LncRNA PURPL调节miR-342-3p/PIK3R1轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探究长链非编码RNA(PURPL)调节微小RNA-342-3p(miR-342-3p)/磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基1(PIK3R1)轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:细胞实验:将si-NC、si-PURPL、si-PURPL+inhibitor NC、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor分别转染至肝癌细胞Huh-7细胞并命名为si-NC组、si-PURPL组、si-PURPL+inhibitor NC组、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor组,未做任何处理的Huh-7细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PURPL、miR-342-3p、PIK3R1的关系;qRT-PCR检测人正常肝细胞系L02和人肝癌细胞系Huh-7中LncRNA PURPL、miR-342-3p表达;Western blot检测L02细胞、Huh-7细胞PIK3R1蛋白水平;MTT法检测Huh-7细胞增殖情况;流式细胞术检测Huh-7细胞凋亡率;Transwell检测Huh-7细胞侵袭数量;划痕试验测定Huh-7细胞迁移。体内实验:构建裸鼠异种移植模型,分组同细胞实验,检测肿瘤体积和肿瘤重量。结果:细胞实验结果显示:与si-NC组相比,si-PURPL组Huh-7细胞OD490值、划痕愈合率、侵袭细胞数量、LncRNA PURPL、PIK3R1水平显著下降(P<0.05),Huh-7细胞凋亡率、miR-342-3p相对表达量显著升高(P<0.05),而抑制miR-342-3p表达减弱了沉默LncRNA PURPL抑制Huh-7细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡的效果;LncRNA PURPL负向调控miR-342-3p/PIK3R1轴。体内结果显示:si-PURPL组裸鼠肿瘤体积和质量较si-NC组下降(P<0.05);抑制miR-342-3p表达减弱了沉默LncRNA PURPL对体内肿瘤生长的抑制作用。结论:沉默LncRNA PURPL可抑制Huh-7细胞的恶性生物学行为,其机制可能与调控miR-342-3p/PIK3R1轴有关。

LINC01503通过miR-342-3p/IGF2R轴促进上皮性卵巢癌的进展

目的:探讨LINC01503在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达水平和生物学功能及其可能的作用机制。方法:收集2015年5月至2016年5月间在河北医科大学第四医院妇瘤科手术切除并经病理学确诊的85例EOC患者的肿瘤组织和输卵管组织。常规培养人EOC细胞A2780、SKOV3、OVCAR3和OV90及正常人卵巢上皮细胞IOSE80,将si-LINC01503、si-NC及miR-342-3p mimic、miR mimic NC分别转染至SKOV3和A2780细胞,分别作为si-LINC01503组、si-NC组、miR-342-3p mimic组和miR mimic NC组。q PCR法检测EOC组织和细胞中LINC01503的表达水平,Kaplan-Meier法分析LINC01503表达水平与患者生存的关系。双荧光素酶报告基因实验验证LINC01503/miR-342-3p/IGF2R轴相关分子间的靶向关系。平板克隆、划痕愈合和Transwell实验分别检测敲低LINC01503及转染miR-342-3p mimic对A2780和SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。WB法检测EOC细胞中LINC01503/miR-342-3p通路对IGF2R蛋白表达的影响。构建A2780细胞裸鼠移植瘤模型,观察敲低LINC01503对移植瘤生长的影响。结果:EOC组织和细胞中LINC01503表达水平分别显著高于输卵管组织和IOSE80细胞(均P<0.01),LINC01503高表达组患者术后PFS和OS均显著短于LINC01503低表达组患者(均P<0.01)。敲低LINC01503、转染miR-342-3p mimic均可抑制EOC细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01)。敲低LINC01503可下调IGF2R的表达(P<0.01),这一现象可通过转染miR-342-3p inhibitor挽救。敲低LINC01503可抑制A2780细胞裸鼠移植瘤的生长(P<0.01)。结论:在EOC组织和细胞中呈高表达的LINC01503与患者的不良预后密切相关,LINC01503可能通过吸附miR-342-3p影响IGF2R表达进而促进EOC的进展。

