miR-150-5p、miR-135b在糖尿病肾病患者中的表达及意义

目的探讨外周血miR-150-5p、miR-135b水平与糖尿病肾病(DN)患者尿白蛋白排泄率(UAER)、预后的关系。方法采用前瞻性研究方法,选取2019年1月至2021年10月延安大学附属医院收治的85例DN患者作为DN组[男46例,女39例,年龄(46.28±4.41)岁,2型糖尿病(T2DM)病程(7.24±2.31)年],另纳入76例单纯T2DM患者作为T2DM组[男40例,女36例,年龄(44.95±6.13)岁,T2DM病程(6.98±3.28)年],80例健康体检者作为对照组[男43例,女37例,年龄(45.74±5.68)岁]。收集3组患者临床资料及外周血miR-150-5p、miR-135b水平,Spearman分析各指标与UAER相关性,绘制受试者操作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC),分析各指标预后的预测效能,采用相对危险度(RR)及95%置信区间(CI)分析各指标对预后的影响。结果DN组外周血miR-150-5p、miR-135b水平>T2DM组>对照组[(3.36±0.68)比(1.03±0.62)比(0.78±0.21)、(3.96±0.51)比(1.24±0.48)比(0.66±0.12)],差异均有统计学意义(F=560.11、1519.26,均P<0.05);DN组UAER>300 mg/24 h患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平>UAER 30~300 mg/24 h患者>UAER<30 mg/24 h患者[(4.10±0.92)比(3.42±0.64)比(2.73±0.51)、(5.40±0.87)比(3.87±0.61)比(3.02±0.49)],差异均有统计学意义(F=23.53、78.25,均P<0.05);DN患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平与UREA呈正相关(r=0.783、0.835,均P<0.05);随访12个月,15例发生终末期肾病(ESRD),发生ESRD患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平均高于未发生ESRD患者[(4.41±0.55)比(3.14±0.38)、(4.67±0.61)比(3.81±0.42)],差异均有统计学意义(t=10.67、6.53,均P<0.05);外周血miR-150-5p、miR-135b、联合预测DN并发ESRD的AUC分别为0.733、0.829、0.944。外周血miR-150-5p、miR-135b高水平患者并发ESRD的RR分别为低水平的3.619倍、10.889倍,其95%CI分别为1.105~11.856、1.503~78.872。结论外周血miR-150-5p、miR-135b水平与DN患者UAER呈正相关,联合检测可作为预测DN并发ESRD的重要辅助手段,为临床诊治提供可靠数据支持。

乳腺癌患者血清微小RNA-135b、微小RNA-148a-3p、微小RNA-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果相关性研究

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性。方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组。比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平。采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性。乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析。血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P<0.05)。耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P<0.05)。结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高。

环状RNA GRIN2B通过调控微小RNA-135b对食管癌细胞增殖和侵袭的影响实验研究

目的:探讨环状RNA GRIN2B(circ-GRIN2B)对食管癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法:采用RT-qPCR检测circ-GRIN2B在食管癌细胞株Eca109、TE-13、KYSE30、OE33、EC9706和正常食管上皮细胞HET-1A中的表达,筛选circ-GRIN2B表达最低的细胞株进行后续实验。在食管癌细胞中转染circ-GRIN2B过表达质粒(circ-GRIN2B组)和空载对照质粒(NC组)。采用平板克隆实验和Transwell实验检测circ-GRIN2B对食管癌细胞增殖和侵袭的影响。采用circRNADb软件预测circ-GRIN2B与微小RNA-135b(miR-135b)的结合位点并用双荧光素酶报告基因验证两者的靶向关系。采用RT-qPCR检测两组miR-135b表达。采用Western blot检测细胞增殖相关蛋白[周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)、周期素C(Cyclin C)]和侵袭相关蛋白[纤维结合蛋白(FN)、转录因子8(ZLF8)、叉头盒蛋白C2(FOXC2)]表达。结果:与HET-1A细胞比较,circ-GRIN2B在细胞株Eca109、TE-13、KYSE30、OE33、EC9706表达降低,且在EC9706细胞中表达量最低(均P<0.05)。circ-GRIN2B组circ-GR IN2B表达量高于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞集落数量少于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞侵袭数目小于NC组(P<0.01)。miR-135b是circ-GRIN2B的靶基因。circ-GRIN2B组miR-135b表达量低于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞增殖相关蛋白和侵袭相关蛋白表达水平较NC组降低(均P<0.05)。结论:circ-GRIN2B在食管癌细胞中低表达,其可能通过下调miR-135b表达抑制食管癌细胞的增殖和侵袭。

