,另取8只为空白组。将造模成功的大鼠随机分为模型组、对照组和低、中、高剂量实验组。对照组给予腹腔注射30 mg·kg^(-1)的3-甲基腺嘌呤;低、中、高剂量实验组分别灌胃给予150、300、450 mg·kg^(-1)的当归黄芪胶囊;空白组及模型组均灌胃给予等量无菌蒸馏水。6组大鼠每天给药1次,持续6周。用超声多普勒检测心功能,用蛋白印迹法检测心肌组织中PI3K、Akt、mTOR、选择性自噬接头蛋白(P62)、微管相关轻链蛋白3Ⅱ/Ⅰ(LC3Ⅱ/Ⅰ)的表达水平。结果空白组、模型组、对照组和高剂量实验组的左心室射血分数分别为(85.00±3.63)%、(56.75±4.83)%、(75.63±3.70)%和(72.75±4.23)%,PI3K相对表达水平分别为1.00±0、0.28±0.05、0.64±0.08和0.74±0.16,磷酸化Akt/Akt分别为1.00±0、0.49±0.06、0.90±0.16和0.95±0.10,磷酸化mTOR/mTOR分别为1.00±0、0.42±0.09、0.73±0.13和0.83±0.08,P62相对表达水平分别为1.00±0、0.24±0.12、0.57±0.09和0.96±0.10,LC3Ⅱ/Ⅰ相对表达水平分别为1.00±0、4.31±0.75、2.20±0.76和1.59±0.24。与模型组比较,高剂量实验组和对照组的上述指标在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论当归黄芪胶囊能通过调控PI3K/Akt/mTOR通路,抑制心力衰竭大鼠心肌的自噬,从而改善大鼠的心功能。

CD40siRNA调控c-Jun氨基末端激酶对自身免疫性心肌炎大鼠心肌细胞自噬的影响

目的探讨CD40siRNA调控c-Jun氨基末端激酶(JNK)对自身免疫性心肌炎(EAM)大鼠心肌细胞自噬的影响。方法 6～8周健康雄性Lewis大鼠32只随机均分为EAM组、CD40siRNA治疗组、siRNA对照组和正常对照组。实验第0天和第7天于前3组大鼠后足垫区注射充分混合的猪心免疫球蛋白,0.2 mL/只,建立EAM大鼠模型;正常对照组大鼠后足垫区注射无菌磷酸盐缓冲液(PBS),0.2 mL/只。第7天,CD40siRNA治疗组尾静脉注射25μL CD40siRNA慢病毒表达载体,siRNA对照组尾静脉注射25μL siRNA慢病毒载体。每3天测量1次大鼠体质量,第21天处死所有大鼠,光学显微镜观察大鼠心肌组织的病理变化并计算病理积分,免疫组化染色JNK,采用Western blotting法检测自噬相关蛋白Beclin1和微管相关蛋白轻链3-Ⅱ/Ⅰ比值(LC3-Ⅱ/Ⅰ)。结果各组均无死亡,正常对照组体质量增长速度超过EAM组(P<0.05)。心肌组织病理积分CD40siRNA治疗组明显低于EAM组(P<0.001)。免疫组化染色显示,CD40siRNA治疗组和NC组的p-JNK明显低于EAM组。Western blotting法检测显示,CD40siRNA治疗组和NC组的LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin1明显低于EAM组,且JNK与LC3-Ⅱ和内参比值具有正相关性斜率(r=0.985,P<0.001)。结论 CD40siRNA可减轻EAM大鼠的炎症,其机制可能与下调JNK抑制自身免疫性心肌炎大鼠心肌细胞自噬有关。