紫花牡荆素通过上调miR-342-3p抑制宫颈癌HeLa细胞糖酵解

目的:探讨紫花牡荆素对宫颈癌HeLa细胞miR-342-3p表达和糖酵解的影响,验证紫花牡荆素是否通过上调miR-342-3p表达抑制宫颈癌HeLa细胞糖酵解。方法:使用不同浓度(0,10,30,100 nmol/L)的紫花牡荆素处理HeLa细胞,采用紫花牡荆素(30 nmol/L)联合miR-342-3p模拟物或抑制物转染HeLa细胞,随后用实时荧光定量PCR分析HeLa细胞miR-342-3p的表达水平,通过测定相对葡萄糖消耗量和相对乳酸产物,分析紫花牡荆素及紫花牡荆素联合miR-342-3p模拟物或抑制物转染对宫颈癌HeLa细胞糖酵解的影响。结果:紫花牡荆素以浓度依赖方式上调HeLa细胞miR-342-3p表达水平,同时降低HeLa细胞的葡萄糖消耗量和抑制乳酸产生。此外,miR-342-3p模拟物协同紫花牡荆素抑制HeLa细胞的葡萄糖消耗和乳酸产生;相反miR-342-3p抑制物减弱紫花牡荆素上调miR-342-3p表达水平的作用和减弱紫花牡荆素抑制HeLa细胞的葡萄糖消耗和乳酸产生作用。结论:紫花牡荆素通过上调miR-342-3p表达水平抑制HeLa细胞糖酵解。

miR-2116-3p和miR-342-3p对肝细胞癌诊断及预后价值的研究

目的:探讨miR-342-3p和miR-2116-3p在肝细胞癌中的临床价值。方法:该研究纳入进行根治性手术切除的HCC患者的肿瘤组织和瘤旁肝组织样本共57例,采用qRT-PCR法进行了miR-2116-3p、miR-342-3p的表达量测定并分析。结果:miR-2116-3p和miR-342-3p在肝癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(P=0.034,P<0.001)。ROC曲线分析二者具有诊断效能(P<0.05)。miR-2116-3p表达量可以作为预测HCC患者不良预后的独立危险因素。结论:在本研究57例样本中,miR-2116-3p以及miR-342-3p在肝炎相关的HCC组织中显著降低,具有HCC诊断价值,为潜在新的标志物;miR-2116-3p为HCC不良预后独立预测因素。

乳腺癌手术前后血清VCAM-1、miR-342-3p水平变化及其临床价值

目的 探究血清VCAM-1、miR-342-3p在乳腺癌手术前后的表达水平及其临床意义。方法 选取乳腺癌患者100例,收集患者临床资料。ELISA法检测患者手术前后血清VCAM-1水平以及RT-PCR检测miR-342-3p水平。结果 不同肿瘤大小、TNM分期、病理类型和淋巴结转移情况的乳腺癌患者术前血清VCAM-1、miR-342-3p表达水平差异均有统计学意义(P<0.05);不同年龄患者的术前血清VCAM-1、miR-342-3p表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。乳腺癌患者术后1周、1个月和6个月血清VCAM-1、miR-342-3p表达水平与术前相比均明显降低(P<0.05)。术前VCAM-1高表达组16个月累积生存率为70.4%,低于低表达组的90.2%(P<0.05);术前miR-342-3p高表达组16个月累积生存率为73.5%,低于低表达组的88.3%(P<0.05)。结论 乳腺癌患者血清VCAM-1、miR-342-3p表达水平在乳腺癌手术后明显下降。术前患者血清VCAM-1、miR-342-3p水平与病理特征及预后显著相关,可作为判断手术治疗效果的重要指标。