血清miR-135b、LZST1表达水平与晚期非小细胞肺癌患者预后的相关性

目的探究晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、亮氨酸拉链肿瘤抑制基因1(LZST1)表达水平及与其预后的相关性。方法收集62例晚期NSCLC患者作为观察组。另外收集同时期94例良性肺部病变患者作为对照组。比较观察组与对照组血清miR-135b、LZST1表达水平差异,比较不同预后患者血清miR-135b、LZST1表达水平差异,分析晚期NSCLC患者血清miR-135b、LZST1表达水平与其预后的关系,miR-135b、LZST1对晚期NSCLC患者预后不良的预测价值。结果两组性别、年龄、体质量指数比较差异不显著,P>0.05。观察组血清miR-135b表达水平高于对照组,LZST1低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。死亡患者血清miR-135b表达水平高于存活患者,LZST1水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-135b与晚期NSCLC患者死亡呈显著正相关关系,LZST1与晚期NSCLC患者死亡呈负相关关系,miR-135b与LZST1表达呈负相关关系,P<0.05。计算约登指数,获取最大约登指数相对应的临界值。4.065为miR-135b预测晚期NSCLC患者死亡的阈值,灵敏度84.00%,特异度81.10%,0.670为LZST1预测晚期NSCLC患者死亡的阈值,灵敏度68.00%,特异度78.40%。miR-135b、LZST1以及两者联合的AUC面积分别为0.792、0.742以及0.850,两者联合的AUC面积最大,灵敏度为88.00%,特异度为70.30%,预测效能较好。结论晚期NSCLC患者血清miR-135b表达水平异常升高,LZST1显著降低,miR-135b高表达、LZST1低表达与患者预后不良相关,miR-135b与LZST1呈负相关关系。miR-135b联合LZST1对晚期NSCLC患者死亡的预测效能较高。

血清miR-200b、miR-135b表达对急性缺血性脑卒中患者脑侧支循环状态及认知功能障碍评估的价值

目的探讨血清微小核糖核酸-200b(miR-200b)、miR-135b表达对急性缺血性脑卒中(AIS)患者脑侧支循环状态及认知功能障碍评估的价值。方法选取海军军医大学第一附属医院2022年3月至2023年3月收治的153例AIS患者作为研究对象,依据数字减影血管造影(DSA)侧支循环状态评分将其分为侧支循环良好组(n=81)和侧支循环不良组(n=72),观察血清miR-200b、miR-135b表达水平。并参照蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评估所有患者认知功能状态,依据是否存在认知功能障碍将患者分为非障碍组(n=74)及障碍组(n=79),观察不同认知功能状态患者血清miR-200b、miR-135b水平变化,通过Pearson相关性分析血清miR-200b、miR-135b表达水平与AIS患者脑侧支循环状态及认知功能障碍的相关性。结果侧支循环良好组患者血清miR-200b、miR-135b表达水平及MoCA评分均高于侧支循环不良组患者(P<0.05)。非障碍组患者血清miR-200b、miR-135b表达水平均高于障碍组患者(P<0.05)。Pearson相关性分析显示:血清miR-200b、miR-135b表达水平与AIS患者脑侧支循环状态呈正相关(r=0.746、0.724,P<0.05);与AIS患者认知功能状态呈正相关(r=0.721、0.703,P<0.05)。ROC曲线分析显示:miR-200b预测不良脑侧支循环发生的约登指数(0.685)最大时对应截断值为0.64,曲线下面积为0.853,预测敏感度为83.33%,特异度为85.19%;miR-135b预测不良脑侧支循环发生的约登指数(0.650)最大时对应截断值为1.16,曲线下面积为0.833,预测敏感度为84.72%,特异度为80.25%。miR-200b预测认知功能障碍发生的约登指数(0.595)最大时对应截断值为0.71,曲线下面积为0.827,预测敏感度为79.75%,特异度为79.73%;miR-135b预测认知功能障碍发生的约登指数(0.488)最大时对应截断值为1.18,曲线下面积为0.800,预测敏感度为77.22%,特异度为71.62%结论血清miR-200b、miR-135b在不良脑侧支循环状态及认知功能障碍的AIS患者中表达水平较低,两者与AIS患者脑侧支循环状态及认知功能状态呈正相关,对不良脑侧支循环及认知功能障碍发生的预测价值较高。