穿心莲内酯通过下调miR-342-3p抑制结核分枝杆菌感染的巨噬细胞焦亡

【目的】探讨穿心莲内酯(Andro)是否通过下调miR-342-3p抑制结核分枝杆菌(Mtb)感染的巨噬细胞焦亡。【方法】构建Mtb H37Ra感染的小鼠RAW264.7巨噬细胞模型。实验分5组:Control组(对照组)为未作处理的巨噬细胞;Mtb组为经Mtb感染的巨噬细胞;Mtb+Andro组为巨噬细胞经Mtb感染后,给予Andro处理;Mtb+Andro+miR-NC组或Andro+Mtb+miR-342-3p组为巨噬细胞经Mtb和Andro联合处理后,分别转染miR-NC或miR-342-3p mimic。各组处理后,利用细胞流式术分析细胞凋亡,乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测LDH活性,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞焦亡相关的炎性因子白细胞介素(IL)-6和IL-18含量,荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定miR-342-3p表达,Western Blot法检测GSDMD、Caspase-1、核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧化酶1(HO-1)蛋白表达。【结果】与Control组比较,Mtb组和Mtb+Andro组的细胞凋亡率,LDH活力,IL-6、IL-18含量,miR-342-3p表达,GSDMD、Caspase-1、Nrf2及HO-1的蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与Mtb组比较,Mtb+Andro组的细胞凋亡率,LDH活力,IL-6、IL-18含量,miR-342-3p表达,GSDMD、Caspase-1、Nrf2及HO-1的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。另外,与Mtb+Andro+miR-NC组比较,Mtb+Andro+miR-342-3p组上述指标均升高(P<0.05)。【结论】Andro通过下调miR-342-3p表达,减少Mtb感染的巨噬细胞炎症和细胞焦亡,其分子机制与Nrf2/HO-1通路有关。

miR-342-3p对三阴性乳腺癌化疗敏感性的影响

目的:研究miR-342-3p对三阴性乳腺癌化疗敏感性的影响。方法:收集江苏省肿瘤医院乳腺外科2011年1月至2013年8月行术前化疗的三阴性乳腺癌病人32例,其中完全缓解(CR)5例,部分缓解(PR)27例,检测肿瘤组织中miR-342-3p的表达情况;应用脂质体转染方法,三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231转染has-miR-342-3p模拟物(mimic)和miR-342-3p抑制物(inhibitor),设立阴性对照(mim-NC)组和(inhi-NC)组。mimic组,mim-NC组,inhibitor组和inhi-NC组细胞株,分别加入浓度为2μmol/L的紫杉醇,顺铂及4μmol/L的阿霉素进行培养;应用CCK8法和流式细胞仪检测48 h后肿瘤细胞增殖率和凋亡的变化。结果:miRNA-342-3p在术前化疗后达到CR的三阴性乳腺癌组织中的表达明显高于PR的三阴性乳腺癌组织(P<0.05)。Mimic组细胞株与紫杉醇,顺铂作用48 h后肿瘤细胞增殖率低于mim-NC组,凋亡率高于mim-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。Inhibitor组细胞株与紫杉醇,顺铂作用48 h后,肿瘤细胞增殖率高于inhiNC组,凋亡率低于inhi-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。但与阿霉素作用后细胞增殖率和凋亡率在mimic组与mimNC组,inhibitor组与inhi-NC组,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-342-3p高表达的三阴性乳腺癌对化疗药物反应更敏感,miR-342-3p能调控乳腺癌细胞株MDA-MB-231对紫杉醇和顺铂的化疗敏感性,但miR-342-3p不影响MDAMB-231细胞株对阿霉素的化疗敏感性。

miR-342-3p在乳腺癌组织中的表达及意义

目的:研究miR-342-3p在乳腺癌中的表达及与临床病理联系。方法:收集2008年1月～2012年8月乳腺癌手术患者组织标本共85例,使用实时荧光定量PCR检测miR-342-3p在乳腺癌组织中的表达情况,应用免疫组化的方法检测乳腺癌组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、Her-2及P53的表达。结果:miRNA-342-3p在Lumina型乳腺癌组织中高表达,在Her-2高表达型乳腺癌次之,在三阴性乳腺癌组织中表达最低,差异有统计学意义(P<0.05);miRNA-342-3p的表达与不同ER、Her-2及P53的表达相关,差异有统计学意义(P<0.05),在不同PR状态、不同年龄组、有无淋巴结转移及与肿瘤大小、组织分级和病理分期间,差异无统计学意义(P>0.05),癌与癌旁组织间无显著性差异(P>0.05)。结论:miR-342-3p在不同乳腺癌分子亚型中表达存在差异,可能成为乳腺癌尤其是三阴性乳腺癌治疗的新靶点。

积雪草苷调控miR-342-5p/AQP3轴保护IL-1β诱导的软骨细胞损伤

目的探讨积雪草苷(Ass)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及作用机制。方法不同浓度的Ass作用IL-1β诱导软骨细胞24 h,流式细胞仪检测细胞凋亡,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-342-5p和水通道蛋白3(AQP3)mRNA表达水平,Western Blot法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)和AQP3蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-342-5p与AQP3靶向关系。转染miR-342-5p抑制剂或AQP3过表达载体至软骨细胞,上述相同方法检测抑制miR-342-5p表达或AQP3过表达对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及IL-6和TNF-α表达的影响。结果Ass可抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡率、Bax蛋白、IL-6和TNF-α表达及miR-342-5p表达(P<0.05),促进Bcl-2蛋白、AQP3 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。miR-342-5p在软骨细胞中负调控AQP3表达。抑制miR-342-5p或AQP3过表达后,IL-1β诱导的软骨细胞凋亡率、Bax蛋白、IL-6和TNF-α表达降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。抑制AQP3表达逆转了抑制miR-342-5p对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡、Bax和Bcl-2蛋白及IL-6和TNF-α表达的影响。结论Ass可抑制IL-1β诱导软骨细胞凋亡和炎症反应,其可能通过调控miR-342-5p/AQP3保护软骨细胞损伤。

miR-342-3p与女性相关疾病的研究进展

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性的,长度为19~25 nt的单链非编码RNA,通过完全和(或)部分互补的原则结合到靶基因3’UTRs或者直接剪切靶基因mRNA,以降解或抑制mRNA翻译的方式调控靶基因的表达。miR-342-3p位于人染色体14q32处,是最近研究较多的miRNA,其主要作为抑癌基因发挥抑制肿瘤生长、转移的作用。现有的研究表明,miR-342-3p在肺癌、前列腺癌、骨肉瘤等多种肿瘤中发挥作用,且在乳腺癌、子痫前期、卵巢早衰等多种女性相关疾病中发挥着重要功能。本文综述了miR-342-3p在女性相关疾病中的生物学功能及作用靶点,为miR-342-3p的临床应用提供理论依据。

荧光定量聚合酶链反应检测miR-342-3p及靶基因EVL在多发性骨髓瘤细胞中的表达

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者中miR-342-3p及靶基因EVL的表达情况及意义。方法建立应用颈环式结构引物反转录扩增微小RNA(miRNA)的反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 ,并采用荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)对miR-342-3p及靶基因EVL的表达进行定量分析。结果①5例MM患者中miR-342-3p相对表达量为7.6±5.7,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。②MM细胞株U266中miR-342-3p相对表达量为7.0±3.2,较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。③5例MM患者中EVL基因相对表达量为6.3±3.2,较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。④MM细胞株U266中EVL基因相对表达量为4.3±1.1,较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MM存在miR-342-3p及EVL基因表达异常,可能为研究MM发病机制提供思路。