参麦地黄汤联合缬沙坦对糖尿病肾病患者氧化应激、血管内皮功能及血清miR-133b、miR-135b的影响

目的探究参麦地黄汤联合缬沙坦对糖尿病肾病患者氧化应激、血管内皮功能及血清miR-133b、miR-135b的影响。方法选取2017年1月至2020年10月于江阴市中医院门诊就诊的90例糖尿病肾病患者为研究对象,依据随机数字表法将其分为对照组、观察组各45例。对照组采用缬沙坦分散片口服治疗,观察组在对照组治疗基础上加服参麦地黄汤。2组疗程均为3个月,治疗前后评估2组患者中医证候积分变化,检测2组患者空腹血糖(FPG)和血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR)、氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)]、血管内皮功能指标[可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)及内皮素-1(ET-1)]及miR-133b、miR-135b变化。结果治疗后,2组患者中医症候积分、FPG、SCr、BUN、UACR及MDA、sICAM-1、ET-1、miR-133b、miR-135b表达水平均显著下降,SOD活性明显升高(P<0.01),观察组优于对照组(P<0.01)。观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.01)。结论参麦地黄汤联合缬沙坦可有效改善糖尿病肾病临床症状,可能与其调控机体氧化应激、血管内皮功能、血清miR-133b、miR-135b水平有关。

miR-135a和miR-135b表达水平在子宫内膜癌预后评估中的价值

目的分析血清miR-135a和miR-135b表达水平预测子宫内膜癌预后的价值。方法选择2018年1月至2019年12月在该院接受子宫内膜癌手术的115例子宫内膜癌患者为子宫内膜癌组。选择同期该院45例体检健康女性为对照组。比较子宫内膜癌组与对照组、子宫内膜癌患者治疗前后、不同特征和不同预后情况子宫内膜癌患者血清miR-135a和miR-135b表达水平,分析血清miR-135a和miR-135b表达水平预测两年内子宫内膜癌患者出现预后不良的价值。结果入院时,子宫内膜癌组血清miR-135a表达水平明显低于对照组,血清miR-135b表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);子宫内膜癌组术后7 d血清miR-135a表达水平较入院时明显升高,miR-135b表达水平较入院时明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。低分化、Ⅲ~Ⅳ期和有淋巴结转移的子宫内膜癌患者血清miR-135a表达水平明显低于中高分化、Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移子宫内膜癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);而低分化、Ⅲ~Ⅳ期和有淋巴结转移的子宫内膜癌患者血清miR-135b表达水平明显高于中高分化、Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移的子宫内膜癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良子宫内膜癌患者血清miR-135a表达水平明显低于预后良好子宫内膜癌患者,而预后不良子宫内膜癌患者血清miR-135b表达水平明显高于预后良好子宫内膜癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-135a和miR-135b联合检测预测子宫内膜癌预后不良的灵敏度为92.3%,特异度为83.1%,曲线下面积(AUC)为0.932,AUC明显大于miR-135a和miR-135b单独检测(P<0.05)。子宫内膜癌患者血清miR-135a表达水平与miR-135b表达水平呈负相关(r=-0.721,P<0.01)。结论miR-135a和miR-135b是子宫内膜癌预后的潜在预测指标。