hsa-miR-342-3p 生物信息学分析

通过生物信息学方法预测hsa-miR-342-3p靶基因及其功能机制。检索Pub Med有关hsa-miR-342-3p的研究报道并进行功能分析;检索miRBase获取hsa-miR-342-3p序列;通过Target Scan,Pictar和PITA数据库预测靶基因并取交集,对其进行组织和疾病特异性表达谱分析、功能富集分析(GO enrichment analysis)、信号转导通路富集分析(Pathway enrichment analysis)和蛋白质相互作用网络分析(PPI analysis)。结果发现:hsa-miR-342-3p序列在多物种间具有高度保守性;hsa-miR-342-3p在肾脏组织和急性淋巴细胞性白血病、乳腺癌疾病中表达水平较高(RPM≥1 000);预测得到14个hsa-miR-342-3p靶基因;靶基因分子功能分别富集于转化生长因子活性、DNA结合和蛋白激酶激活等(P<0.05);hsa-miR-342-3p靶基因GO生物学过程主要集中于大分子代谢抑制,肺部组织发育、呼吸系统发育及管状组织发育建成(P<0.05);细胞信号通路主要富集于TGF-Beta信号通路、细胞因子、受体作用信号通路及前列腺疾病信号通路(P<0.01)。hsa-miR-342-3p在体内分布广泛,预测的靶向TGF-Beta信号通路可能在疾病发生中发挥重要调控作用,是具有潜在研究价值的生物学靶标。

miR-342-3p对乳腺癌化疗敏感性的影响

目的:研究miR-342-3p对乳腺癌化疗敏感性的影响。方法:检测乳腺癌细胞株MCF-7、SKBr3和MDA-MB-231中miR-342-3p的表达。应用脂质体转染方法,转染hsa-miR-342-3p模拟物到低表达miR-342-3p的乳腺癌细胞株(mimic转染组),同时设立阴性对照(mim-NC转染组);转染miR-342-3p抑制物到高表达miR-342-3p的乳腺癌细胞株(inhibitor转染组),同时设立阴性对照(inhi-NC转染组)。mimic转染组、mim-NC转染组、inhibitor转染组和inhi-NC转染组细胞,分别加入浓度为2μmol/L的紫杉醇、顺铂及4μmol/L的阿霉素的进行培养,应用CCK8法检测药物作用48 h后细胞增殖率的变化。结果:以SKBr3为参照,miR-243-3p在MCF-7细胞中的相对表达倍数是126.000,在MDA-MB-231细胞中的相对表达倍数是0.017。mimic转染组细胞与紫杉醇、顺铂孵育48 h后,肿瘤细胞增殖率低于mim-NC转染组,差异有统计学意义(P<0.05),但与阿霉素孵育后细胞增殖率与mim-NC转染组差异无统计学意义(P>0.05);inhibitor转染组细胞与紫杉醇、顺铂和阿霉素孵育48 h后,肿瘤细胞的增殖率高于inhi-NC转染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-342-3p能调控乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7对紫杉醇和顺铂的化疗敏感性,但提高miR-342-3p表达不能增加MDA-MB-231细胞对阿霉素的化疗敏感性,降低miR-342-3p的表达却可以减弱MCF-7细胞对阿霉素的化疗敏感性。

miR-342-3p有助于人脂肪来源间充质干细胞成脂分化过程

目的探讨miR-342-3p对人脂肪来源的间充质干细胞(h AMSCs)向成脂分化的影响。方法利用RT-qPCR在诱导h AMSCs成脂分化过程中的不同时期检测miR-342-3p的表达。分别利用miR-342-3p基因模拟物及抑制物转染h AMSCs,诱导成脂分化后用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,RT-qPCR检测PPARγ、C/EBPα和LPL mRNA的表达,Western blot检测PPARγ、C/EBPα和LPL蛋白的表达。结果 miR-342-3p在h AMSCs成脂分化的过程中表达升高,miR-342-3p模拟物转染组脂肪滴的形成数量增加,PPARγ、C/EBPα和LPL的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0. 05)。miR-342-3p抑制物转染组脂肪滴的形成数量减少,PPARγ、C/EBPα和LPL的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0. 05)。结论 miR-342-3p能够正向调节h AMSCs成脂分化。

miR-342-3p抑制SM22α启动子的转录活性

目的探究miR-342-3p是否通过作用于SM22α启动子,从转录水平调控SM22α的表达。方法通过软件RNAhybrid分析发现,大鼠SM22α启动子中存在一个miR-342-3p的识别位点。将miR-342-3p mimics与报告基因载体p GL3-SM22α-Promoter共转染293A细胞,通过检测荧光素酶活性来分析miR-342-3p对SM22α启动子转录活性的影响。将miR-342-3p mimics转染血管平滑肌细胞,采用q RT-PCR和Western blot分别检测SM22αm RNA和蛋白质水平,分析miR-342-3p对血管平滑肌细胞中SM22α表达的影响。结果与miR-control相比,miR-342-3p能够使SM22α启动子转录活性降低(0.54±0.03)倍,差异有统计学意义(P<0.05);与miR-control相比,miR-342-3p能够使血管平滑肌细胞中SM22αm RNA水平降低(0.45±0.04)倍,SM22α蛋白质水平下降(0.41±0.05)倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-342-3p通过抑制SM22α启动子活性,从转录水平降低SM22α的表达,为miRNA调控血管平滑肌细胞表型转化研究提供了新角度。

2型糖尿病肾病患者血清miR-27b-3p、miR-342-3p表达特点及临床意义

目的探讨2型糖尿病肾病(DN)患者血清miR-27b-3p、miR-342-3p表达特点及其对DN的诊断价值。方法将157例2型糖尿病患者根据尿白蛋白与肌酐比率(UACR)分为正常白蛋白尿(NA)组49例、微量白蛋白尿(MA)组41例、大量白蛋白尿(DN)组67例。收集临床资料,采用实时定量聚合酶链反应检测血清miR-27b-3p、miR-342-3p表达,全自动生化分析仪检测血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr),双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测尿液Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ)。分析DN发病的影响因素以及miR-27b-3p、miR-342-3p对DN的诊断价值。结果与NA组比较,DN组和MA组HbA1c、UACR、尿Ⅳ-C、尿LN、尿PCⅢ水平均增加,而miR-27b-3p、miR-342-3p表达均降低(P<0.05),DN组BUN、Scr水平增加、估算肾小球滤过率(eGFR)水平降低(P<0.05)。较高水平的尿PCⅢ是DN的危险因素,而较高水平的miR-27b-3p、miR-342-3p、eGFR是DN保护因素(P<0.05)。miR-27b-3p、miR-342-3p表达与eGFR呈正相关(r分别为0.647、0.661,P<0.05),与尿PCⅢ呈负相关(r分别为-0.739、-0.766,P<0.05)。联合eGFR、尿PCⅢ、miR-27b-3p、miR-342-3p诊断DN的AUC高于单独eGFR、尿PCⅢ、miR-27b-3p、miR-342-3p(Z分别为5.631、5.794、6.715、4.577,P<0.05)。结论血清miR-27b-3p、miR-342-3p表达降低与DN患者肾功能下降和肾脏疾病发生均有关,可作为DN辅助诊断的生物学指标。

miR-342-3p在鼻咽癌中的表达及意义

目的:探讨miR-342-3p在鼻咽癌(NPC)中的表达及其意义。方法:miRNA芯片检测人永生化鼻咽上皮细胞系NP69和低分化NPC细胞CNE2中miRNA的差异表达;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测NPC组织中miR-342-3p的表达;GO and Pathway分析miR-342-3p在NPC发生发展中可能涉及的功能及其参与的信号通路。结果:miRNA芯片结果表明,miR-342-3p在NPC细胞CNE2中低表达,qPCR结果进一步证实miR-342-3p在NPC组织中低表达;GO分析表明,具有显著差异的10个功能中,与NPC发生发展关系较为密切的是miR-342-3p。Pathway分析显示,miR-342-3p与丝裂原应激活化蛋白(MAPK)信号通路相关性较大。结论:miR-342-3p的低表达可能与NPC的发生和发展相关。