心房颤动患者血清miR-29b和miR-135b水平表达与心房纤维化程度及射频消融术后复发的相关性研究

目的 观察心房颤动(atrial fibrillation,AF)患者血清微小核糖核酸(micro RNA,miRNA,miR)-29b和miR-135b的表达变化,探讨二者表达与心房纤维化程度及射频消融术后复发的关系。方法 选取2019年7月~2022年7月于沧州市人民医院心血管内科住院诊治并接受射频消融术治疗的AF患者(病例组,n=158)以及同期体检的健康者(对照组,n=126)。收集AF患者的一般临床资料及生化指标,采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-29b和miR-135b相对表达水平。采用多因素Logistic回归分析AF患者术后复发的影响因素;绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清miR-29b和miR-135b水平对AF患者术后复发的预测价值,曲线下面积(area under the curve,AUC)比较采用Z检验。结果 与对照组比较,病例组血清miR-29b(0.64±0.13 vs 1.04±0.24)和mi R-135b水平(0.45±0.08 vs 1.00±0.14)均降低,差异均有统计学意义(t=17.916,41.604,均P<0.05);与低纤维化组比较,高纤维化组血清miR-29b(0.51±0.11 vs 0.76±0.15)和miR-135b水平(0.34±0.07 vs 0.55±0.09)均降低,差异有统计学意义(t=11.896,16.314,均P<0.05)。与未复发组比较,复发组左心房内径(45.34±3.56 mm vs35.23±2.89 mm)和血清尿酸(uric acid,UA)水平(478.15±68.45μmol/L vs 421.75±61.76μmol/L)均升高,血清miR-29b(0.54±0.12 vs 0.72±0.14)和miR-135b水平(0.36±0.06 vs 0.53±0.10)均降低,差异有统计学意义(t=19.702,5.441,8.584,12.642,均P<0.05)。Logistic回归分析显示,左心房直径(OR=1.603,95%CI:1.054~2.439),UA(OR=1.527,95%CI:1.202~1.939),miR-29b(OR=0.657,95%CI:0.515~0.835)和miR-135b(OR=0.318,95%CI:0.141~0.719)水平是影响AF患者术后复发的影响因素(均P<0.05);血清miR-29b和miR-135b预测AF患者射频消融术后复发的AUC分别为0.843(95%CI:0.783~0.902),0.901(95%CI:0.852~0.949),最佳阈值分别为0.43和0.64,灵敏度分别为65.1%和80.2%,特异度分别为88.9%和91.7%,两者联合预测术后复发的AUC为0.947(95%CI:0.914~0.981),灵敏度和特异度分别为90.75%,83.1%。结论 血清miR-29b和miR-135b水平异常表达与AF患者心房纤维化程度及射频消融术后复发有关,二者联合预测AF患者术后复发具有一定的价值。

miR-135b靶向SIRT1表达对H_(2)O_(2)诱导神经细胞损伤增殖、凋亡的影响及作用机制

目的探讨miR-135b靶向沉默信息调节因子1(SIRT1)表达对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导神经细胞损伤增殖和凋亡的影响及作用机制。方法将HT22细胞分为对照组(正常培养的HT22细胞)、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)抑制剂阴性对照组、H_(2)O_(2)+miR-135b抑制剂组(转染miR-135b抑制剂)、H_(2)O_(2)+SIRT1过表达组(转染SIRT1过表达载体)、H_(2)O_(2)+空载体对照组(转染空载体)、H_(2)O_(2)+miR-135b抑制剂阴性对照组(转染miR-135b抑制剂阴性对照组)、H_(2)O_(2)+miR-135b抑制剂+SIRT1抑制剂组(转染miR-135b抑制剂和SIRT1抑制剂),各组均在转染后经200μmol/L的H_(2)O_(2)作用24 h。采用Western Blot检测miR-135b、SIRT1信使RNA(mRNA)、SIRT1蛋白表达水平,MTT、流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡情况,双荧光素酶报告基因实验验证miR-135b与SIRT1之间的调控关系。结果与H_(2)O_(2)抑制剂阴性对照组相比,H_(2)O_(2)+miR-135b抑制组miR-135b水平显著降低(0.41±0.05比2.33±0.16)(P<0.05),存活率显著升高[(74.1±5.6)%比(48.3±4.1)%](P<0.05),凋亡率显著降低[(15.4±1.3)%比(33.4±2.6)%](P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示,SIRT1野生型质粒(SIRT1-WT)+mimic-阴性对照组、SIRT1-WT+mimic组、SIRT1突变型质粒(SIRT1-MUT)+mimic-阴性对照组、SIRT1-MUT+mimic组双荧光素酶活性分别为1.15±0.09、0.56±0.03、1.08±0.08、1.12±0.10,各组荧光素酶活性比较差异有统计学意义(P<0.01),其中SIRT1-WT+mimic组荧光素酶活性显著低于SIRT1-WT+mimic-阴性对照组(P<0.05)。miR-135b inhibitor组SIRT1 mRNA、SIRT1蛋白水平高于inhibitor-control组(P<0.05),miR-135b mimic组SIRT1 mRNA、SIRT1蛋白水平低于mimic-control组(P<0.05)。与H_(2)O_(2)+空载体对照组相比,H_(2)O_(2)+SIRT1过表达组SIRT1 mRNA和蛋白水平显著升高(1.15±0.06比0.54±0.03、1.13±0.11比0.57±0.04)(P<0.05),存活率显著升高[(75.3±5.5)%比(45.4±3.4)%](P<0.05),凋亡率显著降低[(15.5±1.2)%比(39.4±2.8)%](P<0.05)。与H_(2)O_(2)+miR-135b抑制剂阴性对照组相比,H_(2)O_(2)+miR-135b抑制剂+SIRT1抑制剂组SIRT1蛋白水平显著降低(0.61±0.04比1.12±0.07)(P<0.05),存活率显著降低[(48.3±4.4)%比(69.2±5.4)%](P<0.05),凋亡率显著升高[(36.2±3.6)%比(13.4±1.0)%](P<0.05)。结论抑制miR-135b表达可促进H_(2)O_(2)诱导的HT22细胞增殖,抑制其凋亡,其机制可能是通过负调控SIRT1表达发挥作用。