MiR-342-3p在类风湿关节炎患者中低表达并促进滑膜成纤维细胞的炎症和迁移

目的探究类风湿关节炎(RA)患者miR-342-3p的表达,及其对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞细胞(RA-FLS)炎症和迁移的影响。方法收集正常人30例、RA患者50例外周血单个核细胞(PBMCs),检测PBMCs中miR-342-3p的表达,并研究其与临床指标RF、ESR、anti-CCP、hs-CRP、C3、DAS-28、SAS、SDS的相关性。建立RA-FLS细胞系,20 ng/mL TNF-α刺激细胞,构建mimics-miR-342-3p和inhibitor-miR-342-3p及空转组,转染至RA-FLS中;实验分为6组:RA-FLS组,TNF-α+RA-FLS组,mimics-NC组,mimics-miR-342-3p组,inhibitor-NC组和inhibitor-miR-342-3p组;采用定量实时聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-342-3p的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。CCK8检测细胞活力。Transwell小室检测滑膜细胞的迁移。结果与正常组相比,RA患者miR-342-3p表达显著降低(P<0.05),ROC曲线结果显示AUC 97.53%。miR-342-3p与RF(r=-0.321)、ESR(r=-0.284)、anti-CCP(r=-0.355)、hs-CRP(r=-0.320)、C3(r=-0.294)、DAS-28(r=-0.395)、SAS(r=-0.366)、SDS(r=-0.397)呈显著负相关(P<0.05)。miR-342-3p与anti-CCP、DAS-28、SDS、SAS的升高有较强的关联,规则支持均大于85%、置信度均大于88%和提升均大于1;与RA-FLS组相比,TNF-α刺激后细胞活力显著升高(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著升高,IL-10的表达显著降低(P<0.05);与mimics-NC组相比,mimics-miR-342-3p组细胞活力显著降低(P<0.05);与inhibitor-NC组相比,inhibitor-miR-342-3p组细胞活力显著升高(P<0.05);与mimics-NC组相比,mimics-miR-342-3p组IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著降低,IL-10的表达显著升高(P<0.05);与inhibitor-NC组相比,inhibitor-miR-342-3p组IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著升高,IL-10的表达显著降低(P<0.05)。结论miR-342-3p在RA患者中表达降低,通过促进RA-FLS炎症和迁移,参与RA的发病机制。

慢病毒载体介导的miR-342-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移的影响研究

目的探讨miR-342-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移的影响及分子机制。方法用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌组织及细胞中miR-342-3p和NUCKS1的表达水平;构建慢病毒介导的miR-342-3p过表达载体(LV-miR-342-3p),将LV-miR-342-3p和阴性对照空病毒载体(LV-NC)转染至肺癌细胞A549、H1299中,采用蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达,双荧光素酶报告实验检测miR-342-3p和NUCKS1的靶向关系,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活力,Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果肺癌组织及肺癌细胞A549和H1299中miR-342-3p表达水平降低,NUCKS1表达水平升高(P<0.05)。miR-342-3p靶向调控NUCKS1。miR-342-3p过表达后,细胞活力降低,迁移和侵袭细胞数降低,NUCKS1表达水平降低(P<0.05)。结论miR-342-3p通过靶向下调NUCKS1抑制非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移。