未破裂颅内动脉瘤患者血清miR-135b和miR-145表达水平及临床价值研究

目的探究血清miR-135b和miR-145在未破裂颅内动脉瘤(unruptured intracranial aneurysm,UIA)患者中的表达水平及临床价值。方法选取2018年5月~2020年3月邯郸市第一医院神外三科收治的102例UIA患者作为研究组,另选同期健康体检者95例作为对照组,同时收集受试者一般资料进行比较。实时荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清中miR-135b和miR-145表达水平;ROC曲线分析血清miR-135b和miR-145对UIA的诊断价值;Logistic回归分析UIA形成的影响因素。结果研究组中高血压(62.75%)、高血脂(60.00%)、吸烟史(64.76%)、饮酒史(70.59%)患者所占比例高于对照组(46.72%,44.21%,47.37%,53.68%),差异均有统计学意义(χ^(2)=5.361,4.986,6.139,5.993,均P<0.05);研究组患者血清miR-135b(0.79±0.20)表达水平低于对照组(1.03±0.27),血清miR-145水平(1.28±0.24)高于对照组(0.99±0.22),差异均有统计学意义(t=7.122,8.821,均P<0.05);与动脉瘤个数为1及动脉瘤直径<7mm的患者相比,动脉瘤个数≥2及动脉瘤直径≥7mm的患者血清中miR-135b表达水平(0.68±0.18 vs 0.84±0.21,0.71±0.17mm vs 0.85±0.22mm)降低,miR-145水平(1.37±0.31mm vs 1.24±0.21mm,1.37±0.30mm vs 1.21±0.19mm)升高,差异均有统计学意义(t=2.472~3.689,均P<0.05);血清miR-135b,miR-145以及二者联合诊断UIA的曲线下面积(AUC)分别为0.788,0.836和0.907,二者联合的诊断效能优于其各自单独检测(Z=4.236,3.226,均P<0.05);Logistic回归分析结果显示,高血压(OR=1.326,95%CI=1.044~1.684)、吸烟史(OR=1.457,95%CI=1.077~1.970)、饮酒史(OR=1.879,95%CI=1.113~3.171)、血清miR-135b水平<0.94(OR=0.758,95%CI=0.612~0.939)、血清miR-145水平≥1.22(OR=1.433,95%CI=1.113~1.845)均是UIA的影响因素(均P<0.05)。结论UIA患者血清miR-135b水平下调,miR-145水平上调,二者与UIA的形成和发展存在相关性,且二者联合检测对UIA形成的诊断效能较高。

白山毛桃根提取物联合miR-135a-5p抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭及迁移的机制