微RNA-342-3p/末端尿苷酰转移酶1/凝血酶敏感素-2通路在胰腺导管腺癌中的作用及机制

目的探讨微RNA(miR)-342-3p/末端尿苷酰转移酶1(TUT1)/凝血酶敏感素-2(THBS2)通路在胰腺导管腺癌中的作用及miR-342-3p、TUT1、THBS2 mRNA表达与患者临床病理学参数的关系。方法选择2008年5月至2021年3月在遂宁市中心医院行根治性手术切除的胰腺导管腺癌标本(n=80)和对应癌旁正常组织标本(n=20)为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测胰腺导管腺癌组织和癌旁正常组织中miR-342-3p、TUT1、THBS2 mRNA的表达。将对数生长期人胰腺导管腺癌细胞株PANC-1细胞分为对照组(转染miR-NC)、miR-342-3p过表达组(转染miR-342-3p mimic)、miR-342-3p抑制剂组(转染miR-342-3p inhibitor)、Vector组(转染pCS4-HA vectors)、TUT1组(转染pcDNA3-Flag-TUT1)、阴性对照组(转染sh-NC慢病毒载体)、TUT1沉默组(转染pGCshL-TUT1载体)、miR-342-3p过表达+TUT1组(同时转染miR-342-3p mimic和TUT1)、miR-342-3p过表达+THBS2组(同时转染miR-342-3p mimic和THBS2)、TUT1+THBS2组(同时转染pcDNA3-Flag-TUT1和THBS2)。采用细胞计数试剂盒-8检测10组细胞的增殖能力,采用流式细胞术检测10组细胞的凋亡情况,采用双荧光素酶报告系统检测miR-342-3p与TUT1的靶向关系,采用Western blot法检测对照组、miR-342-3p过表达组和miR-342-3p抑制剂组PANC-1细胞中TUT1、THBS2蛋白的表达。结果胰腺导管腺癌组织中miR-342-3p TUT1、THBS2 mRNA的相对表达量显著低于癌旁正常组织(P<0.05)。不同年龄、不同肿瘤大小、淋巴结是否转移和不同肿瘤分期患者癌组织中miR-342-3p及TUT1、THBS2 mRNA的表达比较差异均无统计学意义(P>0.05);高分化癌组织中miR-342-3p及TUT1、THBS2 mRNA的表达显著高于中+低分化癌组织(P<0.05)。培养0 h时,各组PANC-1细胞的增殖能力比较差异均无统计学意义(P>0.05)。培养24、48、72 h时,TUT1组细胞的增殖能力均显著低于Vecort组,细胞的凋亡率显著高于Vecort组(P<0.05)。培养24、48、72 h时,TUT1沉默组细胞的增殖能力显著高于阴性对照组,细胞凋亡率显著低于阴性对照组(P<0.05)。培养24、48、72 h时,miR-342-3p抑制剂组的细胞增殖能力显著高于对照组(P<0.05),miR-342-3p过表达组的细胞增殖能力显著低于对照组(P<0.05)。培养24 h时,miR-342-3p过表达+TUT1组、miR-342-3p过表达+THBS2组、TUT1+THBS2组与miR-342-3p过表达组的细胞增殖能力比较差异均无统计学意义(P>0.05)。培养48、72 h时,miR-342-3p过表达+TUT1组、miR-342-3p过表达+THBS2组、TUT1+THBS2组的细胞增殖能力均显著低于miR-342-3p过表达组(P<0.05)。miR-342-3p抑制剂组细胞的凋亡率显著低于对照组(P<0.05),miR-342-3p过表达组细胞的凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。miR-342-3p过表达+TUT1组、miR-342-3p过表达+THBS2组、TUT1+THBS2组细胞的凋亡率显著高于miR-342-3p过表达组(P<0.05)。miR-342-3p过表达组细胞中野生型TUT1报告基因的荧光素酶活性显著高于对照组(P<0.05),突变型TUT1报告基因的荧光素酶活性与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-342-3p过表达组细胞中TUT1和THBS2蛋白的相对表达量显著高于对照组(P<0.05),miR-342-3p抑制剂组细胞中TUT1和THBS2蛋白的相对表达量显著低于对照组(P<0.05)。结论激活miR-342-3p/TUT1/THBS2通路可抑制PANC-1细胞增殖,促进其凋亡,进而抑制胰腺导管腺癌的发展,miR-342-3p/TUT1/THBS2通路有望成为诊治胰腺癌的潜在靶点。