目的 探讨白山毛桃根提取物对宫颈癌细胞HeLa增殖、侵袭及迁移的影响及分子机制。方法 不同浓度的白山毛桃根提取物处理HeLa细胞,将miR-NC、miR-135a-5p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-135a-5p分别转染至HeLa细胞,将anti-miR-NC、anti-miR-135a-5p分别转染至HeLa细胞后用40 mg/ml白山毛桃根提取物处理细胞;噻唑蓝(MTT)法、克隆形成实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭及迁移;qRT-聚合酶链反应(PCR)法检测miR-135a-5p的表达量;Western印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、p-磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和p-蛋白激酶B(Akt)蛋白表达量。结果 白山毛桃根提取物可显著降低细胞活力、克隆数、侵袭和迁移细胞数、miR-135a-5p表达和MMP2、MMP9、p-PI3K、p-Akt蛋白水平(P<0.05);转染anti-miR-135a-5p可降低细胞活力、克隆数、侵袭和迁移细胞数、MMP2、MMP9、p-PI3K、p-Akt蛋白水平(P<0.05),而转染miR-135a-5p mimics的作用与之相反;转染anti-miR-135a-5p可增强白山毛桃根提取物对HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及PI3K/Akt信号通路的抑制作用。结论 白山毛桃根提取物可通过降低miR-135a-5p表达使PI3K/Akt通路失活,进而抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移。

miR-135b促进肝癌细胞侵袭和转移

目的探讨miR-135b对肝癌细胞浸润转移的影响及其分子机制。方法分别在肝癌细胞系中过表达和下调miR-135b,通过Transwell^(TM)实验检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力,利用肝癌移植瘤模型检测肝癌细胞的体内增殖能力和成瘤能力;采用Western blot法结合双荧光素酶基因报告系统预测miR-135b的下游靶基因。结果 miR-135b在高侵袭性的MHCC97肝癌细胞系中高表达;过表达miR-135b能够增强HepG2和Bel-7402肝癌细胞的体外侵袭和转移能力,促进肝癌细胞的体内转移能力;通过靶向miR-135b的干扰载体pcDNA-miR-135b-Sponge下调miR-135b的表达,MHCC97肝癌细胞的体外侵袭转移能力及移植瘤的转移能力明显受到抑制;双荧光素酶基因报告系统和Western blot实验结果显示miR-135b能够靶向Hippo信号通路中的关键分子,包括大型肿瘤抑制因子同源蛋白2(LATS2)、含β转导素重复序列蛋白(β-TrCP)、N-myc下游调节基因2(NDR2)和亮氨酸拉链肿瘤抑制基因1(LZTS1)等。结论 miR-135b可能通过靶向Hippo信号通路相关基因促进肝癌细胞的侵袭和转移。

微小RNA-135b调控Smad5在糖尿病肾病发病中的作用研究

目的探讨微小RNA-135b(miR-135b)在糖尿病肾病(DN)发病中的作用及可能机制。方法应用荧光定量PCR及原位杂交检测miR-135b在DN肾组织中的表达。采用生物信息学预测miR-135b的靶基因,并通过蛋白免疫印迹法及检测双荧光素酶报告基因活性进行验证。同时行蛋白免疫印迹法检测DN系膜细胞增殖及系膜基质相关标志蛋白的表达。结果实时定量PCR显示,miR-135b在DN肾组织中表达较正常肾组织升高(P<0.05)。原位杂交显示,miR-135b在DN肾组织中表达较正常肾组织增强,且其表达主要位于肾小球系膜细胞及肾小管上皮细胞的胞浆和胞核中。人肾小管上皮细胞HMC及人系膜细胞HK-2在高糖培养24 h时均能上调miR-135b的表达,48 h升高更显著,与同时点正常对照培养的HMC及HK-2比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。人源和鼠源的Smad5 3'-非翻译区与miR-135b种子序列的8个碱基UUUCGGUA完全互补。miR-135b模拟物可下调Smad5的蛋白表达水平,而miR-135b抑制物对Smad5的蛋白表达无影响。将Smad5 3'-非翻译区野生型和突变型质粒分别转染入HMC及HK-2,并同时转染miR-135b模拟物,发现miR-135b模拟物能抑制Smad5 3'-非翻译区野生型荧光素酶活性,但对Smad5 3'-非翻译区突变体的荧光素酶活性无影响。miR-135b促进系膜细胞增殖及系膜基质增加HMC细胞转染miR-135b模拟物,可有效下调其靶蛋白Smad5的表达,同时上调增殖核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白(Cyclin D1)表达,且使细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制蛋白p21表达降低(P均<0.05),但转染miR-135b抑制物对PCNA、Cyclin D1、p21的表达无影响(P均>0.05)。结论 MiR-135b通过调控Smad5基因促进系膜细胞增殖及肾脏纤维化。

miR-135a/b逆转肺癌A549/CDDP细胞对顺铂耐药性及相关机制研究

目的:研究miR-135a/b对肺癌耐顺铂细胞株A549/CDDP顺铂耐药的影响。方法:运用实时荧光定量PCR检测miR-135a/b在A549和A549/CDDP细胞株中的差异表达;MTT法检测转染后A549及A549/CDDP细胞对CDDP的敏感性;构建MCL1-3′-UTR荧光素酶报告质粒验证miR-135a/b的靶基因;Western blot检测转染前后细胞MCL1蛋白的表达差异;流式细胞术检测转染后耐药细胞对顺铂诱导凋亡的影响。结果:miR-135a/b在A549/CDDP细胞中表达量降低;在耐药株中上调miR-135a/b后显著增加细胞对顺铂的敏感性;荧光素酶实验证实MCL1是miR-135a/b的靶基因;抗凋亡蛋白MCL1在A549/CDDP细胞中呈高表达,上调miR-135a/b明显抑制耐药细胞中MCL1蛋白的表达;miR-135a/b显著增加A549/CDDP细胞对顺铂诱导的凋亡。结论:miR-135a/b通过靶向调控MCL1蛋白表达增加NSCLC细胞对顺铂的敏感性和凋亡。

血清miR-135b、ANGPTL3与冠心病患者Gensini积分的相关性分析

目的探讨血清微小RNA-135b(miR-135b)、血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)与冠心病患者Gensini积分的相关性。方法选取收治的110例冠心病患者作为研究组,选取同期100例体检健康者作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测受试者血清miR-135b水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清ANGPTL3水平,观察两组受试者血清miR-135b、ANGPTL3水平与血脂指标变化,不同冠状动脉狭窄程度血清miR-135b、ANGPTL3水平变化,两者水平与患者血脂指标相关性及与Gensini积分三者之间相关性。结果研究组患者血清miR-135b、ANGPTL3、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均明显高于对照组(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于对照组(P<0.05);重危组、中危组患者血清miR-135b、ANGPTL3水平高于低危组(P<0.05),重危组高于中危组(P<0.05);冠心病患者血清miR-135b与TC、TG、LDL-C呈正相关(P<0.05),与HDL-C呈负相关(P<0.05);血清ANGPTL3水平与TG、LDL-C呈正相关(P<0.05),与HDL-C呈负相关(P<0.05);血清miR-135b表达与ANGPTL3、Gensini积分呈正相关(P<0.05),ANGPTL3表达与Gensini积分呈正相关(P<0.05)。结论冠心病患者血清miR-135b、ANGPTL3水平升高,两者呈正相关,并与血脂、冠状动脉狭窄程度相关。

橡胶型CPE135B和CPE140B基本性能及硫化体系、补强体系的研究

研究了CPE135B和CPE14 0B的基本性能及CPE135B的硫化体系和补强体系。结果表明 :CPE135B和CPE14 0B具有良好的物理机械性能和优异的耐热老化、耐酸、耐碱性能 ;过氧化物体系是CPE135B较理想的硫化体系 ,而硫脲与噻二唑并用硫化体系可使胶料的撕裂强度和扯断伸长率有显著改善 ;选用N774补强 ,硫化胶综合性能较好 ,白炭黑补强的胶料硬度明显高于其他填料 ,而白炭黑与陶土以 4 0∶10的配比填充CPE135B可获得较高的强度和回弹性。

NR、NBR与橡胶型CPE135B并用的研究

分析了天然橡胶(NR)、丁腈橡胶(NBR)与橡胶型CPE135B共混物的形态结构,并对其物理机械性能进行了研究。结果表明:NBR与CPE135B并用,分散相粒径较小,两相分散均匀,相容性好于NR与CPE135B并用;NR/CPE135B并用胶具有较高硬度、撕裂强度以及良好的耐老化性能,综合性能较好的并用胶其并用比为m(NR)∶m(CPE135B)=40∶60时,并用胶的200%定伸应力、回弹性、硬度和耐热老化性能都较好,并用20～40份CPE135B能改善NBR耐3#油性能;并用CPE135B提高了NBR并用胶的阻燃性。

miRNA-135b对鼻咽癌细胞侵袭和转移的促进作用

目的研究mi RNA-135b对鼻咽癌CNE1细胞系侵袭和转移的影响和作用机制。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mi RNA-135b在鼻咽癌CNE1细胞系中的表达,分别在鼻咽癌CNE1细胞系中过表达和下调mi RNA-135b,通过微孔滤膜培养小室及双室联合培养系统(Transwell^(TM))检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力,采用Western blotting检测大型肿瘤抑制因子同源蛋白2(LATS2)的表达。结果 miRNA-135b在鼻咽癌CNE1细胞系中高表达,通过增强mi RNA-135b表达,鼻咽癌CNE1细胞的侵袭和转移能力有所提升;通过靶向mi RNA-135b干扰载体,下调mi RNA-135b表达,鼻咽癌CNE1细胞的侵袭和转移能力有所下降。增强miRNA-135b表达,LATS2活性和表达下降,而下调miRNA-135b表达,LATS2活性和表达上升。结论miRNA-135b过表达会提升鼻咽癌CNE1细胞的侵袭和转移能力,下调miRNA-135b表达可有效抑制鼻咽癌细胞增殖,促进细胞凋亡。miRNA-135b的表达可能通过影响LATS2活性影响鼻咽癌细胞的生长。

血清miR-671-3p、miR-135b水平与老年乳腺癌患者化疗耐药性的相关性

目的分析血清微小核糖核酸(miR)-671-3p、miR-135b水平与老年乳腺癌患者化疗耐药性的关系。方法回顾性分析2019年1月至2020年2月在该院接受化疗且化疗结束后产生耐药性的52例老年乳腺癌患者作为耐药组,同期选取在该院接受化疗且化疗结束后未产生耐药性的52例老年乳腺癌患者作为敏感组,全部患者均接受6个周期新辅助化疗方案化疗,其患者资料完整,包括一般资料、实验室指标检测结果资料,重点分析化疗前血清miR-671-3p、miR-135b水平与老年乳腺癌患者化疗耐药性的关系。结果耐药组血清miR-671-3p mRNA相对表达量低于敏感组,miR-135b mRNA相对表达量高于敏感组,差异有统计学意义(P<0.05);组间其他实验室指标比较差异无统计学意义(P>0.05);Spearman相关分析结果显示,老年乳腺癌患者血清miR-671-3p mRNA相对表达量与miR-135b mRNA相对表达量呈负相关(r<0,P<0.05);回归分析结果显示,血清miR-671-3p mRNA相对表达量高表达是老年乳腺癌患者化疗耐药性的保护因素(OR<1,P<0.05);miR-135b mRNA相对表达量高表达是老年乳腺癌患者化疗耐药性的危险因素(OR>1,P<0.05);绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),化疗前血清miR-671-3p mRNA相对表达量、miR-135b mRNA相对表达量预测老年乳腺癌患者化疗耐药性风险的曲线下面积均>0.70,预测价值较理想,且联合预测的价值最好。结论血清miR-671-3p mRNA相对表达量、miR-135b mRNA相对表达量与老年乳腺癌患者化疗耐药性有关。

FAM135B与赖氨酸乙酰转移酶在维吾尔族食管鳞状细胞癌中的表达

目的探讨序列相似家族135成员B(FAM135B)与赖氨酸乙酰转移酶(KAT5)在维吾尔族食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达规律。方法使用罗氏全自动免疫组化仪检测40对维吾尔族ESCC及其癌旁组织中FAM135B与KAT5的表达情况,分析两种蛋白间表达的相关性及与临床特征的相关性。结果维吾尔族ESCC标本中FAM135B、KAT5表达分别占92.50%(37/40)、15.00%(6/40);癌组织中FAM135B表达强阳性者所占比例高于癌旁组织[45.00%(18/40)vs 22.50%(9/40),χ~2=4.528,P=0.033];癌组织中KAT5表达阴性者所占比例与癌旁组织差异无统计学意义[85.00%(34/40)vs 87.50%(35/40),χ~2=0.105,P=0.745];ESCC与其配对癌旁组织FAM135B强阳性表达具有良好正相关性(Kendall相关系数=0.707,P<0.001);癌组织的FAM135B强阳性表达与其KAT5表达具有显著负相关性(Kendall相关系数=-0.946,P<0.001);FAM135B与KAT5表达与ESCC患者性别、年龄、肿瘤部位、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期均无明显相关性(P>0.05)。结论 FAM135B强阳性表达可能是维吾尔族ESCC发生的重要分子基础,且该分子可能通过KAT5的负性表达发挥作用。